Fecundación in vitro del Erizo de mar Tetrapygus niger y seguimiento de su desarrollo embrionario. El objetivo de la práctica es realizar la fecundación del erizo de mar Tetrapygus niger ya que es fácil obtener sus gametos y realizar fecundaciones, además nos permitirá seguir paso a paso el desarrollo embrionario de las fases de zigoto hasta el estadio de larva , la “ larva pluteus “
MATERIAL
1 litro de agua de mar
10 Erizos(oricios) de 6 cm de diámetro
KCl 0,5 M
10 vasos de precipitados
Portaobjetos y cubreobjetos
Placas de Petri y pipetas Pasteur
Nevera
Microscopio y cámara de vídeo
Prepararemos 100ml de KCl siguiendo los siguientes pasos: 1.- Depositar 3,73 g de KCl en un matraz aforado de 100ml. 2.- Agregar agua destilada hasta la marca de aforo 3.- Mezclar.
Previo a la realización de la práctica Hay que asegurarse de que los erizos que compramos están vivos para ello nos fijamos que tenga todas sus púas y observar que hace pequeños movimientos de las mismas. Es difícil saber si el oricio es macho o hembra, nos podemos fijar en la zona del anus, si vemos un líquido viscoso y blanquecino, seguro que será macho, en las hembras se podría ver un masa viscosa de color anaranjado, pero esto no siempre es seguro,. Si la práctica no se va a hacer inmediatamente, para asegurarse de que se mantengan vivos, deben guardarse en la nevera.
Es aconsejable realizar una esterilización del agua, este proceso puede ser sencillo, mantener a "Baño María" un recipiente con el agua de mar, durante 45 minutos a temperatura de 100ºC. De esta manera se evita la contaminación del agua durante el desarrollo embrionario.
Preparación de la disolución de KCl
La fecundación in vitro 18