Xây dựng phương pháp định lượng 5-hydroxymethylfurfural và cafein trong nước giải khát bằng điện di

B YT

B YT IH

-----

C HÀ N I

-----

IH

C HÀ N I

-----

-----

C VI T MSV: 1401681

C VI T

XÂY D NH NG 5-HYDROXYMETHYLFURFURAL VÀ CAFEIN TRONG C GI I KHÁT B N DI MAO QU N

XÂY D NG 5-HYDROXYMETHYLFURFURAL VÀ CAFEIN TRONG C GI I KHÁT B N DI MAO QU N KHÓA LU N T T NGHI ng d n: ThS. Nguy n Th Thùy Linh

KHÓA LU N T T NGHI

c hi n: B

HÀ N I - 2019

HÀ N I - 2019

c ch t

M CL C

L IC L IC c th c hi n t i B môn Hóa phân tích và

Khóa lu ih

c ch t

ng

M CL C DANH M C CÁC KÝ HI U, CÁC CH

c Hà N i.

V i lòng bi

ng sâu s c, em xin g i l i c

i ThS. Nguy n

Th Thùy Linh

Gi ng viên B môn Hóa phân tích và

c ch t

c Hà N

u th i gian, công s c, t

ng d

ih c em trong

DANH M C CÁC B NG DANH M C CÁC HÌNH V

n

NG QUAN .........................................................................................3 cùng các th y cô, các anh/ch

k thu t viên t i B môn Hóa phân tích và t n tình ch b o và t o nh Em xin chân thành c th cán b

ih

ih

c Hà N

em có th hoàn thành khóa lu n này.

c Hà N ng t

c ti p gi ng d y và giúp ng.

1.1.2.

1.1.3.

ng tài.

ng phân tích ............................................................................3 ng t ng h p, chuy

1.1.4. Gi i h

ng c a 5- HMF, Cafein trong m t s

c.........................................................................................................9

1.2.2. Th gi i ............................................................................................................10 1.3. T ng quan v s

9

c gi i khát ............8

-HMF và cafein ........................................9

ng mixen ...................................................................13

1.3.1. Gi i thi u v Hà N i, ngày 20 tháng 5

c tính c a 5-HMF ...............................4

c tính c a Cafein ...........................................................................................7

1.2. T 1.2.1.

n bè, nh

viên và khích l em trong su t quá trình h c t p và th c hi

1.1. T ng quan v

1.1.1. C u trúc hóa h c, tính ch t v t lý - hóa h c c a 5-HMF và Cafein .................3

u, các phòng ban, các th y cô và toàn

em trong su t quá trình h c t p và ho Cu i cùng, em xin c

c ch t

u ki n t t nh

TH

.................................................................................................................1

TV

quá trình nghiên c u và hoàn thành khóa lu n t t nghi p.

Em xin g i l i c

VI T T T

1.3.2. S

n di mao qu n .................................................13 ng mixen (MEKC) .....................................................................15 U .......................16

Sinh viên

2.1. Nguyên v t li u, thi t b ..........................................................................................16 2.1.1.

ng nghiên c u ......................................................................................16

2.1.2. Nguyên v t li u, trang thi t b .........................................................................17 c Vi t

2.2. N i dung nghiên c u...............................................................................................18 u ........................................................................................18

2.3.

2.3.1. Chu n b các dung d ch chu n ........................................................................18 2.3.2. Kh o sát và l a ch

u ki

2.3.3. Th

n di............................................................18 ..................................................................19

2.3.4. ng d ng .........................................................................................................21 2.3.5.

lý s li u ...............................................................................21 C NGHI M, K T QU VÀ BÀN LU N .................................22

3.1. Kh o sát và l a ch

u ki

n di ...................................................................22

3.1.1. Kh o sát và l a ch

c sóng phát hi n .....................................................22

3.1.2. Kh o sát và l a ch

n di.....................................................23

3.1.3. Kh o sát và l a ch n n

dung d

3.1.4. Kh o sát và l a ch n n

n ly n n .....................................24

ch t di n ho t .................................................25

3.1.5. Kh o sát và l a ch n hi

Ch

u mao qu n ......................25

vi t t t

3.1.6. Kh o sát và l a ch n th i gian tiêm m u........................................................26

5-HMF

3.1.7. T ng k

n th

DANH M C CÁC KÝ HI U, CÁC CH

u ki

c l a ch n .......................................................27

nh tính các ch

...................................................28

AOAC

Ti ng Anh

Ti ng Vi t

5-hydroxymethylfurfural

5-hydroxymethylfurfural

Association of Official Analytical Chemists

3.2. X lý m u ...............................................................................................................29 .........................................................................29

3.3. Th

phù h p h th ng .......................................................................................29

C

ch n l c ......................................................................................................30

CE

3.3.3. Kho ng tuy

ng chu n .................................................................31

3.3.4. Gi i h n phát hi n (LOD) và gi i h

ng (LOQ) ..............................33

l p l i .........................................................................................................34 ...........................................................................................................35 3.4. ng d

BGE

ng m t s lo

c gi i khát trên th

ng ...........................37

VI T T T

Hi p h i các nhà hóa h c phân tích chính th c

Background electrolyte

Dung d

Concentration

N

n ly n n

Capillary electrophoresis

n di mao qu n

CZE

Capillary zone electrophoresis

n di mao qu n vùng

EOF

Electroendoosmotic flow

EtOH

Ethanol

Ethanol

Gas chromatography - mass spectrometry

S c ký khí

GC-MS

n th m

kh i ph

3.5. Bàn lu n ..................................................................................................................39

HPLC

High Performance Liquid Chromatography

S c ký l ng hi

K T LU N VÀ KI N NGH .....................................................................................41

LC-MS

Liquid chromatography - mass spectrometry

S c ký l ng kh i ph

TÀI LI U THAM KH O

LD50

Lethal dose 50

Li u gây ch t 50% cá th

PH L C

LOD

Limit of detection

Gi i h n phát hi n

LOQ

Limit of quantitation

Gi i h

MEKC

Micellar electrokinetic chromatograph

S

MeOH

Methanol

Methanol

RS

Resolution

phân gi i

Relative standard deviation

l ch chu

RSD S

Area

ng ng mixen

Di n tích

SD

Standard deviation

SDS

Sodium dodecyl sulfat

Natri dodecyl sulfat

Sulphotransferase

Sulphotransferase

tM

Migration time

Th i gian di chuy n

UV

Ultraviolet

B c x t ngo i

VIS

Visible

Ánh sáng kh ki n

SULT

l ch chu n

i

DANH M C CÁC B NG STT

B ng

1

1.1

N i dung C u t o hóa h c, tính ch t v t lý

hóa h c c a 5-HMF và

DANH M C CÁC HÌNH V Trang

STT

Hình

3

1

1.1

2

1.2

3

1.3

cafein 2

1.2

M t s nghiên c

N i dung

Trang

ng t ng h p 5-HMF

5

Quá trình chuy n hóa c a 5-HMF

5

ng 5-HMF và cafein b ng

10

4

3.1

ng 5-HMF và cafein b ng CE

12

5

3.2

16

6

3.3

t i các n

dung d

29

7

3.4

t i các n

ch t di n ho t khác nhau

29

8

3.5

HPLC 3

1.3

M t s nghiên c

4

2.1

Danh m c các m u phân tích

5

3.1

6

3.2

7

3.3

phù h p h th ng c a 5-HMF phù h p h th ng c a cafein Quan h tuy n tính gi a n

và di n tích pic c a 5-

31

và di n tích pic c a cafein

22

c và sau khi thêm SDS

hi

23 n ly n n khác nhau

u th 10 kV, 15 kV, 20 kV

24 25 26

t i các th i gian tiêm m u khác nhau

27

c a 5-HMF và cafein t

28

32

11

3.8

c a t ng ch t phân tích t

33

12

3.9

9

3.5

K t qu

10

3.6

K t qu

35

13

3.10

11

3.7

K t qu

a 5-HMF

36

11

3.11

12

3.8

K t qu

a cafein

37

13

3.9

K t qu

c gi i khát

Ph h p th c a 5-HMF và Cafein

3.6

Quan h tuy n tính gi a n

ng m t s lo

15

3.7

3.4

l p l i c a 5-HMF và cafein

n di mao qu n

9

8

nh LOD, LOQ c a 5-HMF và cafein

c u t o h th

10

HMF

nh

TH

38

u ki n l a ch n u ki n l a ch n

nh tính các ch

28 28

nh tính ch n l c c th quan h tuy n tính gi a n

30 và di n tích pic c a

32

và di n tích pic c a

32

5-HMF 12

3.12

th quan h tuy n tính gi a n cafein

13

3.13

14

3.14

nh LOD, LOQ c a 5-HMF và cafein ng m t s m u th c

34 39

y nghiên c

TV Trong nh

u v 5-hydroxymethylfurfuran (5-HMF)

và cafein trong th c ph

c gi

n

cao có th

càng

ng s d ng nhi u

c u ng gi

lo

ng r t l n d n t

ch

c s d ng trong nhi u lo

gây

ng nhi

i

i th c ph m ng 5-

u ng này

n. Cafein là m t h p

c gi i khát, khi s d

n s c kh

thai

c tính nguy h

nh 5-hydroxymethylfurfural và cafein

c gi i khát b 2.

ng d

n di mao qu n. p trong phân tích m t s m

c s d ng r ng rãi trên th

ng.

ng ít không

c bi t có th kích thích tim quá m c, gi nam gi i, gi m kh

V i nh

v i 2 m c tiêu chính:

u có th d n t i m t ng , h i

h p, bu tinh trùng

c gi i khát b ng

1. Xây d ng và th

t và các lo i

ti t ki m th i gian

ch

ng 5n di mao qu

các t bào ch sau 3 gi ti p xúc [20], [44]. Cu c s ng càng phát tri n

n

ng

m cân n ng tr

.

y, chúng ta không th ch quan v i s có m t c a

5-HMF và cafein trong th c ph

u

v sinh th c ph

Vì v y v

nn

an toàn

i ngành ki m nghi

ki m tra h p lý.

Tình tr ng s d ng các lo c ép hoa qu

c ng t có ga (coca-

c trái cây

ng có m t trong các lo

c ng t nà

n t 0,1-0,2 g/ml, d

5-HMF trong các lo t

ng b l m d u qu làm vi

lo i th c u ng này có th d gây ra nh ng

t s lo i

n tr nên ph bi

ng ng làm

y vi c s d ng liên t c và dài ngày các

n tình tr

5-HMF và cafein

và

ng x u.

