Xác định hàm lượng vitamin D3 trong sữa bằng phương pháp sắc ký lỏng ghép hai lần khối phổ LC/MS/MS

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN ----------

PHẠM KHÁNH NGỌC

XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG VITAMIN D3 TRONG SỮA BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG GHÉP HAI LẦN KHỐI PHỔ (LC/MS/MS)

LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH: CỬ NHÂN HÓA DƯỢC

2015

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN ----------

PHẠM KHÁNH NGỌC

XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG VITAMIN D3 TRONG SỮA BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG GHÉP HAI LẦN KHỐI PHỔ (LC/MS/MS)

LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH: CỬ NHÂN HÓA DƯỢC

CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Ts. NGUYỄN THỊ THU THỦY CN. LA VĂN THÁI

2015

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

LỜI CẢM ƠN

Ơ

Y

N

H

Sau gần bốn năm học tập tại trường Đại học Cần Thơ, dưới sự dạy dỗ, quan tâm, giúp đỡ của quý Thầy Cô, gia đình và bạn bè, em đã hoàn thành chương trình đào tạo với luận văn tốt nghiệp này. Để đạt được thành quả như hôm nay, với sự biết ơn sâu sắc nhất, em xin chân thành gửi lời cảm ơn đến:

N



10 00

B

Chân thành cảm ơn Ban giám đốc Trung Tâm Phân Tích và Giám Định Vinacert Control Cần Thơ đã giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi về trang thiết bị, dụng cụ, hóa chất để em hoàn thành luận văn.

Cuối cùng, cảm ơn gia đình đã luôn là chỗ dựa vững chắc, yêu thương, tạo điều kiện cho con hoàn thành luận văn cũng như chương trình học của mình. Cảm ơn tập thể Hóa dược 1 K38 đặc biệt là những người bạn đã luôn bên cạnh ủng hộ, quan tâm, giúp đỡ mình trong thời gian qua.

Xin chân thành cảm ơn!

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

A

Anh La Văn Thái - trưởng phòng Trung Tâm Phân Tích – Giám Định Vinacert Control Cần Thơ, chị Võ Thị Thúy An, anh Nguyễn Hoài Thương và các anh chị trong trung tâm, đặc biệt là anh chị trong phòng sắc ký đã nhiệt tình hướng dẫn, chia sẻ cho em những kinh nghiệm bổ ích.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

TR ẦN

Đặc biệt cô Tôn Nữ Liên Hương, cô Lê Thị Bạch cố vấn lớp Hóa Dược 1 K38 đã dẫn dắt, định hướng, quan tâm và giúp đỡ chúng em tận tình trong suốt những năm học qua.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

H Ư

N

G

Xin cảm ơn tất cả các quý Thầy Cô trường Đại học Cần Thơ nói chung, bộ môn Hóa khoa Khoa Học Tự Nhiên nói riêng đã truyền dạy những kiến thức, kỹ năng quý báu cũng như đã tạo điều kiện cho chúng em có được môi trường học tập tốt nhất.

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q

Đ ẠO

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Cô Nguyễn Thị Thu Thủy – Bộ môn Sư Phạm Hóa Học – Khoa Sư Phạm đã trực tiếp hướng dẫn, dành thời gian quý báu tận tình chỉ dạy, quan tâm, tạo mọi điều kiện giúp đỡ em thực hiện tốt luận văn tốt nghiệp.

i

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Trường Đại Học Cần Thơ Khoa Khoa Học Tự Nhiên Bộ Môn Hóa Học

Cộng Hòa Xã Hội Chủ Nghĩa Việt Nam Độc Lập - Tự Do - Hạnh Phúc ------------

N

NHẬN XÉT ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN

H

Ơ

1. Cán bộ hướng dẫn: Ts. Nguyễn Thị Thu Thủy

H Ư

N

.............................................................................................................................. ..............................................................................................................................

TR ẦN

b) Nhận xét về nội dung của LVTN (đề nghị ghi chi tiết và đầy đủ):  Đánh giá nội dung thực hiện của đề tài:

10 00

B

.............................................................................................................................. ..............................................................................................................................  Những vấn đề còn hạn chế:

Ó

A

.............................................................................................................................. ..............................................................................................................................

Ý

-H

c) Nhận xét đối với sinh viên tham gia thực hiện đề tài (ghi rõ từng nội dung chính do sinh viên nào chịu trách nhiệm thực hiện nếu có):

ÁN

-L

.............................................................................................................................. .............................................................................................................................. .............................................................................................................................. ..............................................................................................................................

Cần Thơ, ngày… tháng… năm 2015 Cán bộ hướng dẫn

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

d) Kết luận, đề nghị và điểm:

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

G

a) Nhận xét về hình thức của LVTN:

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

4. Nội dung nhận xét:

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

TP

3. Sinh viên thực hiện: Phạm Khánh Ngọc MSSV: B1203477 Lớp: Hóa Dược 1 – Khóa: 38

.Q

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

N

2. Đề tài: XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG VITAMIN D3 TRONG SỮA BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG GHÉP HAI LẦN KHỐI PHỔ (LC/MS/MS)

Ts. Nguyễn Thị Thu Thủy

ii

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Trường Đại Học Cần Thơ Khoa Khoa Học Tự Nhiên Bộ Môn Hóa Học

Cộng Hòa Xã Hội Chủ Nghĩa Việt Nam Độc Lập - Tự Do - Hạnh Phúc ------------

N

NHẬN XÉT ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN 1

H

Ơ

1. Cán bộ phản biện 1: Ths. Nguyễn Thị Diệp Chi

H Ư

N

.............................................................................................................................. ..............................................................................................................................

TR ẦN

b) Nhận xét về nội dung của LVTN (đề nghị ghi chi tiết và đầy đủ):  Đánh giá nội dung thực hiện của đề tài:

10 00

B

.............................................................................................................................. ..............................................................................................................................  Những vấn đề còn hạn chế:

Ó

A

.............................................................................................................................. ..............................................................................................................................

Ý

-H

c) Nhận xét đối với sinh viên tham gia thực hiện đề tài (ghi rõ từng nội dung chính do sinh viên nào chịu trách nhiệm thực hiện nếu có):

ÁN

-L

.............................................................................................................................. .............................................................................................................................. .............................................................................................................................. ..............................................................................................................................

Cần Thơ, ngày… tháng… năm 2015 Cán bộ phản biện 1

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

d) Kết luận, đề nghị và điểm:

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

G

a) Nhận xét về hình thức của LVTN:

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

4. Nội dung nhận xét:

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

TP

3. Sinh viên thực hiện: Phạm Khánh Ngọc MSSV: B1203477 Lớp: Hóa Dược 1 – Khóa: 38

.Q

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

N

2. Đề tài: XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG VITAMIN D3 TRONG SỮA BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG GHÉP HAI LẦN KHỐI PHỔ (LC/MS/MS)

Ths. Nguyễn Thị Diệp Chi

iii

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Trường Đại Học Cần Thơ Khoa Khoa Học Tự Nhiên Bộ Môn Hóa Học

Cộng Hòa Xã Hội Chủ Nghĩa Việt Nam Độc Lập - Tự Do - Hạnh Phúc ------------

N

NHẬN XÉT ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN 2

H Ư

N

.............................................................................................................................. ..............................................................................................................................

TR ẦN

b) Nhận xét về nội dung của LVTN (đề nghị ghi chi tiết và đầy đủ):  Đánh giá nội dung thực hiện của đề tài:

10 00

B

.............................................................................................................................. ..............................................................................................................................  Những vấn đề còn hạn chế:

Ó

A

.............................................................................................................................. ..............................................................................................................................

Ý

-H

c) Nhận xét đối với sinh viên tham gia thực hiện đề tài (ghi rõ từng nội dung chính do sinh viên nào chịu trách nhiệm thực hiện nếu có):

ÁN

-L

.............................................................................................................................. .............................................................................................................................. .............................................................................................................................. ..............................................................................................................................

Cần Thơ, ngày… tháng… năm 2015 Cán bộ phản biện 2

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

d) Kết luận, đề nghị và điểm:

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

G

a) Nhận xét về hình thức của LVTN:

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

4. Nội dung nhận xét:

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

TP

3. Sinh viên thực hiện: Phạm Khánh Ngọc MSSV: B1203477 Lớp: Hóa Dược 1 – Khóa: 38

.Q

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

N

2. Đề tài: XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG VITAMIN D3 TRONG SỮ BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG GHÉP HAI LẦN KHỐI PHỔ (LC/MS/MS)

H

Ơ

1. Cán bộ phản biện 2: Ths. Dương Thị Phương Liên

Ths. Dương Thị Phương Liên

iv

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Ơ

N

H

Vitamin D3 là một trong các loại vitamin thiết yếu, có vai trò đặc biệt quan trọng đối với sức khỏe xương. Ngày nay, rất nhiều các sản phẩm dinh dưỡng được bổ sung vitamin D3 để cung cấp đủ lượng cần thiết cho cơ thể con người mà thông dụng nhất là các loại sữa. Tuy nhiên việc nghiên cứu phương pháp xác định hàm lượng vitamin D3 trong các loại sữa này chưa được làm nhiều. Do đó, đề tài tiến hành nghiên cứu xác định hàm lượng vitamin D3 trong các loại sữa bột nhằm đánh giá đúng chất lượng của các sản phẩm này.

N

TÓM TẮT

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

A

10 00

B

Từ Khóa: vitamin D3, sắc ký lỏng ghép hai lần khối phổ, LC/MS/MS, sữa bột.

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q

TR ẦN

H Ư

N

G

Đ ẠO

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

Sau khi tham khảo, thử nghiệm nhiều nghiên cứu, đề tài đã lựa chọn quy trình sử dụng phương pháp xà phòng hóa, chiết lỏng-lỏng để trích ly mẫu và phương pháp sắc ký lỏng ghép hai lần khối phổ LC/MS/MS để phân tích định lượng. Tiến hành đánh giá phương pháp thông qua một số các chỉ tiêu thẩm định cơ bản, kết quả đều phù hợp các tiêu chuẩn phân tích. Đề tài phân tích hàm lượng vitamin D3 trên 20 mẫu thực, kết quả cho thấy 100% các mẫu đều có chứa vitamin D3, hàm lượng trung bình là 76,89 ppb, mặc dù vẫn có sự chênh lệch giữa hàm lượng phân tích được với thông tin có trên bao bì sản phẩm nhưng sự chênh lệch này là không quá lớn. Điều này chứng tỏ phương pháp phân tích có độ chính xác tương đối, có thể được áp dụng vào trong phân tích thực tiễn.

v

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

CAM ĐOAN

TP

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

A

10 00

B

TR ẦN

H Ư

N

G

Đ ẠO

Ngày: 01/12/2015

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q

Phạm Khánh Ngọc

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

N

H

Ơ

N

Tôi xin cam kết luận văn này được hoàn thành dựa trên các kết quả nghiên cứu của tôi và các kết quả của nghiên cứu này chưa được dùng cho bất cứ luận văn cùng cấp nào khác.

vi

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

MỤC LỤC

N

H

CAM ĐOAN .................................................................................................... vi

Ơ

TÓM TẮT......................................................................................................... v

N

LỜI CẢM ƠN ................................................................................................... i

TP

H Ư

N

1.1 Đặt vấn đề ........................................................................................... 1 1.2 Mục tiêu nghiên cứu ........................................................................... 2

TR ẦN

1.3 Nội dung nghiên cứu ........................................................................... 2

10 00

B

CHƯƠNG 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU ......................................................... 3 2.1 Tổng quan về vitamin ......................................................................... 3

A

2.1.1 Khái niệm ................................................................................ 3

-H

Ó

2.1.2 Đặc điểm ................................................................................. 3

Ý

2.1.3 Phân loại .................................................................................. 3

-L

2.1.4 Vai trò ...................................................................................... 4

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

2.2 Tổng quan về vitamin D ..................................................................... 5 2.2.1 Lịch sử phát hiện ..................................................................... 6

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

G

CHƯƠNG 1 GIỚI THIỆU .............................................................................. 1

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT ........................................................................ xii

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q

DANH SÁCH HÌNH ....................................................................................... xi

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

DANH SÁCH BẢNG ....................................................................................... x

2.2.2 Phân loại .................................................................................. 6 2.3 Tổng quan về vitamin D3 .................................................................... 8 2.3.1 Đặc điểm ................................................................................. 8 2.3.2 Tính chất.................................................................................. 9 2.3.3 Hấp thu và chuyển hóa .......................................................... 10 2.3.4 Vai trò sinh lý ........................................................................ 12 vii

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

2.3.5 Nhu cầu ................................................................................. 14 2.3.6 Nguồn cung cấp..................................................................... 15 2.3.7 Ứng dụng ............................................................................... 16

Ơ

H

2.4.1 Phương pháp xà phòng hóa ................................................... 17

N

2.4 Tổng quan về các phương pháp chuẩn bị mẫu ................................. 17

Y

N

2.4.2 Phương pháp chiết lỏng-lỏng ................................................ 18

TP

N

G

2.5.4 Một số kỹ thuật quét khối phổ MS/MS ................................. 27

H Ư

2.5.5 Định tính, định lượng ............................................................ 28

TR ẦN

2.5.6 Các thông số đánh giá phương pháp ..................................... 30 2.5.7 Ưu, nhược điểm..................................................................... 33

10 00

B

2.5.8 Ứng dụng ............................................................................... 33

CHƯƠNG 3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .......................................... 35

Ó

A

3.1 Phương tiện nghiên cứu .................................................................... 35

-H

3.1.1 Địa điểm và thời gian thực hiện ............................................ 35

-L

Ý

3.1.2 Thiết bị và dụng cụ ................................................................ 35

ÁN

3.1.3 Hóa chất ................................................................................ 35

3.2.1 Phương pháp thu mẫu ........................................................... 36 3.2.2 Phương pháp phân tích .......................................................... 37

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

3.2 Phương pháp nghiên cứu .................................................................. 36

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

2.5.3 Nguyên tắc hoạt động............................................................ 27

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

2.5.2 Cấu tạo hệ thống LC/MS/MS ................................................ 20

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q

2.5.1 Tổng quan về LC/MS/MS ..................................................... 19

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

2.5 Phương pháp sắc ký lỏng ghép hai lần khối phổ (LC/MS/MS) ........ 19

CHƯƠNG 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN ................................................. 45 4.1 Sắc ký đồ của chuẩn vitamin D3 ....................................................... 45 4.2 Khoảng tuyến tính ............................................................................. 45 4.2.1 Kết quả đo các điểm chuẩn khảo sát ..................................... 45 viii

