(compuestos esteroides obtenidos de las plantas filíferas) y un iniciador enzimático natural obtenidos todos los componentes de plantíos estrictamente controlados, libres de plaguicidas. Estos principios actúan sinérgicamente como antioxidantes controlando la cantidad de radicales libres a nivel celular (13,14). Su capacidad bactericida se ha relacionado con el bloqueo enzimático bacteriano ya que inhibe la respiración celular, también altera la per-
meabilidad de la membrana celular y se ha comprobado que destruye la cápside viral. Asimismo produce inhibición de toxinas en procesos metabólicos de los microorganismos patógenos y existe un efecto antiinflamatorio de los flavonoides (13,14). El producto denominado Biocitro en España ya ha mostrado efectividad en infecciones por Gram positivos (Estreptococcus sp.) y otros patógenos bacterianos en trucha arco iris (14, 15). Se utiliza con
Material y Métodos Se utilizaron 420 tilapias juveniles de 5 cm. de longitud total obtenidas de la granja tilapícola de Zacatepec en el Estado de Morelos, las cuales se dividieron en 21 grupos para constituir 7 lotes y sus réplicas, los que se ubicaron en acuarios de 20 litros de capacidad, provistos de agua declorada por aireación y oxigenada mediante bombas aireadoras que inyectan 1 L de aire por minuto*. Se alimentaron con una dieta específica para tilapia** en cantidad del 5% de su biomasa dividida en 3 porciones al día. Una vez adaptados a las condiciones del laboratorio, todos y cada uno de los lotes se ubicaron en acuarios cuya agua se inoculó con Aeromonas hidrophyla y Pseudomonas fluorescens obtenidas del cepario de la Unidad de Investigación Interdisciplinaria en Ciencias de la Salud y Educación de la Facultad de Estudios Superiores de Iztacala (UIICSE-FES Iztacala), con un inóculo cuádruple de cada una de las bacterias estandarizado por el método de transmitancia de Mc Farland 0.5 BaSO4 (4)X (1X108) Unidades formadoras de colonias (UFC)(16) . La utilización de 4 inóculos se debió a que se hicieron pruebas piloto de infección con 1, 2, 3 y 4 inóculos y solo se presentó enfermedad con 4 inóculos. Al mismo tiempo se trataron de la siguiente manera: Lotes a,a´ y a´´ .Ajo en dosis de 25 mg./ L de agua/día/3 días. Lotes b,b´y b´´ . Extracto de cítricos y filiferinas en dosis de 0.1ml/L de agua en solución en el agua del acuario/ día/ 3 días. Lotes c,c´ y c´´. Una combinación de ajo con extracto de cítricos y filiferinas a dosis de 25 mg./L de agua/día/3 días + 0.1ml./L de agua/día/3 días respectivamente. Lotes d,d´y d´´ lotes controles no tratados. Lotes e,e´ y e´´. Ajo en dosis de 50mg/ L de agua/día/3 días. Lotes f,f´y f´´. Mezcla de cítricos en dosis de 0.2 ml./L en solución en el agua del acuario/ día/ 3 días. Lotes g,g´y g´´. Combinación de ajo con extracto de cítricos y filiferinas a dosis de 50mg/ L de agua/día/3 días + 0.2 ml./ L de agua/día/3 días respectivamente.
Con estos antecedentes, se evaluó el efecto individual y en combinación del ajo y del extracto de cítricos para contar con una alternativa en el tratamiento de las infecciones por las bacterias Gram negativas Aeromonas hidrophyla y Pseudomonas fluorescens en la tilapia Oreochromis hornorum.
Cada día se aspiró el detritus del fondo de los acuarios y se sustituyó el 30% del agua por agua limpia. Diariamente se observaron los peces para cuantificar morbilidad y mortalidad y se colectaron los organismos muertos para hacer necropsia y exámenes histopatológicos por inclusión en parafina y tinción con Hematoxilina y Eosina (17). Los resultados se registraron y tabularon. Los análisis estadísticos se llevaron acabo mediante los métodos no paramétricos de Krushkall Wallis, U de Mann Whitney para morbilidad y mortalidad y por la prueba de Probabilidad exacta de Fisher para signos y lesiones macro y microscópicas (17). Preparación del ajo: Se dejaron secar 500 g de ajo fresco en la estufa bacteriológica a por 48 horas y posteriormente se lieron en un molino de cubos. Se el producto para formar dosis de 1 g. de 500 mg, las cuales se colocaron en bolsitas de gasa, se amarraron perfectamente y se ubicaron en los acuarios (de 20 litros de capacidad) para permitir una difusión continua de las sustancias activas. El ajo ya molido es una masa ligeramente grasosa, de color amarillento. Se determinó la Concentración Mínima Inhibitoria del ajo deshidratado y del extracto de cítricos por pruebas de macro dilución en medio de cultivo Mϋeller_Hinton con un pH de 7.2 y 7.4 al que se le añadió un total de 60 µg/L de calcio iónico en forma de cloruro de calcio y 30 µg/L de magnesio iónico en forma de sulfato de magnesio, la incubación se llevó acabo a 35°C por 18 horas utilizando un inóculo de 1 ml. estandarizado por medio del nefelómetro de Mc Farland de 0.5 BaSO4 a 1X108 UFC / ml. (16).
* Bombas Hagen. ** Alimento Silver Cup, comercializado por El Pedregal.
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etanol como vehículo y se aplica directamente en piel, mucosas y objetos por aspersión.
30°C mopesó y