T i Vi t Nam, cho

n nay v n

u các nghiên c u v 5-HMF và

cafein. Hi n 5-HMF, cafein m

nh d a trên m t s

quang, s c ký khí kh i ph (GC-MS) và s c ký l ng hi c hi u không cao, d b GC-MS không ph bi n trong các phòng thí nghi và l p l i t

ng b i n n m u; thi t b nh y

cho m t m u l n, t n kém dung môi, quy trình

ph c t p và có th gây ô nhi

n th 1

u l c tách t t, quy

n ly n n d ki m và chi phí th p.

Xu t phát t th c t trên, chúng tôi ti n hành nghiên c u:

ng hô h p trên,

da, niêm m c và màng nh y [16], ngoài ra 5-HMF còn có th gây phá h k

n, dung d

ng qua ph n ng

c cho t bào, kích thích m

c ng t

n di mao qu n m c dù

c nhi u s quan tâm, chú ý c a

các nhà nghiên c u. 5-HMF là m t s n ph m chuy n hóa t Maillard,

b

ng th i 5-

m hi n t i, nhóm nghiên c u 2

c gi i khát hi

1. T NG QUAN 1.1.

T ng quan v

chloroform; ít tan trong carbon salicylat ki m. Dung d

ng phân tích

có ph n ng trung tính v i qu [1]

tetrachlorid và ether d u m

1.1.1. C u trúc hóa h c, tính ch t v t lý - hóa h c c a 5-HMF và Cafein B ng 1.1. C u t o hóa h c, tính ch t v t lý

[39], [32]

hóa h c c a 5-HMF và cafein

5-HMF

- Trong c u trúc phân t có nhóm - Có tính base y u, ch t o mu i v i formyl và hydroxymethyl nên 5- các acid m nh và các mu i này không

Cafein

Công th c phân t : C6H6O3

Công th c phân t : C8H10N4O2

Công th c hóa h c:

Công th c hóa h c:

c

Tính ch t hóa h c

tính ch t c a b n, d b phân ly - B phân h m t andehyd và m t alcol t

ng ki m, c

-L

t a

Mayer - K t t a v i iod trong

C u trúc hóa h c

acid [1] Tên IUPAC: 5-(hydroxymethyl)furan-2carbaldehyde

Tên IUPAC: 1,3,7-trimethylpurine-2,6-dione

ng g i: 1,3,7-trimethyxanthine [1], [25] ng: 194,191 g/mol - Phân t

ng: 126,11 g/mol

- Phân t

- pKa = 12,82 [22] -T nt i

d ng tinh th r n hình - Cafein t n t i

d ng tinh th hình

ho c d ng b

không mùi, v

hoa cúc

234-239oC, v n nát ngoài không khí

i h p th

ng t 31,5 - M

35oC

100o

- Tan t

ng

i -

acetat

dimethylformamid, trong

ng, nóng ch y

ether,

y u là t

và tan

c

và d

h p nên 5-

n. Hay

ng a là chuy

andehyd

c các

ng chuy n hóa c a 5-

n quá trình oxy hóa nhóm ch c

bi n 5-HMF thành acid 5-hydroxymethyl-2-furoic (HMFA).

liên h p

v i glycine thành 5-hydroxymethyl-2-furoyl glycine (HMFG). C hai ch t chuy n hóa c th i tr

nhanh chóng qua

li u 5-HMF cao

c, d tan trong

c c a benzoat hay

ct

Chuy n hóa [12]

227 nm; 235 nm và 274 nm

c sôi, cloroform, khó tan trong

ng

fructose v i xúc tác acid [37] (hình 1.1).

ng chính ch y u kho ng 200oC

t ng

i qua các h th ng m

b qua các h p ch t m ch h [33]. Ngoài ra có th s d

M

c ti u. T l n

ng glycine t do b c n ki t.

ng chuy

c chú ý trong th i gian g

chính là quá trình sulfon hóa nhóm ch c hydroxyl allylic c a 5sulphoxymethylfurfural (SMF), ph n th gây ra

3

ng. Quá trình t ng h p ph c t p, tr i qua nhi

nhi

v a EtOH và ether; tan trong các dung

benzen,

ng t ng h p 5-HMF t các nguyên li u khác nhau,

n nay, nhi u nghiên c

c và các - Dung d ch trong acol có h p th c c

dung môi h

ethyl

Hi n nay có nhi

283 nm, nhi t khô.

nóng ch

c tính c a 5-HMF

T ng h p 5-HMF

g p nh t là s d ng hexose th c hi n ph n ng lo

- pKa = 14 [51]

kim ho c ch t l ng màu vàng kim tr ng, m n hay b t k t tinh tr ng;

-C

ng t ng h p, chuy

1.1.2.

ng g i: 5-hydroxymethylfurfural [39]

Tính ch t v t lý

ng

c tính ho

t o thành 5-

c xúc tác b i SULTs, k t qu là SMF có

t bi n trên gen thông qua m t carbocation allyl ái l c 4

nt

ng S

c chuy

n nay v

c tính

ng m t cách chính xác (hình 1.2).

5- HMF

n

cao gây

niêm m c và màng nh y, LD50

c t bào, kích thích m

khác cho th y giá tr này là 2,5 g/kg cái. 5-HMF

chu

ng t 2,5-5,0 g/kg

c báo cáo là m t ch s

gan

ng hô h p trên, da,

ng u ng là 3,1 g/kg cân n ng chu t, m t thí nghi m

ng kh i u

ng ru t

ru t non

chu t

chu t, làm

ng th i 5- HMF còn

l u t bào

chu t cái khi dùng li u 188 và 375 mg/kg [16].

B n thân 5-HMF ch y

trong

c test âm tính trong các th nghi m

ng nghi m. Tuy nhiên, n

t bi n v i s

c v i gen

hi n di n c a

phosphoadenosine- -phosphosulphate trong ph n t bào c a gan chu t y u t v i SULTs và ng v t có vú

t bi n c trong các t bào vi khu n bi

nh ng t bào

i di n cho SULT 1A1

Trong m t nghiên c u dài h n, chu

m t

ng

i gen, các t bào

i [12].

c s d ng m c li u 0, 40, 80 ho c 160

mg 5-HMF/kg m i ngày, 6 ngày m t tu n trong kho ng th i gian 11 tháng. S chuy n hóa protein, lipid, n Hình 1.1.

ng t ng h p 5-HMF

acid ascorbic (trong tuy

ng th n), ho

succinate dehydrogenase gan và Tuy nhiên, sàng:

i so v i nhóm ch ng.

m c li u cao 160 mg/kg d

n nh

i các ch s hóa sinh lâm

t m th i -globulin huy t thanh, có xu

gan, t

kh i

ng c a

ng c a tributyrase

ng lá lách chu t; trong khi li u 40 và 80 mg/kg không gây ra các tác

d ng trên [12]. c tính cao c a SMF (ch t chuy n hóa c a 5-HMF)

c ch ng minh b i

c ch ng, Potsdam-

ng, Vi n Dinh

c tiêm vào màng b ng cho chu t

v i li u cao duy nh t 250 mg/kg. H u h t chu t ch t trong vòng 5-11 ngày do h u qu t

i v i các ng

bào ng

ng n

ng n

th n.

h p thu c a SMF vào các t

c th c hi n m t cách gián ti p nh vai trò c a các kênh v n chuy n

OAT1 và OAT3. Trong các nghiên c u ti p theo v i li u th n 40 tu n. Quan sát th y tình tr ng nhi b ng.

[12].

c bi t, không quan sát th y nh y, v i li u th

y u gây ra b i SMF là Hình 1.2. Quá trình chuy n hóa c a 5-HMF 5

m

gan và th

c gan mb

th i gian quan sát ti p xúc tr c ti p v i màng

ng v

u mô chu t

mg/kg, chu t s ng sót; Các v trí t n g n, gan và màng b ng gây ra viêm thanh m c, phúc c tính m nh trên 6

ng n

th n và m c

v a ph i

gan [35]. Hi

m t nghiên c u c th nào v

t bi n gen c a 5-(hydroxymethyl)-2-furfural 1.1.3.

Ý, Ba Lan và Tây Ban Nha) t

c tính

i [39].

quan gi a vi c s d ng cafein v i kh

c cafein r t hi

ng quá li u cafein l i x y ra r

xuyên, m c dù các tri u ch ng c a quá li u hi t

l l md

ng

c n m rõ, vi c qu n lý s d ng

u ng ch

hóa, tim m ch và hô h p. Nhi u nghiên c h th

ng m

n

c coi là m t ch

ng b l m d ng, 1 g cafein có th d

m t ng , h i h p, bu n nôn, ù tai và run tay chân. Ngoài ra, cafein n s co bóp c a tim, làm gi

n

ng tr c ti p

máu não [25].

t áp và nh

c m hôi, b n

ng l n cafein

l th tinh trong ng nghi m (IVF) cho th y có s gi m l d ng nhi

t o thành công. V i m t nam trung bình 70 quá 400

li

ng tinh trùng

t quá 265 mg/ngày, d

c cho là an toàn.

i 2,5 mg/kg/ngày s không Theo m t nghiên c

ng tinh d ch. M i tình ng th i tr l i

s d ng cafein m i ngày. K t qu cho th y vi c s d ng li u cafein n ch

i li u cao (> 800 mg/ngày) có th gây ra gi m n trong tinh d ch [30]. nghiên c u trên 3187 ph n

và s

ng tinh trùng, ng tinh trùng

nh c th v gi i h

nh

7

c,

ng cho phép c a 5-HMF trong nhi u

ng 5-HMF t

c trái cây

àn các nhà s n xu

m c 50 mg/kg.

c ép trái cây qu c t (IFFJPs)

c ép trái cây là 5-10 mg/l [26]. m c cao nh t trong m t s lo

c gi i khát trên th

(theo FDA 2006), v y nên v i m t

m ts t

c ng t. T ch c Y t Th gi i (WHO) và liên minh châu Âu - EU (2001/110,

2001)

phép

c gi i khát

ti n hành nhi u nghiên c u v 5-HMF, t

ng 5-HMF c cho

ng hi n nay là 0,02%

c gi i khát 350 ml thì ch

c phép ch a

71 mg cafein [25].

