Comparación precisión de dos métodos

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE NICARAGUA, UNAN-LEON

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TRATAMIENTO DE DATOS ANALITICOS PARA COMPROBAR SI DOS METODOS ANALITICOS SON IGUAL DE PRECISOS PARA LA DETERMINACION DE ACETAMINOFEN 100 mg/ 1 mL GOTAS ORALES POR CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTA RESOLUCION Y ESPECTROFOTOMETRIA ULTRAVIOLETAVISIBLE. César Antonio Peralta Mayorga, M.Sc. Departamento de Farmacia Industrial Facultad de Ciencias Quimicas/Carrera de Farmacia Universidad Nacional Autónoma de Nicaragua-León E-mail:cperaltamayorga@hotmail.com RESUMEN

Se realizó un estudio para comprobar si dos métodos analíticos son igual de precisos entre un método oficial por Cromatografía Liquida de Alta Resolución para la determinación de Acetaminofén en solución oral y un método Espectrofotométrico Ultravioleta – Visible desarrollado en el Laboratorio del Departamento de Farmacia Industrial de la carrera de Farmacia de la UNAN-León. Se realizó la verificación del desempeño instrumental del sistema analítico de cada método analítico para el caso de HPLC se evaluó la adecuabilidad del sistema y factores tales como el coeficiente de variación del tiempo de retención, áreas, simetría y el números de platos teóricos, mientras que para el método Espectrofotométrico se realizó la idoneidad del sistema instrumental cumpliendo para ambos casos especificaciones. Por cada método analítico (HPLC y UV-Vis) se hicieron 6 análisis independientes de las muestras y dentro de cada análisis, se obtuvieron los resultados de tres determinaciones repetidas. Para comprobar si ambos métodos son igual de precisos se procedió a descartar aquellos datos que resultaban aberrantes mediante la regla de Huber, seleccionando así los datos estadísticamente aceptables y realizar la prueba de precisión y la prueba de F de Snedecor-Fisher. Los resultados indicaron que ambos métodos son igual de precisos para determinar Acetaminofén en solución oral, además este estudio ofreció la posibilidad de verificar el funcionamiento de estos equipos con que cuentan la carrera de Farmacia de la Facultad de Ciencias Quimicas de la UNAN-León.

INTRODUCCIÓN. Acetaminofén, (fig 1) es una acetamida que tiene la siguiente estructura química. [8]

C8H9NO2

Químicamente se describe como: N-Acetil-p-aminofenol. El acetaminofén está indicado

