Importancia del test antiglobulinico

TEST ANTIGLOBULINICO PRE Y POST TRANSFUSION

Por: Fernando Jaramillo G. DP. MEDICINA TRANSFUSIONAL DOCENTE UNACH stetrapia@hotmail.es

NECESIDAD DE LA TRANSFUSION

La terapia transfusional ha contribuido a la disminuci贸n de la mortalidad y a mejorar la calidad de vida de un sin n煤mero de personas con problemas diferentes.

Transfundir sangre y hemocomponentes implica administrar tejidos inmunol贸gicamente activos

Ac Séricos

MUESTRA DE SANGRE Ag Eritrocitarios

VIABILIDAD 48 HORAS

COMPONENTES SANGUINEOS «LA MEJOR TRANSFUSION SANGUINEA ES AQUELLA QUE NO SE LA HACE»

EQUIPOS DE RECOLECCION

SIMPLE

DOBLE

EQUIPOS DE RECOLECCION

TRIPLES

CUADRUPLES

FRACCIONAMIENTO

SISTEMAS DE GRUPOS SANGUINEOS

ABO Lutheran Rh Kidd

 Biológico  Fisicoquímico  Inmunológico

NH2 Lutheran Lw Xg MNSs Indian Knops

COOH

COOH Kell

NH2

Rh. Duffy Kidd

Cromer Dombrock

COOH

NH2 COOH

NH2

COMPOSICIÓN DE GRUPOS SANGUÍNEOS ABO Grupos ABO

Grupo A

Grupo B Grupo AB Grupo O

Antígeno A

Antígeno B

Anti-B

Anti-A

Antígenos AB

No tiene antígenos

Eritrocitos

Plasma

Anti-A y Anti-B

No tiene anticuerpos

EXPRESIÓN DÉBIL DEL ANTÍGENO D Se llama así por sus reacciones débiles o negativas con el anti – D  D-debil:  por efecto de posición (trans con relación al gen D)  D-parcial:  Falta una ó más partes del antígeno  D-adqirido o hereditario:  poseen el antígeno completo pero expresado debilmente  Delección de Rh:  No poseen los antígenos dependientes de los loci C ni E (--D-)  Rh Nulo:  No expresa ninguno de los antígenos del sistema Rhesus

TIPIFICACION DIRECTA • Grupo Anti-suero conocido “COMERCIALES”

Suspensión al 5% de células del paciente

AGLUTINACIÓN: GRUPO IDÉNTICO AL ANTI-SUERO

No Aglutinación: Grupo distinto al antisuero

IMCOMPATIBILIDAD RH(D)

NECESIDAD TRANSFUSIONAL

PRUEBA DE COOMBS

PRUEBA ANTIGLOBULINICA. Prueba de Coombs de gran valor en la investigación de anticuerpos y en las pruebas de compatibilidad 1908 – Moreschi 1946 – Coombs, Mourant y Race

COOMBS DIRECTO COOMBS INDIRECTO

Detecta Inmunoglobulinas unidas a Gr de Tipo IgG (Rh).

Ac: autoinmunes Ac: dependientes del complemento Kidd, Duffy.

SITIO DONDE SE EFECTUA LA INTERACCION Ag-Ac

COOMBS

 Es clínicamente importante en el diagnóstico de condiciones tales como anemias hemolíticas o reacción transfusional hemolítica tardía, estudio de hemólisis mediado por medicamentos, etc.

 Las incompatibilidades sanguíneas se producen debido a que los glóbulos rojos llevan en su superficie determinados antígenos particulares de cada grupo sanguíneo. Los más conocidos son los grupos A, B, AB y O. Además de los grupos de antígenos mayores existen, en forma independiente, el sistema Rh o D. Se dice convencionalmente que una sangre es Rh positiva cuando está presente el antígeno D y negativa cuando no lo está.

 Cuando ingresan glóbulos rojos Rh positivo en el torrente sanguíneo de una madre Rh negativo, el sistema inmunitario de la madre registra estas estructuras extrañas (sensibilización Rh).

EHRN POR INCOMPTIBILIDAD RH.

 En 1994 Halbrech describió la incompatibilidad por ABO por primera vez como causa de enfermedad hemolítica del recién nacido, posteriormente se demostró que existen muchas diferencias entre este padecimiento y la enfermedad hemolítica del recién nacido por Rho (D).  Actualmente la incompatibilidad por ABO es la más frecuente si la comparamos con la incompatibilidad por Rho(D); se piensa que esto se debe al tratamiento preventivo con la inmunoglobulina anti-D.

