Xác định hàm lượng vitamin D3 trong một số sản phẩm thực phẩm và vitamin B2 trong nấm bằng HPLC

1. L do ch

t i.

].

V , nó tham gia

.

3

Vitamin B2 các men oxidase,

B2

cá...Tuy nhiên

Thiamin 1,4-2,2mg (%), Riboflavin 6,7-9,0mg (%), Niacin 60,6-73,3mg (%), Biotin, axit ascorbic 92-144mg (%), axit plantothenic 21,1 33,3mg (%) và axit folic 1,2 1,4mg /100g [26].

3, B2 (HPLC)

3

trong

2

.

Xây d ng quy tr nh phân t ch vitamin D3, B2 b cao HPLC, t x nh h ng c a ch ng trong m t s

+

pd

kh o s

ng vitamin D3, B2 trong m t s

lo i ng v ph m vi nghiên c u C cm c thu th p c c ch c b o qu n trong t l nh 40 C .

a bàn th nh ph Vinh.

Hình 1.

Hình 1.

Hình 1.

Hình 1.6.

2

Hình 1.

Ganoderma lucidum)

Hình 1.7.

3

04 (Ganoderma nigrolucidum)

1.1.1.

].

1.1.2.

B1), riboflavin (vitamin B2), niacin, vitamin (Hexagonia apiaria)

B6, axit pantothenic, folate và vitamin B12

phân tích [19].

1.1.3.

Hình 1.

(Amauroderma schmburgkii)

].

6

4

5

và folate.

1.1.4.

sáng. Niacin và vitamin B6

].

1.2. Vitamin D 1.2.1. Gi i thi tan 2

vitamin D2

7 3 3

và

vitamin D2

Hình 1.11.

ánh

1.2.2.

[18].

sâu[20][17]

[17]. ,

3 thán

[17][20][30].

6

7

Vitamin D c 1.3. Vitamin B2 1.3.1. Gi i thi Vitamin B2 2920 Vitamin B2

[17] .

-

.

1.2.3.

2 2

riboflavin, lactoflavin,ovoflavin 17H20N4O6

-

S t ng h

tr nh t ng h p di n

-

. lumichrome.

2

t ra 18IU vitamin D3[21] 3

2

1.2.4. Tình enzim xúc tác cho các quá trình oxy hóa- adenin- dinucleotit (FAD).

1.3.2.

-

2

: Vitamin B2

2mcg/100g.

8

9

: Vitamin B2 B3, B6

-

-

: Vitamin B2

hình thành t -

: Vitamin B2

ác

2

vitamin B2 2.

2.1.

2.1.1.

: Vitamin B2 Vitamin B2

-

B2 : Vitamin B2 B2

- Vitamin B2 1.3.3.

Vitamin B2

.

2

2.1.2.

1.1:

.

[19]

2

B2 (mg/100g) 4,64

là protein

3,5

[2].

2.1.2.1. Protein

1

Hàng

0,7 Phomat

0,5 amin.

0,47 Cá thu

a 96

0,4 là casein và whey:

0,3 0,17

mixen.

0,13 2

làm giàu vitamin B2 2

-mai.

2

2.1.2.2. Lipit

FMN và

10

11

98%.

2.1.3.1.

khác nhau.

-6 tháng, 6-12 tháng, 1-2-3

2.1.2.3.

2.1.3.2.

Lactos

a Khi lactose lên ramen hóa k

. protein

2.1.2.4. phospho

, hòa.

canxi

2.2.

2.2.1. protein

.

D. 2.1.3.

2.2.2.

Riêng

12

13

g

úc ].

-

Trong lòng

-

Biotin là vitamin B8 2.3.3.

-2,2mg (%), Riboflavin 6,7-9,0mg (%), Niacin 60,6-73,3mg (%), Biotin, axit ascorbic 92-144mg (%), axit plantothenic 21,1

33,3mg (%) và axit folic 1,2

2.3.

2.3.1.

Thu ].

1.2.

].

h

Thiamin (B1)

1,4mg

4,8-8,9mg

Ribiflavin (B2)

1,5mg

3,7-4,7mg

Niacin

18,2mg

42-108mg

Photpho

450mg

708-1348mg

9mg

15-17mg

450mg

33-199mg

2mg

12-22mg

Canxi

2.3.2.

14

15

2.4.2.

2.3.4. p.

-

F1

F2

15.00

F3 ba

(1983) [21]. khác nhau thì F1 và F2 là khác nhau.

