Xây dựng phương pháp định lượng Inulin trong một số thực phẩm chức năng bằng HPLC-RI

B

YT

IH

B C HÀ N I

YT

IH

C HÀ N I

NGUY N TH THOA Mã sinh viên: 1401585

NGUY N TH THOA

XÂY D NG INULIN TRONG M T S TH C PH M CH NG HPLC-RI

XÂY D NG INULIN TRONG M T S TH C PH M CH NG HPLC-RI

KHÓA LU N T T NGHI ng d n: 1. ThS. Nguy n Lâm H ng

KHÓA LU N T T NGHI

2. ThS. Lê H c hi n: Khoa Hoá th c ph m-Vi

HÀ N I

2019

HÀ N I

2019

ng Qu c gia

M CL C

L IC Sau m t th i gian th c hi n, khóa lu trong m t s th c ph m ch

ng Inulin

ng HPLC-

c

k t qu này, ngoài n l c c a b t phía nhà

ng, b

c r t nhi u s c hi

tài- Vi

ng viên, giúp ng Qu c gia, gia

n bè.

.................................................................................................................i

M C L C ..................................................................................................................... ii

c t i ThS. Nguy n Lâm

ng, ch b

H ng

ng viên em trong su t

quá trình th c hi n khóa lu n này.

khóa lu n. Bên c

i ThS. Lê H

và t

,

DANH M C CÁC HÌNH V

il

n các anh ch

NG QUAN .........................................................................................2 1.1 T NG QUAN V INULIN.................................................................................2

khoa Hóa th c 1.2 T NG QUAN V S C KÝ L NG HI

u ki n r t nhi u cho em th c hi n khóa lu n này.

1.2.1. S c ký l ng hi Trong quá trình th c hi

l c và c g ng h

tránh kh i nh ng thi u sót, em r t mong nh n khóa lu n c a em ti p t

TH ................................................................vi

.................................................................................................................1

c ti p

u ki n cho em trong su t quá trình nghiên c u, th c hi n ,

DANH M C CÁC B NG.............................................................................................v

TV

Em xin g i l i c ng d n, h tr và t

th

VI T T T .............................................iv

DANH M C CÁC KÝ HI U, CÁC CH

c tiên, em xin bày t s kính tr ng và bi

ph

L IC

.................................5

...........................................................................5

không

c nh ng ý ki n ch b o, góp ý t các

1.2.2. Ch t nh i c t .................................................................................................6 1.2.3. Detetor RI ......................................................................................................8

c hoàn thi

n nay .......................................10

1.2.4. M t s

Em xin chân thành c

U ......................13 NG NGHIÊN C U ..........................................................................13 Hà N

2.2 NGUYÊN V T LI U........................................................................................13 Sinh viên 2.2.1. Ch t chu n ..................................................................................................13 Nguy n Th Thoa

2.2.2. Chu n b các dung d ch chu n ..................................................................13 2.2.3. Chu n b dung d ch placebo ......................................................................14 2.2.4. Dung môi, hoá ch t ....................................................................................14 2.2.5. D ng c , thi t b .........................................................................................14 2.2.6. N i dung nghiên c u ..................................................................................15 U ...................................................................15

i

ii

2.3.1. Kh

u ki n HPLC ...........................................................................15

2.3.2. Kh

u ki n x lý m u.....................................................................15

2.3.3. Th

nh quy trình...................................................................................16

2.3.4. Áp d

DANH M C CÁC KÝ HI U, CÁC CH Ký hi u

Ti ng Anh

AOAC

Association of Official Analytical Hi p h i các nhà hoá phân tích

FODMAP

Fermentable

ng. ......................................17

Ti ng Vi t

communityes

ng Inulin trong m t s

th c ph m ch

chính th c oligo-,

di-,

saccharides and polyols 2.4. X

LÝ K T QU ............................................................................................18

HPLC

C NGHI M K T QU VÀ BÀN LU N ...............................18 3.1. XÂY D NG QUY TRÌNH PHÂN TÍCH .......................................................18 3.1.1. L a ch

3.1.3. K t qu ........................................................................................................21 3.1.4. Quy trình phân tích Inulin trong th c ph m ch 3.2 TH

.........................22

......................................................................23 nh h th ng ...................................................................................23

3.2.2. Tính ch n l c ..............................................................................................24 ng...............................................26

3.2.3. Gi i h n phát hi n và gi i h

3.2.4. Kho ng tuy n tính ......................................................................................27

High

men performance S c ký l ng hi

HPTLC

High

performance

thin

HL

ng

HLTN

ng trên nhãn

LOD

Limit of detection

Gi i h

LOQ

Limit of quantification

Gi i h

RI

Refractive index

(Detetor) ch s khúc x

RSD%

Relative standard deviation

CH

TS

SCFAs

Short chain fatty acids

SD

Standard deviation

TLC

Thin layer chromatography

ng

i

Các acid béo chu i ng n l ch chu n S c ký l p m ng

TLTK

Tài li u tham kh o

M U TH C PH M

NG ...................................................................31

3.4. BÀN LU N .......................................................................................................32 K T LU N VÀ KI N NGH .....................................................................................33 TÀI LI U THAM KH O...........................................................................................36 PH L C .....................................................................................................................39

iii

nh tính

l ch chu

.......................................................................................................29 NG D

layer S c ký l p m ng hi

chromatography

l p l i .....................................................................................................28

3.3.

mono- Các lo i saccharid có th lên

Liquidchromatography

u ki n s c ký ..........................................................................18

3.1.2. Xây d ng quy trình x lý m u ...................................................................20

VI T T T

iv

DANH M C CÁC B NG B

DANH M C CÁC HÌNH V

m c t trong m t s phân tích Inulin trên th gi i ..............................7

B ng 1.2: M t s

..........................................................10

Hình 1.1: C u trúc hoá h c c a Inulin............................................................................2 Hình 1.2: M t s tác d ng c a GLP-1 ............................................................................4

B ng 2.1: Thành ph n trong 3g m u placebo (n n m u r n) .......................................14

Hình 1.3: M t s th c ph m ch

B ng 2.2: H

Hình 1.4: Mô ph ng hi

ng kh o sát ...................................................................................15

B ng 3.1: K t qu kh o sát th i gian chi t và k thu t chi t trên n n m u r n ...........22 B ng 3.2: K t qu kh

TH

sung Inulin ..................................................5

ng khúc x .........................................................................8

c a detector RI ......................................................................................9

l p l i h th ng ............................................................23

Hình 3.1: S

trên c t Shodex OHpack SB-806M HQ ........................................18

B ng 3.3: Giá tr S/N c a các pic n p chu n và k t qu LOQ, LOD ...........................26

Hình 3.2: S

c t Shodex OHpack SB-806M HQ n i v i c t Supelcosil LC-NH2

B ng 3.4: K t qu kh o sát kho ng tuy n tính c a Inulin ............................................27

.......................................................................................................................................19

B ng 3.5: K t qu

l pl

i v i Inulin ....................................................28

Hình 3.3: S

trên h ghép n i ti p 2 c t Shodex OHpack SB-806M HQ ..........19

B ng 3.6: K t qu

thu h i

m c n p chu n n

th p .......................29

Hình 3.4: S

trên h

ng NaNO3 0,1M .....................................................20

B ng 3.7: K t qu

thu h i

m c n p chu n n

trung bình .............30

Hình 3.5: S

trên h

c kh ion 18m ..........................................20

B ng 3.8: K t qu

thu h i v i m c n p chu n

B ng 3.9: K t qu phân tích m t s m u th c t trên th

n

cao ..................30

ng..................................31

Hình 3.6: Quy trình x lý m u d ki n ..........................................................................21 Hình 3.7: Bi

kh o sát th i gian chi t và k thu t chi t ........................................21

Hình 3.8: Quy trình x lý m u.......................................................................................23 Hình 3.9: S

các dung dich chu n Inulin 1000 ppm khi ch ng lên nhau ..........24

Hình 3.10: S

m u tr ng ....................................................................................25