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

4.2.2 Đồ thị các điểm chuẩn ........................................................... 46 4.2.3 Kết luận khoảng tuyến tính ................................................... 48 4.3 LOD và LOQ của phương pháp ........................................................ 48

Ơ

H

4.5 Độ lặp lại ........................................................................................... 50

N

4.4 Hiệu suất thu hồi ............................................................................... 49

Y

N

4.6 Đường chuẩn ..................................................................................... 51

TP

H Ư

CHƯƠNG 5 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ ................................................ 55

TR ẦN

5.1 Kết luận ............................................................................................. 55 5.2 Kiến nghị ........................................................................................... 56

B

TÀI LIỆU THAM KHẢO ............................................................................. 57

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

A

10 00

PHỤ LỤC ....................................................................................................... 59

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

N

G

4.8 Độ chệch ........................................................................................... 53

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

4.7 Kết quả phân tích hàm lượng vitamin D3 trên các mẫu sữa ............. 51

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q

4.6.2 Phương trình hồi quy tuyến tính ........................................... 51

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

4.6.1 Đường chuẩn ......................................................................... 51

ix

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

DANH SÁCH BẢNG Bảng 2.1 Phân loại các vitamin theo khả năng hòa tan ..................................... 4

Ơ

H

Bảng 2.3 Nhu cầu vitamin D3 được khuyến nghị trong khẩu phần dinh dưỡng hằng ngày do Viện Dinh Dưỡng đề nghị năm 2008. ....................................... 14

N

Bảng 2.2 Vai trò của một số vitamin................................................................. 5

Y

N

Bảng 2.4 Nguồn thực phẩm cung cấp vitamin D3 ........................................... 15

TP

H Ư

N

Bảng 4.2 Hiệu suất thu hồi của Vitamin D3 .................................................... 50 Bảng 4.3 Độ lặp lại của phương pháp ............................................................. 50

TR ẦN

Bảng 4.4 Kết quả phân tích hàm lượng vitamin D3 trên các mẫu sữa ............ 52

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

A

10 00

B

Bảng 4.5 Độ chệch của phương pháp.............................................................. 53

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

G

Bảng 4.1 Tương quan giữa diện tích peak và nồng độ chuẩn của vitamin D3 46

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

Bảng 3.3 Độ lặp lại tối đa chấp nhận tại các nồng độ khác nhau (theo AOAC) ......................................................................................................................... 44

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q

Bảng 3.2 Độ thu hồi chấp nhận tại các nồng độ khác nhau (theo AOAC) ..... 43

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Bảng 3.1 Thông tin của các loại sữa bột được sử dụng trong đề tài ............... 37

x

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

DANH SÁCH HÌNH Hình 2.1 Bảng phân loại các dạng vitamin D ................................................... 7 Hình 2.2 Cấu trúc phân tử vitamin D2 và vitamin D3 ....................................... 7

Ơ

N

H

Hình 2.7 Các phản ứng chuyển hóa vitamin D3 trong cơ thể ......................... 11

N

Hình 2.4 Công thức cấu tạo của cholecalciferol (vitamin D3) .......................... 9

Y

Hình 2.8 Sự chuyển hóa – hấp thu của vitamin D3 trong cơ thể con người .... 12

TP

N

G

Hình 2.14 Sơ đồ cấu tạo hệ thống LC/MS/MS ............................................... 20

H Ư

Hình 2.15 Hệ thống LC/MS/MS AB Sciex QTRAP4500 .............................. 20

TR ẦN

Hình 2.16 Sơ đồ phác họa một hệ thống HPLC cơ bản .................................. 21 Hình 2.17 Phác họa cấu tạo một bình chứa pha động thông thường .............. 21

B

Hình 2.18 Sơ đồ cấu tạo cơ bản của hệ thống đầu dò khối phổ ba tứ cực ...... 24

10 00

Hình 2.19 Phác họa phương pháp ion hóa phun điện ESI .............................. 25 Hình 2.20 Sơ đồ phác họa cấu tạo một tứ cực ................................................ 26

Ó

A

Hình 2.21 Đồ thị tương quan diện tích hoặc chiều cao peak với nồng độ. ..... 29

-H

Hình 2.22 Khoảng tuyến tính và khoảng làm việc.......................................... 31

-L

Ý

Hình 4.1 Sắc ký đồ của chuẩn vitamin D3 nồng độ 100 ppb trong methanol . 45

ÁN

Hình 4.2 Đường chuẩn 20 ppb – 120 ppb ....................................................... 46

TO

Hình 4.3 Đường chuẩn 20 ppb – 140 ppb ....................................................... 47

Hình 4.5 Đường chuẩn 20 ppb – 180 ppb ....................................................... 48

D

IỄ N

Đ

ÀN

Hình 4.4 Đường chuẩn 20 ppb – 160 ppb ....................................................... 47

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Hình 2.13 Hệ thống LC/MS/MS điển hình ..................................................... 19

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

Hình 2.12 Các loại thực phẩm được bổ sung vitamin D3 trên thị trường ....... 17

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q

Hình 2.10 Các chế phẩm vitamin D3 trên thị trường ...................................... 16

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Hình 2.9 Sự điều hòa calci bởi vitamin D3 trong cơ thể con người ................ 13

xi

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

C

Độ Celcius

µL

microliters

AAS

Atomic Emission Spectroscopy

AES

Atomic Absorption Spectroscopy

AOAC

Association Of Analytical Communities

DC

Direct Current

ESI

ElectroSpray Ionization

HPLC

High Performance Liquid Chromatography

ICH

International Conference on Harmonisation

IU

International Unit

LC

Liquid Chromatography

mL

milliliters

MS

Mass spectrometry

NP

Normal Phase

ppb

parts per billion

ppm

parts per million

Ý

SPME

-H

SPE

Ó

A

RP

Reversed Phase Solid Phase Extraction Solid Phase Micro Extraction United States Food and Drug Administration

USP

United States Pharmacopeia

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

USFDA

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Phòng Thí Nghiệm

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

PTN

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

B

TR ẦN

H Ư

N

G

Đ ẠO

TP

.Q

U

Y

N

H

Ơ

N

◦

10 00

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT

xii

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

CHƯƠNG 1 GIỚI THIỆU

D

Ơ https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

A

10 00

B

TR ẦN

H Ư

N

G

Đ ẠO

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

N

H

Vitamin D là một nhóm các secosteroid tan được trong chất béo, có vai trò rất quan trọng đối với sức khỏe con người. Vitamin D tồn tại ở một số dạng khác nhau, trong đó quan trọng nhất là vitamin D3 (cholecalciferol). Chức năng quan trọng nhất của vitamin D là duy trì nồng độ calci và phosphate ở mức ổn định trong huyết tương. Các công trình nghiên cứu gần đây cho thấy, vitamin D còn có vai trò trong sự điều hòa hoạt động tế bào và hệ miễn dịch.

Thiếu vitamin D thường gây nên hai tình trạng bệnh, đó là còi xương (ở trẻ em) và loãng xương (ở người lớn tuổi).

Trước đây, còi xương được coi là bệnh phổ biến ở châu Âu, nhưng gần đây nó là một vấn đề sức khỏe cộng đồng ở nhiều quốc gia, ngay cả ở nước nhiệt đới có nhiều ánh sáng mặt trời như Việt Nam. Theo số liệu thống kê tại Viện Dinh dưỡng năm 2007 thì bệnh còi xương của trẻ em chiếm tỷ lệ 45,5%, năm 2010, tỷ lệ trẻ dưới 5 tuổi bị còi xương chiếm tới 29% nghĩa là trung bình cứ 3 trẻ sẽ có 1 trẻ em bị mắc bệnh còi xương. Kết quả nghiên cứu cho thấy, tại Việt Nam đang có tỷ lệ thiếu vitamin D ở trẻ từ 1-6 tháng tuổi tương đối cao so với các nước khác trong khu vực. Tỷ lệ trẻ có lượng vitamin D thấp là 40%, và gần 24% trẻ thiếu vitamin D, trong đó số trẻ thiếu nặng là 9%.

Tình trạng bệnh thứ hai là loãng xương (còn được gọi là xốp xương), nó là một vấn đề đang được thế giới rất quan tâm, vì có quy mô lớn và gây hệ quả nghiêm trọng trong cộng đồng. Theo thống kê năm 2008 trên thế giới, ở nhóm người trên 60 tuổi, tỷ lệ loãng xương ở phụ nữ vào khoảng 20% và nam giới là 10%. Tại Việt Nam một nghiên cứu dịch tễ ở Hà Nội vào năm 2008 cho thấy tỷ lệ loãng xương ở nữ giới là 15,4%.

Nguyên nhân chính của những thực trạng này là do sự thiếu hụt vitamin D mà chủ yếu là do cơ thể hấp thu thức ăn kém, do ít tiếp xúc với ánh nắng mặt trời, do rối loạn chuyển hóa hay do nhu cầu cao ở phụ nữ có thai và cho con bú…

Mặt khác, việc dùng vitamin D quá liều sẽ gây ngộ độc thuốc, làm tăng calci trong máu, dẫn đến các biểu hiện: mệt mỏi, chán ăn, nôn, tiêu chảy, đau nhức xương khớp… hơn nữa còn có thể gây tổn thương thận và tăng huyết áp.

Do đó, việc cung cấp cho cơ thể một lượng vitamin D vừa đủ và đều đặn mỗi ngày là một việc làm rất cần thiết.

Vitamin D3 là dạng vitamin D chủ yếu mà cơ thể con người hấp thu và chuyển hóa. Có hai nguồn tiếp nhận vitamin D3, đó là tổng hợp ở da dưới tác dụng của bức xạ tia cực tím trong ánh sáng mặt trời và từ các loại thực phẩm

N

1.1 Đặt vấn đề [1-4]

1

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

-L

Ý

-H

Ó

Đề tài “Xác định hàm lượng vitamin D3 trong sữa bằng phương pháp sắc ký lỏng ghép hai lần khối phổ (LC/MS/MS)” mong muốn đạt được các mục tiêu sau:

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-

-

Chọn lựa quy trình phân tích hàm lượng vitamin D3 trong sữa bằng phương pháp sắc ký lỏng ghép hai lần khối phổ (LC/MS/MS).

Xác định hàm lượng vitamin D3 trong 20 sản phẩm sữa bột trên thị trường thành phố Cần Thơ.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

A

1.2 Mục tiêu nghiên cứu

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

10 00

B

TR ẦN

H Ư

N

G

Trên thị trường Việt Nam hiện nay có rất nhiều loại sản phẩm sữa được bổ sung thêm vitamin D3 với hàm lượng khác nhau nhưng việc nghiên cứu về chúng chưa được tiến hành nhiều. Vì vậy, dựa vào tài liệu tham khảo kết hợp với điều kiện thực tế của Trung Tâm Phân Tích và Giám Định Vinacert Control Cần Thơ, đề tài “Xác định hàm lượng vitamin D3 trong sữa bằng phương pháp sắc ký lỏng ghép hai lần khối phổ (LC/MS/MS)” được tiến hành nghiên cứu, thực hiện trên một số loại sữa trên thị trường nhằm đánh giá đúng chất lượng, giá trị dinh dưỡng thực của các sản phẩm này.

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q

Đ ẠO

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

N

H

như dầu cá, gan động vật, lòng đỏ trứng gà, sữa… Tuy nhiên, thực phẩm hằng ngày thường không cung cấp đủ lượng vitamin D3 cần thiết cho cơ thể, do đó người ta sử dụng thêm các loại sản phẩm dinh dưỡng bổ sung mà chủ yếu là các loại sữa.

Chính vì thế, việc tìm hiểu, nghiên cứu các phương pháp để xác định hàm lượng vitamin D3 trong các loại sản phẩm dinh dưỡng bổ sung là hết sức cần thiết. Trên thế giới, nhiều nhà phân tích hóa học đã có nhiều công trình nghiên cứu về vấn đề trên. Các phương pháp khác nhau đã được áp dụng để xác định hàm lượng vitamin D3 trong thực phẩm như LC, HPLC, LC/MS, LC/MS/MS... Trong số các phương pháp nêu trên, LC/MS/MS được xem là một trong những phương pháp đơn giản, có tính ưu việt, tính chọn lọc cũng như có độ nhạy, độ chính xác cao và giới hạn phát hiện thấp thích hợp để phân tích vi lượng.

N

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Ơ

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

1.3 Nội dung nghiên cứu -

Tìm hiểu các quy trình phân tích hàm lượng vitamin D3 trong sữa bằng LC/MS/MS, chọn lựa quy trình phân tích.

-

Điều chỉnh các điều kiện xử lý mẫu và điều kiện định lượng.

-

Đánh giá quy trình phân tích.

-

Định lượng vitamin D3 trong một số sản phẩm sữa bổ sung dạng bột trên thị trường TP Cần thơ 2

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

CHƯƠNG 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan về vitamin [1-9]

Ơ

-H

Ó

A

Khác với enzyme và hormone, cơ thể con người và gia súc không thể hoặc có rất ít khả năng tự tổng hợp được vitamin, vitamin hàng ngày được đưa vào cơ thể theo thức ăn dưới dạng hoàn chỉnh (vitamin) hoặc dạng gần hoàn chỉnh gọi là tiền vitamin (provitamin).

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

Một số loại vitamin (B6, B12, acid pantotenic, acid folic...) được hệ vi khuẩn ở ruột tổng hợp hoặc tạo ra trong cơ thể (ví dụ acid nicotinic được tổng hợp từ tryptophan), tuy vậy các phản ứng này không đủ cung cấp cho nhu cầu của cơ thể.

Nhu cầu vitamin không lớn, chỉ cần với số lượng rất nhỏ cũng đủ để duy trì sự hoạt động bình thường của cơ thể nhưng chúng không thể thiếu được đối với sự sống. Lượng cần thiết hàng ngày thay đổi tuỳ theo từng loại vitamin (ví dụ: D: 0,025 mg; C: 75 mg).

