método Kjeldahl
• Destilar añadiendo 25 ml de NaOH • Una vez destilado y valorado obtenemos el nitrógeno (mg) detectado: P2
Factor: 14 / 135,17 = 0,1035 mg de nitrógeno = 0,1035 * mg de acetanilida
2. La pérdida de nitrógeno durante la digestión.
• Pesar alrededor de 250 mg de acetanilida. El peso exacto será P0
El exceso de sulfato de sodio o potasio que se añade al ácido para elevar el punto de ebullición puede producir una descomposición por calor y, por lo tanto, pérdida de nitrógeno.
P2 = N x V x 14
• La cantidad exacta de nitrógeno es: Donde: P1 (mg) = P0 x 0,1035
N = Normalidad del ácido de valoración (HCl 0,25) V = Volumen de ácido consumido 14 = Peso atómico del nitrógeno. • Calculamos la recuperación: R(%) = P2 / P1 *100
• La recuperación aceptable es de entre 99,5 y 100,5%. Si se utiliza HCl de normalidad diferente preparar muestras: Normalidad
Muestra de amonio sulfato.
0,05 0,1 0,25 0,5
20 ... 40 mg 40... 90 mg 100 … 200 mg 200 … 400 mg
Verificación de la recuperación con acetanilida
Por otro lado, el exceso de catalizador (de cobre generalmente) también puede producir pérdidas de nitrógeno
Digestión de la muestra: • Colocar la acetanilida en un tubo, añadir 10 ml de ácido sulfúrico 98% y una tableta de catalizador Kjeldahl. • Digerir a 400 °C durante 1 hora (el resultado debe ser un líquido transparente con coloración azul) • Dejar enfriar y añadir 25 ml de agua destilada en cada tubo. Tomar precauciones para evitar salpicaduras. La reacción del agua sobre el ácido sulfúrico es violenta.
3. La digestión incompleta de la muestra, generalmente debida a falta de tiempo de reacción o falta de ácido sulfúrico. Durante la destilación:
Destilar:
1. Neutralización incompleta de la mezcla digerida. Es necesario añadir suficiente NaOH para neutralizar el exceso de ácido sulfúrico resultante de la digestión así como transformar todo el amonio formado en la digestión en amoníaco.
• Destilar añadiendo 75 ml de NaOH. Utilizar HCI 0,25 N para la valoración.
2. Pérdida de amoníaco por fugas en el circuito de destilación.
• Una vez destilado y valorado, obtenemos el nitrógeno (mg) detectado: P2
3. Pérdida de amoniaco por refrigeración insuficiente en el condensador.
P2 = N x V x 14
Esta verificación es ampliamente utilizada para certificar el funcionamiento del proceso completo del análisis del nitrógeno Kjeldahl que incluye las etapas de digestión, destilación y valoración. Se trata de preparar una muestra cuyo contenido de nitrógeno es conocido. Esta se digiere, se destila, se valora y se calcula el nitrógeno detectado.
Donde:
Bibliografía
N = Normalidad del ácido de valoración (HCl 0,25) V = Volumen de ácido consumido 14 = Peso atómico del nitrógeno. • Calculamos la recuperación:
El porcentaje de nitrógeno detectado sobre el de la muestra se denomina recuperación de nitrógeno.
• La recuperación aceptable es entre 99,5 y 100,5 %.
Para realizar esta verificación se utiliza la acetanilida.
Fuentes de error
• A.O.A.C. 1980. Association of Official Agricultural Chemists. Official Methods of Analysis. Washington, D.C. • Nielsen, S.S. 1994. Introduction to the Chemical Analysis of Foods. Ed. Jones and Bartlett Publishers. U.S.A. pp 209-212. • Ranganna, S. 1977. Manual of Analysis of Fruit and Vegetable Products. Ed. McGraw-Hill Publishing Co. Ltd. New Delhi. • Yeshajahu P. y Meloan C.E. 1987. Food Analysis. Theory and Practice. 2ª. Ed. AVI U.S.A. pp 753-758.
R(%) = P2/P1 *100
Las principales fuentes de error son: Preparar la muestra: En el proceso de digestión: Contenido de nitrógeno de una muestra de acetanilida: Formula: C8H9NO Peso molecular: 135,17
1. La inclusión de nitrógeno no proteico (aunque la cantidad de este nitrógeno suele ser despreciable comparada con la del nitrógeno proteico)
técnicas de LABORATORIO
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Nº 361 MAYO 2011
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