Vi

các m u th c ph

ih

ng cho phép c a h p ch t 5-HMF và cafein trong

c ng

ng t n t i trong các

s n ph m trên là vi c vô cùng quan tr ng vì nó liên quan tr c ti HMF và cafein

p chí D ch t h c Hoa K , m t nhóm tác gi th c hi n tu i t 25-44 t

i có s d ng cafein, k t

ng c a 5- HMF, Cafein trong m t s

t

nguy n viên tham gia g i m t m u tinh d ch v trung tâm nghiên c

t th

n tình tr ng gây nghi n và ph thu c cafein [38].

u nguyên do, 14% ti p t c s d ng m c

Trên th gi i hi

lo

gi a vi c tiêu th cafein m t ngày v i tình tr ng gi m ch

y

y nh ng d u hi u có h i [28].

ng cafein tiêu th m i ngày không

p chí d ch t h c

ng

c, nghiên c

n hành m t nghiên c

1.1.4. Gi i h n

tìm ra m i liên quan

i s d ng tiêu th m

i nh

gi m s d

ch

ch,

n 505 mg tùy

qu cho th y ch có 18% xác nh n có th b thói quen s d ng, 56% có mong mu n

i

n s c kh e [47].

ra r ng thành ph n

ng t 50

c này khi

m c tiêu th l n cafein có th d

i 250 mg/ngày [34]. V i tr em,

c báo cáo t

làm gi m kh

c hi n nay là cafein, có th

l n cafein trong m t th

n gi m t l th tinh nhân

Hoa K , nghiên c u ti n hành trên 2554 thanh niên kh e m

b câu h i v v

nh

ph n có thai, m c li u gi m xu ng là 300 mg, và

m b o thai nhi phát tri n kh e m

ph n

PubMed, Embase, và The Cochrane Library

lo i. Do v y vi c u ng các lo

mg) trong th i gian

ng n, h u qu có th d n t i kích thích tim quá m c và t vong. K t qu nghiên c u t

li

d li

Hughes và c ng s

Theo các t p chí qu c t v khoa h c y t và nghiên c u s c kh

c bi t khi tiêu th m

mg/ngày [14]. Ngoài ra,

Theo m t báo cáo c a Meredith S.E. và c ng s , s d ng d li u trên các ngu n

chính c

ng máu não b ng cách làm co các m ch

tính khi quá li u cafein có th gây khó ch

t l trì hoãn

n c a thai nhi, làm gi m cân n ng sau khi sinh c a tr [45].

ng minh cafein có tác

t

nhóm ph n

vi c tiêu th cafein > 71 mg/ngày

n kinh, tiêu

i (Spiller, 1998)

ch n, khó th

quá trình th thai, t l này gi m

[34].

Cafein là m t ch t có nhi u tác d ng lên các h

th t

thai. K t qu cho th y

i v i nh ng ph n có s d ng cafein > 500 mg/ngày có s

c tính c a Cafein Nhi

m i liên

c tính c a 5-

. 5-HMF và h p ch t c cv it

cv

Th nên r t c n s d ng m

t bi nh

8

c xác .

ch n l c thích h p,

không t n k

phát hi n và theo dõi liên t

ng 5-HMF, cafein trong các s n

ng cafein trong các s n ph m cà phê nhân, cà phê rang, cà phê hòa tan lo i thông

ph m này.

1.2.

ng và lo

T

1.2.1.

, các s n ph m cà phê hòa tan h n h p ho

phê ki u capuccino b

-HMF và cafein

ng 5-hydroxymethylfurfural trong m t s ch ph m thu c và th c ph m ch

c ký l ng hi

mm x 150 mm, 5 µm),

nh

25

gi

c

ng acid acetic 0,1% - MeOH (85:15), th

tích tiêm m u 20 µl, t c an toàn v sinh th c ph

n qu c gia

HMF) trong s n ph m rau qu . Tiêu chu n này quy ng 5-HMF trong các s n ph m rau qu

ng b ng chu

(TT) và 20 ml toluen (TT). Chu

.

c vào ph n m u th

n th : hòa tan 170 mg ch ph m

b ng dung d

,

nh

n th , 1 ml dung d ch acid percloric i 19,42 mg C8H10O4N2 [4].

1.2.2. Th gi i

i v i các

d t do trong m t lít thì thêm acetaldehyd.

ngu i, thêm 10 ml anhydrid acetic

m k t thúc b

nh hàm

bi n nhi t b

Chu n b dung d ch m u th b

ng cafein trong các ch ph m.

trong 5 ml acetic khan (TT) b

ng 5-hydroxylmethylfurfural (5-

a

c sóng kho ng 272 nm [7].

nh v c

c sóng phát hi n 284 nm [8].

ng

nh b ng HPLC trên c t RP-

ng dòng, s d ng detector UV

d ng c t C18 Apollo (4,6

o

s n ph m ch a nhi

c 90 C v i s có m t c a magie oxit. Sau l

cafein c a d ch chi

n Th Thùy Linh và c ng s

c

o

chi t ra kh i m u b

c

u ng t cà

c ký l ng hi

c kí l ng hi B ng 1.2. M t s nghiên c

ng 5-HMF và cafein b ng HPLC

Thêm dung d ch acid barbituric và p-toluidin vào m t ph n c a dung d ch m u th t o dung d

. Th c hi

Ch t phân

Tác gi

c sóng 550 nm [6].

tích/M u

Chuyên lu nh 5-HMF b ct

c sóng c

h p th c a dung d cl

màng l c 0,45

n hành Nghiên c

chia dòng 1:2, khí mang Heli, t va ch

1 ml/phút, nhi

lên 200 C v i t c

o

tiêm ng

5-HMF / th c Vorlová L., et al. (2006)

u 50 C gi

o

o

10 C/phút, r

Cv it

ph siro, m t, th tr em)

25oC/phút, duy trì trong 1 Jandlova M.,

c an toàn v sinh th c ph m ban hành tiêu chu n qu c gia ng cafein trong m t s s n ph m u ng t cà phê. Tiêu chu

nh hàm 9

dichloromethan (5:95, v:v), th

tích

[41]

tiêm 5µl b ng áp l c 160 psi, detector UV 280nm.

c c t, l c qua

phút [9].

cà phê ho

tan

o

t: nhi o

bu ng ion 280

cà phê u ng hòa

ng s c

tiêm 250oC, ch

c l a ch n: Nhi

ng 5% isopropanol trong

5-HMF và Cafein/

ng 5-

c khu y tr n và pha loãng b

u ki n s

Roger M. Smith, (1981)

c ng t và m t s thu c, th c ph m ch u th

c

[5], [15].

ng s

kh i ph

C t ODS (100 x 5 mm, 5,5µm)

t th tích ch ph m

ng v i 1,0 g glucose v

ký khí

TLTK

c ký

Kucerova J. (2016)

C t C18 (150 x 3,9mm, 4µm) c - methanol (90:10, v:v), t

dòng 1 ml/phút, th tích tiêm

20µl, nhi

[46]

c t 20oC, detector UV

285nm.

C t C8 (150 x 4,6mm, 5µm)

5-HMF/m t mía, bánh

ng methanol t c

c (5:95, v:v),

dòng 1 ml/phút, th tích tiêm

20µl, detector UV 284nm.

10

[29]

(2002) &

n di mao qu n (CE)

C t Spherisorb C18 (250 x 4,6mm,

Ferrer E., et al.

5µm) 5-HMF/s a tr

Hernández

em

ng acetonitril -

(5:95, v:v), t c

dòng 1 ml/phút, th

[27]

Tác gi

Ch t phân

u ki

tích/M u

(1992)

ng

acid

acetic

acetonitril (A: 92:8, acetonitril

al. (2007)

n di

TLTK

C t mao qu n silica (75 µm I.D x 375 µm O.D), Corradini

C t Luna C18 (150 x 4,6mm, 3µm)

Chih-Yu Lo, et

ng 5-HMF và cafein b ng CE

[23]

tích tiêm 20µl, detector UV 284nm.

G.E., et al.

B ng 1.3. M t s nghiên c

c

5-

i; b

-

t ng chi u dài 37 cm, chi u dài hi u d ng 30cm.

5-HMF/

m phosphat 50 mM (pH 7,5) ch a SDS 100 c trái cây mM; detector UV 280 nm; tiêm m u b ng áp

Corradini

u là

C., (1992)

n thành 60:40

su t, th i gian tiêm m u 2,5 s; i

i thành

[17]

n 20:80 trong

40:60, cu

môi này trong 5 phút. T c

t vào

Salvio

dòng 0,8

JimeÂnez-

ml/phút, th tích tiêm 20 µl, nhi

48,5 cm, chi u dài hi u d ng 40 cm.

5-HMF/ s a

c t 25 C, detector UV 284 nm.

m

phosphat 50 mM (pH 7,5) ch a SDS 100 mM; detector UV 280 nm; tiêm m u b ng áp su t 50

tr

mbar, th i gian tiêm m u 2,5 s; i

PeÂrez,

o

25 C.

C t mao qu n silica (50 µm I.D): t ng chi u dài

Francisco J. Morales,

2,5 phút ti p theo và duy trì h dung

[18]

o

u mao qu n 10 kV; nhi

n 52:48 sau 2

u ng có ga

0,15%

D.,

u mao qu n 20 kV; nhi

(2000)

[24]

t vào mao qu n

o

25 C.

ng KH2PO4 (50mM, pH=2)

Md. Abdul Mumin, et al.,

c ng t

(2006).

acetonitril

methanol (40:8:2). T

dòng 0,5 ml/phút. Tiêm b ng áp su t

C t mao qu n silica (50 µm I.D, 375 µm O.D): [36]

Rizelio V.M., et al,

1328-1331 psi, detector UV 254 nm.

(2012)

(2017)

u ng cà phê

v:v), t

c c t (95:5,

dòng 1 ml/phút, th tích

u ng có ga

ng methanol v:v), t

SDS 120 mM; áp th

[21]

c t 30 C, detector UV 275 nm, th tích

u mao qu n 15

40 cm, chi u dài hi u d ng 30 cm, s d ng R.R., et al., (2015) [50]

Cafein

d n. Dung d

c

ph m, thu c

4-dimethoxycinnamat 10 mM (thêm LiOH 15

n ly n n: 3, -alanine 10 n pH 10,4) ch a

SDS 100 mM, th i gian tiêm m u 1s v i áp l c 25 kPa

i n áp 25 kV.

tiêm m u 20 µl.

11

[40]

C t mao qu n silica (50 µm I.D): t ng chi u dài Cunha

c (40:60,

dòng 1,0 ml/phút; Nhi o

m natri tetraborat 5 mM (pH 9,3) ch a

kV; detector UV 284 nm.

C t C18 (4,6 x 250 mm, 5µm)

Chen H., Wu

(2013)

ng methanol

tiêm 20 µl, detector UV 278 nm.