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

10 00

B

TR ẦN

H Ư

N

Vitamin không phải là những chất cung cấp năng lượng cũng như thành phần cấu trúc của cơ thể mà chúng tham gia vào những hệ enzyme, xúc tác cho các phản ứng sinh học, tạo điều kiện thuận lợi cho quá trình sản xuất và sử dụng năng lượng. Cơ thể chỉ có thể sử dụng hiệu quả nguồn nguyên liệu cung cấp năng lượng (lipid, protid, hydrocarbon và nước) nếu duy trì được nồng độ tối ưu của các chất xúc tác này.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

G

Mặc dù có cấu trúc, vai trò và cơ chế hoạt động khác nhau nhưng tất cả các vitamin đều có những đặc tính cơ bản như sau:

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q

Đ ẠO

2.1.2 Đặc điểm

IỄ N D

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

N

H

Vitamin là những hợp chất hữu cơ mà tế bào con người và động vật không thể tự tổng hợp được (trừ vitamin D), có mặt trong thức ăn với hàm lượng rất nhỏ, cấu trúc hoàn toàn khác với glucid, protid và lipid nhưng rất cần thiết cho một số phản ứng chuyển hóa giúp duy trì sự phát triển và sự sống bình thường, khi thiếu hụt sẽ gây nên các bệnh lý đặc hiệu.

N

2.1.1 Khái niệm

2.1.3 Phân loại Có rất nhiều cách khác nhau để phân loại các vitamin. Dựa trên khả năng hòa tan, các loại vitamin được phân chia thành 2 nhóm chính, đó là nhóm các vitamin tan trong dầu và các vitamin tan trong nước.

3

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Bảng 2.1 Phân loại các vitamin theo khả năng hòa tan Vitamin tan trong nước

Vitamin A

Vitamin B1 (Thiamine)

Vitamin B12 (Cyanocobalamin)

Vitamin B2 (Riboflavin)

Vitamin B15 (Pangamic acid)

Vitamin B3 (Pantothenic acid)

Vitamin C (Ascorbic acid)

Ơ H N

Y

Ý

-H

Ó

A

10 00

B

Vitamin đóng vai trò là chất xúc tác trong các phản ứng sinh hóa, từ quá trình trao đổi chất, đến xây dựng hệ thống miễn dịch trong cơ thể. Vitamin có vai trò đặc biệt quan trọng trong việc sản sinh năng lượng, duy trì các hoạt động sống của cơ thể. Mỗi loại vi chất có những công dụng riêng và đều chứa trong nguồn thực phẩm hàng ngày. Vitamin giúp chuyển hóa tối đa chất dinh dưỡng thành năng lượng sống cho cơ thể, tăng cường sức đề kháng, bảo vệ cơ thể. Vai trò của một số vitamin được tóm tắt trong Bảng 2.2.

Vitamin

Chức năng chuyển hóa

A

Đồng phân hóa, điều tiết các con đường liên quan đến thị giác

D

Điều hòa chuyển hóa Calci và Phospho, đặc biệt ở xương

E

Kháng oxy hóa

K

Điều tiết sự biến đổi protein trong quá trình đông máu

B1

Chuyển aldehyde, loại carboxyl trong quá trình lên men rượu và chu trình acid citric

B2

Phản ứng oxy hóa khử, đặc biệt trong chu trình acid citric và

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Bảng 2.2 Vai trò của một số vitamin

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

TR ẦN

H Ư

Acid lipoic

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

N

Vitamin B10/BC (Folic acid)

Vitamin U (S-methylmethionine)

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Vitamin P (Flavonoids)

Vitamin B7 (Biotin)

2.1.4 Vai trò

U

.Q

TP

Vitamin I (inositol)

Vitamin B6 (Pyridoxine)

IỄ N D

Vitamin H (paminobenzoic acid)

Vitamin B5/ PP (Niacinamide)

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

Vitamin K

Đ ẠO

Vitamin E

G

Vitamin D

N

Vitamin tan trong dầu

4

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Phản ứng oxy hóa khử ở nhiều con đường chuyển hóa

B6

Phản ứng chuyển nhóm amino, đặc biệt ở các acid amin

B7

Phản ứng carboxyl hóa trong chuyển hóa carbohydrate và lipid

Bc

Chuyển nhóm một carbon, đặc biệt ở các hợp chất chứa N

B3

Chuyển acyl ở nhiều con đường chuyển hóa

H N Y

Khô mắt, phù đại giác mạc, quáng gà, tăng sừng da

D

Còi xương, loãng xương, yếu cơ

E

Các rối loại về sinh sản, lão hóa

K

Các rối loạn về đông máu

B1

Bệnh tê phù, bệnh viêm thần kinh

B2

Viêm giác mạc, viêm da

B5

Triệu chứng Burning-Feet, viêm mũi – miệng

B

10 00

A

Ó

-H

Ý -L

ÁN

Bc

Hồng cầu khổng lồ, thiếu máu

B3

Bệnh thiếu vitamin PP (pellagra)

B12

Thiếu máu ác tính

C

Bệnh thiếu vitamin C (scurvy)

TO ÀN

Bệnh động kinh, viêm da, môi, lưỡi

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

A

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Bệnh lý điển hình

TR ẦN

Vitamin

B6

Đ

H Ư

N

Bảng 2.3 Các bệnh lý điển hình khi thiếu các loại vitamin

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

U .Q G

Đ ẠO

Khi cơ thể thiếu hoặc thừa một hay nhiều loại vitamin sẽ gây nên một số bệnh lý đặc trưng. Một số bệnh lý điển hình khi thiếu các loại vitamin tương ứng được tóm tắt trong Bảng 2.3.

IỄ N D

Hydroxyl hóa collagen

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

Acid lipoic Chuyển acyl, phản ứng oxy hóa khử C

Ơ

B5

N

vận chuyển điện tử

Các vitamin tan trong dầu như vitamin A, D và E cần lưu ý không được sử dụng quá liều. Khi sử dụng quá liều các vitamin này sẽ gây độc, đặc biệt là vitamin A, do chúng tích tụ trong mô mỡ. Các vitamin tan trong nước không gây độc khi sử dụng quá liều.

5

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

2.2 Tổng quan về vitamin D [1-11] 2.2.1 Lịch sử phát hiện

Ơ

H Ư

N

Năm 1865, bác sĩ Armand Trousseau đề nghị dùng liệu pháp chữa bệnh bằng dầu cá và ánh sáng mặt trời.

TR ẦN

Năm 1919, Maccollum và Mellanbourg phát hiện ra dầu cá chứa vitamin A và vitamin D.

A

2.2.2 Phân loại

10 00

B

Năm 1928, Windaus – nhà hóa học người Đức nhận giải Nobel Hóa Học vì đã phân lập được vitamin D từ nguồn thực vật và động vật là dầu cá ngừ.

Trong hóa học, các dạng khác nhau của vitamin D là những secosteroid – steroid bị gãy một trong những liên kết trong các vòng steroid.

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

Vitamin D tồn tại ở nhiều dạng (vitamer) khác nhau. Chúng bao gồm vitamin D1, vitamin D2, vitamin D3, vitamin D4, vitamin D5… Trong đó hai dạng chính là vitamin D2 (còn gọi là ergocalciferol) và vitamin D3 (cholecalciferol). Vitamin D được viết không kèm theo chỉ số được hiểu là D2 hoặc D3 hoặc cả hai, chúng được gọi chung là calciferol. Cấu trúc hóa học của vitamin D2 được xác định lần đầu vào năm 1931. Vào năm 1935, cấu trúc hóa học của vitamin D3 được xác định và chứng minh là nó được tạo thành từ quá trình biến đổi của 7-dehydrocholesterol dưới tác động của tia cực tím.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

G

Năm 1790, ngoài chức năng chữa bệnh bằng dầu cá, ông còn phát hiện chức năng chữa lành bệnh khi cho tiếp xúc với ánh nắng mặt trời.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

TP

Năm 1782, bác sĩ Dale Percval đã cho những đứa trẻ uống dầu cá và đã chữa trị thành công bệnh còi xương.

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

N

H

Francis Glisson (1596-1677) – giáo sư người Anh đã quan sát và kết luận rằng: xương quá yếu có thể dẫn đến biến dạng bộ xương. Chính cuộc sống không có mặt trời, thiếu nguồn sữa, thiếu chất dinh dưỡng là nguyên nhân gây bệnh còi xương ở trẻ em.

N

Các công trình nghiên cứu về vitamin D được bắt đầu từ năm 1916. Tới năm 1931 người ta đã tổng hợp thành công vitamin D.

6

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

D

IỄ N

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

A

10 00

Sự khác biệt về cấu trúc của vitamin D2 và vitamin D3 nằm ở các chuỗi bên của chúng. Chuỗi bên của vitamin D2 chứa một liên kết đôi giữa carbon 22 và 23 và một nhóm methyl trên carbon 24.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

B

Hình 2.1 Bảng phân loại các dạng vitamin D

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q TR ẦN

H Ư

N

G

Đ ẠO

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

N

H

Ơ

N

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

Hình 2.2 Cấu trúc phân tử vitamin D2 và vitamin D3 Vitamin D2 là một dẫn xuất của ergosterol, một sterol có trong màng tế bào của nấm cựa gà. Sterol này cũng có trong một số loài thực vật phù du, động vật không xương sống, nấm men, và nấm lớn. Vitamin D2 được sản 7

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

A

2.3 Tổng quan về vitamin D3 [1-11]

-H

Ó

2.3.1 Đặc điểm

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

Vitamin D3 còn được gọi là cholecalciferol là một trong năm dạng (vitamer) của vitamin D. Vitamin D3 cùng với vitamin D2 (ergocalciferol) là hai dạng phổ biến nhất. Trong đó vitamin D3 dễ dàng được hấp thu và phát huy tác dụng tốt hơn vì vitamin D2 phải trải qua một quá trình chuyển hoá nhất định thì mới trở thành dạng có hoạt tính được.

Vitamin D3 là một secostreoid, cấu trúc là steroid có một vòng mở.

Vitamin D3 có ở các loại cá béo (cá hồi, cá thu…), dầu gan cá, sữa, lòng đỏ trứng, bơ... với lượng rất thấp. Vitamin D3 là một vitamin D tự nhiên vì cơ thể con người có thể tổng hợp được ở da từ 7-dehydro cholesterol dưới tác dụng của tia tử ngoại trong ánh nắng mặt trời.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

10 00

B

TR ẦN

H Ư

Vitamin D3 được tổng hợp từ tác động của bức xạ tia cực tím (UV) trên tiền chất 7-dehydrocholesterol của nó. Da tạo ra vitamin D3 và cung cấp khoảng 90% nhu cầu vitamin D cho cơ thể. Phân tử này tự xuất hiện trong da động vật và trong sữa. Vitamin D3 có thể được tạo ra bằng cách cho da hoặc phơi sữa (một phương thức thương mại) tiếp xúc trực tiếp với tia cực tím.

Vitamin D3 cũng được tìm thấy trong cá béo và dầu gan cá tuyết.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

N

G

Hình 2.3 Phản ứng tổng hợp Vitamin D2

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q Đ ẠO

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

N

H

Ơ

N

xuất từ ergosterol trong cơ thể của các sinh vật này, dưới sự tác kích của tia cực tím. Cũng giống như tất cả các loại vitamin D khác, không thể tạo ra vitamin D2 nếu không có bức xạ cực tím. Các thực vật có diệp lục và động vật có xương sống không thể tự sản xuất vitamin D2, vì cơ thể chúng không có tiền chất ergosterol.

Vitamin D3 không có hoạt tính sinh học, nó được chuyển đổi thành dạng có hoạt tính thông qua các quá trình chuyển hóa trong cơ thể.

8

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Ơ

N

Vitamin D3 được xem như một hormone vì nó được tổng hợp ở dưới da đi vào máu đến cơ quan đích tạo nên tác dụng thông qua receptor đặc hiệu.

Hoạt tính enzyme hydroxylase xúc tác cho quá trình chuyển hóa vitamin D3 thành chất có hoạt tính được điều hòa theo cơ chế điều khiển ngược thông qua nồng độ ion calci trong máu.

N

H

2.3.2 Tính chất

Y

2.3.2.1 Tính chất vật lý

H Ư

N

G

Vitamin D3 khá bền với nhiệt, môi trường acid (hữu cơ), kiềm và các tác nhân khử.

TR ẦN

Đơn vị: IU, 1 IU = 0,025 µg vitamin D3.

Bị hấp thụ cực đại (trong alcohol hay hexane) ở bước sóng 264,5 nm.

B

2.3.2.2 Tính chất hóa học

10 00

Tên IUPAC: (3β,5Z,7E)-9,10-secocholesta-5,7,10(19)-trien-3-ol.

Công thức phân tử: C27 H44 O

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

A

Công thức cấu tạo:

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Nhiệt độ nóng chảy ở 83 - 86◦C, nhiệt độ sôi 496,4◦C.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

Là tinh thể hình kim, màu trắng. Không mùi.

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Vitamin D3 không tan trong nước, tan trong dung môi hữu cơ như petrolium ether, alcohol, methanol, chloroform…

Hình 2.4 Công thức cấu tạo của cholecalciferol (vitamin D3) Khối lượng phân tử: 384,64 g/mol. Được tổng hợp từ provitamin 7-dehydrocholesterol có sẵn trong da người và động vật dưới tác dụng của tia cực tím có bước sóng từ: 270- 290 nm.

9

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

TR ẦN

Vitamin D3 dễ bị phân hủy khi có mặt các chất oxy hóa và các acid vô cơ: sự phân hủy xảy ra ở nối đôi giữa C7 và C8 trong vòng B của phân tử.

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

A

10 00

B

Vitamin D3 dễ bị oxy hóa và bị bất hoạt khi tiếp xúc với oxy trong không khí hay với các tác nhân oxy hóa khác: bị hydroxyl hóa tại carbon 25.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

H Ư

N

Vitamin D3 rất nhạy cảm với ánh sáng, dưới tác dụng của bức xạ tia UV: Cholecalciferol ↔ sura-sterols → ergosterol

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

G

Hình 2.5 Phản ứng tổng hợp vitamin D3

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q Đ ẠO

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

N

H

Ơ

N

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

Hình 2.6 Phản ứng hydroxyl hóa vitamin D3 2.3.3 Hấp thu và chuyển hóa Sự chuyển hóa vitamin D3 trong cơ thể gồm các quá trình chính như sau: -

Phản ứng vòng hóa electron: 7-dehydrocholesterol có ở dưới da bị quang phân bởi tác dụng của bức xạ UV trong ánh nắng mặt trời 10

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

-

Sự hydroxyl hóa vitamin D3 lần lượt thành 25-hydroxyvitamin D3 và 1,25-dihydroxyvitamin D3 (calcitriol) nhờ các enzyme tại gan và thận.

-

Bị biến đổi thành calcitroic acid có hoạt tính sinh học thông qua các phản ứng dị hóa tại các mô đích.

Ơ

Phản ứng chuyển vị sigma hydride: provitamin D3 tự đồng phân hóa thành vitamin D3, quá trình này mất khoảng 10-12 ngày.