para tratar el dolor agudo, incluyendo cefalea y otros trastornos musculoesquelético; fiebre, dolor posquirúrgico y es el medicamento alternativos a los triptanos y aspirina en el manejo de la crisis aguda de migraña. [10] El acetaminofén se absorbe fácilmente en el aparato digestivo con concentraciones plasmáticas máximas alrededor de 10 a 60 minutos después de las dosis orales. El acetaminofén es distribuido en la mayoría de los tejidos corporales. Atraviesa la placenta y está presente en la leche materna. La unión a proteínas plasmática es despreciable en las concentraciones terapéuticas habituales, pero aumenta con concentraciones crecientes. La vida media de eliminación del paracetamol varía de aproximadamente 1 a 3 horas. Se metaboliza principalmente en el hígado y se excreta en la orina principalmente como glucurónido y sulfatos conjugados. Menos del 5% se excreta sin cambio. Un metabolito hidroxilado (Nacetyl- p-benzoquinoneimina), generalmente se produce en cantidades muy pequeñas por las isoenzimas del citocromo P450. (principalmente CYP2E1 y CYP3A4) en el hígado y el riñón. [9] Por vía oral, la dosis habitual en adultos es de 500- 650 mg/4 horas o 1 g/6-8 horas, sin exceder los 4 g/día. En niños, según su edad, se recomiendan las siguientes dosis 4-5 veces al día: 40 mg (0-3 meses), 80 mg (4-11 meses), 120 mg (1-2 años), 160 mg (2-3 años), 240 mg (4-5 años), 320 mg (6-8 años), 400 mg (9-10 años) y 480 mg (mayores de 10 años).[11] La química analítica juega un papel importante en muchas ramas de la química, bioquímica, farmacia, ciencias de la vida y producción de alimentos, así como en monitoreo de nuestro medio ambiente, nuestra salud, etc. Muchas decisiones se basan en los resultados de análisis químico cuantitativo, y es importante conocer la calidad de los resultados siempre que se utilicen métodos de química analítica. [4] La garantía de calidad de los productos farmacéuticos se logra combinando una serie de prácticas, que incluyen un diseño robusto de la formulación, validación, análisis de materias primas, análisis durante el proceso y pruebas del producto final. Cada una de estas prácticas depende de procedimientos de prueba confiables. Las mediciones son intrínsecamente variables, si no se caracteriza ni se especifica la variabilidad de una medición junto con el resultado obtenido, los datos sólo pueden interpretarse en el sentido más limitado. [2] Las herramientas estadísticas que aplican los laboratorios resultan útiles para la interpretación de los datos analíticos y con más frecuencia se usan cada vez más para evaluar la calidad de sus servicios. Los análisis estadísticos resultantes deben considerar la variabilidad asociada con el proceso de medición, así como la variabilidad de la entidad que se está midiendo. Las mediciones estadísticas usadas para evaluar la dirección y magnitud de estos errores incluyen la media, la desviación estándar y expresiones derivadas de éstas, como el coeficiente de variación porcentual (%CV, también denominado desviación estándar relativa porcentual o %RSD). La variabilidad estimada puede usarse para calcular intervalos de confianza para la media, o mediciones de variabilidad, e intervalos de tolerancia que capturan una proporción especificada de las mediciones individuales.

La variabilidad del procedimiento analítico puede estimarse de varias maneras. La evaluación más común y útil de la variabilidad de un procedimiento es la determinación de la desviación estándar basada en mediciones independientes repetidas2 de una muestra. Debe realizarse un estudio de precisión para obtener una mejor estimación de la variabilidad del procedimiento. Para realizar un estudio de precisión, la prueba debe repetirse varias veces. Cada análisis debe ser completamente independiente de los demás para obtener estimaciones exactas de los diferentes componentes de variabilidad Con frecuencia es necesario comparar dos procedimientos para determinar si hay una diferencia importante en sus resultados promedios o sus variabilidades. El objetivo de un experimento de comparación de procedimientos es generar datos adecuados que permitan evaluar la equivalencia de los dos procedimientos en toda una gama de valores. [2] Los resultados de este estudio se utilizan para fomentar una cultura de análisis estadístico de los datos en todo proceso de medición, así mismo brinda la experiencia de verificar el funcionamiento de estos equipos y la capacidad del personal del laboratorio de generar resultados confiables. Además estos resultados nos permitirá comprobar si estos procedimientos son igual de precisos para la determinación de Acetaminofén con un grado de seguridad importante.

MATERIALES Y MÉTODO La verificación del desempeño del sistema analítico de cada método analítico debe demostrarse antes de proceder a realizar las lecturas de las muestras. Posteriormente se aplica la estadística para el tratamientos e interpretación de los datos analíticos y comparar si ambos procedimientos son igual de precisos.

Verificación del desempeño del sistema HPLC mediante la Adecuabilidad del Sistema (SST).

Procedimiento: Realizar 6 inyecciones como mínimo de la solución estándar de Acetaminofén y demostar que el sistema es adecuado durante cada corrida mediante la evaluación de los siguientes parámetros cromatográficos: Parámetro Cromatografico a examinar DER del Tiempo de Retención DER de las Áreas Simetría USP Platos Teóricos USP

Especificación ≤ 2.0% ≤ 2.0% 0.75 – 2.0 ≥ 2000

Verificación del desempeño del sistema instrumental del Espectrofotometría UVVIS PerkinElmer Lambda 25.

Procedimiento: Leer las soluciones estándar de stray light blank, potassium chloride, sodium iodide, hexane blank, toluene in hexane, potassium dichromate blank, potassium dichromate 60 mg/ L y Holmium.

