Les protides /Les acides aminés
Halitim Leila
Méthodes de Séparation des Acides Aminés « AA » selon la « charge électrique»
Chromatographie ionique
Électrophorèse de zone
La chromatographie ionique « CI » Échangeuses d'ions Échangeuse de cations (+)
Échangeuse d’ anions (-)
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Les protides /Les acides aminés
Halitim Leila
Chromatographie ionique « CI » Résines échangeuses . d'ions Phase stationnaire « résine » . Contenant des groupes fonctionnels chargés
Phase mobile Ou Phase aqueuse « Éluant »
Phase stationnaire « résine » Contenant des groupes fonctionnels chargés
Résine échangeuse de cations (+) La phase stationnaire porte des groupements anioniques (-)
Résine échangeuse d’ anions(-) La phase stationnaire porte des groupements cationiques (+)
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Les protides /Les acides acid aminés
Halitim tim Leila
Résines
Chargée négative tivement Échangeuse des c cations
Sulfoniques ; Carboxyliqu iques ; Phosphates ; Sulfoéthyl.
Chargée positiv itivement Échangeuse des d d’anions
Diéthylamino inoéthyl (DEAE) Aminoéthyl – triméthylamin mine
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Les protides /Les acides aminés
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Exercice 7 Arg n’a pas été retenu (n’a pas été fixé) par cette résine à PH =9
Arg a la même charge que la résine. À PH =9 > Phi (Tyr, Glu, Ala, Asp) À PH =9 < Phi Arg
Tyr-, Glu-, Ala-, Asp-
Arg+
La nature de cette résine est positive ; La colonne est échangeuse d’anions.
+ Arg+
+ Tyr-
+ Tyr-
+ Glu-
+ Glu-
+
+
+
Arg+
+ Arg n’a pas été fixé
Exercice 9 1) Une colonne échangeuse d’anions (AA chargés négativement)
La
résine est chargée positivement (+) PH > PHi Lys donc PH > 9.14 (PH=10) 2) L’ordre d’élution des AA est décroissant : Lys puis Ala puis Tyr puis Glu et Asp.
L’ordre d’élution des AA décroissant
AA Basique
AA Neutre
AA Acide L’ordre d’élution des AA Croissant
AA Acide
AA Neutre
AA Basique 4
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Exercice 11 Rappels La résine échangeuse d’anions est une résine chargée positivement ; La résine échangeuse de cations est une résine chargée négativement
- A PH > Phi de Arg (PH=11) tous les acides aminés seront retenus par cette résine car ils seront chargés négativement Ala-, Tyr-, Glu-, Arg-, Asp-, Lys- Si on ramène progressivement la valeur du PH à 5.2 l’ordre d’élution de ces acides aminés(AA) : Arg puis Lys puis Tyr enfin Ala. Glu et Asp restent fixés. À PH= 5.2
Phi(Arg)=10.76
PH < Phi
Arg+
Phi(Lys)=9.14
PH < Phi
Lys+
Phi(Ala)=6.02
PH < Phi
Ala+
Phi(Tyr)=5.65
PH < Phi
Tyr+
Phi (Asp)= 2.97
PH > Phi
Asp-
Phi (Glu)= 3.22
PH > Phi
Glu-
- Cette élution n’est pas totale. La valeur du PH pour qu’elle soit totale PH <2.97
Elution veut dire sortie des molécules
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