3-1세부과제
15/ 15/47
- L-tryptophan 0.2g - L-arginine 1.0g - Resazurin 0.0001% - Reductant: L-Cysteine 5.0g/L (3mM), Ti-Citrate(20% Ti) 769㎕ (1mM) - Hemin Sol. 10ml - Vitamin Sol. 1ml
다. 분리 및 동정
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순수 분리 : 배양 후 형성된 집락 (colony)은 크기, 모양과 색 등의 형태학적 특성에 따 라 분류, 무작위로 선택하였으며, 3회의 계대배양을 통해 미생물을 순수 분리 한다.
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16S rRNA gene sequence 분석을 통한 분리 미생물의 동정 : 순수 분리된 미생물의 16S rRNA 유전자 염기서열을 얻기 위해 colony PCR을 수행한다. 단일 colony로부터 1 toothpick 채취하여 PCR-premix (iNtRON Biotechnology, Korea)와 혼합한 후, bacteria (8f, 1492r)에 특이 적인 primer를 이용하여 16S rRNA gene을 증폭한다. 각 미생물 별로 조합 된 16S rRNA gene 염기서열을 Korea bioinformation center의 EzTaxon 과 Genbank database (NCBI database) 통해 기존에 보고된 미생물의 16S rRNA 염기서열과의 상동성을 비교한다.
2-2. 한국인 특이 혐기성 장내 미생물 15종 이상의 신종 분리, 배양 및 동정 약물대사기반연구사업단