Obtención de Datos Por cada método analítico (HPLC y UV-Vis) se hicieron 6 análisis independientes de las muestras y dentro de cada análisis, se obtuvieron los resultados de tres determinaciones repetidas.

TRATAMIENTO ESTADISTICO DE LOS RESULTADOS.

El tratamiento estadístico se realizó en distintas etapas. En la primera etapa se procedió a un examen crítico de los datos obtenidos por cada procedimiento, descartándose aquellos que resultaban aberrantes.

Una segunda etapa permitió seleccionar los datos estadísticamente aceptables, a partir de los cuales se aplican las pruebas estadísticas básicas y las pruebas adicionales para la comparación de los dos procedimientos analíticos.

Tratamiento de datos aberrantes.

Existen varias pruebas para detectar resultados aberrantes, según la USP 39/NF34, entre ellos: la prueba de Desviación Estudentizada Externa, la prueba de Dixon y la regla de Huber. Para este caso estaremos aplicando la regla de Huber. [2] Pruebas estadísticas básicas utilizadas para el tratamiento de los datos generado por cada método analítico Las mediciones estadísticas usadas para evaluar tal situación incluyen: La media La desviación estándar La desviación estándar relativa porcentual o %RSD) La varianza Intervalos de confianza para la media Sesgo Pruebas estadísticas para la comparación de dos procedimientos analíticos.

Para realizar la comparación de dos procedimientos analíticos se estará realizando un análisis de precisión y la prueba de F de Snedecor-Fisher. Si se comprueba que Fcalculado < Fcrit, ambos métodos son igual de precisos. [5] En este estudio se hicieron 5 análisis independientes y dentro de cada análisis, se obtuvieron los resultados de tres determinaciones repetidas.

A estos datos obtenidos se realiza un análisis de varianza (ANOVA).

Hipótesis Se plantea la Hipótesis nula: El método HPLC y el UV-Vis bajo las condiciones descritas son igual de precisos para la determinación de Acetaminofén 100 mg/ mL. Condiciones analíticas e Instrumentales.

Los métodos analíticos utilizados para evaluar la precisión y determinar la concentración de Acetaminofén 100 mg/ 1 mL han sido por Cromatografía Liquida de Alta Resolución según la USP 39/NF34 [2]. y Espectrofotometría Ultravioleta Visible.

[1].

La metodología analitica por Espectrofotometría ha sido validada siguiendo los lineamientos del Reglamento Técnico Centroamericano [7]. El área en el cual se realizaron los análisis fue en el departamento de Farmacia Industrial de la carrera de Farmacia de la Facultad de Ciencias Químicas de la UNAN-León.

El análisis por HPLC se llevó a cabo en HPLC HEWLETT PACKCARD serie 1100.

Departamento de Farmacia Industrial, Facultad de Ciencias Quimicas, UNAN-León. La columna utilizada es Agilent, Eclipse XDB-C18 (250 × 4,6 mm, empaquetada con 5 μm) y la detección se realizó a 243 nm. El volumen de inyección de las soluciones estándar y muestra fue de 20 μL. Se llevó una fase móvil isocrática que contenía agua y metanol en una proporción de 3: 1 (v / v) con una velocidad de flujo de 1,5 mL/min. La fase móvil se filtró a través de un filtro de membrana de 0,45 µm y se desgasificó antes de su uso. [2] El análisis por Espectrofotometría Ultravioleta Visible se llevó a cabo en un Espectrofotómetro PerkinElmer Lambda 25, Departamento de Farmacia Industrial, Facultad de Ciencias Quimicas, UNAN-León. Se utilizó celda de cuarzo de 1 cm, la solución blanco ha sido una mezcla de Agua: Alcohol Etílico en una proporción de 75:25 y la detección se realizó a 245 nm. [1] Reactivos y Químicos: El estándar de trabajo de Acetaminofén fue amablemente facilitado por el Laboratorio de Control de Calidad de Medicamentos de la UNAN-León. La solución oral de Acetaminofén fue facilitado por el Laboratorio Mauricio Díaz Muller de la UNANLeón. Metanol (grado HPLC; J. T. Baker), agua destilada, Alcohol Etílico (grado reactivo; J.T. Baker).