D

Hình 2.7 Các phản ứng chuyển hóa vitamin D3 trong cơ thể

Vitamin D3 được hấp thu tốt qua đường tiêu hóa, mật rất cần thiết cho sự hấp thụ ở ruột non.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

A

10 00

B

TR ẦN

H Ư

N

G

Đ ẠO

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

N

H

-

N

chuyển thành provitamin D3.

Vì vitamin D3 tan trong lipid nên được tập trung trong vi thể dưỡng chấp và được hấp thu theo hệ bạch huyết, trong máu chúng liên kết với alpha glubomin đặc hiệu. Thời gian bán hủy trong huyết tương là 19-25 giờ nhưng lại được lưu trữ lâu dài trong các mô mỡ.

11

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Vitamin D là một chất quan trọng giúp điều hoà cân bằng nội môi của calci và phosphate trong cơ thể. Oxy hóa citrate giúp cho sự hòa tan phức hợp calci và phối hợp với hormone cận giáp giúp điều hòa nồng độ calci trong máu.

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

A

10 00

Vitamin D đóng vai trò quan trọng trong việc tạo nên cấu trúc xương thông qua cơ chế phân phối canlci và phosphate. Tham gia vào quá trình tạo xương nhờ tác dụng chuyển hóa các chất vô cơ chủ yếu là calci và phosphate làm tăng hấp thu calci và phosphate ở ruột, tái hấp thu calci ở ống thận do kích thích tăng sinh các carrier vận chuyển calci, tăng tích tụ calci trong xương, giảm bài tiết phosphate, giúp chuyển phosphate hữu cơ thành phosphate vô cơ và tham gia vào quá trình calci hóa sụn nên rất cần cho sự phát triển xương ở trẻ em. Lượng vitamin D đầy đủ trong cơ thể là điều kiện thiết yếu để canlci và phosphate được gắn trong mô xương.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

B

2.3.4 Vai trò sinh lý

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Hình 2.8 Sự chuyển hóa – hấp thu của vitamin D3 trong cơ thể con người

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q TR ẦN

H Ư

N

G

Đ ẠO

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

N

H

Ơ

N

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

12

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

-L

ÁN

TO ÀN Đ

IỄ N D

Khi thiếu vitamin D, ruột không hấp thu đủ calci và phosphate làm nồng độ calci trong máu giảm, gây hậu quả trẻ em chậm lớn, còi xương chân vòng kiềng, chậm biết đi, chậm kín thóp, người lớn bị loãng xương, xốp xương, xương thưa dễ gãy, phụ nữ có thai thiếu vitamin D3 dễ sinh trẻ bị khuyết tật ở xương.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Ý

-H

Ó

A

Vitamin D cũng đóng vai trò trong quá trình phân chia tế bào, bài tiết và chuyển hoá các hormone, bao gồm hormone tuyến cận giáp và insulin.

VitaminD cũng có khả năng ảnh hưởng đến sự biệt hoá một số tế bào ung thư như ung thư da, xương, và các tế bào ung thư vú. Tình trạng đủ vitamin D có liên quan đến giảm nguy cơ phát triển ung thư vú, đại tràng và tuyến tiền liệt.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

10 00

B

Hình 2.9 Sự điều hòa calci bởi vitamin D3 trong cơ thể con người

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q TR ẦN

H Ư

N

G

Đ ẠO

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

N

H

Ơ

N

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

Nhìn chung, vitamin D3 và các dẫn xuất được chỉ định trong các trường hợp: -

Phòng và điều trị còi xương ở trẻ em, loãng xương, nhuyễn xương ở người lớn.

-

Điều trị hội chứng Fanconi.

-

Phòng và điều trị co giật trong suy cận giáp.

13

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

2.3.5 Nhu cầu Nhu cầu về vitamin là rất khác nhau, tùy thuộc vào điều kiện dinh dưỡng, nhiệt độ, khí hậu, và điều kiện hấp thụ calci và phosphate của cơ thể.

A

10 00

Nữ vị thành niên (tuổi)

TO

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

Nam trưởng thành (tuổi)

H Ư

5 5

10 – 18

5

19 – 50

5

51 – 60

10

> 60

15

19 – 50

5

50 – 60

10

> 60

15

D

IỄ N

Đ

ÀN

Nữ trưởng thành (tuổi)

5

10 – 18

B

Nam vị thành niên (tuổi)

TR ẦN

7–9

N

4–6

5

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

G

1–3

5 MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

6 – 11

5

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

U .Q TP

Trẻ em (tháng tuổi)

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

<6

Trẻ nhỏ (năm tuổi)

N

Nhu cầu khuyến nghị (µg/ngày)

Y

Nhóm tuổi/tình trạng sinh lý

H

Ơ

N

Bảng 2.3 Nhu cầu vitamin D3 được khuyến nghị trong bảng nhu cầu dinh dưỡng khuyến nghị cho người Việt Nam của Viện Dinh Dưỡng năm 2007.

Phụ nữ mang thai

5

Bà mẹ cho con bú

5

Vitamin D3 gây ngộ độc khi dùng quá liều: > 400 IU/ngày đối với trẻ dưới 1 tuổi.

14

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

>1000 IU/ngày đối với trẻ trên 1 tuổi. >50.000 IU/ngày với cả trẻ em và người lớn.

Ơ N

H

2.3.6 Nguồn cung cấp

Hàm lượng (IU/1g)

Tảo Cladina arbuscula Dầu gan cá (cá Tuyết)

10 00

B

Cá Hồi Cá Thu

100 5,2

2,7

-H

Ó

1,9 0,7

Ý

Lòng đỏ trứng

0,5

-L

Gan bò

26,8 – 81,6

4,6

A

Cá Ngừ Cá Mòi

TR ẦN

Loại thức ăn

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

Vì hàm lượng vitamin có trong các loại thức ăn thường rất nhỏ, không đủ cung cấp cho nhu cầu của cơ thể do đó ngày nay có rất nhiều loại thực phẩm bổ sung vitamin D3 với liều lượng phù hợp đảm bảo đáp ứng đầy đủ lượng vitamin D3 cơ thể cần. Các loại sản phẩm bổ sung như: sữa (sữa bột và sữa lỏng), bơ, phô mai, ngũ cốc…

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

H Ư

N

Bảng 2.4 Nguồn thực phẩm cung cấp vitamin D3

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

G

Đ ẠO

Cơ thể con người được cung cấp vitamin D3 qua các loại thức ăn như gan động vật, sữa, dầu cá… Nguồn vitamin này được hấp thu ở hỗng tràng và hồi tràng nhờ có vai trò của mật.

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

U TP

.Q

2.3.6.1 Ngoại sinh

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

D

Y

Có hai nguồn cung cấp vitamin D3 cho cơ thể:

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

Khi ngộ độc có biểu hiện tăng calci máu, chán ăn, mệt mỏi, tiểu nhiều, khát nước, nôn, tiêu chảy, rối loạn tâm thần. Tăng calci máu kéo dài gây calci hóa các tạng và có thể gặp suy thận.

Ngoài ra, còn có thể bổ sung lượng vitamin D3 cần thiết bằng các loại thuốc, viên uống bổ sung, thực phẩm chức năng… Tuy nhiên, cần tham khảo ý kiến bác sĩ trước khi sử dụng vì đa phần hàm lượng vitamin D3 trong các sản phẩm này rất cao.

15

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Ơ

Y

N

H

Đây là nguồn cung cấp vitamin D3 chủ yếu cho cơ thể, vì vậy nên tiếp xúc với ánh nắng mặt trời một cách thích hợp. Riêng với trẻ em cần cho trẻ chơi ngoài trời với thời gian thích hợp, cho trẻ tắm nắng vào buổi sáng sớm, ngồi chỗ có ánh nắng mặt trời, không có gió lùa, bỏ bớt quần áo và tả lót và cho trẻ tiếp xúc với ánh nắng ngay từ tháng đầu sau khi sinh để cơ thể trẻ tự tổng hợp vitamin D3.

N

2.3.6.2 Nội sinh

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-H

Ngoài ra, vitamin D3 còn được thêm vào trong các loại viên uống bổ sung hay thực phẩm chức năng đảm bảo cung cấp đủ lượng vitamin D 3 cơ thể cần.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

TP

Đ ẠO

G N H Ư TR ẦN B 10 00

Ó

A

Hình 2.10 Các chế phẩm vitamin D3 trên thị trường

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

U .Q

Trong y học, người ta dùng các chế phẩm vitamin D3dưới nhiều dạng khác nhau như dạng viên nén hoặc dạng hòa tan trong dầu để điều trị các bệnh thiếu vitamin D.

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

2.3.7 Ứng dụng

Hình 2.11 Các loại thực phẩm chức năng bổ sung vitamin D3 trên thị trường

16

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

2.4.1 Phương pháp xà phòng hóa [12]

ÁN

-L

Ý

Khái niệm: Xà phòng hóa là quá trình thủy phân ester trong môi trường kiềm tạo thành alcohol và muối carboxylate.

TO ÀN Đ

IỄ N D

Nguyên tắc: Mẫu được đun hồi lưu hoặc cho phản ứng ở nhiệt độ phòng qua đêm với dung dịch potassium hydroxide trong ethanol, các chất không xà phòng hóa được chiết từ dung dịch xà phòng bằng các dung môi thích hợp (diethyl ether, hexane…).

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

-H

Ó

A

2.4 Tổng quan về các phương pháp chuẩn bị mẫu

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Hình 2.12 Các loại thực phẩm được bổ sung vitamin D3 trên thị trường

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q 10 00

B

TR ẦN

H Ư

N

G

Đ ẠO

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

N

H

Ơ

N

Trong thực phẩm, vitamin D3 được bổ sung vào nhiều loại sản phẩm dinh dưỡng như sữa, ngũ cốc, nước trái cây, sữa chua, bơ…

Chất không xà phòng hóa bao gồm các lipit có nguồn gốc tự nhiên như sterol, các hydrocarbon có mạch carbon cao, các loại alcohol, alcohol bão hòa, alcohol terpenic… được chiết bằng dung môi và không bay hơi ở 103oC. Vitamin D3 là một secosteroid, một lipid có nguồn gốc tự nhiên (sterol) nên không bị xà phòng hóa. Phương pháp này được áp dụng để loại các chất béo khác vitamin D3 có trong mẫu.

17

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DấyKèmQuyNhƥn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Ć

N Y

-H

Ă&#x201C;

A

10 00

B

Háşąng sáť&#x2018; phân báť&#x2018; cᝧa nhᝯng chẼt tan tĆ°ĆĄng Ä&#x2018;áť&#x2018;i Ă­t thay Ä&#x2018;áť&#x2022;i theo nhiáť&#x2021;t Ä&#x2018;áť&#x2122; hoạc náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; cᝧa chẼt tan Ä&#x2018;Ăł cĂł trong dung dáť&#x2039;ch ban Ä&#x2018;ầu, tuy nhiĂŞn háşąng sáť&#x2018; nĂ y thay Ä&#x2018;áť&#x2022;i nhiáť u tĂšy vĂ o dung mĂ´i (Ä&#x2018;áť&#x2122; phân cáťąc, Ä&#x2018;ạc tĂ­nh ĂĄi nĆ°áť&#x203A;c cᝧa dung mĂ´i) vĂ dung dáť&#x2039;ch nĆ°áť&#x203A;c (pH, láťąc ion). RiĂŞng váť&#x203A;i dung dáť&#x2039;ch nĆ°áť&#x203A;c, pH cᝧa dung dáť&#x2039;ch cĂł nhᝯng ảnh hĆ°áť&#x;ng quan tráť?ng, nhẼt lĂ áť&#x; pH acid yáşżu vĂ pH base yáşżu.

Ä?

Ă&#x20AC;N

TO

Ă N

-L

Ă?

Viáť&#x2021;c chiáşżt láť?ng-láť?ng Ä&#x2018;ưᝣc tháťąc hiáť&#x2021;n báşąng bĂŹnh lĂłng, trong Ä&#x2018;Ăł chẼt phân tĂ­ch ban Ä&#x2018;ầu Ä&#x2018;ưᝣc hoĂ tan vĂ o pha nĆ°áť&#x203A;c. Sáť­ d᝼ng lần lưᝣt cĂĄc dung mĂ´i hᝯu cĆĄ, loấi khĂ´ng hoĂ tan váť&#x203A;i nĆ°áť&#x203A;c hoạc loấi cĂł tháť&#x192; háť&#x2014;n hᝣp Ä&#x2018;ưᝣc váť&#x203A;i nĆ°áť&#x203A;c Ä&#x2018;áť&#x192; chiáşżt ra kháť?i pha nĆ°áť&#x203A;c cĂĄc hᝣp chẼt cĂł tĂ­nh phân cáťąc khĂĄc nhau (tuáťł vĂ o Ä&#x2018;áť&#x2122; phân cáťąc cᝧa dung mĂ´i).

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

TR ẌN

H ĆŻ

N

G

M᝼c Ä&#x2018;Ă­ch chĂ­nh cᝧa sáťą chiáşżt báşąng dung mĂ´i lĂ Ä&#x2018;áť&#x192; sĆĄ báť&#x2122; tinh cháşż hĂła máť&#x2122;t hᝣp chẼt nĂ o Ä&#x2018;Ăł. Náşżu máť&#x2122;t chẼt tan X hoạc nhᝯng chẼt tĆ°ĆĄng Ä&#x2018;áť&#x201C;ng váť&#x203A;i chẼt X nĂ y cĂł háşąng sáť&#x2018; phân báť&#x2018; láť&#x203A;n còn cĂĄc chẼt tấp bẊn cĹŠng nhĆ° cĂĄc chẼt khĂĄc cĂł cẼu trĂşc hĂła háť?c khĂ´ng tĆ°ĆĄng Ä&#x2018;áť&#x201C;ng váť&#x203A;i X lấi cĂł háşąng sáť&#x2018; phân báť&#x2018; nháť? thĂŹ cĂł tháť&#x192; ĂĄp d᝼ng káťš thuáş­t chiáşżt láť?ng-láť?ng Ä&#x2018;áť&#x192; cĂ´ láş­p chẼt X vĂ cĂĄc chẼt tĆ°ĆĄng Ä&#x2018;áť&#x201C;ng váť&#x203A;i nĂł.

Máť&#x152;I YĂ&#x160;U CẌU GᝏI Váť&#x20AC; Háť&#x2DC;P MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

đ??śđ?&#x2018;? : Náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; cᝧa chẼt tan trong pha (b) tấi giai Ä&#x2018;oấn cân báşąng.