Hình 3.11: S

chu n Inulin 1000 ppm ...............................................................25

Hình 3.12: S

m u placebo ................................................................................25

Hình 3.13: S

m u placebo thêm chu n Inulin 200 ppm ...................................26

Hình 3.14: Giá tr S/N c a Inulin trong m u n p chu n Inulin 125 ppm .....................27 th bi u di n m

n tính gi a di n tích pic và n

c a Inulin .......................................................................................................................28 Hình 3.16: Quy trình x lý m u.....................................................................................34

v

vi

NG QUAN

TV 1.1 T NG QUAN V INULIN Xã h i này càng phát tri n thì nhu c u b o v và nâng cao s c kho ngày càng c quan tâm. Nhi u nhà s n xu th

ng nghiên c u, phát tri

ng các th c ph m ch

sung ch

góp

ph n c i thi n các b

t trong các s n ph m y

là các th c ph m ch

sung Inulin

Inulin là nhóm các polymer c k t v i nhau b ng liên k

m t lo i ch

ng c

ng v t b c cao do không có emzym inulinase, tuy nhiên l s vi sinh v

ng ru

L.acidophilus, t o ra các s n ph

Inulin trong th c v t ch a 2

Inulin là m t lo i polymer c a fructose, n nhi u l

i s d ng. Tuy nhiên,

c b sung hàng ngày s c ta,vi c

t ra cho các nhà qu n lý là c ng các th c ph m ch

tra, giám sát ch

is

m b o ch

cho nhà s n xu t. Vì v y, vi c xây d ch

48%), t i (9

cây rau di c m t s th c v t s d

cách d tr

sung Inulin nh m ki m

ng. H u h t các loài th c v t t ng h p và d tr Inulin không d

tr

t [6].

ng

ng Inulin trong th c ph m

n thi t.

Chúng tôi ti n hành nghiên c u khoá lu n t t nghi ng Inulin trong m t s th c ph m ch

tra, giám sát ch

ng HPLC-

nh m góp ph n ki m

ng các ch ph m có b sung Inulin v i hai m c tiêu sau:

1. Xây d ng và th

ng Inulin trong m t s th c ph m

ch 2. Áp d

ki m tra m t s m u th c ph m ch

b

ng.

Hình 1.1: C u trúc hoá h c c a Inulin - Công th c phân t : C6nH10n+2O5n+1, n t 3

61.

- Tính ch t: B t màu tr ng, không mùi, d hút m Tan t t trong

tan 120 g/L (25

Nhi

nóng ch y: 165

Nhi

chuy n kính: 125

- Tác d 1

i ch t có giá tr

i c a cây.

c tìm th y trong nhi u loài th c v

sung Inulin

c tiêu hoá b i m t

dài c a chu i ph thu c vào

loài th c v t và th

ng Inulin v

th trong khi nhu c u s d ng th c ph m ch Trong hoàn c

i

i và

[7], [26].

t th c v t.

ngày m

c liên

-1) glycosid. Vì v y, Inulin không b tiêu hoá

180 140

c lý: 2

)

t

y s cân b ng c a h vi khu

ng ru t. Trên th c t ,

các nghiên c

ra r ng Inulin có th giúp kích thích s phát tri n c a vi khu n có

l i [14], [15]

ng vi khu n này có th giúp c i thi n h tiêu hoá, mi n d ch

và s c kho t ng th [26].

Inulin giúp làm gi m tri u ch ng táo bón. M t nghiên c u cho th y nh ng i dùng I

i ti

[11]. Nghiên c u kéo

dài 4 tu n c a Marteau P. và c ng s

ra r ng nh

dùng 15 gram I khoa h

[25] ra r ng không có s

ng c a I

t s nghiên c [10], [18], [28] l

i l n tu

c

a, các nhà ng ru t [23].

ra r ng Inulin có kh

tr gi m cân [5],

c a tác d ng này là do s lên men Inulin b i các vi sinh v t có

ng tiêu hoá t o ra các acid béo chu i ng n (SCFAs), các s n ph m này làm u hi n c a proglucagon, kích thích t bào Enteroendocrine L t i ru t s n sinh ra

GLP-1 (Glucagon-like peptid 1) và PYY (Peptid YY) [13]. PYY là m t peptid ng n g m 36 acid amin, có tác d ng c ch

c gi

ng, kéo dài

th i gian tháo r ng c a d dày. Tuy nhiên, trong các nghiên c u v tr th a cân béo phì, Inulin không có hi u qu trong vi

[23].

ki và ti n ti

i m c b nh ti

Hình 1.2: M t s tác d ng c a GLP-1

ng [12], [18], [19], [30]

GLP-1 (m t lo i peptid ng n có 30

-1 còn có nh ng tác d c a d dày, làm ch m h p thu tinh b t. M t s nghiên c 1 có th kích thích tu tái sinh t c s s ng c a các t

ch it

31 acid amin). GLP-1 kích thích ti t insulin m t

cách có l thu c glucose, t c là nó ch kích thích ti t insulin

thi

ng

ng l i s ch t t

ng trong máu i gian tháo r ng ng v t cho th y, GLPi

i tràng phát tri n [6]

c ru

ch y u d a trên vai trò c a các SCFAs bao g m acid

butyric, là s n ph m trong quá trình lên men Inulin t i tr c tràng [24]. Acid butyric là ngu

ng cho các t bào ru t k

các t

i c ch s

a

c ch enzym histon deacetylase [16]. sung I

[9]. mu i khoáng

c ch

thanh thi u niên, ch y u thông qua tác d

p thu calci, magie, p thu canci

ru t

già [3], [6], [17], [21]. u v Inulin cho th y Inulin an toàn cho h u h t m nhiên, v i nh mong mu

ng và tiêu ch y. Các tri u ch ng này s d ng h n khi c b sung Inulin [8], [35].

3

i. Tuy

i không dung n p FODMAP có th g p m t s tác d ng không

4

- M t s th c ph m ch

sung Inulin

cl b lo

cc

c r a gi

h t gel

u

ic al x

th tích Vo

th tích r ng gi a các

trong c t. c nh

c nh nh t c a l x p s khu ch

tích Vt. có kí

c trung gian s

l c

c tách d n theo m

c, phân t nh

khu ch tán

ra sau trong th tích Vp

ng n m gi a Vo và Vt .

-D

ng, có th phân lo i s c ký l ng trên gel thành: S c ký th m gel (GPC: gel-permeation chromatography): là s ng k

Hình 1.3: M t s th c ph m ch

sung Inulin

c.

S c ký l c gel (GFC: gel filtration chromatography): s

1.2 T NG QUAN V S C KÝ L NG HI

các polymer sinh h

1.2.1. S c ký l ng hi Nguyên t c: S c kí l ng là quá trình tách x y ra trên c t tách v r

ng là ch t l ng. Các ch t phân tích di chuy n qua c t, t n ái l

i c a ch t v

ch t phân tích di chuy n qua c t c

t di chuy n khác

r a gi i các ch t phân

c [1].

1.2.2. Ch t nh i c t a. Các lo

ng dùng u ch

- Trong s

ng. Thành ph n pha u ch

ng dùng cellulose và dextran, là polymer c a D-glucose. t o thành l x có k

- Phân lo i:

i ta dùng các ch

liên

k t các chu

S c ký phân b

liên +

k t v i các nhóm ch

S c ký h p ph

s t o ra các ch t

i ion

(RCH2)3SO3H, -CH2COOH, -CH2N (CH3)3 i ion.

Polyacrilamid: Chu

S c ký rây phân t

c liên k t v i nhau b ng phân t N, N

methylenbisacrylamid

c ký ái l c

- Trong s c ký l

ng phân quang h c i

ng dùng là polysacharid và

polyacrilamid:

tích v i th i gian h p lý [1].