Soluciones estándar facilitados por el Laboratorio de Control de Calidad de Medicamentos de la UNAN-León: Stray light blank, Potassium Chloride, Sodium Iodide, Hexane blank, Toluene in Hexane, Potassium Dichromate blank, Potassium Dichromate 60 mg/ L y Holmium. (Todos los estándares son de la marca Sterna)

Preparación de la fase móvil, solución estándar y solución muestra para ser analizada por HPLC. [2] Preparación de la fase móvil: Se transfirieron 750 mL de Agua destilada y 250 mL de Metanol grado HPLC a un matraz volumétrico de 1000 mL, se mezclaron y luego se filtró a través de un filtro de membrana de 0,45 µm al vacío. La misma fase móvil se utilizó como diluyente para preparar la solución estándar y las soluciones muestras.

Preparación de la solución estándar de Acetaminofén: Se pesaron con precisión 500 mg de Acetaminofén estándar de trabajo y se transfirieron a un matraz volumétrico aforado de 250 mL y se disolvieron en 50 mL de fase móvil agitando mecánicamente por 5 minutos. El volumen se ajustó con la fase móvil. 1 mL de esta solución madre se transfirió a un matraz volumétrico aforado de 200 mL y se disolvió con fase móvil. Esta solución se filtró a través de filtros de membrana de 0,45 µm, que proporcionan una solución con una concentración de 10 µg / mL. Preparación de la solución de muestra de Acetaminofén 100 mg/ mL gotas orales: Se vierte el contenido de 10 envases a un recipiente adecuado. Se toma una alícuota de 5 mL (secar la punta de la pipeta antes de transferir el volumen) y se transfieren a un matraz volumétrico aforado de 250 mL, adicionar 50 mL de fase móvil, agitar mecánicamente por 5 minutos. Aforar con fase móvil. 1 mL de esta solución madre se

transfiere a un matraz volumétrico aforado de 200 mL y el volumen se ajustó hasta la marca con la fase móvil para dar una concentración teórica de 10 μg / mL. Preparación de la solución blanco, solución estándar y solución muestra para ser analizada por Espectrofotometría Ultravioleta Visible.[1] Preparación de la solución blanco: Se transfirieron 750 mL de Agua destilada y 250 mL de Alcohol Etílico a un matraz volumétrico de 1000 mL. Agitar mecánicamente por 2 minutos. Dejar reposar a temperatura de ambiente de trabajo por 30 minutos. La misma solución se utilizó como diluyente para preparar la solución estándar y las soluciones muestras.

Preparación de la solución estándar de Acetaminofén: Se pesaron con precisión 100 mg de Acetaminofén estándar de trabajo y se transfirieron a un matraz volumétrico aforado de 100 mL y se disolvieron en 50 mL de la solución blanco agitando mecánicamente por 5 minutos. El volumen se ajustó con la solución blanco. 1 mL de esta solución madre se transfirió a un matraz volumétrico aforado de 100 mL y se disolvió con solución blanco. La solución tiene una concentración de 10 µg / mL. Preparación de la solución de muestra de Acetaminofén 100 mg/ mL gotas orales: Se vierte el contenido de 10 envases a un recipiente adecuado. Se toma una alícuota de 1 mL (secar la punta de la pipeta antes de transferir el volumen) y se transfieren a un matraz volumétrico aforado de 100 mL, adicionar 50 mL de solución blanco, agitar mecánicamente por 1 minuto. Aforar con solución blanco. 1 mL de esta solución madre se transfiere a un matraz volumétrico aforado de 100 mL y el volumen se ajustó hasta la marca con la solución blanco para dar una concentración teórica de 10 μg / mL.

