MIKROBIOLOŠKA DIJAGNOSTIKA TUBERULOZE
2.4 IGRA ( interferon-gamma release assay ) QuantiFERON – TB Gold In – Tube QFT (QuantiFERON test) je in vitro dijagnostički test koji služi za dokazivanje latentne tuberkulozne infekcije ( LTBI, engl. Latent TB Infection). LTBI je nezarazno asimptomatsko stanje, imuni odgovor na prije unesene antigene M.tuberculosis. Nužno ne znači da će nazočnost uzročnika biti prisutna za vrijeme testiranja. Ključni čimbenik kontrole tuberkuloze jest ciljano traženje i liječenje osoba sa LTBI koje imaju povišen rizik od progresije infekcije u aktivnu bolest. QFT-GIT je ELISA-test (enzyme-linked immunosorbent assay) koji nakon inkubacije s mješavinom sintetskih peptida koji simuliraju mikobakterijske proteine: ESAT-6, CFP-10 i TB7.7(p4) detektira otpuštanje interferona-gama (IFN-γ) iz T-limfocita u svježoj hepariniziranoj punoj krvi senzibiliziranih osoba. Svi BCG- cijepni sojevi, kao i većina netuberkuloznih mikobakterija, s izuzećem M. kansasii, M. szulgai i M. marinum, ne sadrže ove proteine. Osobe zaražene mikobakterijama iz M. tuberculosis kompleksa u krvi imaju limfocite koji prepoznaju mikobakterijske antigena. Detekcija, a zatim i kvantifikacija interferona-gama (IFN-γ) čine temelj ovog testa. Načela QFT-GIT testa Sustav QFT-GIT sadržava posebne epruvete (Nil kontrola-nulta kontrola, TB antigen i Mitogen kontrola-pozitivna kontrola odnosno kontrola pravilnog postupanja sa krvi i pravilne inkubacije) u koje se uzimaju uzorci pune krvi koji se najkasnije u roku od 16 sati nakon uzorkovanja trebaju inkubirati pri temperaturi od 370C u razdoblju od 16 – 24 sata. Uzorci se nakon inkubacije centrifugiraju, a nakon oduzimanja plazme slijedi utvrđivanje IFN-γ (uIJ/ml) metodom ELISA. Postupak rada: 2.4.1 Uzorkovanje QFT- GIT epruvete: Nil kontrola (sivi čep), TB antigen (crveni čep), Mitogen kontrola (ljubičasti čep). Antigeni se nalaze u suhom obliku na unutarnjoj stjenci epruvete. Svakom pacijentu potrebno je uzeti po 1ml krvi postupkom venepunkcije direktno u QFT-GIT epruvetu (Nil, TB, Mitogen). Poredak epruveta mora biti kako je navedeno: Nil, zatim TB Antigen i potom Mitogen. S obzirom da 1ml teče sporo (zbog slabijeg vakuuma) potrebno je pričekati 2-3 sekunde dulje kako bi smo bili sigurni da je epruveta napunjena. Na svakoj epruveti je nacrtana crta koja označava volumen krvi (0.8-1.2ml) koji treba biti u epruveti. Nakon vađenja epruvete se trebaju obavezno okrenuti nekoliko puta,a zatim intenzivno promiješati (okretati 8-10 puta). Miješanje je bitno kako bi se krv promiješala sa sadržajem
35