Zhu Q., Ma C.,

Y., Huang J.,

cm.

ong

C t C18 ODS (250 x 4,6 mm, 5µm)

Fajara B.E.P., Susanti H.,

5-HMF/ m t

T ng chi u dài 32 cm, chi u dài hi u d ng 23,5

12

[19]

M ts

di chuy n v phía c

khác:

Trong glucose, 5-

nh b ng

nm. K t qu

cc

nh cho th y kho ng tuy n tính gi

c sóng 284

h p th và n

em, m

s c ký: c

u ki n ng là h n h p acid acetic

0,01 mM trong dung d ch acid formic 0,2%; t

dòng 0,2 ml/phút

s n ph

MS)

cs d

c cam và các

o

c gi

tiêm là 280oC, nhi t

b. Nguyên lý c

ng c

quang

ng cafein theo công th c. K t qu cho th

nd

hòa tan là kho ng 3-4%; trong cà phê rang kho ng 1-2%; trong trà hòa tan kho ng 8% [42].

ng b

n di b

ub

c ng d ng r ng rãi nh

ng th i các ch t vì cho k t qu tách t

ng

nh y cao. Tuy nhiên HPLC

l i có giá thành cao, chi phí phân tích m t m u l n, t n kém dung môi, ô nhi m môi ng. Trong k

n di mao qu n

nhi u do hi u qu tách cao, tính linh ho t l c th .

T ng quan v s

làm vi c và các ch

u ch

n gi

i tác d ng c a l

n ion hóa m

pH th p, nhóm silanol s

ion

ion hóa nhi

.

c. Phân lo i Hi

n di mao qu n có 5 lo i ch y u: n di mao qu n vùng (capillary zone electrophoresis - CZE) còn g dung d ch t

n di

n di mao qu n dòng t do. ng, còn g i là s

ng mixen (micellar electrokinetic

n di mao qu n gel (capillary gel electrophoresis - CGE). n hòa tan hay phân tán trong

di chuy n v phía c c âm (cathod), anion 13

c thêm vào. .

dòng EOF s

n di mao qu n h i t

ng di chuy n c a ti

ng c a kh i dung d

chromatography - MEKC).

n di mao qu n

n di mao qu n

n di là hi

u cathod c a mao qu n kéo

n th m (electroendoosmotic flow - EOF). M

S ng mixen [3], [10]

1.3.1. Gi i thi u v

t th trên chi u dài c t mao qu n làm cho

c a nhóm silanol trên thành mao qu n ph thu c ch y u vào pH c a dung d

c s d ng n nhanh chóng và

n vào thành mao qu n tích

n tích kép di chuy n v

theo kh i dung d ch. S chuy cg

pH r t th p. Cation hay các ch t hòa

n tích kép.

hóa th HPLC hi

m làm vi c, thì nhóm silanol n m trên

n âm ngay c

t ph

n âm t o nên m t l

c sóng 250, 273, 296 nm ng cafein có trong cà phê

ng

n hình v i mao qu n mà m t trong thành mao qu n

b m t thành mao qu n s

c gi

: Sau

n áp cao th

thành phía trong c a mao qu n s gi i phóng ion hydrogen vào dung d

ph n dung d ch c a l

ng trong cà phê và trà b ng

a. Khái ni

ct ob

n di mao qu n

Quá trình v n hành c

u là 70oC

C v i 7 oC/phút và 300 oC v i 20 o

khi chi t cafein t m u, ti

s d ng ít m

n tích khác nhau trong

u mao qu n.

d ng: c t DB-5MS (30 m x 0,25 mm), khí mang Heli,

trong 10 phút); Gi i h n phát hi n là 6 ng/g [43].

ch

i

là 10

c sóng

nh 5-

t, m

khí mang liên t c là 1,3 ml/phút; nhi

1.3.

trong c t mao qu

không có l p bao và mao qu n ch a dung d kh i ph (GC

HMF trong m t s m u th c ph

(

40

o

285 nm. [31]. c ký khí

t

nh HMF trên

c x lý b ng dung d

o Zorbax C18

phát hi n

i cho phép tách nhanh và hi u qu h n h p các ch

dung d ch l ng. Quá trình tách d a trên s di chuy n khác nhau c a các phân t ch t c ký l ng - kh i ph (LC-MS): Nghiên c

các m u th

n di mao qu n (CE - capillary electrophoresis) là m t k thu t phân tích hi n

HMF trong

kho ng 0-0,1 mM [48].

n không b hút v phía

n c c.

t ngo i,

m u chu n là dung d ch 5-HMF và m u tr

nt

n di mao qu

n (capillary isoelectric focusing - CIEF).

ng t c (capillary isotachophoresis - CITP).

bi n nh t là i n di mao qu n vùng và s 14

ng mixen.

d. C u t o c a h th

n di mao qu n

U 2.1.

Nguyên v t li u, thi t b

2.1.1.

ng nghiên c u

Ch t nghiên c u: 5-hydroxylmethylfurfural (5-HMF); cafein.

M u tr ng:

c lo i ion.

N n m u t t o: ph bi n hi n nay:

c m t s thành ph n có m t trong các lo

(0,00024%), B12, các ch t màu sunset yellow, tartrazine (v M u th : m t s m

c ng t

ng (10-17%) , natri (0,03%), các vitamin B3 (0,0012%), B5, B6

c gi i khát

tích có ngu n g c khác nhau

n th

t o màu). ng Hà N i. Các m u phân

c th hi n trong b ng 2.1.

B ng 2.1. Danh m c các m u phân tích Hình 1.3.

1.3.2. S

n di mao qu n Mã s

ng mixen (MEKC)

a. S

Tên m u

Ngày s n xu t

S lô

ng S

s

c u t o h th

H n dùng

c gi i khát có ga ng (EKC) là m t k thu t k t h p các nguyên t c tách c a CE và

m r ng ph m vi ng d ng c a CE sang tách các h p ch t trung hòa v M t thành ph n m

c thêm vào g

c phân b gi

c c a dung d

t c c a ch

- PS n ly n

n.

t phân tích

V03

Coca cola

0455C8W026

111218

110619

V04

Bò húc

008SY1

080119

080720

V10

Sting dâu

A1827F

111218

110619

V11

Mirinda orange

H0941A

061118

061119

V14

Coca cola plus coffee

1556N3W45B 061018

060419

). V n

n s di chuy n ho c b ng v n t c c a EOF ho c

b ng v n t c c a PS, v n t c bi u ki n c a m t vùng ch t phân tích là giá tr trung bình c a hai v n t c trên.

V i các lo

khác nhau s cho các k thu t s

ng khác

ng h p s d ng các ch t di n ho t (anionic, cationic, không ion hóa ho

ng tính, các mixen polyme ho c ch t di n ho

k thu t EKC s b. S

Công ty s n xu t/ công ty phân ph i

c g i là MEKC

m t k thu

, c s d ng r ng rãi nh t.

V12

ng mixen

Red Dragon

1438V3

101119

100819

Cty TNHH URC Vi t Nam

1332V3

161218

160919

Cty TNHH URC Vi t Nam

Red Dragon

c hình thành khi thêm ch t di n ho t vào dung d

n ly n n n ng

V16 cây

mixen t i h n c a chúng, các ch t di n ho t này có th là ion hóa, ng tính. Khi m t ch

c gi i khát không có ga

c tiêm vào mao qu n, nó

s phân b gi a hai pha: Di chuy n v i v n t c b ng v n t c PS khi c r a gi i ra tPS ho c v i v n t c b ng v n t c r a gi i cùng EOF t i tEOF. 15

trong mixen và i mixen

c gi i khát Coca-cola Vi t Nam T.C. PHARMACEUTICAL INDUSTRIES CO., LD c gi i khát Suntory PepsiCo Vi t Nam c gi i khát Suntory PepsiCo Vi t Nam c gi i khát Coca-cola Vi t Nam

V01 V02

Siro sim (SimUpin & Ipin nho

71

261217

261219

12307c

121017

120419

16

i và d ch v Cty TNHH xu t nh p kh u An Hân

V05

Nutri boost

023905

081218

c gi i khát Coca-cola Vi t Nam

080619

cy n V06

090818 Y n Vi t Cà phê s a HighLand coffee Upin & Ipin cam

V07 V08 V09

V15

trà xanh (Green Tea)

V17

Trà xanh 0o

V18

Cty C ph n Y n Vi t Cty TNHH MTV Thái Kiên

0108

301118

300520

12307a

121017

120419

11921

151018

151019

240618

291219

- M t s d ng c th y tinh thông d ng trong phòng thí nghi m: c c có m , ph u th y nh m c, pipet chính xác, pipet chia v ch, pipet Pasteur, micro pipet, th 2.2.

160818

160820

091B14

091118

091119

10142

160119

150120

ng th i 5-hydroxymethylfurfural và cafein b ng

n di mao qu n.

- Th

Cty TNHH Paldo Vina Cty TNHH Cánh vàng

N i dung nghiên c u

- Xây d

Cty TNHH xu t nh p kh u An Hân c Gi i Khát Kirin Vi t Nam

-

Pororo (tropical fruits flavor)

V13

090819

- Màng l c 0,2 µm và 0,45 µm, gi y l c.

.

ng d

ng hai ch t trên trong các lo

gi i khát trên th

ng.

2.3.

ng

u

2.3.1. Chu n b các dung d ch chu n

Cty TNHH Number One Hà Nam c Gi i Khát Kirin Vi t Nam

Pha dung d ch chu n 5-HMF 2000 µg/ml (2000 ppm

c lo i ion, l

u

Pha dung d ch chu n cafein 2000 µg/ml (2000 ppm) trong methanol 50%, l

u

b o qu n

2-8oC, s d

nhi

b o qu n

nhi

a. Hóa ch t, ch t chu n, dung môi

2.3.2. Kh o sát và l a ch

- Các ch t chu n: Chu n 5-hydroxylmethylfurfural (99% nguyên tr ng, ch t chu n

-

u ki

2-8 C.

-

c lo i ion

c), natri tetraborat (

n di mao qu n v i detector UV-

o

VIS, nhi

c), natri dodecyl sulfate (Trung

n di

c ti n hành trên h th mao qu n 25 C. t hóa mao qu n:

c l c qua màng l c 0,2 µm, methanol (Fisher Scientific Korea Ltd),

natri hydroxyd (

u ki

c áp d ng cho nghiên c

Sigma Aldrich, CAS number 67-47-0, lot WXBB6224V), cafein (99,57%, SKS: p).

c trong vòng 1 tháng.

o

2.1.2. Nguyên v t li u, trang thi t b

0316099.03, do Vi n Ki m nghi m thu c T

X lý mao qu n m

c khi s d ng l

u tiên c t mao qu n m

Qu c).

s ch v i dung d ch NaOH 1M trong 10 phút, r

b. Các trang thi t b

r a b ng dung d ch NaOH 0,1M trong 30 phút, r i r a l i b

-

phút.

n di mao qu n Agilent 3D CE (G1602A), s seri DE01602452.