RESULTADOS Tabla 1. Resultados para la Adecuabilidad del sistema (SST) HPLC N STD 1 STD 2 STD 3 STD 4 STD 5 STD 6 Promedio S DER

TR (min) 3.142 3.132 3.136 3.136 3.138 3.141 3.1375 0.00367 0.1171

Con AREA SIMETRIA N USP μg/mL 596.24634 0.998 5766 10.03224 594.33044 0.999 6784 10 599.26855 0.999 5781 10.08309 597.62018 0.999 6082 10.05535 597.9281 0.999 6092 10.06053 598.80316 0.999 6427 10.07526 597.366128 0.9988 6155 10.0510783 1.81845826 0.000408 392.458745 0.03059725 0.30441 0.040872 6.37591376 0.30441763

Tabla 2. Especificaciones de la adecuabilidad del sistema (SST) HPLC Parámetro Cromatografico a examinar DER del Tiempo de Retención DER de las Áreas Simetría USP Platos Teóricos

Especificación ≤ 2.0% ≤ 2.0% 0.75 – 2.0 ≥ 2000

Resultados 0.1171% 0.30441% 0.9988 6155

Tabla 3. Resultado de la Idoneidad Instrumental del Espectrofotómetro PerkinElmer, Lambda 25.

Prueba Poder de resolución-Método Tolueno en Hexano Prueba de la luz dispersa Prueba de control de absorbanciaMétodo de K2Cr2O7 235 nm 257 nm 313 nm 350 nm Prueba de control de la longitud de onda-Método perclorato de holmio Región Ultravioleta Región Visible

Especificación R˃1.5

Resultado 2.1116

A˃2.0 Absortividad Especifica (1%, 1 cm) 122.9 – 126.2 142.4 – 145.7 47.0 – 50.3 106.6 – 108.2

2.0667 A=Absorbancia A%cm = Abs. especifica A= 0.751; A%cm=125.1 A= 0.860; A%cm=143.3 A= 0.295; A%cm=49.16 A= 0.639; A%cm=106.5

240.15 – 242.15 nm 286.17 – 288.17 nm 360.5 – 362.5 nm 533.3 – 539.3 nm

241.03 nm 287.07 nm 361.00 nm 536.86 nm

Tabla 4. Resultados obtenidos de 6 análisis independientes al aplicar el método HPLC. N Mt 1.1 Mt 1.2 Mt 1.3 Mt 2.1 Mt 2.2 Mt 2.3 Mt 3.1 Mt 3.2 Mt 3.3 Mt 4.1 Mt 4.2 Mt 4.3 Mt 5.1 Mt 5.2 Mt 5.3 Mt 6.1 Mt 6.2 Mt 6.3

TR (min) 3.142 3.141 3.139 3.133 3.135 3.137 3.132 3.134 3.135 3.133 3.134 3.133 3.125 3.121 3.129 3.13 3.133 3.139

AREA 586.69037 586.11749 586.70862 592.3291 591.11023 590.13812 585.93201 588.07874 587.67834 578.72705 579.21704 580.32843 585.31482 588.33215 587.06219 584.27014 582.88947 585.27155

SIMETRIA 0.999 0.999 0.997 0.999 0.999 1.001 0.999 0.998 0.998 1 0.999 0.999 0.997 0.99 0.998 0.998 0.999 0.999

N USP 6434 6429 6421 5773 6080 6413 6069 5774 6080 5772 6076 5771 5465 4955 5757 5761 5772 6421

Conc. μg/mL 9.87145 9.86181 9.87176 9.96633 9.94475 9.92839 9.85869 9.89481 9.88807 9.73746 9.74571 9.76441 9.84831 9.89907 9.87771 9.83073 9.8075 9.84758

% 98.2 98.1 98.2 99.0 98.9 98.8 98.1 98.4 98.4 96.9 97.0 97.1 98.0 98.5 98.3 97.8 97.6 98.0

Promedio (%)

Figura 1. Cromatograma de Acetaminofén por HPLC.

Fase móvil: Agua: Metanol (3:1); L1, 250 x 4.6mm, 5μm; UV: 243 nm; 1.5 mL/min; 20μL; 10 μg/mL.

98.2

99.0

98.3

97.0

98.2

97.8

Prueba de resultados aberrantes para los datos analíticos generados por el método de HPLC, aplicando la regla de Huber.

Tabla 5. Resultados de la prueba usando la regla de Huber.