S

tách

ng c a khoá lu n này là s c ký rây phân t

(SEC: size exclution

chromatography) hay còn g i là s c ký l ng trên gel. Nguyên lý tách c a các ch t d a

polyhydroxymethacrylat v

cl x

n vài

c s d ng trong các nghiên c u phân tích Inulin trên th

gi i.

5

ng trong kho ng t

µm. b. M t s ch t nh i c

c phân t :

ng dùng các h t hình c u poly-styren ho c

6

kh o

sát

trên

c t

Shodex

OHpack

SB-806M

c h t 13µ

HQ

có

ch t

nh i

là

c l x p 15000 , có kh

c các phân t có tr 1.2.3. Detetor RI B

m c t trong m t s phân tích Inulin trên th gi i

Detector là b ph

phát hi n các ch

gi i ra kh i c t s c ký. M i ch STT Tên c t 1

Ch t nh i

TLTK

v in m u phân tích. Tùy thu c vào tính ch t lý, hóa c

(300 x 7,5mm)

s

các nút

c l a ch n thích h

ion Ca .

2

c

7,8mm)

liên k t v i m t phân t glucose

các liên k t sulfonate

các nút

u ki n phòng thí

tài l a ch n RI là detector c a k thu t s c ký.

- Polystyren-divinylbenzen, có [36]

ion Pb C t Rezex RCM (300 x 7,8 mm)

nghi

c h t: 25µm

các liên k t sulfonate

4

d n.

u nên Inulin r t ít h p th UV-VIS và không

ng v i detector hu nh quang. Qua tham kh o tài li u k t h p v

ion Ca , t l liên k t chéo 4% C t SP0801 Pb2+ (300 x 8,0 mm)

ng v i detector. Các lo i detector

c. Do c u trúc hoá h c g m m t chu i dài các phân t fructose

C t Animex HPX-42C (300 x - Polystyren-divinylbenzen, có [38] 2+

3

nh ng ch

ng nghiên c u c a Khoá lu n t t nghi p này là Inulin- m t lo i polymer

c h t: 10µm

-

ng ch t c n phân tích, detector

c s d ng trong HPLC: RI, h p th UV-VIS, hu nh quang,

2+

-

ng khác bi t

ng các thành ph n trong

C t Shim-pack SCR Shimadzu - Polystyren-divinylbenzen, có [37] các liên k t sulfonate

c tách riêng và r a cho tín hi

các nút

2+

c h t: 7µm

- Polystyren-divinylbenzen, có [20] các liên k t ngang

các nút ion

+

Ag , t l liên k t 8% 5

c h t: 8µm

C t Shodex OHpak SB-804 (300 x - Polyhydroxymethacrylat, 7,9mm)

Hình 1.4: Mô ph ng hi [22]

ng khúc x

Nguyên lý phát hi n c a detector RI d a trên s

-

c h t: 10µm

bào thu

-

cl x

bu ng còn l i ch

i ch s khúc x . M t t

c chia làm hai bu ng. Dòng ch y t c t LC ch ng. Khi dòng ch

ng m

ng m tk

ch t phân tích nào, dung môi bên trong hai bu ng gi ng nhau. Lúc này, tia t i và tia Vì Inulin là m t lo

c nên k thu

l a ch n là s c ký l ng hi

c

d ng c t có ch t nh i là poly-styren

ho c polyhydroxymethacrylat. K t h p v

u ki n phòng thí nghi 7

tài ti n hành

khúc x s h p v i nhau m t góc 180o (Hình 1.4A ch y ch a b t kì thành ph

ng, tia t i s b b

ng h p dòng m t

phân cách gi a hai bu ng do s chênh l ch ch s khúc x gi a hai dung môi (Hình 8

1.4B). B

ng s

i này, ta có th

c ch t c n phân tích

Nh y c m v i nh

u.

i v nhi

. C detector và c

u ph

c

u nhi t.

Khó s d ng trong ch

gradient vì khó so sánh tr s RI c a m u và pha

ng thành ph n r a gi i s b

i trong quá trình phân tích.

1.2.4. M t s

n nay

a. Trên th gi i Ngay t nh

ng nghiên c bi n nh

u tiên v

i. Ngày nay

phân tích Inulin là s c ký l ng hi

d ng

detector ch s khúc x (RI) [34],[36], [37], [38] ho c s d ng detector tán x (ELSD) [20]. M t s ít nghiên c

d

[27]

phân tích Inulin.

nzym [32] ho c TLC [33]

c a detector RI -

nh y th c s d ng ph bi

-

B ng 1.2: M t s

n RI

-VIS. Tuy nhiên, detector RI l i có m t s l i th

STT M u

Có th phát hi n t t c các ch t. Các ch t không h p th tia UVphát hi n b ng detector UV-

S d

i ch s khúc x x

c v i các dung môi có kh

các dung môi h

c

c phát

1

i v i m i ch t phân tích.

r

p thu tia UV-VIS trong khi

Chicory

và n

i c a detector UV-VIS không cung c p thông tin v n in

tích.

nh ng m t h n ch nh

trong 48 gi , siêu âm

ng: H2O

2

phòng trong 30 phút, l c

dòng: 1ml/phút qua màng l c 0,45µm.

Inulin trong C t Shodex SP0810 0,45g b t r khô chi t 3 l n, [29]

ch t phân

r

ch t phân

Chicory

cây Pb2+ (300mm x 8,0 m i l n 60 phút v i EtOH mm), 85

95%, l n 1 và 2 chi t v i

Detetor RI, 85

40ml, l n 3 chi t v i 20ml,

ng: H2O T

g

100ml, l c qua màng

dòng: 1ml/phút 0,45 µm.

nh y th p (ph m vi mg/L)

9

nhi t

ch t

m n i tr i so v i detector UVnh:

[37]

c ngâm trong EtOH 95%

Detetor RI, 80oC

T

c h p th ph thu c vào t ng ch

cb

cây Shimadzu, 80oC

ng c n s d ng

c m i quan h tr c ti p gi ng UV-

- Bên c nh nh

TLTK

Inulin trong C t Shim-pack SCR 1g b t r cây rau di

p th tia UV-VIS.

Có kh

X lý m u

K thu t phân tích HPLC

ng,

i có th

detector UV-VIS không th s d ng trong m t s

phân tích. B i l

u ki n phân tích

tích

i detector UV-VIS:

hi n b i detector RI do s

phân

10

3

Inulin trong C t Aminex HPX-87H Hút chính xác 1ml siro cho [34]

ly tâm l y ph

s n ph m siro (300mm x 7,8mm),

l c qua màng l c 0,22µm.

multivitamin

nh m c 10ml,

80

nh m c v

b

c

kh ion, siêu âm 60 70 ng :H2O

7

,

c

trong 5 phút, hút chính xác

T

nh m v

cây SB-804 HQ (300 x thu

artichoke

c kh ion,

Inulin trong C t Animex HPX-42C 1g m c

o

cây (300 x 7,8 mm), 80 C

T

0,8 lo i b

ml/phút

, t a b ng Ca(OH)2

n pH =11, trung hoà Ca(OH)2

o

100 ml H2O 85 C trong 15

pH =8, t y màu b ng H2O2,

c qua màng

t t a Inulin b ng

Topinambour Detector RI, 80 C

T

dòng;

ml H2O

c chi t trong [38]

o

ng: H2O

b t ho t

nh , chi t cách thu v i 200

ng: H2O 100%

l c qua màng 0,45µm.

4

ng H3PO4

l c 0,2µm.

dòng:

Inulin trong C t s a chua

0,6

c c kh ion,

SP0810

Pb

2+

30 ml H2O 100oC trong 10

Detetor RI

phút., lo i t a protein b ng 5

ng: H2O

l c qua màng 0,45µm

c chi t v i [36]

10g s

(300mm x 8,0 i.d.)

T

K thu t phân tích HPTLC 8

ml dung dich Carrez I và

Inulin trong B n m ng silicagel th c ph m

dòng: 1 ml/phút 1465 ml dung dich Carrez II c qua màng l c 0,45µm.