- C t mao qu n silicagel nung ch y, chi u dài 44 cm, chi u dài hi u d ng 36

ng

Hàng ngày, vào th

kính trong 50 µm.

trong 15 phút

- Máy c

r a l i b ng

- H th ng l

c hai l n Hamilton, Anh. c siêu s ch PURELAP Classic ELGA, Anh.

- Cân phân tích Sar

c.

- Máy quang ph UV-VIS SHIMADU 124, Nh t B n.

17

u ngày mao qu

cr a

c lo i ion 1 phút, ti p theo c lo i ion 1

c r a s ch v i

c lo i ion

a b ng dung d ch NaOH 0,1M trong 30 phút, cu i cùng c lo i ion trong 15 phút.

Gi a các l n ch

t hóa c

trong 1 phút, NaOH 0,1M trong 3

c.

c

n ly n n trong 1 phút. Th

c th c hi n v i

c lo i ion

c lo i ion trong 1 phút, dung d ch

m cu i ngày mao qu

ion trong 15 phút, NaOH 0,1M trong 30 18

cr av

c lo i ion trong 15 phút.

c lo i

- Kh o sát, l a ch

c sóng phát hi n

n di.

- Kh o sát, l a ch n n

dung d

- Kh o sát, l a ch n n

ch t di n ho t.

- Kh o sát, l a ch n hi

n th

úng phù h p. Giá tr

n ly n n.

10-

u mao qu n và th i gian tiêm m u.

Sau khi kh o sát, l a ch

u ki

phù h

n di t

n hành th

m

phù h p h th ng, tính ch n l c, gi i h n phát hi n và gi i h

ng, kho ng tuy n

ng chu n ng cho k t qu chính xác, c

mà

n tính gi a di

nh kho ng n ng ng phân tích) v i n ng

ch t phân tích.

phù h p h th ng

M

phù h p c a h th ng là phép th nh

gi a di n tích pic và n

nh c a toàn

h th ng phân tích b i các y u t : máy móc, thi t b , cách ti n hành, m u th ...

Các thông s

a ch n.

ng 3 là giá tr LOD và b ng 10 là giá tr LOQ.

mb

.

phù h p c a h th ng bao g

i RSD c

mà t

Kh o sát kho ng tuy

nh bao g

c dung d ch chu n có

nh t l S/N c a m i n

L y giá tr n

c là phù h p. Các tiêu chí c n th

l pl

ng l y giá tr b ng 10).

n

[11], [13]

b

có t l S/N n m trong kho ng t

nh: Thêm chu n vào các m u n n t t

tv

2.3.3. Th

nh t i n

g

i quy x p x 1.

2

Yêu c u: h s m dùng xây d

t

Ti n hành tiêm l p l i 6 l n cùng m t dung d ch chu n h n h

c bi u di n b ng ng h i quy có d ng

ng th ng và h s

l ch chu n

ng phân tích khi tiêm m u l p l i.

ch

i quy tuy n tính và h s

u ki n

ng chu n so v

V i

ch ch c a

ng chu

ng

.

x 100%

n. Yêu c u các giá tr th i gian di chuy n c a m i pic, di n tích pic c a m i ch t

, ti

n di

u ki

n. Yêu c

pic

m ng v i pic c a 5-HMF và cafein

Ti n hành

xu t hi n. Th i gian di chuy n và hình dáng c a pic trên Gi i h n phát hi n và gi i h Gi i h n phát hi n (LOD) là n

nhau.

cl l pl

th p, trung bình, cao so v

l ch chu

i RSD. Theo AOAC, yêu c

ta có th

ng b

mà pic có t l S/N n m trong kho ng t 2-3

ng n n, b r ng m i bên t i thi u g p 10

t i thi u c a m t ch t có trong m u th mà

m i

g n sát c a k t qu phân tích v i giá tr th c c am

t. c bi u th b ng t l thu h i: -

i v i m u tr ng: R% =

-

i v i m u th :

x 100%

R% =

x 100%

o sát và cho k t qu 19

l pl i

nh

l n chi u r ng c a pic t i ½ chi u cao. ng LOQ là n

ng chu

khác nhau là khác nhau.

u cao tín hi u c a ch t phân tích, N là

Gi i h

m chu n.

c a các ch t phân tích trong 6 m u th thêm chu n

u ki n thí nghi m c th .

c tính v hai phía c

ng chu n c m chu n.

nh n

ng t i 3 n

ng n

ng.

ng l y giá tr b ng n

ph

th p nh t c a ch t phân tích có th

t thi t ph nh t i n

n di

c có pic

c

ng chu n.

l pl i

c a các ch t phân tích ph i tách hoàn toàn so v i pic c a các ch t t c a n n m u t t o, t i th

c

Cc : N

Chu n b n n m u t t o, n n m u thêm chu n, m u th , m u chu n h n h p và các m u chu

m chu n dùng xây d

Ct : N

Tính ch n l c

nhi

ch ch c a t

i

phân tích

20

C NGHI M, K T QU VÀ BÀN LU N R%

thu h i. :N

ch t phân tích trong m u th .

:N

ch t chu n thêm vào theo lý thuy t.

:N

ch t phân tích trong m u tr ng thêm chu n.

Ti n hành: Thêm chu n vào các n n m u t t o ho c m u th g p 0,5 l n; 1 l n; 2 l n so v i gi i h n

th c t , t

2.3.4.

n di

Ti n hành quét ph c a t ng dung d ch chu n SDS 75mM v

c sóng t 210 nm

trên n n

n 350 nm. Ph thu

m borat 40mM và

c c a hai ch

thu h i l ng n

c th

hi n trong hình 3.1.

các m c n

n di dung d ch thêm chu n (ti n hành ch y 4 l n). D a ng chu

m

u ki

c sóng phát hi n

nh b i các t ch c có uy

vào di

h i

Kh o sát và l a ch

3.1.1. Kh o sát và l a ch

:N

tín trên th gi i. Ti

3.1.

sau khi thêm ch t chu n (th + chu n).

cn

5-HMF

chu n thêm vào

ng ch t chu n thêm vào (%). Yêu c

thu

khác nhau là khác nhau theo AOAC.

ng d ng T

ng c a 5-HMF và

cafein trong m t s lo

c gi i khát có m t trên th

ng.

Cafein lý s li u [2]

2.3.5.

Tính toán và x lý th ng s li u trên ph n m m Microsolf Excel 2016. M t s công th c tính toán giá tr th * Giá tr trung bình:

= Hình 3.1. Ph h p th c a 5-HMF và Cafein

l ch chu n:

SD = T ph c a hai ch t trên, ta nh n th y r ng m i ch

l ch chu

i:

RSD (%)

=

x 100%

h p th c

c sóng khác nhau (5-

a ch

i

các

c sóng

ng 5-HMF là 284 nm và cafein là 274 nm.

M ts

u ki

Mao qu

n di c

nh:

n di: C t silica nung ch y, chi u dài 44cm, chi u dài hi u d ng ng kính ngoài 375 µm.

Dectector: UV-VIS. Dung d ch chu n h n h p hai ch t g m 5-HMF và cafein có n 150 µg/ml.

Ch 21

tiêm m u b ng áp su t 50 mbar.

22

m i ch t là

3.1.2. Kh o sát và l a ch n

Ti ly n

n di

3.1.3. Kh o sát và l a ch n n

n di dung d ch chu n h n h p 5-HMF và cafein v i dung d m borat

40 mM (pH = 9,3) và v i dung d n th

m

i n ly n n là h n h

n m

u mao qu n là 15 kV, th i gian tiêm

Ti

n ly n n v i các n

natri dodecyl sulfat (SDS) 75 mM,

kV, th i gian tiêm m

c th hi n trong hình 3.2.

n ly n n

n di dung d ch chu n h n h p 2 ch t phân tích (cùng n

µg/ml), s d ng dung d ch mM; n

dung d

150

khác nhau: 25 mM, 40 mM, 50 n th

u mao qu n 15

c th hi n trong hình 3.3.

Borat 25 mM

m borat 40 mM

Borat 40 mM m borat 40 mM + SDS 25 mM

Borat 50 mM c và sau khi thêm SDS

Hình 3.2.

V i dung d

n ly n

m borat 40 mM (pH = 9,3)

1 pic, hai ch t phân tích không có kh

nhau. V i dung d

h

ch xu t hi n n ly n n là h n

t hi n 2 pic tách nhau.

25oC, pKa c a 5-HMF là 12,82, pKa c a cafein là 14, t phân tích ch y u t n t i

d hóa, nên t

i n di

Khi gi m n

ly n n. Vì v y, chúng tôi ti n hành tách 5-HMF và cafein theo

.

n

23

n ly n n khác nhau

n ly n n, th i gian phân tích gi m. T i n

40 mM

nh (kho ng 60 µA)

n d

ng mixen (MEKC).

dung d

dung d

25 mM, th i gian phân tích ng n d l n pic t p. T i n

c nhau. xu t hi n 2 pic tách nhau khi thêm SDS vào dung d

t i các n

Hình 3.3.

d ng không ion

di chuy n c a chúng b ng v i v n t c dòng EOF. Vì v y trong các

ng h p này, hai ch Nh n th

ng h p ch s

m borat 40 mM là n

50 mM, th i gian

p (RS = 16,7) n di ho

dung d

i,

n ly n n cho các kh o sát ti p theo.

24

n

ng an toàn. Vì v y, ch n dung

3.1.4. Kh o sát và l a ch n n

Ti

ch t di n ho t

n di dung d ch chu n h n h p hai ch t phân tích (cùng n

µg/ml), s d ng dung d

in

150

10 kV

natri dodecyl sulfat (SDS): u mao qu n 15 kV, th i gian

tiêm m

i

c th hi n trong hình 3.4.

SDS 50 mM

SDS 25 mM

15 kV

20 kV SDS 75 mM

SDS 100 mM

hi

Hình 3.5.

t i các n

Hình 3.4.

n ly n n, ta th y RS c a hai ch t

ng th i th i gian di chuy n 100 mM (RS = 21,8), hai ch t tách t c kh

ch t di n ho t thêm vào dung d

3.1.5. Kh o sát và l a ch n hi

Ti p t c ti

i 75 mM (RS= 16,7) và

c mao qu n. Vì v y, ch n 75

u mao qu n l

n th

150 t vào

th hi n trong hình 3.5.

25

n di (< 100 µA). T

n di

u mao qu n cho th i gian phân tích h p lý.