Muestra MTA 1 MTA 2 MTA 3 MTA 4 MTA 5 MTA 6

Datos ordenados 97.0 97.8 98.2 98.2 98.3 99.0

Datos 98.2 99.0 98.3 97.0 98.2 97.8

Mediana

98.2

Desviaciones Absolutas Datos (Xi-X med) ordenados 0 0 0.8 0 0.1 0.1 1.2 0.4 0 0.8 0.4 1.2

MAD

0.25

El valor 97.0% se considera un resultado aberrante.

Los valores aberrantes son los que se encuentran fuera del intervalo X m ± k*MAD Dónde: Mediana K MAD K*MAD LI LS

98.2% 3.5 0.25 0.875 97.325% 99.075%

Figura 2. Carta de control para detectar resultado aberrante descrito en la tabla 5.

Carta de control para detectar outlaier por HPLC 99.5

Porcentaje (%)

99 98.5 LI

98

Mediana

97.5

LS Datos

97 96.5 0

2

4

6

Muestras de Acetaminofen 100 mg/ mL

8

Tabla 6. Datos estadísticamente aceptables correspondientes al método de HPLC. N0 Muestra % 1 MTA 1 98.2 2 MTA 2 99.0 3 MTA 3 98.3 4 MTA 4 98.2 5 MTA 5 97.8 Serie de mediciones estadísticas Media 98.30% Desviación Estándar 0.44% DER % 0.44% Mediana 98.2% Varianza 0.19(%)2 Sesgo 1.70% Intervalo de confianza para la media. P=95%. Para el método HPLC

tα/2, n-1=t0,025,4=2.78.

98.3 - 2.78 * [0.44/

] ≤ μ ≤ 98.3 + 2.78 * [0.44/

]

97.753 ≤ μ ≤ 98.847 = IC 98.3 ± 0.547= IC

Prueba de precisión para el método HPLC. Tabla 7. Datos del estudio de precisión para el método HPLC. No de la repetición 1 2 3 Media Desv. Std DER (%)

1 98.2 98.1 98.2 98.2 0.058 0.059

Numero de Análisis 2 3 4 99.2 98.1 98 98.9 98.4 98.5 98.8 98.4 98.3 99.0 98.3 98.3 0.208 0.173 0.252 0.210 0.176 0.256

5 97.8 97.6 98.0 97.8 0.200 0.204

Tabla 8. Tabla de análisis de varianza para los datos presentado en la tabla 7.

Fuente de Grados de Suma de variación libertad (df) cuadrados (SS) Entre-análisis 4 2.14 Intra-análisis 10 0.36 Total 14 2.5

Cuadrados medios (MS) 0.535 0.036

F 14.861111

Tabla 9. Resultados obtenidos de 6 análisis independientes al aplicar el método de Espectrofotometría UV-Visible.

Nombre Absorbancia a 245 nm STD 1-1 0.71876 STD 1-2 0.71812 STD 1-3 0.71809 Promedio 0.71832 Nombre MTA 1-1 MTA 1-2 MTA 1-3 MTA2-1 MTA 2-2 MTA 2-3 MTA 3-1 MTA 3-2 MTA 3-3 MTA 4-1 MTA 4-2 MTA 4-3 MTA 5-1 MTA 5-2 MTA 5-3 MTA 6-1 MTA 6-2 MTA 6-3

Absorbancia a 245 nm 0.71595 0.71692 0.71568 0.73734 0.74597 0.74626 0.71943 0.71924 0.71902 0.71883 0.71825 0.71855 0.71674 0.71644 0.71649 0.72017 0.71994 0.72015

Con ug/mL 10 10 10 10 Con μg/mL 9.97 9.98 9.96 10.26 10.38 10.39 10.02 10.01 10.01 10.01 10.00 10.00 9.98 9.97 9.97 10.03 10.02 10.03

% 100 100 100 100 (%) 99.7 99.8 99.6 102.6 103.8 103.9 100.2 100.1 100.1 100.1 100.0 100.0 99.8 99.7 99.7 100.3 100.2 100.3

Promedio (%)

99.7

103.5

100.1

100.0

99.8

100.2

Figura 3. Espectro característico del Acetaminofén por Espectrofotometría UV.

