Méthodes de séparation des Acides Aminés 'AA'

Méthodes de séparations des acides aminés

Halitim Leila

Exercice 1 Soit un mélange d’acides aminés Lys, Gly, Ala, Ile, Glu séparé par la chromatographie échangeuse d’ions. Quel sera l’ordre d’élution ? Si on utilise un gradient de PH allant de 10 à 2 en utilisant : a. Une résine échangeuse de cations b. Une résine échangeuse d’anions Quelle sera la colonne qui donnera la meilleure séparation ?

Exercice 2 On se propose de séparer par électrophorèse un mélange d’acides aminés : Val, Asp, Lys, His à PH=3.2 Donnez leur carte électrophorétique Exercice 3 On veut séparer 3 acides aminés : l’acide L- glutamique, L-leucine et la L- lysine par chromatographie sur une résine polystyrénique substituée par des groupements sulphonates (-SO3-). Les PH isoélectriques de l’acide L- glutamique, L-leucine et la Llysine sont respectivement : 3.22 ; 5.98 ; 9.74 à 25 °C. On dépose ces 3 acides aminés sur la colonne à PH=2, puis on élue en amenant progressivement le PH à 7.

Quels acides aminés sont élués et dans quel ordre ?

Exercice 4 Le tableau des pks est valable pour toutes les questions dont il est nécessaire.

Acide Aminé(AA) pKa pKb pKr Lys (K) 2.18 8.95 10.53 Val (V) 2.32 9.62 ***** Glu (E) 2.19 9.67 4.25 Met (M) 2.28 9.21 ***** Arg (R) 2.17 9.04 12.48 1. Soit le peptide suivant : Lys-Val-Glu-Met, à PH=4, la charge nette du peptide est : a)+2 b)-2 c)+1 d)-1 2. Le PHi des 4 AA dans l’ordre sont : a)(K) 5.59 b) (V) 5.97 c)(E) 3.22 d) (M) 7.22 3. Soit un mélange de 3 peptides : A/Glu-Cys-Leu-Glu B/Arg- Pro- Cys –Lys C/Val-Ile-Leu-Gly. Le mélange est soumis à une chromatographie échangeuse de cations. L’élution est faite par un gradient de PH allant de 1à13.Si on considère que le pKb de Glu est bloqué. L’ordre de sortie des 3 peptides est :a)A puis B suivi de C b) B puis C suivi de A c)A puis C suivi de B d) C puis B suivi de A.

4. Le même mélange de la question 2 est soumis à une électrophorèse sur papier à PH=7. Si on considère que pKb de Glu n’est pas bloqué. L’électrophoregramme est : a

-

B

C

A

+

b

-

A

C

B

+

c

-

C

B

A

+

d

-

A

B

C

+

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Méthodes de séparations des acides aminés

Halitim Leila

Exercice 5 On cherche à déterminer la séquence d’un peptide X suite aux traitements suivants : - La carboxypeptidase A, ne donne aucun résultat.

- La trypsine n’a aucun effet.

- La chymotrypsine libère un tétrapeptide A, un dipeptide B et un Trp. - Le traitement par l’hydrazine révèle une Lys. - Le traitement de A par l’aminopeptidase détache Glu. - Le traitement de A par le bromure de cyanogène libère 2 peptides dont l’un, traité par DNFB suivi d’hydrolyse acide, montre la présence de DNP-Val. - Le traitement de B par la fluorescamine suivi d’hydrolyse acide donne Val fluorescent sous UV. - La carboxypeptidase A libère Tyr du peptide B. La séquence de X est : a)Val-Trp-Tyr-Met-Glu-Val-Lys b) Trp-Tyr-Val-Glu-Met-Val-Lys c)Glu–Met-Val-Lys-Val-Tyr-Trp d) Val -Tyr-Trp-Glu-Met-Val-Lys Exercice 6 Soit le peptide O suivant : Met-Tyr- Leu-Glu-Arg-Lys-Asn-Trp. 1. L’action de la thermolysine libère : a) 2 fragments b) 3 fragments c) 4 fragments d) 1 fragment.

2. L’action de la chymotrypsine sur O libère/ a) 2 fragments b) 3 fragments c) 4 fragments d) 1 fragment.

3. L’hydrolyse chloridrique totale de O donne : a) 1 fragment+2Acide Aminés(AA) b) 2 fragments+2AA c) 8 AA d) 7AA. 4. Apres l’hydrolyse chloridrique totale de O : a)Tyr est modifié b) Gly est modifié c)Asn est modifié d) Aucun AA n’est modifié.

5. Les fragments issu de l’action de la thermolysine sont séparer par chromatographie d’exclusion, l’ordre de sortie est: a)En même temps b) Haut poids moléculaire puis bas poids moléculaire c)1 fragment puis un dipeptide d) bas poids moléculaire puis haut poids moléculaire.

6. On fait agir sur O en même temps c'est-à-dire à la fois les enzymes et les réactifs suivants : la chymotrypsine, la trypsine et le bromure de cyanogène. Le nombre d’acides aminés libérer dans le milieu d’hydrolyse est : a) 1AA b) 2AA c) 8AA d) 3AA. Exercice 7 Pendant la séparation d’un mélange d’acides aminés contenant Tyr, Arg, Glu, Ala, Asp par chromatographie d’échange d’ions sur résine à PH =9 L’Arg n’a pas été retenu pas cette résine. Quelle est donc la nature de cette résine ?

Exercice 8 Soit le peptide : H2N-Val-Gly-Arg-Tyr-Lys-Asp-Glu-COOH 1) Quelle sera sa migration électrophorétique à PH=6 ?

2) Après l’avoir soumis à l’action de la chymotrypsine, quelle sera la migration du plus petit peptide obtenu ?

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Halitim Leila

Exercice 9 Soit le mélange d’acides aminés suivant : Ala, Tyr, Glu, Asp, Lys. Le mélange est déposé sur une colonne échangeuse d’anions à un certain PH. 1) Indiquer ce PH. 2) Quel est l’ordre d’élution de ces acides aminés ? expliquer.

Exercice 10 Après avoir effectué une électrophorèse sur papier à PH=X d’un mélange d’AA, on a obtenu les résultats : - Asp migre vers l’anode ; - Lys et Arg migrent vers la cathode ; - Gly et Val restent au voisinage du point de dépôt.

Déterminer l’intervalle dont lequel est compris la valeur du PH de cette électrophorèse.

Exercice 11 Un mélange d’acides aminés suivant : Ala, Tyr, Glu, Arg, Asp, Lys. Le mélange est placé sur une colonne échangeuse d’anions à un certain PH. - A partir de quelle valeur du PH tous les acides aminés seront retenus par cette résine ?

- Indiquer l’ordre d’élution de ces acides aminés(AA) si on ramène progressivement la valeur du PH à 5.2.

- Dites si cette élution est totale ou non ?si non à quelle valeur du PH serait-elle totale ?

Cours Question 1 Pour obtenir le Pourpre de Ruhemane, les produits suivants sont associés a)Ninhydrine oxydée + Ninhydrine réduite + NH3 b) Ninhydrine oxydée + Ninhydrine réduite + R-CHO. c) Ninhydrine oxydée + Ninhydrine réduite + CO2. d) Ninhydrine oxydée + R-CHO. Question 2 Lors de la réaction d’EDMANE : a)On obtient à PH basique le dérivé phénylcarbamyle ; b) On obtient à PH acide le dérivé phénylthiohydantoine ; c)Le dérivé amilinothiazolinone donne le dérivé phénylthiohydantoine d’acide aminé ; d) On obtient à PH acide le dérivé phénylcarbamyle.

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