3.1.6. Kh o sát và l a ch n th i gian tiêm m u

n di dung d ch chu n h n h p hai ch t (cùng n i hi

n

pháp; t i 20 kV, th i gian phân tích ng n, d l n các pic t p trong n n m u. Vì v y, ch n n th

u mao qu n

µg/ml), s d ng dung d ch borat 40 mM và SDS 75 mM

ng th

u n m trong kho ng an toàn cho phép c

n ly n n.

n th

u mao qu n, th i gian phân tích gi m rõ r t,

hai ch t phân tích v n tách nhau hoàn toàn,

ta th y, t i 10 kV thì th i gian phân tích quá dài làm gi m tính t

t i 75 mM th

nh t c a dung d ch th mM là n

n th

ch t di n ho t khác nhau

c a SDS trong dung d

u th 10kV, 15kV, 20 kV

Ti n hành ch µg/ml), gi

n di dung d ch chu n h n h p hai ch t (cùng n u ki

a ch n

i th i gian tiêm m u l n

c th hi n trong hình 3.6.

26

150

5s

3s

Hình 3.7.

3.1.8.

10s

7s

c a 5-HMF và cafein t

u ki n l a ch n

nh tính các ch

Ti n hành kh o sát các dung d ch chu µg/ml

a hai ch t phân tích

n

284 nm và 274 nm cho k t qu

hình 3.8.

c a t ng ch t phân tích t

u ki n l a ch n

5-HMF

Hình 3.6.

t i các th i gian tiêm m u khác nhau

Nh n th y th i gian tiêm m l

n, di

n, t i t = 5s pic

p. Vì v y, ch n th i gian tiêm m

3.1.7. T ng k

u ki n

Cafein

c l a ch n

Qua kh o sát, chúng tôi l a ch Mao qu

n di.

u ki

:

n di: c t silica nung ch y, chi u dài 44 cm, chi u dài hi u d ng 36 ng kính trong 50

Detector: UV

ng kính ngoài 375 µm.

Hình 3.8.

VIS.

c sóng phát hi

T iv i

ng 5-

iv i

nh

c, nh n th y 5-HMF di chuy

là cafein v i th i gian di chuy n là: 5-HMF (tM = 4,6 phút) và cafein (tM = 6,1 phút).

ng cafein.

Dung d

n ly n n: Dung d c

m natri tetraborat 40 mM + natri dedocyl 5-HMF

sulfat 75 mM (pH = 9,3).

Hi

n th

Cafein

u mao qu n: 15 kV.

Th i gian tiêm m u: 5s.

Ch

tiêm m u b ng áp su t: 50 mbar.

Hình 3.9.

27

nh tính các ch 28

20

3.2.

K t qu trong 2 b ng cho th y RSD (%) c a th i gian di chuy n (tM) và di n tích

X lý m u

Khu y tr

ng nh

n hành pha loãng m u theo t l thích h p. M u

c l c qua màng l l

c phân tích d

3.3.

3.3.2.

n di l p l i 6 l n cùng m t h n h p chu n 5-HMF và cafein t i ba

th p (10 µg/ml), trung bình (100 µg/ml) và cao (200 µg/ml)

u ki

m c 3.1.7, ghi l i th i gian di chuy n và di n tích pic.

K t qu

c th hi n trong các b ng 3.1 và 3.2.

B ng 3.1.

STT

1 2 3 4 5 6 TB RSD (%)

HMF 10 (µg/ml) Spic tM (phút) (mAU.s) 4,717 13,3 4,674 13,7 4,671 13,2 4,672 13,6 4,677 13,9 4,645 13,7 4,674 13,6 0,50 1,96

1 2 3 4 5 6 TB RSD (%)

Cafein 10 (µg/ml) Spic tM (phút) (mAU.s) 6,090 11,2 6,286 11,5 6,097 11,2 6,285 11,5 6,280 11,7 6,246 11,7 6,214 11,5 1,52 1,96

HMF 100 (µg/ml) Spic tM (phút) (mAU.s) 4,650 133,9 4,645 135,6 4,648 131,2 4,655 133,3 4,661 131,1 4,584 128,9 4,641 132,3 0,61 1,8

n

HMF 200 (µg/ml) Spic tM (phút) (mAU.s) 4,567 306,0 4,578 304,0 4,556 307,2 4,565 302,9 4,546 305,0 4,553 305,9 4,561 305,2 0,25 0,50

n di l

t các m u sau t

n

g nn

- Dung d ch n n t t o.

- Dung d ch n n t t o thêm chu n.

K t qu

29

Cafein 200 (µg/ml) Spic tM (phút) (mAU.s) 6,056 191,9 6,042 189,9 6,001 189,4 6,022 190,7 5,978 188,8 5,996 188,4 6,016 189,9 0,50 0,68

u ki

n di t

m c 3.1.7:

-HMF và cafein, dung d ch chu n h n h p hai ch t m u th .

ng th i 5-HMF và cafein.

c th hi n trong hình 3.10.

5-HMF chu n

Cafein chu n

phù h p h th ng c a cafein Cafein 100 (µg/ml) Spic tM (phút) (mAU.s) 6,209 97,4 6,196 96,9 6,206 94,5 6,089 94,6 6,235 95,4 5,942 95,3 6,146 95,7 1,80 1,30

ng 2 ch t trên.

ch n l c

- M u th ch

phù h p h th ng c a 5-HMF

B ng 3.2.

STT

n di phù h p v i vi

- Hai dung d ch chu

phù h p h th ng

di t

u n m trong kho

u này ch ng t h th

Ti

Ti n

ng.

Th

3.3.1.

pic (Spic) c a 5-

c qua màng l c 0,2 µm d ch

5-HMF và Cafein chu n

N nt t o

30

B ng 3.4. Quan h tuy n tính gi a n

N n t t o thêm chu n u

N (µg/ml)

10,0 80,0 100,0 150,0 300,0 400,0 500,0

M u th

m u chu n và m u th

th

c a m u th và m u n n thêm chu n, th i gian

di chuy n c a hai ch

ng v i th i gian di chuy n c a chúng trên m u chu n và

tách kh i các thành ph n khác trong n n m u. V 3.3.3. Kho ng tuy

9,913 81,78 101,5 152,5 313,6 397,0 507,5 i quy

ch ch c a t ng m chu n (%)

8,690 -13,1 79,82 -0,2 99,34 -0,7 149,8 -0,1 309,3 3,1 391,8 -2,0 501,2 0,2 y = 1,0103x + 1,1330 0,9992

y = 1,3847x + 0,5464 R² = 0,9996

n l c.

ng chu n

V i m i ch t phân tích, t dung d ch chu n g c có n hành pha loãng v Ch y

tính l i t ng chu n (µg/ml)

m xu t hi n pic S (mAU.s)

c a m u n n t t o không xu t hi n pic

N

R2

nh tính ch n l c c

Hình 3.10.

Di n tích pic (mAU.s)

và di n tích pic c a cafein

là 2000 µg/ml, ti n

c lo i ion thành dãy dung d ch chu n có n

n di các dung d ch trên b

khác nhau.

ng, k t qu th hi n

C (µg/ml)

trong các b ng 3.3 và 3.4.

N

u (µg/ml) 5,0 10,0 50,0 80,0 100,0 150,0 200,0 R

Di n tích pic (mAU.s) 7,329 13,52 71,48 113,1 135,4 210,0 276,9 i quy

và di n tích pic c a 5-HMF

N ng tính l i t ng chu n (µg/ml)

ch ch c a t ng m chu n (%) 4,898 -2,0 9,369 -6,3 51,23 2,5 81,28 1,6 97,39 -2,6 151,3 0,9 199,6 -0,2 y = 1,3847x + 0,5464 0,9996

2

31

Hình 3.11.

S (mAU.s)

B ng 3.3. Quan h tuy n tính gi a n

th quan h tuy n tính gi a n

và di n tích pic c a 5-HMF

y = 1,0103x + 1,1330 R² = 0,9992

C (µg/ml)

Hình 3.12.

th quan h tuy n tính gi a n 32

và di n tích pic c a cafein

T b ng k t qu

th , nh n th y kho ng n

µg/ml và cafein t

5-HMF t

n 500 µg/ml có m

di n tích pic và n

m u chu n 2

,

n 200 5-HMF 1 µg/ml

cafein 2 µg/ml

5-HMF 5 µg/ml

cafein 7 µg/ml

n tính ch t ch gi a

ng h i quy có d

ng th i các giá tr

ng th ng và h s ch ch c a t

m chu

u

n m trong gi i h n cho phép là ±15%.

3.3.4. Gi i h n phát hi n (LOD) và gi i h

ng (LOQ)

Chu n b các n n m u t t o thêm chu n c a 5-HMF v i các n ng µg/ml và c a cafein v i các n trên (m i n

7 µg/ml, 2 µg/ml. Ti

l p l i 4 l n)

u ki n

n di t

a ch n

nh t l tín hi u c a các ch t phân tích trên nhi nh chi u cao m

5 µg/ml, 1

n di các dung d ch m c 3.1.7.

ng n n (S/N) b ng

nhi u n n xung quanh pic tính v hai phía.

T i m i phía, nhi u n

nh trong kho ng 10 l

cao pic. T l S/N c a các m

r ng c a pic t i ½ chi u

nh và th hi n k t qu trong b ng 3.5.

B ng 3.5. K t qu

Hình 3.13.

3.3.5.

nh LOD, LOQ c a 5-HMF và cafein

l pl i

l pl ic

nh LOD, LOQ c a 5-HMF và cafein

nh t i ba n

ng chu n c a m i ch t phân tích. T i m i n 5-HMF N ng (µg/ml)

1,0

5,0

cafein

S N S/N (mAU) (mAU)

N ng TB (µg/ml)

S N (mAU) (mAU)

song song c a cùng m t m u v S/N

TB

M u th ch a 5-HMF v i n

0,22

3,0

0,75

0,25

3,0

0,70

0,25

2,8

0,70

0,25

2,8

0,65

0,21

3,1

0,65

0,19

3,4

0,62

0,20

3,1

0,70

0,25

2,8

K t qu kh

2,30

0,21

10,9

2,0

0,21

9,5

b ng 3.6.

2,20

0,21

10,5

2,2

0,22

10,0

2,30

0,23

10,0

2,2

0,22

10,0

2,30

0,21

10,9

2,2

0,21

10,5

2,0

10,6

7,0

i v i 5-HMF, t i 1 µg/ml và 5 µg/ml, t l S/N có giá tr

M u th ch a cafein v i n

n kho ng 150 µg/ml và 400 µg/ml.

l p l i trên m u th và m u th thêm chu n

10,0

ng

ng

b ng 3,0 và 10,0. V y cafein có giá tr LOD b ng 2 µg/ml và giá tr LOQ b ng 7 µg/ml.

33

n kho ng 100 µg/ml và 150 µg/ml.

kho ng 19,0 µg/ml.