Prueba de resultados aberrantes para los datos analíticos generados por el método de Espectrofotometría UV-Visible, aplicando la regla de Huber.

Tabla 10. Resultados de la prueba usando la regla de Huber.

Muestra MTA 1 MTA 2 MTA 3 MTA 4 MTA 5 MTA 6

Datos 99.7 103.5 100.1 100 99.8 100.2

Datos ordenados 99.7 99.8 100 100.1 100.2 103.5

Mediana

100.05

Desviaciones absolutas Datos (Xi-Xmed) ordenados 0.35 0.05 3.45 0.05 0.05 0.15 0.05 0.25 0.25 0.35 0.15 3.45

MAD

0.2

El valor 103.5% se considera un resultado aberrante.

Los valores aberrantes son los que se encuentran fuera del intervalo X m ± k*MAD Dónde: Mediana K MAD K*MAD LI LS

100.05% 3.5 0.2 0.7 99.35% 100.75%

Figura 4. Carta de control para detectar resultado aberrante descrito en la tabla 10.

Carta de control para detectar outlaier por UV-Vis

Porcentaje (%)

104 103 102

LI

101

Mediana LS

100

Datos 99 0

1

2

3

4

5

6

7

8

Muestras de Acetaminofen 100 mg/ mL

Tabla 11. Datos estadísticamente aceptables correspondientes al método de UVVis. N0 Muestra % 1 MTA 1 99.7 2 MTA 2 100.1 3 MTA 3 100.0 4 MTA 4 99.8 5 MTA 5 100.2 Serie de mediciones estadísticas Media 99.96% Desviación estándar 0.21% DER % 0.211% Mediana 100.05% Varianza 0.043(%)2 Sesgo 0.04 Intervalo de confianza para la media. P=95%. Para el método UV-Visible.

tα/2, n-1=t0,025,4=2.78.

99.96 - 2.78 * [0.21/

] ≤ μ ≤ 99.96 + 2.78 * [0.21/

]

99.698 ≤ μ ≤ 100.221 = IC 99.96 ± 0.261= IC

Prueba de precisión para el método Espectrofotometría UV-Visible.

Tabla 12. Datos del estudio de precisión para el método UV-Visible.

No de repetición 1 2 3 Media Desv. Std DER (%)

1 99.7 99.8 99.6 99.7 0.100 0.1003

2 100.2 100.1 100.1 100.1 0.058 0.058

Número de Análisis 3 100.1 100 100 100.0 0.058 0.058

4 99.8 99.7 99.7 99.7 0.058 0.058

5 100.3 100.2 100.3 100.3 0.058 0.058

Tabla 13. Tabla de análisis de varianza para los datos presentado en la tabla 12 Fuente de Grados de Suma de variación libertad (df) cuadrados (SS) Entre-análisis 4 0.742666667 Intra-análisis 10 0.046666667 Total 14 0.789333333

Cuadrados medios (MS) 0.185666667 0.004666667

Resultado de la Prueba F para varianza de dos muestras Medidas Media Varianza Observaciones Grados de libertad F P(F<=f) una cola Valor crítico para F (una cola)

Método HPLC Método UV-Vis 98.3 99.96 0.19 0.043 5 5 4 4 4.418604651 0.089604459 6.388232909

F 39.7857143

Se comprueba que F < Fcrit, ambos métodos son igual de precisos.

CONCLUSIONES Mediante este estudio se estima la importancia de aplicar las herramientas estadísticas para la evaluación y la interpretación de los datos analíticos y resaltar que no existen resultados cuantitativos de interés si no van acompañados de alguna estimación de los errores inherentes a los mismos.

Se demuestra que el método HPLC y Espectrofotométrico UV-Visible bajo las condiciones descritas resultaron ser igual de preciso para la determinación de Acetaminofén 100 mg/ mL gotas orales, por lo que se acepta la hipótesis nula.

Mediante este estudio se ofreció la posibilidad de verificar el funcionamiento del HPLC HEWLET PAKCHAR serie 1100 y el Espectrofotómetro PerkinElmer Lamba 25 de la Facultad de Ciencias Quimicas de la UNAN-León, siendo los resultados satisfactorios.

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