Ανίχνευση παθογόνων μικροοργανισμών στα τρόφιμα

Ανίχνευση παθογόνων μικροοργανισμών στα τρόφιμα Π.Ν. Σκανδάμης Εργαστήριο: Υγιεινή Εγκαταστάσεων Βιομηχανιών Τροφίμων

Εργαστήριο Ποιοτικού Ελέγχου και Υγιεινής Τροφίμων και Ποτών

International Standard Organization : ISO Ελληνικός Οργανισμός Τυποποίησης: ΕΛΟΤ

Μικροοργανισμός Listeria monocytogenes Salmonella

Πρότυπο

Μέθοδος

ISO 11290-1:1996/1:2004(E) Ανίχνευση ISO 11290-2:1998/1:2004(E) Καταμέτρηση ISO 6579:2002

Ανίχνευση

Escherichia coli

ISO 16649-2:2001

Καταμέτρηση

Stapphylococcus aureus

ISO 6888-1:1999

Καταμέτρηση

Ανίχνευση Listeria monocytogenes Δείγμα (x g ή ml)

1ος Εμπλουτισμός (Half Fraser), Επώαση στους 30οC για 24 hrs 2ος Εμπλουτισμός (Fraser), Επώαση στους 37οC για 48 hrs

Εξάπλωση σε επιλεκτικό υλικό Palcam και ALOA agar 30οC ή 37οC για 24-48 hrs

Εξάπλωση σε επιλεκτικό υλικό Palcam και ALOA agar 30οC ή 37οC για 24-48 hrs

Επιβεβαίωση:  Κινητική (motility),  Αιμόλυση (hemolysis),  Ζύμωση σακχάρων (mannitol, rhamnose,xylose)

Half Fraser (ζωμός)

Fraser υδρόλυση της εσκουλίνης σε εσκουλιτίνη Αντιδρά με ιόντα σιδήρου καστανό –μαύρο σύμπλεγμα

Palcam agar

ALOA agar

L. innocua

L. monocytogenes

χρωμογόνο υπόστρωμα (X-glucoside) με την ανίχνευση β-γλουκοσιδάσης υποδηλώνει παρουσία Listeria spp., ενώ το ένζυμο φωσφολυπάση C διαφοροποιεί την L. monocytogenes

Ανίχνευση Salmonella Δείγμα (x g ή ml)

1ος Γενικός εμπλουτισμός, Επώαση στους 37οC για 16-20 hrs

2ος Ειδικός εμπλουτισμός (Rappaport-Vassiliadis medium, RSV), Επώαση στους 42οC για 48 hrs

Εξάπλωση σε επιλεκτικό υλικό XLD ή Red phenol/ Briliant green agar 37οC για 24-48 hrs Επιβεβαίωση

Rappaport-Vassiliadis medium

Πράσινο του μαλαχίτη και χλωριούχο μαγνήσιο Επιτρέπει την αύξηση της Salmonella στους 42οC

XLD: Άγαρ Ξυλόζης Λυσίνης Δεσοξυχολικού άλατος Εντεροβακτήρια ζυμώνουν την ξυλόζη Salmonella ζυμώνει την λυσίνη Το θειοθειϊκό νάτριο και κιτρικο σιδηρο(ΙΙΙ)αμμώνιο δρα ως δείκτης παραγωγής υδροθείου με το σχηματισμό αποικιών με μαύρο κέντρο

Καταμέτρηση Escherichia coli Δείγμα (x g ή ml) Ομογενοποίηση σε διάλυμα Πεπτόνης 0.1%, Εξάπλωση σε χρωμογόνο επιλεκτικό υλικό Tryptone Bile X-glucuronide Agar (ΤΒΧ) στους 44οC για 24 hrs

Το ένζυμο ß-D-glucuronidase διαφοροποιεί τα E. coli ssp. από τα άλλα εντεροβακτήρια καθώς οι αποικίες εμφανίζονται μπλέ-πράσινες

Καταμέτρηση θετικών στην πηκτάση σταφυλόκοκκων Staphylococcus aureus Δείγμα (x g ή ml) Ομογενοποίηση σε διάλυμα Πεπτόνης 0.1%, Εξάπλωση σε χρωμογόνο επιλεκτικό υλικό BairdParker agar στους 37οC για 48 hrs Περιέχει κρόκο αυγού-ενώσεων τελλουρίτη • Παραγωγή λεκιθινάσης αδιαφανής ζώνης γύρω από την αποικία • Παραγωγή λιπάσης διαυγούς ζώνης γύρω από την αδιαφανή

Επιβεβαίωση μαύρες αποικίες με θετική παραγωγή λεκιθινάσης εξετάζονται ως προς την θετική αντίδραση στην πηκτάση