Các m u th ch a cafein thêm chu

b ng 3,0 và 10,6. V y 5-HMF có giá tr LOD b ng 1 µg/ml và giá tr LOQ b ng 5 µg/ml. i v i cafein, t i 2 µg/ml và 7 µg/ml, t l S/N có giá tr

n di, trong cùng m t ngày. Chúng

kho ng 18,0 µg/ml.

Các m u th ch a 5-HMF thêm chu 3,0

, ti n hành trên 6 m u th

tôi ti n hành trên các m u là:

0,65

3,0

u ki

th p, trung bình và cao

34

c th hi n trong

B ng 3.6. K t qu

Gi i h n cho phép c a 5-

l p l i c a 5-HMF và cafein

c gi i khát là 10 µg/ml, c a cafein trong

c gi 5-HMF

STT

Spic (mAU.s)

C CTB (µg/ml) (µg/ml)

Cafein RSD (%)

AOAC (%)

C Spic (mAU.s) (µg/ml)

CTB (µg/ml)

n hành thêm chu n vào n n m u t t o

i v i 5-HMF) t i ba m c n RSD (%)

AOAC (%)

vào m u th

i v i cafein) t i ba m c n

K t qu

1

25,5

18,0

19,3

18,0

2

25,6

18,1

19,3

18,0

3

25,8

18,2

20,3

19,0

4

25,5

18,0

20,7

19,4

5

25,4

18,0

19,7

18,4

6

25,3

17,9

19,2

17,9

thuy t

1

151,1

108,7

144,2

141,6

(µg/ml)

2

147,7

106,3

147,1

144,5

1

3

153,5

110,5

142,7

140,1

2

4

151,9

109,3

143,4

140,8

3

5

149,8

107,8

143,8

141,2

6

150,3

108,2

147

144,4

1

233,3

168,1

396,1

390,9

2

2

240,5

173,3

391,4

386,3

3

3

242,8

174,9

383,1

378,1

4

237,3

171,0

389,2

384,1

5

240,7

173,4

6

235,2

169,5

18,0

108,5

171,7

K t qu cho th y t i 3 n

0,57 < 7,3

1,31 < 5,3

1,52 < 5,3

379,6

374,8

383,6

378,6

là 100 µg/ml, 200 µg/ml và 400 µg/ml

c th hi n trong các b ng 3.7 và 3.8.

B ng 3.7. K t qu Di n tích

N STT

18,5

142,1

382,1

3,30

1,30

1,57

< 7,3

< 5,3

< 5,3

th p, trung bình, cao c a kho ng tuy n tính, RSD

chu n thêm

pic

theo lý

(mAU.s)

N

a 5-HMF 5-HMF

tìm l i (µg/ml)

4,81

96,3

7,5

5,03

100,6

7,3

4,89

97,7

4

7,8

5,25

104,9

1

14,2

9,87

98,7

14,9

10,37

103,7

15,0

10,45

104,4

4

14,3

9,94

99,4

1

29,4

20,85

104,2

28,9

20,48

102,4

29,5

20,92

104,5

28,5

20,20

100,9

2

4

5,00

10,00

20,00

l p l i.

3.3.6.

nh c a h i

i v i các ch tiêu an toàn, thêm chu n vào m u tr ng (ho c m u th ) ba m c n

t i 0,5 l n, 1 l n và 2 l n gi i h n cho phép.

35

(%)

TB (%)

Yêu c u AOAC (%)

t

thu h i.

thu h i

7,2

3

u n m trong gi i h n cho phép c a AOAC. yêu c u v

là 5 µg/ml, 10 µg/ml và 20 µg/ml và thêm chu n

36

99,9

80-110

101,6

80-110

103,0

80-110

B ng 3.8. K t qu

Công th c tính n

a cafein

c a 5-HMF và cafein trong m

u:

Cm u = C x K N STT

N ng

chu n m u thêm theo th lý thuy t

Di n tích

N

th

pic

+ chu n tìm

(mAU.s)

l i (µg/ml)

thu h i

TB

Yêu c u

(%)

(%)

AOAC

C c tính d

(%)

10,72

2

10,72

89,29

101,6

99,44

99,4

100,8

98,65

98,5

3

10,72

4

10,72

99,3

97,17

96,8

1

16,36

209,0

205,75

103,1

2

16,36

197,2

194,07

96,8

3

16,36

207,5

204,26

102,3

4

16,36

205,8

202,58

101,4

1

15,07

396,1

390,9

99,0

2

15,07

391,4

386,3

97,8

3

15,07

4

15,07

183,61

379,48

99,7

97,56

97,3

389,2

384,1

97,3

407,4

402,1

101,9

K t qu trong b ng cho th y

thu h i c a 5-

ng chu n

K

99,0

B ng 3.9. K t qu

90-107

90-107

ng hai ch

t

.

u (µg/ml)

c trình bày theo mã s m u sau khi mã hóa trong b ng 3.9.

90-107

100,9

5-HMF ho c cafein có trong m

: H s pha loãng

K t qu 98,0

u n m trong

kho ng gi i h n cho phép c a AOAC. yêu c u v

5-HMF ho c cafein trong dung d ch sau khi pha loãng,

Cm u : Là n

(µg/ml)

1

: Là n

N

ng m t s lo 5-HMF (µg/ml) 175,8

c gi i khát N

cafein (µg/ml) i LOQ

STT

Mã s m u

1

V01

2

V02

5,8

3

V03

5,0

71,0

4

V04

i LOQ

177,7

5

i LOQ

V05

i LOQ

i LOQ

6

V06

i LOQ

i LOQ

7

V07

i LOQ

8

V08

i LOQ

i LOQ

9

V09

5,1

i LOQ

10

V10

i LOQ

11

167,8

171,6

V11

6,2

i LOQ

12

V12

8,2

i LOQ

phân tích và

13

V13

i LOQ

i LOQ

ng hi n nay

14

V14

5,2

c gi i khát sau khi mua t i m t s siêu th , c a hàng t p hóa, ch

15

i LOQ

i LOQ

16

V15 V16

7,6

i LOQ

c pha loãng theo

17

V17

5,2

i LOQ

t l thích h p, l c qua gi y l c, qua màng l c 0,45 µm và cu i cùng là màng l c 0,2

18

V18

i LOQ

i LOQ

3.4.

ng d

ng m t s lo

c gi i khát trên th

Trong ph n này, chúng tôi s áp d ng ng 5-HMF và cafein trong m t s m Các lo

a bàn Hà N i s

c mã hóa m u, ghi l i thông tin v tên m u, s lô, ngày s n

xu t, h n s d ng và công ty s n xu t/phân ph

µm. D ch l c này s

c gi i khát trên th

ng

c phân tích d

us

ng.

Các m

98,7

ng bao g m 18 m

c gi

thành ph Hà N i, t i các qu n Hoàn Ki 37

38

c thu th

a bàn

K t qu cho th y, 17 m th p (5,1

c gi i khát (tr m

u có n

7,6 µg/ml), n m trong m c gi i h n cho phép c ng 5-

i v i m u siro

5-HMF gi m, tuy nhiên v n c n h n ch .

c gi i khát n u ch

V04 (177,7 µg/ml). Hi n nay, nhi u lo

ng

ng th i 5-HMF và cafein b

ng không ghi rõ hàm

-330 ml) nên

d n t i tình tr ng s d

ng b gi i tr l m d ng

c p

u ch

m c 1.1.3.

Tuy nhiên m t s lo

c ng t t i Vi t Nam

nên s d ng cafein làm chu n n phù h p. Nghiên c

ng ch

ng th i 5-HMF và cafein

ng 5-HMF ng 5-

c t p. và [24]

ng m t trong hai ch t phân

c dùng làm chu n n i cho phép phân tích 5-HMF.

ng xuyên x y ra, gây nh

n s c kh

n di mao qu n.

H u h t các nghiên c tích. Theo nghiên c

m c cao, cao nh t là m u

c gi i khát trên th

ng cafein trong m t th

ng nhi

hóa ch t dung môi d ki m và chi phí th p. Vì v y nhóm nghiên c u ti n hành tri n khai

c r t cao 175,8 µg/ml. Khi s d ng siro c n pha

loãng s n ph m nên n Các m

5-HMF

nghiên c u trên là

u ng có ga s d ng HPLC v i

iv

ng 5-HMF v i n

nghiên c u [18]

SDS cao (100 mM), nghiên c

ng

cafein s d ng dung d ch BGE nhi u thành ph n k t h p v i SDS n mM) r t d gây b n và t c mao qu n

V11

V01

ng th i 5-HMF và cafein, s d ng dung d (75 mM) nên làm gi m kh

n, n

SDS th

c gi

ng ch

l n (10-17%), n u phân tích b ng HPLC thì ph i ti n hành lo

V04

ng

c mao qu n.

V quá trình x lý m u, các s n ph

c

cao (100

ng th c hi

ng m u l n [8]. M t s nghiên c u

ng không gây t c

còn c n s d ng thêm

acetaldehyd, acid barbituric, p-toluidin trong quá trình x lý m u [6].

V10

s d ng c t mao qu n r ng nên quy trình x lý m do thành ph

cc t

ng c a m u phân tích, t

y rõ tính t

trình x lý m u so v i V k t qu

ng m t s m u th c

Hình 3.14.

3.5.

ng trong hoa qu

Bàn lu n

,

V

Vi t Nam, 5-HMF và cafein m

c

ng b ng

gi

c nhi u l n làm quá trình phân h

ng b i n n m u, h u h t các lo i

c

u có thành ph n ph là các h p ch t màu có th h p th các b c x làm sai

l ch k t qu . Thi t b s d

GC-MS là máy s c ký khí kh i ph

l i không ph bi n trong các phòng thí nghi m t i Vi t Nam. HPLC hi u l c tách t

l

nh y t

khá t n dung môi.

c s d ng r ng rãi trong phân tích m

cho n di mao qu u l c tách r t t t,

39

ng r t l n, nên khi s d

ng trong s n ph m cao; th hai có th do

, s c ký khí kh i ph GC-MS và s c ký l ng hi d b

ng các m u th c cho th y m u V01 có n

5-HMF cao

(175,8 µg/ml), nhóm nghiên c u cho r ng có th do hai nguyên nhân: th nh

x y ra m nh m , d Các nhà s n xu t nh táo, t ng xuyên x

s n xu t siro d ng c a nhi

ng ng

trong quá trình x

ng t o 5-HMF qua ph n ng Maillard

n 5-HMF sinh ra nhi ng l m d

c gi

i u ng, chính vì v y tình tr ng ng c bi t là gi i tr .

khát ch a cafein m i ngày và tuy

ch nên dùng t

i không nên s d ng liên t

s c kh e.