Dáş Y KĂ&#x2C6;M QUY NHĆ N OFFICIAL ST&GT : Ä?/C 1000B TRẌN HĆŻNG Ä?áş O TP.QUY NHĆ N

U .Q TP

Ä? áş O

đ??śđ?&#x2018;&#x17D; : Náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; cᝧa chẼt tan trong pha (a) tấi giai Ä&#x2018;oấn cân báşąng.

Iáť&#x201E; N D

đ??śđ?&#x2018;&#x17D; đ??śđ?&#x2018;?

Trong Ä&#x2018;Ăł:

NĆĄi báť&#x201C;i dưᝥng kiáşżn thᝊc ToĂĄn - LĂ˝ - HĂła cho háť?c sinh cẼp 2+3 / Diáť&#x2026;n Ä?Ă n ToĂĄn - LĂ˝ - HĂła Quy NhĆĄn 1000B Trần HĆ°ng Ä?ấo Tp.Quy NhĆĄn Táť&#x2030;nh BĂŹnh Ä?áť&#x2039;nh

http://daykemquynhon.ucoz.com

đ??ž=

H

NguyĂŞn tắc: nguyĂŞn tắc cĆĄ bản cᝧa sáťą chiáşżt láť?ng-láť?ng lĂ sáťą phân báť&#x2018; cᝧa máť&#x2122;t chẼt tan vĂ o hai pha láť?ng vĂ hai pha láť?ng nĂ y khĂ´ng hòa tan vĂ o nhau.

Háşąng sáť&#x2018; phân báť&#x2018; cᝧa máť&#x2122;t chẼt tan cho biáşżt khả nÄ&#x192;ng hòa tan cᝧa chẼt nĂ y Ä&#x2018;áť&#x2018;i váť&#x203A;i hai pha láť?ng tấi tháť?i Ä&#x2018;iáť&#x192;m cân báşąng, Ä&#x2018;ưᝣc biáť&#x192;u diáť&#x2026;n báşąng háşąng sáť&#x2018; cân báşąng K.

N

2.4.2 PhĆ°ĆĄng phĂĄp chiáşżt láť?ng-láť?ng [13]

TĂšy vĂ o tᝡ tráť?ng so sĂĄnh giᝯa dung mĂ´i vĂ nĆ°áť&#x203A;c mĂ pha hᝯu cĆĄ náşąm áť&#x; láť&#x203A;p trĂŞn hoạc áť&#x; dĆ°áť&#x203A;i so váť&#x203A;i pha nĆ°áť&#x203A;c.

Viáť&#x2021;c chiáşżt Ä&#x2018;ưᝣc tháťąc hiáť&#x2021;n lần lưᝣt tᝍ dung mĂ´i hᝯu cĆĄ kĂŠm phân cáťąc Ä&#x2018;áşżn dung mĂ´i phân cáťąc thĂ­ d᝼ nhĆ°: ether dầu háť?a hoạc hexane, chloroform, ethyl acetate, buthanolâ&#x20AC;Ś Váť&#x203A;i máť&#x2014;i loấi dung mĂ´i hᝯu cĆĄ, viáť&#x2021;c chiáşżt Ä&#x2018;ưᝣc tháťąc hiáť&#x2021;n nhiáť u lần, máť&#x2014;i lần máť&#x2122;t lưᝣng nháť? tháť&#x192; tĂ­ch dung mĂ´i, chiáşżt Ä&#x2018;áşżn khi khĂ´ng còn chẼt hòa tan vĂ o dung mĂ´i thĂŹ Ä&#x2018;áť&#x2022;i sang chiáşżt váť&#x203A;i dung mĂ´i cĂł tĂ­nh phân cáťąc hĆĄn. Dung dáť&#x2039;ch cᝧa cĂĄc lần chiáşżt Ä&#x2018;ưᝣc gom chung lấi, lĂ m khan nĆ°áť&#x203A;c váť&#x203A;i cĂĄc 18

Ä?Ăłng gĂłp PDF báť&#x;i GV. Nguyáť&#x2026;n Thanh TĂş

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

chất làm khan như Na2SO4, MgSO4, CaSO4… đuổi dung môi ta thu được chất cần phân tích.

Ơ

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

A

10 00

B

LC/MS/MS là phương pháp sắc ký lỏng ghép với hệ thống máy khối phổ 2 lần liên tiếp. Việc ghép máy sắc ký lỏng vào máy khối phổ không thể được thực hiện trực tiếp vì muốn đo khối phổ cần phải tạo ra các ion ở thể khí, trong khi sắc ký lỏng được áp dụng cho những trường hợp chất ít bay hơi.Vấn đề còn phức tạp thêm ở việc khi hợp chất đi ra khỏi cột sắc ký lỏng, hợp chất đó đang ở trong pha động lỏng, cần phải loại bỏ dung môi trước khi đưa hợp chất khảo sát vào máy khối phổ.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

2.5.1 Tổng quan về LC/MS/MS [13-18]

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

TR ẦN

H Ư

2.5 Phương pháp sắc ký lỏng ghép hai lần khối phổ (LC/MS/MS) [11-16]

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q

N

G

Đ ẠO

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

N

H

Kỹ thuật chiết lỏng-lỏng có nhược điểm là do phải lắc bình lóng nhiều lần nên ở những lần chiết sau dung môi trong bình lóng tạo nhũ tương, gây khó khăn trong việc tách pha thành hai lớp. Khi dung môi trong bình lóng tạo nhũ tương có thể sử dụng một đũa thủy tinh dài đưa vào trong bình lóng, khuấy nhẹ dung dịch hoặc cọ xát nhẹ vào thành bình, chỗ mặt thoáng của dung dịch nhằm phá vỡ các bọt khí để dung dịch nhanh chóng phân thành hai lớp, cũng có thể phá nhũ bằng cách ly tâm dung dịch; ngoài ra, có thể thêm dung dịch NaCl bão hòa hoặc acetonitrile vào hỗn hợp đang tạo nhũ, khi đó hỗn hợp sẽ tách thành hai lớp rõ rệt.

N

Điều cần lưu ý là quá trình chiết lỏng-lỏng được thực hiện ở nhiệt độ phòng, nếu gia tăng nhiệt độ cho dung môi thì khả năng hòa tan của dung môi sẽ tăng lên và nguyên tắc nêu trên sẽ có nhiều thay đổi.

Hình 2.13 Hệ thống LC/MS/MS điển hình Những sự không tương thích cơ bản giữa hai loại máy là: -

Máy sắc ký lỏng hiệu năng cao hoạt động trong điều kiện: áp suất cao, nhiệt độ tương đối thấp, các chất khảo sát ở thể lỏng, vận tốc dòng chảy lớn (vài mL/phút).

19

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

Hình 2.14 Sơ đồ cấu tạo hệ thống LC/MS/MS

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

A

10 00

B

Hệ thống được sử dụng trong đề tài là LC/MS/MS AB Sciex QTRAP4500 với đầu dò ba tứ cực.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

TR ẦN

H Ư

N

G

Đ ẠO

Một hệ thống LC/MS/MS cơ bản bao gồm 3 bộ phận chính: Hệ thống LC (hay HPLC), hệ thống phân tích khối phổ MS/MS và bộ phận hiển thị kết quả.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

TP

2.5.2 Cấu tạo hệ thống LC/MS/MS

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

N

H

Để khắc phục những khó khăn trên trong việc ghép hai loại máy lại với nhau, cần phải có một trung gian là giao diện. Có nhiều loại giao diện khác nhau như: chùm tia hạt (PB), bắn phá nhanh nguyên tử dòng liên tục (CF – FAB), tia nhiệt (TSP), ion hóa bằng cách phun ion (ESI), ion hóa hóa học ở áp suất khí quyển (APCI)… Tùy thuộc vào khối lượng phân tử và đặc tính của hợp chất khảo sát mà có thể lựa chọn các giao diện khác nhau.

N

Máy khối phổ hoạt động trong điều kiện: chân không sâu, nhiệt độ cao, các chất khảo sát phải ở thể khí, vận tốc dòng chảy nhỏ (vài µL/phút).

Ơ

-

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Hình 2.15 Hệ thống LC/MS/MS AB Sciex QTRAP4500 2.5.2.1 Hệ thống HPLC Gồm các bộ phận cơ bản sau: bình chứa pha động, bộ phận khử khí, bơm cao áp, bộ phận tiêm mẫu, cột sắc ký và detector.

Trong đó: có bình chứa dung môi pha động, bộ phận khử khí, bơm cao 20

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

áp, bộ phận tiêm mẫu, cột sắc ký (pha tĩnh) để ngoài môi trường hay trong bộ điều nhiệt. Detector, hệ thống máy tính gắn phần mềm nhận tín hiệu, xử lý dữ

Đ

ÀN

TO

ÁN

Hệ dung môi giải ly cột được hút ra từ các bình chứa dung môi. Bình được làm bằng chất liệu trơ, thường là bằng thủy tinh. Bình luôn luôn có nắp bảo vệ, nắp có lỗ hở để thông với không khí. Trong bình có một ống dẫn dung môi từ bình vào ống sắc ký, ở đầu này có gắn một nút lọc bằng kim loại với mục đích lọc dung môi và cũng để giữ ống luôn luôn ở dưới mặt thoáng của chất lỏng. Trước khi lắp một bình dung môi vào vị trí hoạt động, cần phải loại bỏ (khử) bọt khí vì chúng làm máy bơm và detector hoạt động kém hiệu quả.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

B 10 00 A Ó -H

-L

Ý

Hình 2.17 Phác họa cấu tạo một bình chứa pha động thông thường

IỄ N D

Bình chứa pha động

TR ẦN

a)

H Ư

N

Hệ thống trang bị của HPLC bao gồm các bộ phận chính:

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

G

Hình 2.16 Sơ đồ phác họa một hệ thống HPLC cơ bản

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q Đ ẠO

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

N

H

Ơ

N

liệu, điều khiển hệ thống HPLC và in dữ liệu.

Hiện tại, các máy HPLC thường có 4 đường dung môi vào đầu bơm cao áp. Cho phép chúng ta sử dụng 4 bình chứa dung môi cùng một lần để rửa giải theo tỷ lệ mong muốn và tổng tỷ lệ dung môi của 4 đường là 100%.

21

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Ơ

Trong trường hợp bọt quá nhiều bộ khử khí không thể loại trừ hết được thì có thể bơm sẽ không hút được dung môi, khi đó áp suất không lên và máy sắc ký sẽ ngừng hoạt động.

ÁN

-L

Ý

Để đưa mẫu vào cột phân tích với thể tích bơm có thể thay đổi.Có 2 cách đưa mẫu vào cột: bằng tiêm mẫu thủ công và tiêm mẫu tự động (autosampler).

Cột sắc ký

Đ

ÀN

TO

e)

Là cột chứa pha tĩnh, được xem là trái tim của quá trình sắc ký, nó là một yếu tố quyết định hiệu quả của quá trình tách sắc ký của một hỗn hợp chất mẫu.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Bộ phận tiêm mẫu:

-H

d)

Ó

A

10 00

B

Loại bơm của máy HPLC là loại bơm đặc biệt với áp suất rất cao lên đến 7.000 psi (48,3 MPa) để bơm pha động vào cột tách, đi xuyên ngang qua một pha tĩnh (được nhồi thật chặt bởi những hạt thật mịn) với một vận tốc không đổi (thường vào khoảng 0,5-4,0 mL/phút), thực hiện quá trình sắc ký, rửa giải chất tan ra khỏi cột sắc ký. Bơm được cấu tạo bằng chất liệu chịu được dung môi hữu cơ và các dung dịch đệm.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

TP

Đ ẠO

N

H Ư

Bơm cao áp (Pump)

TR ẦN

c)

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

U

-

.Q

Tỷ lệ pha động của các đường dung môi lấy không đúng sẽ làm cho thời gian lưu của peak thay đổi.

Trong bất cứ trường hợp nào nêu trên cũng cho kết quả phân tích sai.

IỄ N D

-

G

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

Y

N

H

Mục đích của bộ khử khí là nhằm loại trừ các bọt nhỏ còn sót lại trong dung môi pha động. Nếu như trong quá trình phân tích mà dung môi pha động còn sót các bọt khí thì một số hiện tượng sau đây sẽ xảy ra:

N

Tuy nhiên theo kinh nghiệm thì chúng ta ít khi sử dụng 4 đường dung môi cùng một lúc mà chúng ta chỉ sử dụng tối đa là 3 hay 2 đường để cho hệ pha động luôn được pha trộn đồng nhất hơn, hệ pha động đơn giản hơn để quá trình rửa giải ổn định. b) Bộ khử khí (Degasses)

Cột HPLC được làm bằng thép không gỉ, thường dài từ 10-25 cm và có đường kính bên trong 2,1-4,6 mm. Cột sắc ký được nhồi thật chặt bởi những hạt nhỏ đường kính ≤ 5µm, đạt tiêu chuẩn >10.000 mâm lý thuyết/mét. Thông thường chất nhồi cột là silicagel (pha thuận)hoặc là silicagel đã được silan hóa hoặc được bao một lớp mỏng hữu cơ (pha đảo), ngoài ra người ta còn dùng các loại hạt khác như: nhôm oxide, polymer xốp, chất trao đổi ion.

22

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Ơ

các chất cần phân tích mà người ta sử dụng loại detector thích hợp và phải

10 00

B

thỏa mãn điều kiện trong một vùng nồng độ nhất định của chất phân tích.

Ó

Trong đó:

A

A = k.C

Ý

-H

A: là tín hiệu đo được

-L

C: Nồng độ chất phân tích

Đ

ÀN

TO

ÁN

K: là hằng số thực nghiệm của detector đã chọn Tín hiệu này có thể là: độ hấp thụ quang, cường độ phát xạ, cường độ

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

TR ẦN

ghi trên sắc ký đồ để có thể định tính và định lượng. Tùy theo tính chất của

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

N

Là bộ phận phát hiện các chất khi chúng ra khỏi cột và cho các tín hiệu

IỄ N D

Detector (đầu dò)

H Ư

f)

G

Đ ẠO

TP

Trước khi pha động đi vào cột phân tích, nó phải được cho đi ngang một cột bảo vệ, sử dụng để lọc bỏ những chất tạp bẩn còn sót lại.Đối với một số phương pháp phân tích đòi hỏi phải có nhiệt độ cao hoặc thấp hơn nhiệt độ phòng thì cột được đặt trong bộ phận điều nhiệt (oven column).

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

N

H

Cột C18 được sử dụng trong đề tài là Zorbax Eclipse XDB – C18, XDB (eXtra Densely Bonded) ưu điểm là có tốc độ phân tích và độ phân giải cao, khoảng pH cho phân tích tốt là từ 2-9, loại cột hạn chế tối đa sự tạo thành silanol.

