414 • Praktisk arbeid
Praktisk arbeid Isolering av DNA Kapittel 3, 5, 10 Alt DNA i cellene til en organisme er pakket inn med proteiner og omgitt av fett (fosfolipider i cellemembraner). I denne øvelsen skal du isolere DNA ved å løse opp cellemembraner, bryte ned proteiner og felle ut DNA i etanol.
Utstyr – Løk – Begerglass (250 ml) – Oppvaskmiddel blandet i vann i forholdet 1 : 10 – Salt (NaCl) – Målesylindere (100 ml og 10 ml) – Hurtigmikser, stavmikser eller blender – Vannbad (60 °C) – Isbiter – Trakt – Kaffefilter – Reagensrør
Resultater
– Iskald etanol – Protease
Presenter forsøket ved å legge vekt på de ulike trinnene i isoleringsprosessen:
– Glasstav
– Hvilken oppgave har oppvaskmiddelet?
Framgangsmåte 1. Kutt en halv løk i små biter på ca. 5 x 5 mm. 2. Ha løken i et begerglass sammen med 100 ml av oppvaskmiddelløsningen og 1 teskje salt. 3. Sett blandingen på vannbad ved 60 °C i ca. 15 minutter. 4. Avkjøl blandingen på is i et par minutter. 5. Hell blandingen over i hurtigmikser og kjør på full styrke i 5 sekunder. 6. Filtrer blandingen gjennom et kaffefilter. 7. Ta ca. 10 ml av den filtrerte løsningen over i et reagensrør og tilsett et par dråper protease. 8. Hell forsiktig på ca. 10 ml iskald etanol og la løsningen stå rolig i et par minutter. 9. DNA flyter opp i det øvre etanollaget. DNA-et har en gråaktig og gjennomsiktig konsistens. Kveil forsiktig DNA-et opp på en glasstav ved å legge glasstaven inntil reagensrøret mens du vrir rundt.
– Diskuter hvorfor løken i oppvaskmiddelløsning først varmes opp og deretter avkjøles. – Hvilken oppgave har protease? – Hvilken oppgave har etanol? Til læreren: Det er fullt mulig å isolere DNA fra andre grønnsaker eller frukter. Prøv for eksempel med banan, kiwi, tomat eller hvitløk. Tilsettingen av protease kan sløyfes, men da vil mindre mengde DNA felles ut. Det er også spennende å lage sitt eget DNA-smykke, se tips på www.gyldendal.no/bi.