La taxa de canvi d’aquests dos gens és molt diferent, essent la del gen ribosomal 12S molt més lenta que la del gen CytB. Aquests dos gens es van utilitzar degut a que, estudis previs realitzats amb el gen 12S per Van der Kuyl i col·laboradors l’any 2002 i els estudis realitzats amb el gen CytB per Fritz i col·laboradors l’any 2006, van demostrar clarament que tots dos gens són vàlids per a diferenciar les dues subespècies amb gran confiança. El fet d’utilitzar dos gens independentment augmenta encara més la robustesa dels resultats, ja que redueix molt la probabilitat d’errors produïts per contaminacions de les mostres o altres errors de laboratori o de posterior manipulació de les seqüències (Carranza, 2007). Per buscar les seqüències d’ADN de les aproximadament 25 espècies utilitzem la pàgina web del National Center for Biotechnology Information (NCBI). Es tracta d’una pàgina web utilitzada per científics d’arreu del món ja que disposa de la base de dades biològiques més gran del món. Hi podem trobar el genoma complet de la majoria d’espècies conegudes que s’han seqüenciat i, a més a més, ofereix diverses eines molt útils per la recerca bioinformàtica. Per trobar les seqüències que busquem utilitzem l’eina anomenada BLAST 10 (acrònim de Basic Logal Alignment Search Tool) que ens permet introduir una seqüència genètica, en el nostre cas les dels gens 12S i CytB, i dur a terme una recerca de seqüències d’alta similitud pertanyents a altres espècies, és a dir, buscarà gens 12S i CytB de l’espècie que nosaltres li indiquem tal i com es mostra en la Fig. 8, en la qual es detallen els paràmetres més importants a l’hora de cercar una seqüència coincident amb la nostra utilitzant el BLAST.
10
http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/
16