N

Có rất nhiều nhãn hiệu cột khác nhau hiện bán trên thị trường. Chúng được chia làm nhiều loại theo mục đích sử dụng, trong đó chủ yếu là: cột pha đảo RP C18 (ODS), cột pha thường C8, các loại cột chuyên dụng cho từng nhóm chất. Cột C18 và C8 được sử dụng cho phần lớn các hợp chất thông thường.

điện thế, độ dẫn điện, độ dẫn nhiệt, chiết suất …

Trên cơ sở đó người ta chế tạo các loại detector sau: -

Detector hấp thụ quang phân tử vùng phổ UV hay UV-VIS

-

Detector hấp thu phổ nguyên tử AES hay AAS

-

Detector phổ huỳnh quang

-

Detector điện hóa (đo vòng, cực phổ, độ dẫn, điện lượng) 23

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Detector chiết suất

-

Detector đo độ dẫn nhiệt

-

Detector diode phát quang và diode mảng

-

Detector đo khối lượng (khối phổ MS)

N

-

-

Bộ gia nhiệt và ổn định nhiệt độ cho cột sắc ký

-

Máy tính và các phần mềm điều khiển toàn bộ hệ thống HPLC, xử lý và in kết quả tách hay bộ tách phân kế.

Đ

ÀN

10 00

TO

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

A

2.5.2.2 Đầu dò khối phổ ba tứ cực (MS/MS)

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Bộ chương trình gradient dung môi (pha động)

B

-

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

TR ẦN

H Ư

Ngoài ra, các hệ thống HPLC hiện đại còn được trang bị thêm các bộ phận như:

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

U TP

N

G

Đ ẠO

Có nhiều loại, nhưng đơn giản và phổ biến nhất là các máy tự ghi (recorder) để ghi tín hiệu đo dưới dạng các peak của các chất, rồi đến bộ phân tích kế (intergrator), sau đó là máy tính và máy in kèm theo để xử lý và in kết quả.

IỄ N D

Trang bị chỉ thị kết quả

.Q

g)

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

Y

N

H

Tùy theo chất phân tích mà chọn loại detector phù hợp nhằm đạt được độ nhạy cao, định lượng chính xác. Hệ thống LC/MS/MS cơ bản là một hệ thống HPLC đầu dò khối phổ MS.

Ơ

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

Hình 2.18 Sơ đồ cấu tạo cơ bản của hệ thống đầu dò khối phổ ba tứ cực a)

Buồng ion hóa

Là nơi mẫu được tách khỏi dung môi và biến thành các ion để đi vào hệ thống phân tích. Có nhiều nguồn tạo ion khác nhau dùng cho LC/MS như: -

Chùm tia hạt (PB)

-

Bắn phá nhanh nguyên tử dòng liên tục (CF – FAB) 24

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

-

Tia nhiệt (TSP)

-

Ion hóa bằng cách phun ion (ESI)

-

Ion hóa hóa học ở áp suất khí quyển (APCI)…

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

Dung dịch mẫu phân tích gồm hỗn hợp chất phân tích và dung môi pha động từ hệ thống sắc ký lỏng được đưa vào một ống mao quản làm bằng thép không gỉ, dưới ảnh hưởng của điện thế cao và sự hỗ trợ của khí mang, dung dịch mẫu phân tích được phun sương ra khỏi ống mao quản vào một điện trường mạnh. Dưới ảnh hưởng của điện thế, tại đầu mao quản, dung dịch xuất hiện thành những giọt sương nhỏ, mang điện tích. Khí xung quanh các giọt này tạo một nhiệt năng làm bay hơi dung môi ra khỏi giọt sương, các hạt mang điện tích có thể tích nhỏ dần và do sự đẩy nhau giữa các điện tích cùng dấu, sẽ bị vỡ dần thành các hạt nhỏ mang điện tích. Quá trình này được lặp lại nhiều lần để hình thành những hạt rất nhỏ. Từ những hạt rất nhỏ mang điện tích cao này, các ion phân tích được chuyển thành thể khí bởi lực đẩy tĩnh điện rồi sau đó đi vào bộ phân tích khối.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Nguyên tắc:

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q G N

H Ư TR ẦN B 10 00 A

-H

Ó

Hình 2.19 Phác họa phương pháp ion hóa phun điện ESI

IỄ N D

Cấu tạo

Đ ẠO

-

TP

Phương pháp ion hóa phun điện (ESI)

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

N

H

Tùy thuộc vào khối lượng phân tử và đặc tính (phân cực – không phân cực) của hợp chất khảo sát mà có thể sử dụng máy LC-MS với các nguồn tạo ion khác nhau. Hệ thống LC/MS/MS sử dụng trong đề tài được tích hợp cả hai nguồn tạo ion là ESI và APCI, tuy nhiên kỹ thuật ESI được sử dụng vì đơn giản và cho hiệu quả tốt hơn.

N

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Ơ

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

25

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Ơ

Ứng dụng: được ứng dụng để ion hóa những hợp chất không bền nhiệt, phân cực, có khối lượng phân tử lớn. ESI có khả năng tạo thành những ion đa điện tích (dương hoặc âm, tùy thuộc vào áp cực điện thế), ESI được xem là kỹ thuật ion hóa êm dịu hơn APCI, thích hợp cho phân tích các hợp chất sinh học như protein, peptide, nucleotide, vitamin…

Hình 2.20 Sơ đồ phác họa cấu tạo một tứ cực

Đ

ÀN

TO

Nguyên tắc: sau khi ra khỏi buồng ion hóa, các ion sinh ra được tập trung và gia tốc bằng hệ quang học ion để đưa vào hệ MS1, tại đây tứ cực 1 sẽ quét phân tích và chọn lọc ra ion mẹ (precursorion). Khi các ion phân tích đi vào vùng tứ cực (Q1) sẽ di chuyển theo hình sin do tác dụng của dòng điện một chiều tích điện trên các thanh tứ cực và sự quét tín hiệu tần số vô tuyến. Mỗi ion có khối lượng khác nhau và có một tần số quét khác nhau. Các ion có cùng tần số với tần số quét sẽ đi ra ngoài, các ion còn lại sẽ tiếp tục đi vào vùng va chạm Q2. Các ion con được chọn sẽ đi tiếp vào detector. c)

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

A

10 00

B

TR ẦN

H Ư

N

G

Cấu tạo: Được cấu tạo bởi bốn thanh điện cực song song tạo thành một khoảng trống để các ion bay qua. Hai cặp thanh điện cực đối nhau sẽ tích dòng điện một chiều trái nhau cùng với tần số vô tuyến luôn biến đổi. Một trường điện từ được tạo ra bằng sự kết hợp giữa dòng điện một chiều (DC) và điện thế tần số radio (RF).

IỄ N D

Hệ máy khối phổ thứ nhất (tứ cực Q1)

TP

b)

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

N

H

-

N

Trong kỹ thuật ESI, phân tử nhất thiết phải được biến thành chất điện ly, tan trong dung dịch để phun sương. Dung môi phù hợp để phun sương là ethanol, methanol, isopropanol, acetonitrile, acetone, chloroform…

Buồng va chạm (tứ cực Q2) 26

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Là nơi khí argon có động năng lớn đi vào, có tác dụng đập vỡ các phân tử hóa chất bằng dòng khí argon cùng điện thế cao tạo thành những ion con (fragment ions) có khối lượng phân tử nhỏ hơn. Áp suất cao và điện thế cao từ 10 – 550V.

N

Hệ máy khối phổ thứ hai (tứ cực Q3)

-L

Ý

-H

Ó

A

Tại Q1 với cấu tạo có 4 tứ cực khác dấu và đối nhau sẽ chọn ra các ion có khối lượng m/z đã được chọn trước đưa vào buồng va chạm (Q2). Tại đây dòng khí trơ như N2, He… sẽ va đập vào các ion từ Q1 chuyển đến cho vỡ ra thành những mảnh (fragment) nhỏ hơn có khối lượng m/z và tất cả các mảnh nhỏ này được chuyển tiếp đến Q3. Tại đây một lần nữa Q3 sẽ chọn những ion định lượng và ion xác nhận cần phân tích và chuyển đến đầu dò (detector).

Đ

ÀN

TO

ÁN

2.5.4 Một số kỹ thuật quét khối phổ MS/MS 2.5.4.1 Full MS

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

10 00

B

TR ẦN

Mẫu sau khi được tiêm vào hệ thống HPLC và đi ra vẫn ở dạng lỏng, mẫu tiếp tục được đưa vào đầu dò khối phổ. Tại đây (nguồn ion) dưới áp suất, nhiệt độ cao > 400◦C mẫu chuyển sang thể aerosol khí có hạt rất mịn, mẫu được khí mang là khí trơ Ar, hoặc He, N2 loại bỏ các dung môi và chuyển các ion mẫu vào Q1.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

H Ư

N

2.5.3 Nguyên tắc hoạt động

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

U

TP

G

Đ ẠO

Là nơi tiếp nhận các ion và biến chúng thành các tín hiệu điện và được ghi nhận thành các tín hiệu phổ khối (peak) bao gồm cả các mũi mẹ và các mũi con.

IỄ N D

Bộ phận ghi nhận tín hiệu (detector)

.Q

e)

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

Y

N

H

Có cấu tạo và nguyên tắc hoạt động giống với hệ máy khối phổ thứ nhất. Đây là nơi xác nhận lại các ion con (product ion) theo khối lượng phổ của chúng (m/z) sau khi đã được đập vỡ tại Q2.

Ơ

d)

Là kiểu quét khối phổ toàn bộ các ion đã đi qua bộ phận ion hóa, sử dụng một tứ cực Q1 hoặc Q3 để phân tích xác định các ion ban đầu đó mà không thông qua việc đập vỡ thành ion con. Thường dùng để nhận danh hay phân tích khi chất phân tích có nồng độ đủ lớn. Đối với đầu dò khối phổ ba tứ cực, chế độ scan thường được lựa chọn để khảo sát ion mẹ.

2.5.4.2 SIM MS (Selected Ion Monitoring) Trong chế độ SIM, đầu dò MS chỉ ghi nhận tín hiệu một số mảnh ion 27

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Ơ

N

đặc trưng cho chất cần xác định. Khối phổ ở chế độ SIM chỉ cho tín hiệu của các ion đã được lựa chọn trước đó, do vậy không thể dùng để nhận danh hay so sánh với các thư viện có sẵn. Đối với đầu dò khối phổ ba tứ cực, chế độ SIM thường được lựa chọn để khảo sát năng lượng phân mảnh khi đó biết ion mẹ.

N

H

2.5.4.3 SRM (Selected Reaction Monitoring)

-L

Ý

-H

Ó

A

Nguyên tắc của phân tích định tính là so sánh thời gian lưu của các peak sắc ký trong mẫu phân tích với thời gian lưu của các peak sắc ký trong mẫu chuẩn. Từ đó sẽ xác định trong mẫu phân tích có những chất nào, nếu chúng có thời gian lưu đúng như thời gian lưu của các peak trong mẫu chuẩn.

2.5.5.2 Định lượng

ÁN

TO ÀN Đ

IỄ N D

Nguyên tắc của phân tích định lượng là dựa trên tỷ lệ nồng độ của chất với chiều cao hoặc diện tích peak của nó. Có 4 phương pháp định lượng trong sắc ký: phương pháp ngoại chuẩn, phương pháp nội chuẩn, phương pháp thêm chuẩn và phương pháp chuẩn hóa diện tích. Đề tài sử dụng phương pháp chuẩn ngoại để thực hiện, tính toán kết quả.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

10 00

2.5.5.1 Định tính

B

2.5.5 Định tính, định lượng

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

TR ẦN

H Ư

N

G

Là kỹ thuật thông dụng hơn SRM do yêu cầu thực tế về mặt kỹ thuật đối với phân tích vi lượng nên các ion con cần quan tâm thường từ 2 trở lên. Đầu tiên, cô lập ion cần chọn (ion mẹ) ở tứ cực thứ nhất, phân mảnh ion cô lập đó tại tứ cực thứ 2 (thực chất là buồng va chạm) thu được các ion con, cô lập 2 (hoặc nhiều) ion con cần quan tâm ở tứ cực thứ 3 và đưa vào đầu dò để phát hiện. Đây là kỹ thuật quét khối phổ được sử dụng trong đề tài.

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q

Đ ẠO

2.5.4.4 MRM (Multiple Recation Monitoring)

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

Cô lập ion cần chọn, sau đó phân mảnh ion cô lập đó, trong các mảnh ion sinh ra, cô lập một mảnh ion con cần quan tâm và đưa vào đầu dò để phát hiện.

Phương pháp chuẩn ngoại là phương pháp định lượng cơ bản trong đó dung dịch chất chuẩn và mẫu thử được tiến hành sắc ký trong cùng điều kiện.

Sau đó, so sánh diện tích peak hoặc chiều cao của mẫu thử với diện tích peak hoặc chiều cao dung dịch chất chuẩn để tính nồng độ chất có trong mẫu. Có thể dùng phương pháp chuẩn hoá một điểm hoặc nhiều điểm.

28

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DấyKèmQuyNhƥn

-

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

ChuẊn hoĂĄ máť&#x2122;t Ä&#x2018;iáť&#x192;m (phĆ°ĆĄng phĂĄp so sĂĄnh): cháť?n náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; dung dáť&#x2039;ch chẼt chuẊn gần báşąng náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; mẍu tháť­, tĂ­nh theo cĂ´ng thᝊc sau: đ??śđ?&#x2018; đ?&#x2018;&#x2020;đ?&#x2018;

N

đ??śđ?&#x2018;Ľ = đ?&#x2018;&#x2020;đ?&#x2018;Ľ Ă&#x2014;

Ć

Trong Ä&#x2018;Ăł: đ??śđ?&#x2018;Ľ lĂ náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; mẍu tháť­.

N

H

đ??śđ?&#x2018; lĂ náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; dung dáť&#x2039;ch chẼt chuẊn.

ChuẊn hoĂĄ nhiáť u Ä&#x2018;iáť&#x192;m: chuẊn báť&#x2039; dĂŁy dung dáť&#x2039;ch cĂĄc chẼt chuẊn váť&#x203A;i náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; tÄ&#x192;ng dần tiáşżn hĂ nh chấy sắc kĂ˝. Váş˝ Ä&#x2018;áť&#x201C; tháť&#x2039; liĂŞn quan giᝯa diáť&#x2021;n tĂ­ch hoạc chiáť u cao peak váť&#x203A;i náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; máť&#x2014;i chẼt chuẊn. Sáť­ d᝼ng Ä&#x2018;oấn tuyáşżn tĂ­nh cᝧa Ä&#x2018;Ć°áť?ng chuẊn Ä&#x2018;áť&#x192; tĂ­nh náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; cĂĄc chẼt cần xĂĄc Ä&#x2018;áť&#x2039;nh.