2.4.3.

i.

2.4.

2.4.1.

) atography). (high performance liquid chromatography).

g

-

16

-

17

6

5

3

2.4.4.

1

2 4

8 7 Hình 1.13.

1.

2.

3.

4.

5.

6.

7.

Hình 1.12.

8.

-

-

18

19

C là n

-

k

.

-

-

0.1-9.999 ml/phút.

-

-

- VIS): 190 -

-

-

-

-30cm, -

-10mm. o

.

-

.

.

A = k.C

: A

20

21

-

2.4.5.

2.4.5.1.

-

2...

n tích, HPLC.

quang (v

UV - VIS thì dung

-

.

cacbon vòng (Phenyl-

-

ng: Ngoài các dung môi chính thì trong thành tách RP-

2.4.5.2.

cao.

2.4.5.3. Detector

: A = kC

. : -

.

22

23

VÀ 2.1.

0,001g. âm.

- Bình nón 250ml.

5, 10, 50, 100, 250ml.

- Pipet 5ml, 10ml, 20ml.

- Micropipet.

d vùng UV-

-

rong phân -

-

[15].

.

2.1.2.

- Metanol ( Merk) - n-hexan (Merk) - Dietyl ete (Merk)

2.4.6.

- Chu n vitamin D3 - Axetonitril (Merk) - Etanol 960 - Axit ascobic (Merk) - KOH, NaOH CH3COONa 0,05M - Dung môi Methanol (Merck) - Men amilase - Acid axetic (Merck) 2 cc ion.

T t c c c h a ch t c n l u thu c lo i tinh khi t phân t ch.

có

.

chuyên l

-

2.3.

24

25

D ch chi MeOH.

2.3.1. Vitamin D3 2.3.1.1.

3

có

2.3.1.4. metanol.

2.3.1.2.

ng tích.

3

- C t s c ký: c t s c ký o RP-18 dòng: 1,08 ml/phút.

-T - Nhi -

ng: 100% metanol : 300C

2.3.2. Vitamin B2 2.3.2.1. là 0,5ppm; 10ppm; 50ppm 2.3.2

2.3.1.3.

H nh pg m1 5 thêm 4ml natri ascobat (17,5 g ascobic+100 ml NaOH) + 50 ml etanol + 3 g KOH, cho vào bình c votex trong 30 phút. Ti n h 0 75 nhi ph ng, thêm v c và i 50 ml h n h p dietyl ete : n-hexan = 1:3. D ch chi t thu c chi t l i b r a b ng n khi trung t nh.

26

2

cho phép

100ppm.

2

2.3.2.3.

27

o

3.1.2.

3

o

2.3.2.4.

-

3COONa

0,05M: MeOH = 70:30(V/V)

18.

Hình 3.1.

3.1. Vitamin D3 3.1.1.

D3 0,5ppm; 1ppm; 5 ppm; .

D3 10ppm; 25ppm; 50ppm; 100ppm.

3.1

3

3

m

0,5

12,68392

12,73691

12,68372

1

22,46859

22,46857

22,39302

5

133,52037

133,52621

133,48506

10

253,37396

253,41572

253,37403

25

594,15656

594,15708

594,23649

50

1296,45618 1296,39052 1296,45217

100

2582,10376 2582,07592 2582,13294

b

R2

Hình 3.2.

25,83861

28

- 6,66622

3

0,99979

29

Hình 3.3.

3

30

Hình 3.4.

3

Hình 3.5.

3

31

Hình 3.8

vitamin D3

3.1.3. pháp phân tích 3.1.3.1.

Hình 3.6.

3

l ch chu n c a tín hi u

nhau 0,5ppm; 1ppm; 3 là 0,0037ppm.

3.1.3.2.

Hình 3.7.

3

3

nhau 0,5ppm; 1ppm; 5ppm; 10ppm; 25ppm; 50ppm; 100ppm là 0.0111ppm.

3

sau:

32

33

3.1.4.

3

.

3

vitamin D3(ppm). tính

3

C = (Co/m).Vdm.f - Co - Vdm

3 3

Hình 3.10.

Hình 3.9.

Hình 3.11.

34

35

ch chu n v

m, 10ppm, 25ppm, 50ppm, 100ppm. l ch chu

3.3.