6

7,8

mm,

8

µm),

Phenomenex, 80oC.

dòng:

ho t

tính

0,5 INU/g,

ml/phút

propano:aceton:H2O

30 phút trong 100ml. D ch

(40:30:25),

chi

c tr n v i 5 ml dung d ch

phát hi n: 100ml,

enzyme

l c

qua

màng

0,45µm.

b ng

scanner và m

máy k

1740

60o

thêm 1,5 ml TCA 20% (**),

Chú thích: (*) Dung dich Carrez I: hoà tan 15,0g K4Fe(CN)6.3H2O trong H2 100ml

11

nh m c v

ng các v t Inulin

thêm 100µL inulinase có

ng: H2O T

ng nh t, [31]

n- chi t cách thu 85 C trong

DPA (***)

m acetat (0,1M, Ph 4,5),

Detetor ELSD

2g th c ph

o

ng:

Thu c th

Inulin trong C t Rezex RCM (300 x 2ml dung d ch s a tách béo [20] s a tách béo

n

-

ml/phút 5

[22]

c xay Detector: RI

nh m c b

c

Jerusalem

dòng: 1ml d ch l c cho vào bình

0,5ml/phút

Inulin trong C t Shodex OHpak 50g r

12

nh m c v

Dung dich Carrez II: hoà tan 30,0g ZnSO4.7H2O trong H2

Dãy dung d ch chu n: t dung d ch chu n g c, pha dãy chu n có n

nh m c v

n 5000 ppm. B o qu n

100ml (**) TCA: Tricloacetic

nhi

-24

o

n khi dùng.

2.2.3. Chu n b dung d ch placebo

(***) DPA: Diphenylamin

M u placebo: do n n m u là th c ph m ch s n ph m r

ng. Vì v

nn nm

không ch a Inulin làm m Vi t Nam ng b ng b ng

Thành ph n

u có sai s l n.

v

nh nên hi n

ng c th .

T th c t trên, qua tham kh o tài li u k t h p v tài ti n hành kh o sát, xây d

u ki n phòng thí nghi m, ng Inulin b ng

HPLC v i detector RI, c t s c ký Shodex OHpack SB-806M HQ có ch t nh i là c.

U NG NGHIÊN C U ng nghiên c u c a

ng

Calci Cacbonat (Nano)

50mg

Vitamin D3

200UI

Vitamin A

250UI

Nguyên sinh ch

1000mg

L-Lysin

20mg

Vitamin B1

0,4mg

Vitamin B2

0,2mg

Vitamin B6

0,4mg

Vitamin PP

10mg

Thành ph n khác v

tài là Inulin trong m t s m u th c ph m ch

b

c trình bày trong b ng sau:

B ng 2.1: Thành ph n trong 3g m u placebo (n n m u r n)

pháp chu

Riêng v i Inulin, do không còn tính kh và không có góc quay c

i di n nh t và

n hành chi t theo quy trình chi t.

Thành ph n m

Vi t Nam, các carbohydrat có tính kh

n n n m u các

tài ti n hành kh o sát thành ph n n n m u c a 6 m u

th c ph m ch b.

t 125

1 gói

ng.

2.2.4. Dung môi, hoá ch t

2.2 NGUYÊN V T LI U

-

2.2.1. Ch t chu n ng 97,0%, CAS number 9005-80-

c cung c p b i Sigma-

-

Natri nitrat c a Merck c kh

Aldrich.

-

Natri azid c a Merck

2.2.2. Chu n b các dung d ch chu n

-

Natri hydroxid c a Merck

Dung d ch chu n g c: ti n hành cân chính xác kho ng 50,0 mg chu n Inulin, hoà tan b

c c t hai l

nh m

g cn

20000ppm. B o qu n

nh m -24o

nhi

13

n khi dùng.

c dung d ch chu n

c.

c. c

2.2.5. D ng c , thi t b Các thi t b , d ng c s d ng trong nghiên c u: -

H th ng máy HPLC Waters e2695 c a M cùng ph n m m Empower® 3 2471

-

C t s c ký Shodex OHpack SB-806M HQ (300 x 8,0mm i.d.)

14

c)

-

-

ngapo)

-

Th i gian chi t.

2.3.3. Th

-

Máy l c vortex

-

Máy ly tâm l

-

Ph u l c Buchner, b l c dung môi, l c m u v i màng l c 0,45µm

nh quy trình lý m

c)

nh h th ng HPLC-RI

c

nh tính phù h p c a h th ng b ng cách tiêm l p l i 6 l n 1 dung d ch

-

T âm sâu Panasonic

chu n có n

-

Màng l c PTFE 0,45 µm

c a các l n tiêm s c ký.

-

ng falcol 50ml, 15ml Pipetman 100

-

Các d ng c

200 µL, 10

100 µL

th b

nh m c 10ml, 25nl, 50 ml, pipet Pasteur thu tinh, c c

l ch chu

-

Xây d ng quy trình chi t xu t Inulin trong các m u th c ph m ch

-

Kh

-

Th

-

Áp d

u ki

-

c xây d ng. ki m tra m t s m u th c ph m ch

Chu n b các m u sau:

Yêu c u: trên s

B ng 2.2: H c kh ion 18m

MP2

NaNO3 0,1M/H2O

-

K thu t chi

nh nh t c a ch t phân tích trong m u th

nh nh t c a ch t phân tích trong m u th có th p

ng v

nh: thêm chu n v i n giá tr

ng kh o sát [20], [34]

nh

p. gi m d n vào m

ng. LOD là giá tr mà n

ng n n (S/N=3), LOQ là giá tr n

t mà t

y tín hi y tín hi

nh n g p 3 l n nhi u n g p 10 l n nhi u

nh giá tr LOD qua công th c LOQ = 3xLOD. d. Kho ng tuy n tính

u ki n x lý m u

Qua tham kh o các tài li u và d

ng

ng. Gi i

ng (LOQ) là n

ng d a trên các tài li u tham kh o

MP1

m xu t hi n pic

có th phát hi h

C t Shodex OHpak SB-806M HQ (300mm x 8.0 mm i.d.)

kh o sát:

c, t i th

Gi i h n phát hi n (LOD) là n

u ki n HPLC

là H2

c am

c.

c xu t hi n pic l .

c. Gi i h n phát hi n và gi i h

Kh o sát c t s c ký s d ng:

2.3.2. Kh

c 2.2.2

Ti n hành ch y s c ký 3 m u trên, so sánh các pic trên s

c

U

Kh o sát m t s

,00% [2].

M u placebo, m u placebo thêm chu n.

phân tích Inulin.

b sung Inulin.

-

i RSD (%) không l

M u chu n I

-

-

n tích pic

b. Tính ch n l c

u l c, vial lo

2.2.6. N i dung nghiên c u

2.3.1. Kh

n m trong kho ng tuy n tính. Ghi l i th

Yêu c u: chênh l ch di n tích pic, tR gi a các l n tiêm c a cùng m t m u, bi u

1000 µL, 20

có m ,

c th m

nh v các tiêu chí sau:

-

-

u ki n phân tích Inulin b ng HPLC-

tan c

tài c 85oC

15

nh dung môi chi t

- Chu n b dãy dung d ch chu n có n chu n d a vào giá tr LOQ, gi i h n trên c

n, gi i h ng chu

trong m t s th c ph m ch

ng.

16

ic

ng ng Inulin

- Ti n hành s c ký, xây d

nh h s

th c ph m ch

u thu th p

r.

n hoá.

-Yêu c

ng h i quy ph i có d

ng th ng và 0,995 r 1.

2.4. X

K t qu

l pl i -

chính xác c a m t quá trình phân tích di n t s th ng nh t (m

tán) k t qu gi a 1 lo i nh

phân

nhi u l n l y m u trên cùng m t m u th

c x lý b ng ph n m m Empower®3 3471 và tính toán

b ng Excel 2019.

ng nh t

C NGHI M K T QU VÀ BÀN LU N

u ki n mô t .