Tháťąc hiáť&#x2021;n viáť&#x2021;c tĂ­nh toĂĄn nĂ y theo hai cĂĄch:

HĂŹnh 2.21 Ä?áť&#x201C; tháť&#x2039; tĆ°ĆĄng quan diáť&#x2021;n tĂ­ch hoạc chiáť u cao peak váť&#x203A;i náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122;.

Iáť&#x201E; N D

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

+ Xây dáťąng phĆ°ĆĄng trĂŹnh háť&#x201C;i quy tuyáşżn tĂ­nh đ?&#x2018;&#x152; = đ?&#x2018;&#x17D; + đ?&#x2018;?đ??ś

Ä?

Ă&#x20AC;N

TO

Ă N

-L

Ă?

-H

Ă&#x201C;

A

10 00

B

TR ẌN

+ Ă p diáť&#x2021;n tĂ­ch hoạc chiáť u cao peak vĂ o Ä&#x2018;Ć°áť?ng chuẊn Ä&#x2018;áť&#x192; suy ra náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; cᝧa chẼt trong mẍu.

Máť&#x152;I YĂ&#x160;U CẌU GᝏI Váť&#x20AC; Háť&#x2DC;P MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

H ĆŻ

N

G

Ä? áş O

TP

-

Dáş Y KĂ&#x2C6;M QUY NHĆ N OFFICIAL ST&GT : Ä?/C 1000B TRẌN HĆŻNG Ä?áş O TP.QUY NHĆ N

.Q

đ?&#x2018;&#x2020;đ?&#x2018; lĂ diáť&#x2021;n tĂ­ch/chiáť u cao peak dung dáť&#x2039;ch mẍu chuẊn.

NĆĄi báť&#x201C;i dưᝥng kiáşżn thᝊc ToĂĄn - LĂ˝ - HĂła cho háť?c sinh cẼp 2+3 / Diáť&#x2026;n Ä?Ă n ToĂĄn - LĂ˝ - HĂła Quy NhĆĄn 1000B Trần HĆ°ng Ä?ấo Tp.Quy NhĆĄn Táť&#x2030;nh BĂŹnh Ä?áť&#x2039;nh

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

đ?&#x2018;&#x2020;đ?&#x2018;Ľ lĂ diáť&#x2021;n tĂ­ch/chiáť u cao peak mẍu tháť­.

Trong Ä&#x2018;Ăł: đ?&#x2018;&#x152; lĂ diáť&#x2021;n tĂ­ch hay chiáť u cao peak đ?&#x2018;&#x17D; lĂ giao Ä&#x2018;iáť&#x192;m cᝧa Ä&#x2018;Ć°áť?ng chuẊn váť&#x203A;i tr᝼c tung đ?&#x2018;? lĂ Ä&#x2018;áť&#x2122; dáť&#x2018;c cᝧa Ä&#x2018;Ć°áť?ng chuẊn 29

Ä?Ăłng gĂłp PDF báť&#x;i GV. Nguyáť&#x2026;n Thanh TĂş

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

C lànồng độ của chất thử Dựa vào phương trình đường chuẩn để tính nồng độ chất thử. Chú ý độ lớn diện tích hay chiều cao peak của chất thử phải nằm trong đường chuẩn.

Ơ

Khoảng tuyến tính và đường chuẩn (Linearity and Calibration curve)

-

Giới hạn phát hiện (Limit of Detection – LOD)

-

Giới hạn định lượng (Limit of Quantitation – LOQ)

-

Độ đúng (Trueness)

-

Độ chụm (Precision)

-

Độ vững (ổn định) của phương pháp (Robustness/Ruggedness)

10 00

A

Ó

-H

Ý

-L

ÁN

Việc lựa chọn các thông số thẩm định tùy thuộc vào kỹ thuật áp dụng trong phương pháp, yêu cầu của phương pháp, điều kiện và nguồn lực của phòng thử nghiệm... Từng trường hợp cụ thể các thông số thẩm định có thể có sự khác nhau. Do giới hạn về về thời gian và điều kiện PTN, đề tài chỉ tiến hành khảo sát một số thông số sau.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

-

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Tính đặc hiệu, tính chọn lọc (Specifility/Selectivity)

B

-

TO ÀN Đ

IỄ N D

TR ẦN

Theo các quy định của USFDA, AOAC, USP và ICH, đối với các phương pháp phân tích hóa học các thông số cần thẩm định bao gồm:

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q

H Ư

N

G

Đ ẠO

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

N

H

Thẩm định phương pháp là sự khẳng định bằng việc kiểm tra và cung cấp bằng chứng khách quan chứng minh rằng phương pháp đó đáp ứng được các yêu cầu đặt ra. Kết quả của thẩm định phương pháp có thể được sử dụng để đánh giá chất lượng, độ tin cậy của kết quả phân tích. Thẩm định phương pháp phân tích là một phần không thể thiếu nếu muốn có một kết quả phân tích đáng tin cậy. Hiện nay nhiều thuật ngữ khác nhau được sử dụng để chỉ khái niệm trên, như định trị phương pháp, đánh giá phương pháp, xác nhận giá trị sử dụng của phương pháp, phê duyệt phương pháp. Tất cả các thuật ngữ này đều là cách gọi khác nhau của thẩm định phương pháp (method validation).

N

2.5.6 Các thông số đánh giá phương pháp [17]

2.5.6.1 Khoảng tuyến tính Khoảng tuyến tính của một phương pháp phân tích là khoảng nồng độ ở đó có sự phụ thuộc tuyến tính giữa đại lượng đo được và nồng độ chất phân tích.

30

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

A

Việc xác định khoảng tuyến tính thường được khảo sát bắt đầu từ giới hạn định lượng (điểm thấp nhất) và kết thúc là giới hạn tuyến tính (điểm cao nhất). Nói chung, để xác định khoảng tuyến tính cần khoảng 10 (tối thiểu là 6) nồng độ khác nhau. Để xác định khoảng tuyến tính cần thực hiện đo các dung dịch chuẩn có nồng độ thay đổi và khảo sát sự phụ thuộc của tín hiệu vào nồng độ. Vẽ đường cong phụ thuộc giữa tín hiệu đo và nồng độ, sau đó quan sát sự phụ thuộc cho đến khi không còn tuyến tính.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

10 00

B

Khoảng tuyến tính dài hay ngắn phụ thuộc vào nhiều yếu tố, trong đó quan trọng nhất là bản chất của chất phân tích và kỹ thuật sử dụng. Các chất khác nhau có khoảng tuyến tính khác nhau do sự khác nhau về tính chất lý hóa. Trong khi các kỹ thuật sử dụng khác nhau ảnh hưởng lớn đến độ dài ngắn của khoảng tuyến tính.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

TR ẦN

Hình 2.22 Khoảng tuyến tính và khoảng làm việc

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q H Ư

N

G

Đ ẠO

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

N

H

Ơ

N

Khoảng làm việc của một phương pháp phân tích là khoảng nồng độ giữa giới hạn trên và giới hạn dưới của chất phân tích (bao gồm cả các giới hạn này), tại đó được chứng minh là có thể xác định được bởi phương pháp nhất định với độ đúng, độ chính xác và độ tuyến tính như đã nêu.

Sau khi xác định khoảng tuyến tính cần xây dựng đường chuẩn và xác định hệ số hồi quy tương quan. Trong phân tích thực tế, có thể xây dựng các đường chuẩn ngắn, trùm lên vùng nồng độ trong mẫu, không nhất thiết phải lập đường chuẩn toàn bộ khoảng tuyến tính. Nồng độ trong mẫu không được vượt ra ngoài giới hạn cao nhất và thấp nhất của đường chuẩn và tốt nhất phải nằm ở vùng giữa đường chuẩn.

2.5.6.2 Giới hạn phát hiện – giới hạn định lượng

31

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Ơ

Y

N

H

Giới hạn định lượng LOQ là nồng độ tối thiểu của một chất có trong mẫu thử mà ta có thể định lượng bằng phương pháp khảo sát và cho kết quả có độ chụm mong muốn. LOQ chỉ áp dụng cho các phương pháp định lượng.

N

Giới hạn phát hiện LOD là nồng độ mà tại đó giá trị xác định được lớn hơn độ không đảm bảo đo của phương pháp. Đây là nồng độ thấp nhất của chất phân tích trong mẫu có thể phát hiện được nhưng chưa thể định lượng được (đối với phương pháp định lượng).

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

Trong nhiều trường hợp các phép thử nghiệm trên những đối tượng và với những điều kiện khác nhau thường không cho kết quả giống nhau. Điều này do các sai số ngẫu nhiên của mỗi quy trình gây ra, ta không thể kiểm soát được hoàn toàn tất cả các yếu tố ảnh hưởng đến kết quả thử nghiệm. Do đó, để kiểm soát được các sai số này, phải dùng đến khái niệm độ chụm.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

-H

2.5.6.5 Độ lặp lại

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Ó

A

10 00

B

Trong nhiều trường hợp không thể tìm hoặc áp dụng một phương pháp tiêu chuẩn để so sánh kết quả, cũng như không thể dễ dàng có được các mẫu chuẩn hoặc mẫu chuẩn được chứng nhận phù hợp với phương pháp. Việc xác định độ đúng có thể được thực hiện thông qua xác định độ thu hồi (còn gọi là độ tìm lại) của phương pháp.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

TR ẦN

2.5.6.4 Hiệu suất thu hồi

H Ư

N

G

Đ ẠO

TP

Độ chệch là một đại lượng đặc trưng cho độ đúng. Độ đúng của phương pháp là khái niệm chỉ mức độ gần nhau giữa giá trị trung bình của kết quả thử nghiệm và giá trị thực hoặc giá trị được chấp nhận là đúng. Đối với đa số mẫu phân tích, giá trị thực không thể biết một cách chính xác, tuy nhiên nó có thể có một giá trị quy chiếu được chấp nhận là đúng (gọi chung là giá trị đúng). Độ đúng là một khái niệm định tính nên được biểu diễn bằng độ chệch.

IỄ N D

U .Q

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

2.5.6.3 Độ chệch (bias)

Độ chụm chỉ phụ thuộc vào sai số ngẫu nhiên và không liên quan đến giá trị thực. Độ chụm là một khái niệm định tính và được biểu thị định lượng bằng độ lệch chuẩn hay hệ số biến thiên. Độ chụm càng thấp thì độ lệch chuẩn hay hệ số biến thiên càng lớn. Độ lặp lại là độ chụm của phương pháp trong trường hợp phân tích trên các nền mẫu và nồng độ khác nhau bởi cùng một thiết bị, người phân tích, dụng cụ, hóa chất, điều kiện môi trường và phòng thử nghiệm.

32

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Độ chụm thay đổi theo nồng độ chất phân tích. Nồng độ chất càng thấp thì kết quả càng dao động nhiều (không chụm) nghĩa là RSD càng lớn.

2.5.7 Ưu, nhược điểm

Có nhiều loại đầu dò để phân tích.

-

Giới hạn định lượng thấp.

-

Không cần làm bay hơi mẫu.

-

Độ phân giải cao nhờ quá trình tách trên cột.

-

Độ nhạy cao (ppm-ppb) nhờ đầu dò.

-

Thể tích mẫu phân tích nhỏ (1-100 L)

-

Dung môi sử dụng phải có độ tinh khiết cao (LC/MS, LC/MS/MS)

-

Mất thời gian để rửa cột sau khi phân tích.

-

Thiết bị rất đắt tiền.

10 00

A

Ó

-H

-L

Ý

2.5.8 Ứng dụng

-

Phân tích các chỉ tiêu ở hàm lượng siêu vết (ppb/ppt)

-

Phân tích dư lượng các loại kháng sinh thuộc nhóm A (theo quy định của châu Âu) như chloramphenicol, các dẫn xuất nitrofuran, malachite green hay các chất trong nhóm B như họ tetracylienes, họ sulfonamides, nhóm avermectin… Trong thủy sản, thức ăn chăn nuôi, thực phẩm và môi trường…

-

Các loại vitamin trong thực phẩm, đặc biệt trong các nền mẫu phức tạp, có hàm lượng thấp như sữa, mì gói…

-

Dư lượng thuốc trừ sâu nhóm carbamate, diệt cỏ, diệt nấm trong

Đ

ÀN

TO

ÁN

Phương pháp LC/MS/MS có thể dùng để:

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Phải mất thời gian ổn định cột trước khi tiêm mẫu.

B

-

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

TP Đ ẠO G

N

H Ư

2.5.7.2 Nhược điểm

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

-

IỄ N D

U

Cột sắc ký có thể sử dụng lại nhiều lần.

.Q

-

TR ẦN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

Y

N

H

Có thể phân tích được các hợp chất cao phân tử và ion thuộc nhiều lĩnh vực, có thể tách được các hợp chất có độ phân cực gần nhau, các hợp chất tự nhiên không bền, các hợp chất kém bền nhiệt…

Ơ

N

2.5.7.1 Ưu điểm

33

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

D

ÀN

Đ

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

A

Ó

-H B

10 00 TR ẦN G

N

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Ý

-L

TP

Y

U

.Q

N

Ơ

H

N

-

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

TO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

nông thủy hải sản…

Hormone tăng trưởng (họ β-agonist, clenbuterol, salbutamol…) trong thịt gia súc, thủy hải sản…

34

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

CHƯƠNG 3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Phương tiện nghiên cứu

Ơ

Y

N

H

Địa điểm thực hiện: Trung Tâm Phân Tích và Giám Định Vinacert Control Cần Thơ. Địa chỉ: F2-62-63, đường số 6, khu dân cư 586, phường Phú Thứ, quận Cái Răng, Thành phố Cần Thơ.

