Chromatographie des acides aminés (solution des Exercices 7, 9, 11)

Les protides /Les acides aminés

Halitim Leila

Méthodes de Séparation des Acides Aminés « AA » selon la « charge électrique»

Chromatographie ionique

Électrophorèse de zone

La chromatographie ionique « CI » Échangeuses d'ions Échangeuse de cations (+)

Échangeuse d’ anions (-)

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Les protides /Les acides aminés

Halitim Leila

Chromatographie ionique « CI » Résines échangeuses . d'ions Phase stationnaire « résine » .

Contenant des groupes fonctionnels chargés

Phase mobile Ou Phase aqueuse « Éluant »

Phase stationnaire « résine » Contenant des groupes fonctionnels chargés

Résine échangeuse de cations (+) La phase stationnaire porte des groupements anioniques (-)

Résine échangeuse d’ anions(-) La phase stationnaire porte des groupements cationiques (+)

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Les protides /Les acides acid aminés

Halitim tim Leila

Résines

Chargée négative tivement Échangeuse des c cations

 Sulfoniques ;  Carboxyliqu iques ;  Phosphates ;  Sulfoéthyl.

Chargée positiv itivement Échangeuse des d d’anions

 Diéthylamino inoéthyl (DEAE)  Aminoéthyl – triméthylamin mine

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Les protides /Les acides aminés

Halitim Leila

Exercice 7 Arg n’a pas été retenu (n’a pas été fixé) par cette résine à PH =9

Arg a la même charge que la résine. À PH =9 > Phi (Tyr, Glu, Ala, Asp) À PH =9 < Phi Arg

Tyr-, Glu-, Ala-, Asp-

Arg+

La nature de cette résine est positive ; La colonne est échangeuse d’anions.

+ Arg+

+ Tyr-

+ Tyr-

+ Glu-

+ Glu-

+

+

+

Arg+

+ Arg n’a pas été fixé

Exercice 9 1) Une colonne échangeuse d’anions (AA chargés négativement)

La

résine est chargée positivement (+) PH > PHi Lys donc PH > 9.14 (PH=10) 2) L’ordre d’élution des AA est décroissant : Lys puis Ala puis Tyr puis Glu et Asp.

L’ordre d’élution des AA décroissant

AA Basique

AA Neutre

AA Acide L’ordre d’élution des AA Croissant

AA Acide

AA Neutre

AA Basique 4

Les protides /Les acides aminés

Halitim Leila

Exercice 11 Rappels La résine échangeuse d’anions est une résine chargée positivement ; La résine échangeuse de cations est une résine chargée négativement

- A PH > Phi de Arg (PH=11) tous les acides aminés seront retenus par cette résine car ils seront chargés négativement Ala-, Tyr-, Glu-, Arg-, Asp-, Lys- Si on ramène progressivement la valeur du PH à 5.2 l’ordre d’élution de ces acides aminés(AA) : Arg puis Lys puis Tyr enfin Ala. Glu et Asp restent fixés. À PH= 5.2

Phi(Arg)=10.76

PH < Phi

Arg+

Phi(Lys)=9.14

PH < Phi

Lys+

Phi(Ala)=6.02

PH < Phi

Ala+

Phi(Tyr)=5.65

PH < Phi

Tyr+

Phi (Asp)= 2.97

PH > Phi

Asp-

Phi (Glu)= 3.22

PH > Phi

Glu-

- Cette élution n’est pas totale. La valeur du PH pour qu’elle soit totale PH <2.97

Elution veut dire sortie des molécules

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