-

l l i

u ki

ng) xác

cl

3.1. XÂY D NG QUY TRÌNH PHÂN TÍCH 3.1.1. L a ch

nh b ng cách ti n hành chi t và ch y s c ký m u th c ph m ch 6l

LÝ K T QU

u ki n s c ký

D a trên các TLTK cùng v

phân tán s li u d a vào giá tr RSD (%). s

tài c T

u ki n phòng thí nghi

kh

u ki n

nh m t s thông s sau:

dòng: 1ml/phút

Th tích tiêm: 10µl

l ch chu n N là s l n thí nghi m

Nhi

c t: 40oC

Xi là giá tr

Nhi

detector: 40oC

c c a l n th

a. L a ch n c t s c ký

nghi m th

Qua tham kh o m t s tài li u, chúng tôi ti n hành kh o sát trên ba mô hình c t Yêu c u: chênh l ch k t qu gi a các l n th , bi u th b i RSD (%) c a Inulin ph i không l m cn

im cn

l ch chu 100 ppm và 3,7% t i

-

C t Shodex OHpak SB-

-

Ghép n i ti p c t Shodex OHpak SB-806M HQ (300mm x 8,0mm i.d.) v i c t Supelcosil LC-NH2 (25cm x 4,6mm)

0,1 % [4].

-

thu h i c

n vào m u

ng thêm chu n vào

m c th p, trung bình và cao. T i m i n

K t qu

Ghép n i ti p hai c t Shodex OHpak SB-806M HQ (300mm x 8,0mm i.d.) cs

, phân

tích l p l i 6 l n. Tính t l thu h i c a Inulin thêm vào m u th - Yêu c u: t l thu h t im cn

t 90% - 107% t i m c n

ng d n c a AOAC 2016 (Ph l c 6).

2.3.4. Áp d

ng Inulin trong m t s th c

ph m ch Nh

100 ppm và 95% - 105%

ng. có m

ng c a Inulin trong m t s th c

ph m ch

Hình 3.1: S

trên c t Shodex OHpack SB-806M HQ

n hành l y ng u nhiên 4 m u 17

18

Hình 3.4: S

c t Shodex OHpack SB-806M HQ n i v i c t Supelcosil LC-NH2

Hình 3.2: S

Hình 3.5: S Hình 3.3: S

trên h ghép n i ti p 2 c t Shodex OHpack SB-806M HQ

trên h

- Trên hai h

- H ghép n i ti p c t Shodex OHpak SB-806M HQ và c t Supelcosil LC-NH2 kh

n có hi

ng dính pic, các pic không cân x ng, th

c kh ion 18m

i

i t t, pic cân x ng.

kéo

Vì v y chúng tôi quy

dài.

c th

NaNO3 0,1M, xu t hi ch t có th

- H ghép n i ti p 2 c t Shodex OHpak SB-806M HQ kh

ng NaNO3 0,1M

Nh n xét:

Nh n xét:

thi

trên h

u này s ng. Trên h

ng trên các m u ch a các c kh

nh ch

c kh

t tách

.

3.1.2. Xây d ng quy trình x lý m u -S

ch y b i 1 c t Shodex OHpak SB-806M HQ cho kh

i t t, pic s c ký cân x ng, th - Vì v y, chúng tôi quy

Qua tham kh o nhi u bài báo c a các tác gi trên th gi i, chúng tôi ti n hành

p

kh o sát k thu t chi t và th i gian chi t c a quy trình chi

nh chon h g m 1 c t Shodex OHpak SB-

ti n hành phân tích Inulin. b. Kh

p x nhau. Tuy nhiên trên h

ng Khoá lu n ti n hành kh

ng là dung dich NaNO3

c

kh

19

20

B ng 3.1: K t qu kh o sát th i gian chi t và k thu t chi t trên n n m u r n 15 phút Thêm 40 ml H2O

Cách th c chi t

-8

Siêu âm 15 60 phút [33] Chi t siêu âm

Hình 3.6: Quy trình x lý m u d ki n

30 phút

45 phút

60 phút

Di n tích (MV)

HL so v i HLTN (%)

Di n tích (MV)

HL so v i HLTN (%)

Di n tích (MV)

HL so v i HLTN (%)

Di n tích (MV)

HL so v i HLTN (%)

173744

82,0

209564

98,5

210201

98,9

210918

98,8

174569

82,5

209820

97,2

210498

96,4

209129

97,6

174021

81,6

211026

99,4

209136

98,3

201397

95,4

Trung bình

82,1

98,4

97,9

97,3

SD

0,45

1,12

1,30

1,72

RSD (%)

0,55

1,13

1,33

1,77

Chi t cách thu 85oC

3.1.3. K t qu

190146

88,3

190507

90,6

209069

95,9

198594

92,6

192068

89,9

190759

87,4

210927

95,8

199050

93,0

192035

90,0

190637

89,0

208949

96,4

199487

91,9

Trung bình

89,4

89,0

96,0

92,5

SD

0,93

1,60

0,35

0,53

RSD (%)

1,04

1,80

0,37

0,58

Nh n xét: K t qu kh o sát cho th y hi u su t chi t Inulin cao nh t khi chi t b ng siêu âm trong th

a ch

pháp chi t là siêu âm

nhi t

phòng trong 30 phút.

3.1.4. Quy trình phân tích Inulin trong th c ph m ch T k t qu th c ngi m trên, chúng tôi xây d ng quy trình x lý m Hình 3.7: Bi u

kh o sát th i gian chi t và k thu t chi t (trên n n m u r n) 21

s 22

u ki n

Thêm 40 ml H2O

-8

L n6

10,504

61894

Trung bình

10,505

61940,3

SD

0,002

83,7

RSD (%)

0,019

0,135

Nh n xét:

l ch chu

i RSD (%) các thông s phân tích c

ng t h th ng s c ký phù h p, có th s d

i

phân tích m u trong

th c t .

Hình 3.8: Quy trình x lý m u Hình 3.9: S 3.2 TH

3.2.2. Tính ch n l c

Khoá lu n ti n hành th

n m u r n v i các ch tiêu

Ti n hành chu n b các m u

sau:

- M u tr

u ki n s - Xác

c. 2.2.2). Tiêm l p l i 6 l n

-M

m c 3.1.4

c 2.2.2 2.2.3

- M u placebo thêm chu n: Cân 0,25g m

nh các thông s m i l n tiêm m u: th

K t qu th c nghi

c kh ion 18m

- M u chu

nh h th ng - Chu n b dung d ch chu v

các dung dich chu n Inulin 1000 ppm khi ch ng lên nhau

c trình bày

B ng 3.2: K t qu kh

n tích pic c a Inulin.

b ng sau:

dung d ch chu n Inulin 20000 ppm. Ti n hành chi t m u theo quy trình chi t m m c 3.1.4

l p l i h th ng

tR (phút)

Di n tích (MV)

L n1

10,503

62064

L n2

10,509

62015

L n3

10,505

61943

L n4

10,506

61869

L n5

10,506

61857 23

n hành n p 500µl

- Các m u sau khi chu n b xong s ti n hành thêm vào h th ng s c ký v ki

c 3.1.4

24

u

Hình 3.10: S

m u tr ng

Hình 3.13: S

m u placebo thêm chu n Inulin 200 ppm

Nh n xét: - Trên các s

c, t i th

(10,505 phút) trên m u chu n, trên s

m ng v i th

a Inulin

c a m u placebo không xu t hi n pic nào,

trên m u placebo thêm chu n có pic rõ nét c a Inulin trùng v i th c a các ch t này trong dung d ch chu n. Pic Inulin trên s -V

ng

- Gi i h n phát hi n và gi i h nn chu n Inulin 1000 ppm

i, rõ nét.

o sát và l a ch n có tính ch n l c v i Inulin.

