ANALYSIS

Using PCR to Rapidly Identify Salmonella Serotypes

Author info เวยเจีย หวัง Weijia Wang Field Marketing Specialist, Food Science Division, Asia Pacific , Bio-Rad Laboratories weijia_wang@bio-rad.com เชือ ้ แบคทีเรียซาลโมเนลลาทีจ ่ �ำ แนกโดยใช้องค์ประกอบของโมเลกุลเฉพาะทีผ ่ ว ิ เซลล์แล้ว 2,500 ซีโรไทป์ Salmonella enteritidis และ Salmonella typhimurium เป็นซีไรไทป์ที่มักเป็นสาเหตุของโรคในมนุษย์ทั่วโลก โดยเป็นสาเหตุของโรคซาลโมเนลโลซิสใน ยุโรป 44% และ 17% ตามลำ�ดับ ปี 2554 พบว่าในสหรัฐอเมริกา เชื้อดังกล่าวเป็นสาเหตุของโรคในมนุษย์ 16.5% และ 13.4% ตามลำ�ดับ ในปี 2559 มีการศึกษาด้วยการเก็บตัวอย่างจากตลาดค้าปลีกเนื้อสัตว์ในมาเลเซีย พบการปนเปื้อน S. Enteritidis และ S. Typhimurium ในเนื้อไก่ดิบ 6.7% และ 2.5%

การทดสอบเชือ้ ก่อโรคในอาหารทัง้ หมด เป็นการทดสอบเชือ้ ซัลโมเนลลา 40% จาก การศึกษาตลาดการวิเคราะห์เชือ้ ภาคการ ผลิตเนือ้ สัตว์ปกี และเนือ้ สัตว์มกี ารทดสอบ เชื้อซัลโมเนลลามากที่สุด คิดเป็น 40% ของการทดสอบทั้งหมด กฎหมายมักกำ�หนดให้หอ้ งปฏิบตั กิ าร ตรวจสอบตัวอย่างทีพ่ บ Salmonella spp. ทัง้ หมดเพือ่ จำ�แนกและแยกซีโรไทป์ เพือ่ ให้ หน่วยงานรัฐสามารถติดตามและควบคุมการ ระบาดและสอบกลับหาแหล่งทีม่ า เนือ่ งจาก S. enteritidis และ S. typhimurium มัก เป็นสาเหตุของโรค ห้องปฏิบตั กิ ารอาจต้อง มีมาตรการเมื่อพบเชื้อสองซีโรไทป์นี้ วิธีการเพาะเชื้อและวิธีการวิเคราะห์ โดยใช้เทคนิคพีซีอาร์ (polymerase chain reaction)

วิธกี ารเพาะเชือ้ เป็นวิธวี นิ จิ ฉัยมาตรฐาน

สำ�หรับการทดสอบอาหารซึ่งเป็นพื้นฐาน ของการวิเคราะห์ในห้องปฏิบัติการด้าน ความปลอดภัยอาหารและสาธารณสุข เนือ่ งจากเป็นวิธที งี่ า่ ยและให้ผลการเชือ่ ถือ ได้ อย่างไรก็ตาม เมื่อต้องตรวจคัดกรอง ตัวอย่างจำ�นวนมาก วิธกี ารทีใ่ ช้เทคนิคการ เพาะเชือ้ มีความยุง่ ยากและใช้เวลามากอาจ ลดประสิทธิภาพของห้องปฏิบตั กิ าร วิธกี าร เหล่านีต้ อ้ งการพนักงานเทคนิคในการแยก เชือ้ เพือ่ ระบุชนิดเชือ้ ก่อโรคและพวกเขาต้อง ใช้เวลานานกว่าห้าวันเพื่อยืนยันชนิดย่อย และซีโรไทป์ นอกจากนัน้ ผลบวกเทียมอาจ เกิดขึน้ เนือ่ งจากเชือ้ แข่งขัน (competitive flora) พีซอี าร์ (polymerase chain reaction) เป็นวิธกี ารทางเลือกทีม่ ปี ระสิทธิภาพเพือ่ ใช้ แทนทีว่ ธิ กี ารเพาะเชือ้ มาตรฐาน วิธพี ซี อี าร์ จะใช้การเพิ่มจำ�นวนดีเอ็นเอเป้าหมายโดย ใช้กรดนิวคีอกิ และไพรเมอร์ พีซอี าร์สามารถ

ใช้เพือ่ ตรวจจับเชือ้ ก่อโรคในตัวอย่างหลาย ประเทศโดยมีความไวและความจำ�เพาะสูง ด้วยการระบุล�ำ ดับยีนทีจ่ �ำ เพาะของเชือ้ ก่อ โรคแต่ละชนิด ข้อได้เปรียบหลักของวิธกี ารทางโมเลกุ ลาร์ที่เหนือกว่าวิธีมาตรฐานคือระยะเวลา เพื่อให้ได้ผลที่เชื่อถือได้ วิธีการเพาะเชื้อ สำ�หรับ Salmonella spp. ที่กำ�หนดเป็น วิธีอ้างอิงมาตรฐานต้องใช้เวลาสามถึงห้า วันในการยืนยันผลลบ เมื่อพบตัวอย่างที่ ผลเป็นบวก จะต้องมีขั้นตอนการแยกเชื้อ และจำ�แนกเพิม่ อีก ในทางตรงกันข้าม การ ศึกษาล่าสุดแสดงให้เห็นว่า ระยะเวลาที่ ใช้สามารถลดลงได้อย่างมีนัยสำ�คัญเหลือ เพียง 24 ชั่วโมง ด้วยการปรับใช้วิธีเรียล ไทม์พซี อี าร์ในการตรวจสอบแบคทีเรียเหล่า นี้แทบทุกชนิด การตรวจยืนยันซีโรไทป์ของเชือ้ ซัลโมเนล ลามักใช้วิธี Serotyping (การวิเคราะห์ Sep-Oct

31