MANUAL SEPAR DE PROCEDIMIENTOS
lentes rápidos (tinción rápida de Grifols, Diff-Quick®, etc.). Distribuidos por Merck y Grifols (Grifols, Movaco, SA) (Jesús i Maria, 6. 08022 Barcelona. Tel.: 935710450). − Azul de tripano 0,4% (trypan blue solution 0.4%. Cat. Ref. T-8154). Sigma-Aldrich Química, SA (Apdo. 161. Alcobendas. 28100 Madrid. Tel.: 900101376). • Equipo y otros materiales. − Discos de cultivo de Petri. − Pinzas de punta fina. − Tubos de Eppendorf de 2 ml. − Balanza de precisión. − Mezclador de líquidos para tubos (Vortex® o similar). − Pipetas de Pasteur de 3,5 ml desechables. − Banco mecedor de tubos de sobremesa. − Filtro de nylon con poros de 48 μm. − Embudo de polipropileno (plástico) o cristal de unos 5,5 cm de diámetro. − Tubos cónicos de poliestireno (plástico) de 10 ml. − Cronómetro o reloj de laboratorio. − Hojas absorbentes. − Cámara de recuento de Neubauer (citométro). − Portaobjetos para citología. − Recipientes de citocentrífuga. − Centrifugadora con adaptadores para tubos y posibilidad de cytospins (Hettich), o citocentrifugadora (p. ej. Shandon III). Distribuido entre otros por: Grifols (véase arriba), Pacisa (Pacisa-Giralt) (Diputació, 119-121, 2.a planta. 08015 Barcelona. Tel.: 934513000) o Nirco (Nirco, SA, Polígono Industrial Salvatella) (Avda. Salvatella, 4. Barberà del Vallès. 08210 Barcelona. Tel.: 937180808). − Microscopio óptico (con objetivos de 4×, 10×, 40× y 100× y ocular 10×), preferiblemente de los denominados de contraste de fases. Se basa en las modificaciones de la trayectoria de los rayos de luz, los cuales producen contrastes notables en la preparación que son especialmente útiles para el recuento en fresco con la cámara de Neubauer. − Archivador. • Equipo opcional. − Microscopio óptico invertido (alternativa al de contraste de fases que también resalta las células en fresco) con objetivo de 10× o lupa binocular. 2.2. Procedimiento • Protocolo de procesado para obtener una solución de células sin moco. − Preparar 10 ml de solución de trabajo de DTT añadiendo 9 ml de agua destilada a 1 ml de la solución de stock de DTT (Sputolysin®). Mezclar durante 15 s. Esta solución de trabajo debe ser preparada cada día y desechado el sobrante.
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