3.2.3. Gi i h n phát hi n và gi i h

Hình 3.11: S

ng

ng c

nh b ng

gi m d

nh giá tr

ng. nh t i S/N=3, giá tr LOQ=3 x LOD.

- Giá tr - Giá tr

c tính toàn thông qua ph n m m Empower. V i m i n

n p ti n hành ch y 4 l n khi giá tr - K t qu

c trình bày

t yêu c u. b ng sau:

B ng 3.3: Giá tr S/N c a các pic n p chu n và k t qu LOQ, LOD L n N Hình 3.12: S

thêm chu n

S/N

K t qu th

m u placebo 1 2

LOQ (mg/g) (*)

LOD (mg/g)

25

8,3

9,8 125 ppm

11,4

3

10,6

4

9,5

(*): trên m u r n 25

nh

26

S/N=10,6

Hình 3.14: Giá tr S/N c a Inulin trong m u n p chu n Inulin 125 ppm 3.2.4. Kho ng tuy n tính - Xây d

ng chu n Inulin v i n

t

n 10000 ppm

- Chu n b dung d ch chu n có n chu n trên. Thi t l và n ng

ng. Ti n hành tiêm m u các

i quy bi u di n s

a di n tích pic

th bi u di n m

n tính gi a di n tích pic và n

Áp d ng công c h i quy tuy n tính v

.

- K t qu th c nghi

(ppm)

125

250

500

1000

c a Inulin

ng chu n Inulin trong Excel 2019,

c p-value (intercept) = 0,26 (>0,05). K t qu cho th y trong kho ng tin c y 95%,

c th hi n trong b ng 3.4

giá tr intercept l

B ng 3.4: K t qu kh o sát kho ng tuy n tính c a Inulin N

Hình 3.15

2500

ng chu ng.

5000 l pl i

Di n tích

6916

13858

30782

58141

50366

Ti n hành chi t và ch y s c ký m u th c ph m ch

303649

3.1.4) trong 6 l Nh n xét:

ng c

K t qu trên cho th y, trong kho ng n ng kho ng n

t

kh o sát, Inulin tuy n tính trong

l pl ic

c th hi n qua m

dao

ng Inulin gi a các l n phân tích.

K t qu th c nghi

n 10000 ppm, h s

c th hi n trong b ng 3.5

B ng 3.5: K t qu M u

27

cl

c

ng m u

l pl Di n tích

i v i Inulin

N

ng inulin

(g)

(MV)

(mg/ml)

(mg/g)

MR1

0,2554

183670

2,92

631,62

MR2

0,2525

182694

2,90

644,44

MR3

0,2552

185428

2,94

638,78

MR4

0,2501

187525

2,98

619,67

MR5

0,2550

183951

2,92

634,78

MR6

0,2598

180049

2,86

650,71

28

TB

636,67

SD

10,77

RSD (%)

1,69

Nh n xét: Theo tiêu chu

thu h i t i m c n

100 ppm

t kho ng

90% - 107%.

Theo AOAC, chênh l ch k t qu gi a các l n th , bi u th b i RSD (%) c a Inulin ph i không l

3,7% t i m c n

T k t qu trên, ta th

K t qu cho th

l ch chu n 0,1%.

b. K t qu thu h i

u nh

3,7%

m cn

0,1% theo

ng thêm chu n 3 m c n

v i6m

n

M7

36,2

37,5

96,5

th p, trung bình và cao. T i m i m c n ng

M8

36,7

37,5

97,8

nb

M9

36,3

37,5

96,9

M10

35,7

37,5

95,1

c tính theo

M11

36,3

37,5

96,8

M12

36,6

37,5

97,7

thu h i c

ng chu n thêm vào ( µg) ng tìm th y t

c c a m u thêm chu n (µg)

Nh n xét: Theo tiêu chu

th p

c l p, r i ti n hành chi t m u và ch y s

B ng 3.6: K t qu

thu h i (%)

c 3.1.4). Ghi s c kí

Thêm 500 µL dung d ch chu n Inulin 20000 ppm vào 0,25 g m u placebo. Làm v i6m

trung bình

HL thêm vào (mg)

công th c sau:

Ct

c 3.1.4

m c n p chu n n

HL tìm th y (mg)

, di n tích pic, tính h s thu h i các ch

V i: Cc

thu h i

Tên m u

Ti n hành chi t và ch y s c kí các m

a. K t qu thu h i

c l p, ti n hành chi t m u và ch y s

n vào m u

, phân tích l p l i 6 l n.

= .100 (%)

th p.

trung bình

B ng 3.7: K t qu

nh c a AOAC 2016 [4].

R (%)

n

n

Thêm 1875 µL dung d ch chu n Inulin 20000 ppm vào 0,25g m u placebo. Làm

l p l i t t, v i giá tr RSD (%) c a

Inulin khi ti n hành 6 l n phân tích l p l

thu h i t t khi n p

thu h i

thu h i t i m c n

- 105%.

K t qu cho th

c 3.1.4

m c n p chu n n

th p

t kho ng 95%

c. K t qu thu h i

thu h i t t khi n p n

n

trung bình.

cao

Thêm 5000 µL dung d ch chu n Inulin 20000 ppm vào 0,25g m u. Làm v i 6 Tên m u

HL tìm th y (mg)

HL thêm vào (mg)

M1

9,4

10

94,0

M2

9,1

10

91,0

M3

9,6

10

96,0

M4

9,5

10

95,0

M5

9,1

10

91,0

M6

9,3

10

93,0

29

thu h i (%)

m

c l p, ti n hành chi t m u và ch y s B ng 3.8: K t qu Tên m u

c 3.1.4

thu h i v i m c n p chu n HL tìm th y (mg)

n

cao

HL thêm vào (mg)

thu h i (%)

M13

98,0

100

98,0

M14

99,4

100

99,4

M15

97,5

100

97,5

30

M16

97,9

100

97,9

M17

97,5

100

97,5

M18

97,7

100

97,7

ML02

0,0

5,0

Nh n xét: Qua ki m tra 4 m u s n ph m TPCN có b sung Inulin trên th th y m u MR02 có ph

ng, có th

ng Inulin so v i trên bao bì cao nh

t 97,4%,

m u ML01 và ML02 không phát hi n Inulin trong thành ph n. Tuy nhiên, v i s

Nh n xét: Theo tiêu chu

thu h i t i m c n

t kho ng 95%

m u còn h n ch , cách l y m

ng

i di n, khuôn kh nghiên c ng Inulin trong các ch ph m TPCN có b sung

- 105%.

K t qu cho th

thu h i t t khi n p

n

thu h i t t khi n p vào m u placebo

K t lu n

Inulin trên th

cao.

NG D

TS

c ba m c n

3.4.1.

-M

im

c mua ng u nhiên t i nhà thu

hành x lý m u và ch y s c ký v -

ng nghiên c u Inulin là m t lo i ch

M U TH C PH M

NG

CH

ng.

3.4. BÀN LU N

th p, trung bình và cao phù h p v i tiêu chu n c a AOAC 2016.

3.3.

0,0

u ki

a bàn qu

y u là ch ng táo bón và gi m béo phì. Các d ng bào ch trên th t hoà tan, c m, dung d ch u

n d ng bào ch và nhà s n xu t, thành ph

c 3.1.4

ng Inulin trong các m

c a Inulin trong m

a ch n quy trình x lý m

ng nh t, chi t v i 40,0 ml H2O b nh m c, l c, pha loãng và l c qua màng 0,45 µ

ng chu n vào h th ng s c

(ppm) X (mg/g) =

c khi tiêm

m: ít s d ng hoá ch t, thao tác

n, d tri n khai. Tuy nhiên, trên m i n n m u khác nhau c n kh o sát l i th i

V: th tích pha loãng (ml)

gian và k thu t chi

f: h s pha loãng c a m u th

c k t qu

y nh t.