 En 1932, Diamond demostró que la hidrops fetalis, ictericia grave y kernicterus eran grados de la misma enfermedad, siete años después, Levine y Stetson plantearon que una mujer que tuvo un mortinato hidrópico se sensibilizó con un antígeno eritrocitario del feto heredado del padre.

 La hemólisis que ocurre es extravascular porque se lleva a cabo en el sistema fagocítico mononuclear, dado que los eritrocitos están cubiertos por aloanticuerpos del tipo IgG de origen materno dirigidos contra un antígeno de origen paterno presente en los eritrocitos fetales

 Cuando el volumen que entra a la circulación materna es de 30 mL o más, la posibilidad de inmunización materna es casi de 100 %, aunque se dice que volúmenes tan pequeños como0.1 mL son capaces de producir isoinmunización.  Una vez que la madre se inmuniza se lleva acabo la respuesta inmune primaria a anticuerpos(IgM) y aparece la memoria inmunológica, por este motivo generalmente en el primer embarazo el producto no está afectado; es hasta una nueva exposición al mismo estímulo antigénico que la respuesta inmune secundaria genera la producción de anticuerpos IgG específicos.

 En la enfermedad hemolítica del recién nacido por anti-D, a la mujer embarazada se le debe realizar el grupo ABO (prueba directa e inversa),Rh (con su respectivo control Rh salino) y rastreo de anticuerpos irregulares. Si éste se encuentra positivo, se realizará una búsqueda de anticuerpos irregulares, que deberá repetirse de la semana 18 a la 20 de gestación y cada dos semanas. Si el anticuerpo es muy potente en el tercer trimestre, la muestra previa siempre tendrá que ser trabajada en paralelo con la muestra más reciente.

TIPO CONCENTRACIÓN

PESO

CRUCE

MOLECULAR

PLACENTA

DIAS

FIJACION DE COMPLEMENT O

IgG

600 - 1500 mgr%

160.000

+

20 – 25

+

IgM

50 – 100 mgr%

900.000

-

5

++++

IgA

150 – 400 mgr%

160.000

-

6

+/-

390.000

IgD

3 mgr%

150.000

-

3

0

IgE

0.03 mgr%

180.000

-

2

0

TIPO DE

IgG

IgM

IgA

Gamma

Gamma - Beta

Beta

160.000

900.000

160.000

7s

19s

7s

Secundaria

Primaria

-

Inmune

Natural

-

No

Si

No

SI

Si

-

Hemólisis in vitro

Si

No

No

Secreción.

No

No

Si

Cruzan la placenta.

Si

No

-

INMUNOGLOBULINA Movilidad electroforética.

Peso Molecular.

Coeficiente Sedimentación Tipo de Respuesta.

Mecanismo

de

producción.

Reacción en Salina.

Fijación

de

complemento.

PASO DE ANTICUERPOS MATERNOS AL FETO  Los anticuerpos IgG pasan activamente a través del trofoblasto a la circulación fetal, puesto que este tejido posee receptores para la fracción Fc de esta inmunoglobulina. Una vez reconocida la molécula de IgG, esta es transportada al interior del trofoblasto en una vesícula endocítica y llevada hasta el lado fetal, donde se produce la exocitosis de la IgG a la circulación fetal.

 Las IgG2 y las IgG4 sensibilizan a los hematíes fetales, pero no disminuyen su vida media debido a la poca o ninguna unión a los receptores Fc de los macrófagos y a la no activación del sistema del complemento.

 La IgG1 pasa a la circulación fetal a las 26 semanas de gestación. Por sus características produce una anemia más intensa y de forma precoz, aunque in vitro sea menos hemolítica que la IgG3.

 La IgG3 pasa a la circulación fetal entre las 28 y las 32 semanas de gestación y produce anemia de forma tardía e hiper-bilirrubinemia en el recién nacido.