3 (C)

ppm Xtb

3

STT

Co(ppm) 28,36762

726,31354

709,19050

2

1,76752

39,00392

44,18800

3

0,88543

16,21220

22,13575

1,33277

27,77074

33,31925

2,04891

46,27463

51,22275

dielac mama

5

709,19050

709,59135 709,62427 709,46871

0,2415

0,0340

44,18800

44,15952

44,19092

44,17948

0,0173

0,0392

22,13575

22,13362

22,12529

22,13155

0,0055

0,0250

33,31925

33,33273

33,31759

33,32319

0,0083

0,0249

51,22275

51,24297

51,25265

51,23946

0,0153

0,0298

24,67150

24,67093

24,66358

24,66867

0,0044

0,0179

15,76250

15,76728

15,76494

15,76490

0,0024

0,0152

mama

1

4

C(ppm)

6

0,98686

18,83301

24,67150

7

0,63050

9,62506

15,76250

optimum vinamilk

3.1.5.

3.1.5.1.

x l th ph p, ch -

nh gi k t qu th c nghi m sai s v c theo cĂ´ng th c sau: tb

CV(%)

alpha gold

HĂŹnh 3.12.

3.2.

SD

l pl ic

=

D= : CV% (RSD) =

36

37

-

3

l ch chu n:

= 0,0024

= 709,46871 H s bi n thiên: l ch chu n:

= 0,2415

N

H s bi n thiên: -

3.1.5.2.

vitamin D3

Hi u su

= 44,17948 l ch chu n:

= 0,0173

H s bi n thiên: -

3

= 22,13155 l ch chu n:

= 0,0055 Cm+c Cm

H s bi n thiên: -

Cc

3

= 33,32319 3.4 K

l ch chu n:

= 0,0083

H s bi n thiên: STT

= 51,23946 l ch chu n:

= 0,0153

Cm+c- Cm

Cc(ppm)

H (%)

22,13575

4,85127

5

97,03

26,98361

22,13602

4,84759

5

96,95

26,98623

22,13629

4,84994

5

96,99

Cm+c

Cm

1

26,98702

2 3

3

H s bi n thiên: -

3

Htb (%) =

= 24,66867 l ch chu n:

1 n

n

X

96,99 %

i 1

= 0,0044 3.2. Vitamin B2 3

bi n thiên: -

3

2

= 15,76490

38

39

3.5.

2

m

b

R2

ppm

3.2.2.

0,5

57,8243

57,4576

57,9443

10

1160,9643

1160,7951

1161,0254

50

5909,9194

5909,3551

5905,7642

118,37

-10,963

0,9999

2

Hình 3.13.

Hình 3.14.

2

Hình 3.15.

2

2

2

Y = 118,37x + -10,963

40

41

tích pic vitamin B2 2

2

Co

2

Vdm 2

Hình 3.16.

2

3.2.3 3.2.3

l ch chu n c a tín hi u Hình 3.17.

2

3.2.3 LO

2

nhau 0,5ppm; 10ppm và 50ppm là 0,018 ppm 3.2.4 2

42

43

3.6.

2

Co (ppm) HKG 406

C ( ppm)

0,22743

10

50

20,21801

0,21174

10

50

18,28830

1,1371 1,0587

HKG 401

0,51756

10

50

55,89994

1,2939

TH 04

0,10458

10

50

5,10844

0,5229

01

0,15005

10

50

10,70119

0,7502

3.2.5.

3.2.5

Hình 3.18.

Xi

3.7.

TT

HKG 406

1

10

1,1371

10

1,0587

10

1,2939

10

0,5229

10

0,7502

2

10

1,1242

10

1,0413

10

1,3082

10

0,5073

10

0,7721

3

10

1,1058

10

1,0625

10

1,2715

10

0,5486

10

Hình 3.19.

HKG 401

tích

tích

tích

01

tích

1,2912

tích

1,0541

SD

0,015

0,011

0,018

0,02

0,02

CV

1,33%

1,04%

1,39%

3,80%

2,66%

vitamin B2 = 1,1223

45

0,5262

0,7306

1,1223

-

44

TH 04

0,7509

l ch chu n:

= 0,015

3.8.