40

c cafein hi n nay 2-

c gi i mb o

2.

K T LU N VÀ KI N NGH

ng th i 5-HMF và

cafein trong m t s m

K t lu n

Sau m t kho ng th i gian dài nghiên c u và làm th c nghi m, thành hai m c

Mao qu

n di: c t silica nung ch y, chi u dài 44 cm, chi u dài hi u d ng 36

n di:

ng kính ngoài 375 µm.

c sóng phát hi n: 284 nm (5-HMF) và 274 nm (cafein).

Detector: UV

ts

n ly n n:

ng d ng r

bi

c nghiên c u và ki m nghi m.

u mao qu n: 15 kV.

tiêm m u b ng áp su t: 50 mbar x 5s. t hóa c t: X lý mao qu n m i.

Hàng ngày, vào th

u ngày.

Gi a các l n ch y.

Th

m cu i ngày. c th

nh các tiêu chí: th ng: RSD < 2%.

Tính ch n l c Kho ng tuy

ng chu n

5-HMF: 10

200 µg/ml, y = 1,3848x + 0,5464, R2 = 0,9996.

Cafein: 10 500 µg/ml, y = 1,0103 + 1,1330, R2 = 0,9992.

Gi i h n phát hi n và gi i h

nh

ng

5-HMF: LOD = 1 µg/ml, LOQ = 5 µg/ml.

Cafein: LOD = 2 µg/ml, LOQ = 7 µg/ml. l p l i: RSD < 5,3 %. thu h i c a 5-HMF n m trong kho ng 80-110% và c a cafein n m trong kho ng 90-107%.

41

ng n n m u khác: thu c, th c ph m

n di

m borat 40 mM + SDS 75 mM.

n th

xu

ch - Cân nh c trang b thêm thi t b

VIS.

Dung d Hi

tài này, chúng tôi có m t s

- Ti p t c tri

u ki

ng kính trong 50 µm,

ng hi n nay.

ng th i 5-HMF và

cafein v i

cm,

c gi i khát ph bi n trên th

Ki n ngh

Sau khi th c hi

1. Xây d ng và th

Ch

ng d

42

c

14. Bolumar F., Olsen J., Rebagliato M., Bisanti L., (1997),

TÀI LI U THAM KH O

Delayed Conception: A European Multicenter Study on Infertility and

Ti ng Vi t

1. B Y t (2007),

American Journal of Epidemiology, 145(4), pp.324-334.

c, t p 1, NXB Y h c, Hà N i.

15. British Pharmacopoeia Commisson (2001), British Pharmacopoeia, II, pp.2123.

2. B Y T (2007), Hóa phân tích, t p 1, NXB Y h c, Hà N i.

16. Capuano E., Fogliano V., (2011),

3. B Y T (2007), Hóa phân tích, t p 2, NXB Y h c, Hà N i.

4. B Y T (2018),

n Vi t Nam V, t p 1, tr.167, NXB Y h c, Hà N i.

5. B Y T (2018),

n Vi t Nam V, t p 1, tr.462, NXB Y h c, Hà N i.

(HMF): A review on metabolism, toxicity, occurrence in food and mitigation , LWT - Food Science and Technology, 44(4), pp.793-810.

6. C c an toàn v sinh th c ph m (2012), TCVN 9041:2012, S n ph m rau qu - xác

17. Chih-Yu Lo, et al., (2007),

ng 5-hydroxymethylfurfural.

ng cafein b ng s c ký l ng hi

Food Chemistry, 107(3), pp. 1099 1105.

18. Corradini D., Corradini C., (1992),

o.

8. Nguy n Th Thùy Linh, Tr n Th Nguy t, Tào Th Ph m Th

n Tri u Quý,

Thanh Hà, (2018),

c ký l ng hi

Journal of

ng

c h c, s 501, 1/2018, tr.17-

T

Chromatography, 624(1-2), pp. 503-509.

19. Cunha R.R., et al., (2015),

on of caffeine, paracetamol,

and ibuprofen in pharmaceutical formulations by high-performance liquid

19.

9. Tào Th

n Tri u Quý, Ph m Th

,

ng 5th c ph m ch

ih

chromatography with UV detection and by capillary electrophoresis with , Journal of Separation Science, 38(10), pp.1657-1662.

c ng t và m t s thu c,

ng s c ký khí

kh i ph

T p

c h c, s 483,

20. Durling J.K., Busk L., Hellman E.B (2009), effect of the heat-induced food toxicant 5-hydroxymethylfurfural (HMF) in various

7/2016, tr.48-52. c Hà N i (2015),

Food and Chemical

n di mao qu n, NXB Y h c, Hà N i

11. Vi n Ki m nghi m An Toàn V sinh Th c Ph m Qu c Gia (2010), Th

nh

c và vi sinh v t, Nhà xu t b n Khoa H c và K

Toxicology, 47(4), pp.880-884.

21. Fajara B.E.P., Susanti H., (2017), , Materials Science and Engineering, 259(1).

Thu t, Hà N i.

22. Fang Liu, et al., (2014), Ti ng Anh

(2011),

-HMF from simulated hydrothermal

, Sustain. Environ. Res., 24(2), pp.149-157.

12. Abraham.K, Gurtler.R, Berg. K, Heinemeyer.G, Lampen. A and Klaus E. Appel -

23. Ferrer E., et al, (2002),

-performance liquid chromatographic determination

of furfural compounds in infant formulas: Changes during heat treatment and

Molecular nutrition & food research, 55(5), pp.667-669.

storage

13. AOAC International (2002),

, 947(1), pp.85-95.

24. Francisco J. Morales, Salvio JimeÂnez-PeÂrez, (2000), Journal of the

AOAC.

on of 5-

hydroxymethyl-2-furaldehyde and 2-furaldehyde in fruit juices by micellar

ng 5-

hydroxymethylfurfural trong m t s ch ph m thu c và th c ph m ch

10.

-

(hydroxymethyl)-2-furfural in carbonated beverages containing high fructose corn

7. C c an toàn v sinh th c ph m (2012), TCVN 9723:2013, Cà phê và s n ph m cà phê

-hydroxymethylfurfural

determination in infant milk-based formulas by micellar electrokinetic capillary , Food Chemistry, 72(4), pp.525-531.

25. Gerald I., Arthur D.E., Adedayo A., (2014),

36. Md. Abdul Mumin, et al., (2006),

, American Journal of Engineering Research, 3(8), pp.124-

in Tea, Coffee and Soft Drinks by Solid Phase Extraction and High performance

137.

Malaysian Journal of Chemistry, 8(1), pp.45

26. Gurkan R., Altunay N., (11/2015),

-hydroxymethylfurfural in

37. Melo F.C., et al. (2014),

thesis of 5-Hydroxymethylfurfural from Dehydration

honey samples and acidic beverages using spectrophotometry coupled with ultrasonic-

, Journal of Food Composition and

Analysis, 42, pp.141-151.

Journal of the Brazilium Chemical Society, 25(12), pp.2378-2384.

38. Meredith S.E., Juliano L.M., Hughes J.R., Griffiths R.R., (2013),

27. Hernรกndez G.E., Villanova G.B., Gรณmez M.J. (1992), hydroxymethylfurfural

in

baby

cereals

by

high

Disorder: A Co performance

liquid

28. Hughes JR, Oliveto AH, Liguori A, Carpenter J, Howard T., (1998), of DSM-

, Journal of Caffeine

Research, 3(3), pp.114-130.

39. National toxicology program (2010), Toxicology and carcinogenesis studies of 5-

, Journal of Liquid Chromatography, 15(14), pp.2551-2559.

hydroxylmethyl-2-furfural, pp.15.

Drug Alcohol Dependence,

52(2), pp.99 107.

40. Rizelio V. M., Gonzaga L. V., da Silva Campelo Borges G., Micke G. A., Fett R., Costa A. C. O. (2012),

29. Jandlova M., Kucerova J. (2016),

5-HMF in honey sample

mendelNet, pp.557-581.

Food Chemistry, 133(4), pp.1640 1645.

41. Roger M. Smith, (1981),

-hydroxymethylfurfural and caffeine

30. Jensen T.K., et al., (2010),

, Food American Journal of Epidemiology, 171(8), pp.883-891.

31. Kmen V., Hamide Z.S., Enyuva, (2006), Mass

Journal of agricultural and food chemistry, 54(8), pp.2845-2849.

, The Analyst, 88(1005), pp.310-313.

32. Lewis, R.J. Sr.; Hawley's, (2007), Condensed Chemical Dictionary 15th Edition.

John Wiley & Sons, Inc. New York, pp.675.

J.

Chemistry, 7(1), pp.41-45.

42. Smith R.F., Rees D.I., (1963),

of Hydroxymethylfurfural in Baby Foods Using Liquid Chromatography

33. Lewkowski

51.

43. Teixido E., Santos F.J., Puignou L., Galceran M.T., (2006), hydroxymethylfurfural in foods by gas chromatography

(2001),

5Arkivoc, pp.17-54.

Journal of Chromatography A, 1135, pp. 85-90.

44. Ulbricht R.J., Northup S.J., Thomas J.A. (1984),

34. Louis ZG Touyz, (2017),

-

Fundamental and Applied International Journal of Medical Science and

Health Research, 1(02).

35. Marinovic M.B., Taugner F., Florian S., Glatt H., (2012),

Toxicology, 4(5), pp.843-853.

45. Vlajinac H.D., et al., (2002), -

hydroxymethylfurfural and its metabolite 5-sulphooxymethylfurfural in wild-type Arch Toxicol, 86, pp.701 711.

-

American Journal of Epidemiology, 145(4), pp.335-338.

46. Vorlovรก L., et al. (2006),

foodstuffs determined 45(1), pp.34-38

47. Wikoff D., Welsh B.T., Henderson R., (2017),

PH L C

adverse effects of caffeine consumption in healthy adults, pregnant women, adol

n di

ng cรกc m u th c

Food and Chemical Toxicology, 109, pp.585-648.

48. Yang L., Liu Y., Ruan R., (2012),

-hydroxymethylfurfural , Advanced

V02

V03-1, K=2

Materials Research, 361-363, pp.1713-1717.

49. Zhao Y., Lunte C.E., (1997), Journal of Chromatography B,

688(2), pp. 265-274.

50. Zhu Q., Ma C., Chen H., Wu Y., Huang J., (2013),

molecular imprint-coated V03-2, K=1 V05

Microchim Acta, 181(3-4), pp.303-311.

51. Zylber-Katz. D., et al., (1984), Clinical Pharmacology & Therapeutics, 36(1), pp.133-137.

V07 V06

V08 V09

V12

V13

V14 V15

V16

V18

V17