3.4.2. i u ki n s c ký

ng m u cân (g)

m: kh

im i

ng không gi ng nhau. Qua tham

kh o tài li u và ti n hành kh o sát, khoá lu

c tính theo công th c

m u th c ph m ch Ct: n

c b sung vào các th c ph m ch c

u ki n s c

ng ch t có trong 1g m u (mg/g)

c kh o sát d a trên nh ng tài li u tham kh

u ki n phòng thí nghi m.

K t qu

c trình bày

C ts

b ng sau:

B ng 3.9: K t qu phân tích m t s m u th c t trên th M u th

ng

ng trên

th c t

bao bì

MR01

245,3

339,7

MR02

612,0

628,6

ML01

0,0

10,0

%

HLTN mg/g

so

v i

2000

0,0

ch có th

n hình dùng cho s c ký ng phân t

n

y, c t Shodex OHpack SB-806M HQ không

c Inulin mà còn nhi u lo i phân t l n quan tr b o qu n c t t t, s d

c lâu dài, sau khi ch y s c

ký xong nên cho dung dich NaN3 0,02% ch y qua c t trong 20 phút, t cs d ch t không h p th UV-

31

t có kh

i gi i h n r

72,2 97,4

mg/ml

l ng trên gel. C t có kh

ng HL

c l a ch n trong khoá lu n là lo i c

c ho 32

1 ml/ phút.

i detector có kh

c các

ng d a trên hi

ng khúc x nên yêu

c

ng ph i n

nh, ít ch

lo i b y u t nhi

có hi u qu t t,

c khi ti n hành ch y s c ký nên có th i gian cân b ng h

detector

T các k t qu nghiên c

nh

ng.

ng Inulin trong th c ph m ch - Quy trình x lý m u

Dung môi ch y s ng c a các ion

c kh ion. Vi c kh ion giúp lo i b ng n n, gi m b t y u t nhi

s ch, h u h t các phòng thí nghi

tài có các k t lu n sau:

c th hi n qua hình sau:

nh

c kh ion là dung môi

u có th t cung c p. Vì v y, vi c s d

c

kh ion làm dung môi không ch giúp ti t ki m chi phí mà còn góp ph n b o v môi ng. u ki n s

xây d ng có

th 3.4.3. P

Thêm 40 ml H2O

n, ít s d ng hoá ch t. K t qu ys

y.

ng Inulin trong m t s th c ph m ch

ng

-8

HPLC-RI HPLC là k thu

ng

các phòng thí nghi

chính xác và

c trang b thi t b này. Do v y, vi c s d ng HPLC làm

k thu t phân tích s

i tính kh thi cao, d áp d ng vào th c t . ng có gi i h

iv in

nh cao. Ngày nay, h u h t

tiêm s

ng là 25mg/g m u, và 125 ppm

t qu

y và t

c a Petkova N và c ng s v i gi i h

i nghiên c u iv in

Hình 3.16: Quy trình x lý m u

tiêm s c -

ký [29].

M i s n ph m th c ph m ch Do v y, v i m i n n m

u có thành ph u c n ti n hành th

u ki n HPLC t Shodex OHpak SB-806M HQ

ng khác nhau.

c kh

nh l

có k t qu tin c y.

Th tích tiêm m u: 10µL

3.4.4. Kh o sát m t s m u th c ph m ch

T

trên th

Nhi

c t: 40oC

Nhi

detector: 40oC

ng

Trong 4 m u kh o sát, có 2 m u có ch a Inulin v

ng so v

ng

t 97,4% và 72,2%, có 2 m u không phát hi n Inulin. C n ti p t c kh o sát các m u th c ph m ch

1.2

ng theo yêu c u c a AOAC 2016

K t qu th

ng Inulin trong các s n ph m th c ph m ch

K T LU N VÀ KI N NGH 1. K t lu n

sung Inulin.

nh:

-

nl ct Có s kho ng n

33

: 1 ml/phút

i v i Inulin

n tính ch t ch gi a di n tích pic s c ký và n

Inulin:

t 125 ppm t i 5000 ppm, r=0,999 nh y t

phát hi n Inulin, LOQ = 25 mg/g, LOD= 8,3 mg/g 34

-

l pl i

các m c n

th

ng

yêu c u c a AOAC 2016 -

TI NG VI T

thu h i t t (95%

ng yêu c u c a AOAC 2016.

c Inulin trong 4 m u th c ph m ch th

sung Inulin trên

1.

2.

ng Inulin không

3.

ng.

K t qu phân tích th c t cho th y, xu t hi n m t s m ng v

TÀI LI U THAM KH O

ng công b trên bao bì, th m chí có m u không phát hi n Inulin

trong thành ph n.

4.

2. Ki n ngh

D a vào nh ng k t qu t khoá lu 1. Ti p t c th

u n n m u khác.

2. Ti p t c kh Inulin trên th

5.

t s ki n ngh

ng Inulin trong các m u th c ph m ch

sung

6.

ng.

7.

8.

9.

10.

11.

12.

13.

14.

15.

35

B Y t (2012), Hoá phân tích, T p 2, Nhà xu t b n Y h c, Hà N i, tr. 123-200.

Tr Th c và vi sinh v t, Nhà xu t b n Khoa h c và k thu t, Hà N i, tr. 10-59.

Abrams S. A., Griffin I. J., et al. (2005), "A combination of prebiotic short- and long-chain inulin-type fructans enhances calcium absorption and bone mineralization in young adolescents", Am J Clin Nutr, 82(2), pp. 471-6.

Analysis AOAC Official method of (2016), "Appendix F: Guidelines for standard method performance requirements".

Arora T., Loo R. L., et al. (2012), "Differential effects of two fermentable carbohydrates on central appetite regulation and body composition", PLoS One, 7(8), pp. e43263.

Barclay Thomas, Ginic-Markovic Milena, et al. (2016), "Inulin-a versatile polysaccharide with multiple pharmaceutical and food chemical uses", Journal of Excipients and Food Chemicals, 1(3), pp. 1132.

Barclay Thomas, Ginic-Markovic Milena, et al. (2012), "Analysis of the hydrolysis of inulin using real time 1H NMR spectroscopy", Carbohydrate research, 352, pp. 117-125.

Bonnema A. L., Kolberg L. W., et al. (2010), "Gastrointestinal tolerance of chicory inulin products", J Am Diet Assoc, 110(6), pp. 865-8.

-cell deficit and in cell apoptosis in humans with type 2 diabetes", Diabetes, 52(1), pp. 102-110.

Chambers E. S., Viardot A., et al. (2015), "Effects of targeted delivery of propionate to the human colon on appetite regulation, body weight maintenance and adiposity in overweight adults", Gut, 64(11), pp. 1744-54.

Collado Yurrita L., San Mauro Martin I., et al. (2014), "Effectiveness of inulin intake on indicators of chronic constipation; a meta-analysis of controlled randomized clinical trials", Nutr Hosp, 30(2), pp. 244-52.

Dehghan P., Pourghassem Gargari B., et al. (2013), "Effects of high performance inulin supplementation on glycemic status and lipid profile in women with type 2 diabetes: a randomized, placebo-controlled clinical trial", Health Promot Perspect, 3(1), pp. 55-63.

Delzenne Nathalie M, Cani Patrice D, et al. (2005), "Impact of inulin and oligofructose on gastrointestinal peptides", British Journal of Nutrition, 93(S1), pp. S157-S161.

Dewulf E. M., Cani P. D., et al. (2013), "Insight into the prebiotic concept: lessons from an exploratory, double blind intervention study with inulin-type fructans in obese women", Gut, 62(8), pp. 1112-21.

Gibson G. R., Probert H. M., et al. (2004), "Dietary modulation of the human colonic microbiota: updating the concept of prebiotics", Nutr Res Rev, 17(2), pp.

259-75.

36

16.

17.

18.

19.

20.

21.

22.

23.

24.

25.

26.

27.

28.

29.

30.