IgG 1 IgG 2 IgG 3 IgG 4

FRECUENCIA

UNION A FAGOCITOS

mayor menor mayor menor

si no si no

CRUCE BARRERA PLACENTARIA 18 - 20 sem

PODER HEMOLITICO

28 - 32 sem

mayor

menor

SINTOMAS

 ANEMIA.  HIPERBILLIRUBINEMIA.  KERNICTERUS

•Herpes Simplex Virus (HSV) •La meningitis bacteriana •La sepsis neonatal •Hiperamonemia

FOTOTERAPIA + EXANGUINEO - TRANSFUSION

EVALUACIÓN DE LA GRAVEDAD DE LA EHN       

HISTORIA OBSTÉTRICA Y HEMOTERAPÉUTICA. CARACTERÍSTICAS DEL ANTICUERPO. ESTUDIO DEL LÍQUIDO AMNIÓTICO. ULTRASONOGRAFÍA. EXTRACCIÓN PERCUTÁNEA DE SANGRE DE CORDÓN. TOMA DE MUESTRAS DE VELLOSIDADES CORIÓNICAS. UTILIZACIÓN DE LA REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR) PARA DETERMINAR EL RH FETAL.  LA PRUEBA DE RESPUESTA A LA OXITOCINA.  ESTUDIOS DE INMUNIDAD CELULAR.

TEST ANTIGLOBULINICO AC : LIGADOS AL GR/ REACCIÓN IN VIVO

AC :LIBRES QUE AL UNIRSE AL Ag REACCIONARAN

PANTALLAS DE CELULAS

PANTALLAS DE CELULAS

MULTIPANEL DE CELULAS

MULTIPANEL DE CELULAS

FASES DEL TEST ANTIGLOBULINICO

 SALINA

Ac + Ag = reacción no térmica IgM

 LISS

Ac + Ag + S.B.F= reacción térmica IgM/IgG

 COOMBS

Ac + Ag + S.B.F + lavado + SAHG = IgG

INTERPRETACION NO

NO

+

+

DONANTE

RECEPTOR

Grupo: O Factor RhD,Ce

Grupo: O Factor RhD,Ce

PANTALLAS 1

2

3

LISS REACTIVO

FASE LISS

PANTALLAS

1

2

3

4

5

3

7

8

9

10

+ DONANTE Grupo: O Factor RhD,Ce

PAD: POSITIVA

=

ELIMINADA

ELIMINADA

+

PAI: POSITIVA

DONANTE Grupo: O Factor RhD,Ce

anti-D

RECEPTOR Grupo: O Factor Rhd, ce ADQUIERE/SENSIBILIZAN

Grupo: O Factor Rhd, ce

+ anti-D

FACTORES QUE AFECTAN A LA PRUEBA

     

Tiempo de Incubación.

Temperatura.

Medio en que se suspenden los hematíes.

Fases de lavado.

Velocidad de centrifugación Lectura de la prueba.

ALTERNATIVAS ALTERNATIVAS ALTERNATIVAS AB

AB

B

A

A

O

B

O

ALTERNATIVAS TRANSFUSIONALES

GRUPO DEL RECEPTOR

CONCENTRADO GLOBULAR

PLASMA

1

2

3

1

2

3

O

O

NINGUNA

NINGUNA

O

AB

A -B

A

A

O

NINGUNA

A

AB

NINGUNA

B

B

O

NINGUNA

B

AB

NINGUNA

AB

AB

A -B

O

AB

NINGUNA

NINGUNA

ALTERNATIVAS TRANSFUSIONALES

GRUPO DEL PACIENTE

SANGRE TOTAL RECONSTITUIDA

CONCENTRADO DE GLÓBULOS ROJOS

PLASMA PFC PR CRIO CPq

A

CGR A + Plasma A

A-O

A - AB

B

CGR B + Plasma B

B-O

B - AB

AB

CGR AB + Plasma AB

AB - A - B - O

AB

O

CGR O + Plasma O

O

O - A - B - AB

ES IMPORTANTE PARA QUIENES TRABAJAN EN AREAS RELACIONADAS CON LA TRANSFUSION DE SANGRE POSEAN CONCEPTOS CLAROS SOBRE LAS BASES DE LA INMUNOLOGIA Y ESTEN FAMILIARIZADOS CON LOS MAS RECIENTES AVANCES QUE SE PRODUZCAN EN ESTE CAMPO, LA RECOLECCION DE SANGRE EL FRACCIONAMIENTO , ANALISIS Y ADMINISTRACION DEBE SER REALIZADA CUMPLIENDO METAS IMPORTANTES PARA ASEGURAR AL PACIENTE EL MAXIMO BENEFICIO.