užívá pro vyšetření chromosomů v mitóze nebo v interfázi. V praxi je možné použít několik typů sond – centromerické, lokus-specifické, malovací. Konkrétní sondu volíme podle indikace vyšetření. Centromerické sondy jsou tvořeny alfa-satelitními sekvencemi repetitivní DNA přítomné v oblasti centromery. Dovolují rychlou detekci numerických aberací, zejména v nedělících se buňkách. Lokus-specifické sondy se váží se specifickým lokusem na chromosomu. Umožňují stanovení některých strukturálních změn, jako jsou mikrodeleční syndromy (viz Početí a prenatální vývoj), specifické translokace u některých malignit atp. Celochromosomové sondy (malovací) jsou připravené jako směs fragmentů DNA konkrétního chromosomu. Po jejich aplikaci dojde k „obarvení“ celého chromosomu. Používají se pro určení některých strukturálních aberací, jako jsou translokace, inserce nebo komplexní přestavby (hlavně v buňkách nádorů), a dále pro stanovení původu nadpočetných markernebo ring-chromosomů. Tyto sondy vyžadují metafázické chromosomy, pro interfázní jádra je nelze použít. Komparativní genomová hybridizace (CGH) slouží k zjišťování odchylek v množství genetického materiálu mezi různými genomy. Nevyžaduje přítomnost dělících se buněk, provádí se z izolované DNA. Zásadní význam má proto pro analýzu buněk solidních nádorů, kde ostatní postupy vyšetření chromosomů často selhávají. Princip CGH představuje současná hybridizace dvou rozdílně značených DNA (vyšetřované a kontrolní) k metafázickým chromosomům zdravého dárce v poměru 1 : 1. V oblasti zmnožení nebo ztráty DNA je detekována změna poměru intenzity signálů obou fluorochromů. Demonstrace barvících technik: Bakalářské studium, Biologie člověka (přednášky), http://biol.lf1.cuni.cz/Pregrbak.htm
7.3 Změny struktury nebo počtu chromosomů V karyotypu mohou být nalezeny různé odchylky, jak ve struktuře, tak v počtu chromosomů. Tyto odchylky mohou podmiňovat onemocnění obecně označovaná jako chromosomálně podmíněné syndromy. Syndrom je soubor příznaků charakterizujících určitý fenotyp (chorobu).
7.3.1 Numerické odchylky – aneuploidie a polyploidie Polyploidie Polyploidie znamená zmnožení (násobek) celé sady chromosomů. Na příklad 3n – triploidie, 4n – tetraploidie. Je možný vznik triploidní zygoty (např. po oplození vajíčka dvěma spermiemi, poruchou I. nebo II. zracího dělení vajíčka), ale není slučitelný se životem. Těhotenství končí potratem. Skupiny polyploidních buněk mohou být nalezeny v některých tkáních. V kostní dřeni mají megakaryocyty 8–16násobek haploidního počtu chromosomů. V regenerujících se játrech, a i v jiných regenerujících se tkáních, se vyskytují tetraploidní buňky. Vznikají endomitózou; chromosomy se dělí dvakrát a buňky jen jednou.
98 Ukázka elektronické knihy, UID: KOS199276