Goncalves P., Martel F. (2013), "Butyrate and colorectal cancer: the role of butyrate transport", Curr Drug Metab, 14(9), pp. 994-1008.

Griffin I. J., Davila P. M., et al. (2002), "Non-digestible oligosaccharides and calcium absorption in girls with adequate calcium intakes", Br J Nutr, 87 Suppl 2, pp. S187-91.

Guess N. D., Dornhorst A., et al. (2015), "A randomized controlled trial: the effect of inulin on weight management and ectopic fat in subjects with prediabetes", Nutr Metab (Lond), 12, pp. 36.

Guess N. D., Dornhorst A., et al. (2016), "A Randomised Crossover Trial: The Effect of Inulin on Glucose Homeostasis in Subtypes of Prediabetes", Ann Nutr Metab, 68(1), pp. 26-34.

Kristo E, Foo A, et al. (2011), "Determination of inulin in milk using highperformance liquid chromatography with evaporative light scattering detection", Journal of dairy science, 94(7), pp. 3316-3321.

Legette L. L., Lee W., et al. (2012), "Prebiotics enhance magnesium absorption and inulin-based fibers exert chronic effects on calcium utilization in a postmenopausal rodent model", J Food Sci, 77(4), pp. H88-94.

Li Wancong, Zhang Jun, et al. (2015), "Extraction, degree of polymerization determination and prebiotic effect evaluation of inulin from Jerusalem artichoke", Carbohydrate polymers, 121, pp. 315-319.

Linetzky Waitzberg D., Alves Pereira C. C., et al. (2012), "Microbiota benefits after inulin and partially hydrolized guar gum supplementation: a randomized clinical trial in constipated women", Nutr Hosp, 27(1), pp. 123-9.

Manrique Vergara D., Gonzalez Sanchez M. E. (2017), "Short chain fatty acids (butyric acid) and intestinal diseases", Nutr Hosp, 34(Suppl 4), pp. 58-61.

Marteau P., Jacobs H., et al. (2011), "Effects of chicory inulin in constipated elderly people: a double-blind controlled trial", Int J Food Sci Nutr, 62(2), pp.

164-70.

Meyer D., Stasse-Wolthuis M. (2009), "The bifidogenic effect of inulin and oligofructose and its consequences for gut health", Eur J Clin Nutr, 63(11), pp.

1277-89.

Nolin Thomas D, Colaizzi Ivan V, et al. (2002), "Rapid microtiter plate assay for determination of inulin in human plasma and dialysate", Journal of pharmaceutical and biomedical analysis, 28(2), pp. 209-215.

Parnell J. A., Reimer R. A. (2009), "Weight loss during oligofructose supplementation is associated with decreased ghrelin and increased peptide YY in overweight and obese adults", Am J Clin Nutr, 89(6), pp. 1751-9.

Petkova N, Vrancheva R, et al. (2014), "HPLC-RID method for determination of inulin and fructooligosacharides", Acta Scientifica Naturalis, 1(99), pp. 107.

Pourghassem Gargari B., Dehghan P., et al. (2013), "Effects of high performance inulin supplementation on glycemic control and antioxidant status in women with type 2 diabetes", Diabetes Metab J, 37(2), pp. 140-8.

32.

33.

34.

35.

36.

37.

38.

Quemener Bernard, Thibault Jean-François, et al. (1997), "Integration of inulin determination in the AOAC method for measurement of total dietary fibre", International journal of biological macromolecules, 21(1-2), pp. 175-178.

Reiffová Katarína, Nemcová Radomíra (2006), "Thin-layer chromatography analysis of fructooligosaccharides in biological samples", Journal of Chromatography A, 1110(1-2), pp. 214-221.

Retnaningtyas Yuni (2012), "Determination of inulin from multivitamin syrup product by high performance liquid chromatography with RI detector", Indonesian Journal of Chemistry, 12(2), pp. 201-205.

Ripoll C., Flourie B., et al. (2010), "Gastrointestinal tolerance to an inulin-rich soluble roasted chicory extract after consumption in healthy subjects", Nutrition, 26(7-8), pp. 799-803.

Vlaseva Radka, Ivanova Mihaela, et al. (2014), "Analysis of fermented lactic acid dairy products enriched with inulin-type fructans", Scientific Bulletin. Series F. Biotechnologies, 18, pp. 145-149.

Wang Quanzhen, Liu Yuyan, et al. (2011), "Optimization of ultrasonic-assisted extraction for herbicidal activity of chicory root extracts", Industrial Crops and Products, 34(3), pp. 1429-1438.

Zuleta Angela, Sambucetti María E (2001), "Inulin determination for food labeling", Journal of Agricultural and Food Chemistry, 49(10), pp. 4570-4572.

31. evaluation of inulin in food products", JPC-Journal of Planar ChromatographyModern TLC, 16(1), pp. 58-62.

37

38

PH L C PH L C 1: M T S

S

KH O SÁT QUY TRÌNH CHI T

Chi t siêu âm 60 phút

Chi t siêu âm 15 phút

Chi t cách thu 15 phút

Chi t siêu âm 30 phút

Chi t cách thu 30 phút

Chi t siêu âm 45 phút

Chi t cách thu 45 phút

39

40

Chi t cách thu 60 phút

PH L C 2: M T S

Chu n Inulin 500 ppm

S C KÝ KHO NG TUY N TÍNH

Chu n Inulin 1000 ppm

Chu n Inulin 125 ppm

Chu n Inulin 2500 ppm

Chu n Inulin 250 ppm

Chu n Inulin 5000 ppm

41

42

PH L C 3: QUY TRÌNH X

M u MR02

LÝ M U TRÊN N N M U L NG

Thêm 40 ml H2O

-8 M u ML01

PH L C 4: M T S

S

M U TH

M u ML02

NG

PH L C 5: CÔNG TH C BÀO CH CÁC M U TH

NG

Công th c bào ch m u MR01

Thành ph n

ng

Inulin

1000 mg 105

Lactobacillus acidophilus u M u MR01

106 CFU

V

Công th c bào ch m u MR02

Thành ph n

ng

Inulin

2500 mg

Vitamin B1

0,6 mg

Vitamin B2

0,9 mg

Vitamin B6

0,3 mg

Saccarose, kem s a non, flavor 43

3g

V 44

4g

PH L C 6: Công th c bào ch m u ML01

1.

Thành ph n

ng 50 mg

TT

Inulin

50 mg

1

Lysin

40 mg

Thymomodulin

10 mg

Vitamin D3

200 UI

Vitamin B1

1 mg

5

0,01

Vitamin B6

1 mg

6

0,001

Vitamin B12

2 µg

Calci lactat

cc tv

V

1

100%

1,3

2

10-1

10%

1,9

3

-2

1%

2,7

-3

0,1%

3,7

-4

10

100 ppm

5,3

10-5

10 ppm

7,3

-6

1 ppm

11

-7

100 ppb

15

-8

7 8

Công th c bào ch m u ML02

100 mg

Cao phan t di p

50 mg

Cao di p cá

50 mg uv

0,0001 0,00001

10 10

9

0,000001

10

10ppb

21

0,0000001

10-9

1 ppb

30

2.

TT phân tích

10 ml

Mã m u

D ng bào ch

MR01

B t hoà tan

2

MR02

B t hoà tan

3

ML01

Dung d ch u ng

4

ML02

Dung d ch u ng

6 7

100%

98-102

-1

10%

98-102

-2

1%

97-103

10

0,1%

95-105

10-4

100 ppm

90-107

-5

10 ppm

80-110

-6

1 ppm

80-110

-7

10

-3

4 5

1 10

3

0,01 0,001 0,0001

10 10

8

0,00001

10

100 ppb

80-110

9

0,000001

10-8

10ppb

60-115

-9

1 ppb

40-120

10

45

100

2

D ng bào ch c a các m u

1

10

10

1

STT

10

ng

Inulin

cc

100

4

10 ml

Thành ph n

RSD (%) phân tích

0,0000001

10

46

47