H s bi n thiên:

TT

= 1,0541 l ch chu n:

= 0,011

Cm+c - Cm

1

2,0372

1,0587

0,9785

1

97,85%

2

2,0125

1,0413

0,9712

1

97,12%

3

2,0361

1,0625

0,9736

1

97,36%

2

= 97,44%

= 1,12912 l ch chu n l ch chu n:

= 0,372

= 0,018 H s bi n thiên:

-

= 0,381%

2

= 0,5262 l ch chu n:

2

= 0,02

H s bi n thiên: -

g vitamin B2 = 0,7509 l ch chu n:

= 0,02

H s bi n thiên:

3.2.5

H Cm+c Cm Cc

46

%R

Cm

H s bi n thiên: -

Cc (ppm)

Cm+c

2

47

K 3 2

vitamin D3, B2 + Vitamin D3 có: LOD là 0,0037 và LOQ là 0,0111. + 3 trong :

[4].

[5]. Hoàng Kim Anh, [6].

[7].

S T

00ppm

S

alpha gold là 22,13575ppm [8]. Lê Lý Thùy Trâm (2007),

S S

.

[9].

t dielac optimum là 51,22275ppm

[10].

[11].

S + Vitamin B2 có LOD là 0,0504 và LOQ là 0,018. + 2 N

[1].

(2008), [2]. Lâm Xuân Thanh, [3].

. DHVinh

: [12].

[13].

87ppm

ác vitamin B1, B2, B3, B6, B12

N N N -

3,

.

3

2

3,

i

trong B2

B2

[14].

[15].

. Hóa sinh I . NXB Nông

[16]. Angelika Gratzfeld-Huesgen (1997). HPLC analysis of viatmins in tables using HPLC. Agilent technologies, publication number 5966 -0639E [17]. DeLuca Hector F;(2004), Overview of general physiologic features and functions of vitamin D, American Society for Clinical Nutrition, USA [18].

[19]. George F.M Ball (2006). Vitamins in foods Analysis, Bioavailability, and Stability.

Taylor & Francis group [20].

[21]. Bilal Ahmad Wani, R.H Bodha, and A.H.Wani (2010). Nutritional and medicinal imfortance of mushrooms. Journal of medicinal Plants research, vol 4 (24), pp 2598- 2604 [22]. Chang S.T (2008). Mushrooms as Functional Foods. Wiley

48

49

[23]. Chang S.T and Miles P.G (2004). Mushroom cultivaton, nutritional value, medicinal effect, and enviroment impact. Second edition. CRC press p.1-41

-

-

[24] David A. B (2003). Nutritional biochemistry of the vitamins. Second edition,

Cambridge university press [25]. vitamins

Handbook of Francis group

[26].Kakon A.J, Md. Bazlul Karim Choudhury, Shusmita Saha (2012). Mush is an ideal food supplement. J.Dhaka National Med.Cod.Hoss.

:

[27]. Regina Prado Zanes Furlani, Helena T.G (2008). Analytical nutritional and Clinical Methods Vitamin B1 and B2 contents in cultivated mushrooms. Food chemistry [28]. AOAC 981.17 (1982), Vitamin D in Fortified Milk and Milkpowder - Liquid Chromatographic Method [29]. AOAC 992.26, (1995),Vitamin D3 (cholecalciferol) in ready-to-feed milk-based infant formula. Liquid chromatographic method [30]. A. Catharine Ross et al, (2011), Dietary Reference Intakes For Calcium And

Msv: 1052043927 Msv: 1052043941

Khóa : 51 Ngành : 1.

3

vitamin B2

Vitamin D, National Academy of Sciences, Washington, D.C [31].

Trang web: [32]. http://idoc.vn/tai-lieu/xac-dinh-ham-luong-vitamin-d-d2-va-d3-trong-thuc-pham-bangphuong-phap.html [33]. http://www.hoahoc.org [34]. http://vi.wikipedia.org/wiki/Vitamin_D [35]. http://xetnghiemdakhoa.com/diendan/showthread.php?tid=820 [36]. http://123doc.org/document/927970-xac-dinh-ham-luong-vitamin-b2-bang-phuongphap-trac-quang.htm [37]. http://123doc.org/document/1342713-cac-phuong-phap-xac-dinh-ham-luong-vitamintrong-thuc-pham.htm [38].

Ngày ho

: : :

4 4 5

)

50

51

-

-

-

-

Msv: 1052043927 Msv: 1052043941

Msv: 1052043927 Msv: 1052043941 Khรณa:

51

Khรณa: 51 ThS.

1.

1. ............ ....

2.

......................................................

1

HPLC Th.s

High Performance Liquid Chromatography

NP HPLC

RP HPLC -

LOD LOQ UV VIS

Ultraviolet

IU

Võ

FMN

Flavin mononucleotide

FAD

Flavin adenine dinucleotide

ELSD MeOH

2

Metanol

3