N

3.1.1 Địa điểm và thời gian thực hiện

-

Máy lắc OS – 340C

-

Máy trộn Vortex VM –1000

-

Bể điều nhiệt

-

Máy thổi khí nitrogen

-

Lọ đựng mẫu vial

-

Cân phân tích

-

Ống thử nghiệm Falcon bằng nhựa 50ml,30x115mm

-

Micropipete 10-100µL, Micropipete 100-1000µL, Micropipete 5005000 µL đã được hiệu chỉnh, đầu tip Micropipet

-

Syringe Filters PTFE 0.45µm

-

Kim tiêm

-

Giấy lọc

-

Hệ thống lọc pha động

-

Và các dụng cụ thí nghiệm khác

G N H Ư

TR ẦN

B 10 00

A

Ó

-H

Ý

-L

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Máy ly tâm lạnh NIKRO 220R

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

U

Máy sắc ký lỏng ghép khối phổ LC/MS/MS AB Sciex QTRAP4500

Đ ẠO

-

ÁN TO ÀN Đ

IỄ N D

TP

3.1.2 Thiết bị và dụng cụ

.Q

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

Thời gian thực hiện: từ tháng 9 đến tháng 11 năm 2015.

3.1.3 Hóa chất 3.1.3.1 Hóa chất cần sử dụng -

Methanol

J.T.Baker

-

Ethanol

J.T.Baker

-

Formic Acid

J.T.Baker

-

Water LC/MS

J.T.Baker

-

Nước cất siêu sạch

J.T.Baker 35

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DấyKèmQuyNhƥn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

BHT

Sunpelco

-

Potassium hydroxide

Fisher

-

Hexane

J.T.Baker

-

ChuẊn cholecalciferol

Sunpelco

-

Amonium Acetate

Merck

H

Ć

N

-

N

3.1.3.2 Hóa chẼt pha chế

Amonium acetate 5mM 0,03% FA trong H2O (tháť&#x192; tĂ­ch 500 mL): Cân 0,1927 g amonium acetate, hòa tan trong nĆ°áť&#x203A;c LC/MS, cho vĂ o bĂŹnh Ä&#x2018;áť&#x2039;nh mᝊc 500 mL, thĂŞm 150 đ?&#x153;&#x2021;L acid formic, Ä&#x2018;áť&#x2039;nh mᝊc Ä&#x2018;áşżn vấch váť&#x203A;i nĆ°áť&#x203A;c LC/MS, khuẼy tᝍ, láť?c báşąng háť&#x2021; tháť&#x2018;ng láť?c pha Ä&#x2018;áť&#x2122;ng, cho vĂ o bĂŹnh thᝧy tinh 500 mL, siĂŞu âm 30 phĂşt.

-

Amonium acetate 5mM 0,03% FA trong methanol (tháť&#x192; tĂ­ch 500 mL): Cân 0,1927 g ammonium acetate, hòa tan trong methanol, cho vĂ o bĂŹnh Ä&#x2018;áť&#x2039;nh mᝊc 500 mL, thĂŞm 150 đ?&#x153;&#x2021;L acid formic, Ä&#x2018;áť&#x2039;nh mᝊc Ä&#x2018;áşżn vấch váť&#x203A;i methanol, khuẼy tᝍ, láť?c báşąng háť&#x2021; tháť&#x2018;ng láť?c pha Ä&#x2018;áť&#x2122;ng, cho vĂ o bĂŹnh thᝧy tinh 500 mL, siĂŞu âm 30 phĂşt.

-

KOH 60% (tháť&#x192; tĂ­ch 200 mL): cân 120 g KOH, hòa tan trong nĆ°áť&#x203A;c cho vĂ o bĂŹnh Ä&#x2018;áť&#x2039;nh mᝊc 200 mL, Ä&#x2018;áť&#x2039;nh mᝊc Ä&#x2018;áşżn vấch váť&#x203A;i nĆ°áť&#x203A;c, cho vĂ o bĂŹnh thᝧy tinh 200 mL, siĂŞu âm 20 phĂşt.

-

BHT 0,02% trong ethanol (tháť&#x192; tĂ­ch 250 mL): cân 0,05000 g BHT trong giẼy cân, cho vĂ o bĂŹnh Ä&#x2018;áť&#x2039;nh mᝊc 250 mL, trĂĄng giẼy cân nhiáť u lần váť&#x203A;i ethanol, Ä&#x2018;áť&#x2039;nh mᝊc Ä&#x2018;áşżn vấch váť&#x203A;i ethanol, cho vĂ o bĂŹnh thᝧy tinh 500 mL, siĂŞu âm 20 phĂşt.

-

Methanol90% (tháť&#x192; tĂ­ch 200 mL): DĂšng áť&#x2018;ng Ä&#x2018;ong 200 mL Ä&#x2018;ong 180 mL methanol vĂ 20 mL nĆ°áť&#x203A;c cẼt cho vĂ o bĂŹnh thᝧy tinh 200 mL, lắc Ä&#x2018;áť u, siĂŞu âm 20 phĂşt.

3.2 Phưƥng phåp nghiên cᝊu

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Máť&#x152;I YĂ&#x160;U CẌU GᝏI Váť&#x20AC; Háť&#x2DC;P MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Dáş Y KĂ&#x2C6;M QUY NHĆ N OFFICIAL ST&GT : Ä?/C 1000B TRẌN HĆŻNG Ä?áş O TP.QUY NHĆ N

.Q

G

N

H ĆŻ

TR ẌN

B

10 00

A

Ă&#x201C;

-H

Ă?

-L

Ă N TO Ă&#x20AC;N Ä?

Iáť&#x201E; N D

Ä? áş O

TP

NĆĄi báť&#x201C;i dưᝥng kiáşżn thᝊc ToĂĄn - LĂ˝ - HĂła cho háť?c sinh cẼp 2+3 / Diáť&#x2026;n Ä?Ă n ToĂĄn - LĂ˝ - HĂła Quy NhĆĄn 1000B Trần HĆ°ng Ä?ấo Tp.Quy NhĆĄn Táť&#x2030;nh BĂŹnh Ä?áť&#x2039;nh

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

-

3.2.1 PhĆ°ĆĄng phĂĄp thu mẍu [19] Ä?áť tĂ i Ä&#x2018;ưᝣc tiáşżn hĂ nh trĂŞn 20 mẍu sᝯa báť&#x2122;t Ä&#x2018;ưᝣc thu mua tấi cĂĄc cáť­a hĂ ng tấp hĂła trĂŞn Ä&#x2018;áť&#x2039;a bĂ n thĂ nh pháť&#x2018; Cần ThĆĄ. CĂĄc mẍu sᝯa Ä&#x2018;ưᝣc bảo quản áť&#x; nĆĄi khĂ´ rĂĄo, trĂĄnh ĂĄnh sĂĄng mạt tráť?i. Káťš thuáş­t thu vĂ lẼy mẍu Ä&#x2018;ưᝣc ĂĄp d᝼ng theo TCVN 6400:1998 (ISO 707:1997).

36

Ä?Ăłng gĂłp PDF báť&#x;i GV. Nguyáť&#x2026;n Thanh TĂş

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Bảng 3.1Thông tin của các loại sữa bột được sử dụng trong đề tài

Ơ H

ÁN

a)

Dung dịch chuẩn gốc ppm

Đ

ÀN

TO

Cân chính xác 1000 mg chuẩn Cholecalciferol (99,99%), định mức thành 10 mL bằng dung dịch ethanol. Chuẩn được lưu giữ ở nhiệt độ 2–8◦C. b)

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Ó -H

-L

Ý

3.2.2.1 Chuẩn bị dung dịch chuẩn

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

G

Đ ẠO

TP

.Q

U

Y

N

01/11/2015 01/11/2015 01/11/2015 01/11/2015 01/11/2015 01/11/2015 01/11/2015 01/11/2015 01/11/2015 01/11/2015 01/11/2015 01/11/2015 01/11/2015 01/11/2015 01/11/2015 01/11/2015 01/11/2015 01/11/2015 01/11/2015 01/11/2015

N

Ngày thu mẫu

N

H Ư

TR ẦN B

10 00

Anlene Anlene Gold Dielac Alpha Dielac Alpha Gold Fam X.O Nestle Milo α-Milk α-Milk Gold NuVita Nuti IQ Ensure Dielac Grow Friso Gold Dutch Lady Ovaltine Pedia Sure Abbott Grow Enfamil A+ Similac Gain Nan Pro

Hàm lượng trên bao bì (ppb) 83 167 52 103 200 45,25 37,5 50 75 75 60 65 85 130 75 75 150 80 95 90

3.2.2 Phương pháp phân tích

IỄ N D

Tên sữa

A

PM01 PM02 PM03 PM04 PM05 PM06 PM07 PM08 PM09 PM10 PM11 PM12 PM13 PM14 PM15 PM16 PM17 PM18 PM19 PM20

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

Ký hiệu

Dung dịch chuẩn trung gian

- Chuẩn trung gian 100 ppm: hút 1mL dung dịch chuẩn 1000 ppm cho vào bình định mức 10 mL bằng methanol.

- Chuẩn trung gian 10 ppm: hút 1 mL dung dịch chuẩn 100 ppm cho vào bình định mức 10 mL bằng methanol.

- Chuẩn trung gian 1 ppm: hút 1 mL dung dịch chuẩn 10 ppm cho vào bình định mức 10 mL bằng methanol.

37

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

- Chuẩn trung gian 100 ppb: hút 1 mL dung dịch chuẩn 1 ppm cho vào bình định mức 10 mL bằng methanol.

Các chuẩn trung gian được lưu giữ ở nhiệt độ 2–8◦C.

Ơ

N

- Chuẩn làm việc 10 ppb: hút 1 mL dung dịch chuẩn 100 ppb cho vào bình định mức 10 mL bằng methanol.

N

Dung dịch chuẩn làm việc

H

c)

H Ư

N

- Chuẩn làm việc 60 ppb: hút 60 µL dung dịch chuẩn 60 ppm cho vào vial, định mức đến 1 mL bằng methanol.

TR ẦN

- Chuẩn làm việc 80 ppb: hút 80 µL dung dịch chuẩn 1 ppm cho vào vial, định mức đến 1 mL bằng methanol.

10 00

B

- Chuẩn làm việc 120 ppb: hút 120 µL dung dịch chuẩn 1 ppm cho vào vial, định mức đến 1 mL bằng methanol.

Ó

A

- Chuẩn làm việc 140 ppb: hút 140 µL dung dịch chuẩn 1 ppm cho vào vial, định mức đến 1 mL bằng methanol.

Ý

-H

- Chuẩn làm việc 160 ppb: hút 160 µL dung dịch chuẩn 1 ppm cho vào vial, định mức đến 1 mL bằng methanol.

Các chuẩn làm việc được lưu giữ ở nhiệt độ 2–8◦C và được sử dụng trong ngày.

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

- Chuẩn làm việc 180 ppb: hút 180 µL dung dịch chuẩn 1 ppm cho vào vial, định mức đến 1 mL bằng methanol.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

G

- Chuẩn làm việc 40 ppb: hút 40 µL dung dịch chuẩn 1 ppm cho vào vial, định mức đến 1 mL bằng methanol.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

TP

- Chuẩn làm việc 30 ppb: hút 30 µL dung dịch chuẩn 1 ppm cho vào vial, định mức đến 1 mL bằng methanol.

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

- Chuẩn làm việc 20 ppb: hút 200 µL dung dịch chuẩn 100 ppbcho vào vial, định mức đến 1 mL bằng methanol.

38

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

3.2.2.2 Quy trình trích ly mẫu [20] Quy trình xử lý mẫu được tóm tắt bằng sơ đồ sau:

N

H

Ơ

N

Cân 1,00 g mẫu cho vào ống falcon 50 mL (được bọc giấy bạc chắn sáng).

Mẫu QC spike chuẩn 100 ppb

Ó

A

Gom dịch chiết vào ống falcon khác, rửa dịch chiết với 5 mL methanol 90%

-L

Ý

-H

Dịch chiết sau khi rửa được cho vào hủ bi (màu nâu), đem thổi khô

Đ

ÀN

TO

ÁN

Định mức lại bằng 1 mL methanol

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

10 00

B

Chiết với hexane, chiết 2 lần, mỗi lần 10 mL

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

TR ẦN

H Ư

N

G

Để yên mẫu ở nhiệt độ phòng trong khoảng 16 giờ

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q Đ ẠO

Vortex 1 phút, lắc 15 phút

IỄ N D

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

Thêm 10 mL BHT 0,02% và 3 mL KOH 60%

Vortex 30 giây, lọc dung dịch qua màng lọc PTFE 0,45 µm cho vào vial (màu nâu), đặt mẫu vào hệ thống sắc ký 3.2.2.3 Điều kiện chạy sắc ký [20,22] a) -

Điều kiện hệ thống HPLC Pha động: +A: 0,03% FA/5mM Amonium Acetate/H2O 39

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

+B: 0,03% FA/5mM Amonium Acetate/Methanol Chương trình gradient:

5

95

6

0,3

90

10

8

0,3

90

10

10

0,3

5

95

13

0,3

5

TP

Cột sắc ký: Zorbax Eclipse XDB – C18 Rapid Resolution 2,1×50mm, 3,5 µm

-

Nhiệt độ cột: 40◦C

-

Thể tích tiêm: 10 µL

H Ư

TR ẦN

B

Điều kiện hệ thống MS/MS Chế độ vận hành : ESI+

-

Ion source (nguồn tạo ion): ESI (+)

-

TEM: 500

-

GS1: 45

-

GS2: 45

-L

Ý

-H

Ó

A

10 00

-

Đ

ÀN

TO

ÁN

-

CUR: 10

-

IS: 5500

-

Scan type: MRM

-

CAD: Medium

-

MS:

Q1 Mass Q3 Mass (Da) (Da)

Time (msec)

ID

DP EP CE

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

-

G

Tốc độ dòng: 0,3 mL/phút

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

95

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

0,3

Ơ

4

H

95

N

5

Y

0,3

.Q

0

N

%B

U

%A

-

b)

IỄ N D

Flow (mL/phút)

N

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

Phút

Đ ẠO

-

CXP

385,3

107,2

400 Vitamin D3 1

45

10

34

13

385,3

259,0

400 Vitamin D3 2

45

10

20

13

40

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DấyKèmQuyNhƥn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

3.2.2.4 Phưƥng phåp tính toån kết quả Công thᝊc tính hà m lưᝣng vitamin D3 có trong mẍu:

Ć

N

đ?&#x2018;&#x2039;Ă&#x2014;đ?&#x2018;&#x2030; đ?&#x2018;&#x20AC;

H

đ??ś=

Y

N

Trong Ä&#x2018;Ăł:

Ă&#x201C;

Trong Ä&#x2018;Ăł:

A

đ?&#x2018;Ś = đ?&#x2018;&#x17D;đ?&#x2018;Ľ + đ?&#x2018;?

-H

a: giĂĄ tráť&#x2039; Ä&#x2018;áť&#x2122; dáť&#x2018;c slope

Ă?

b: giĂĄ tráť&#x2039; háť&#x2021; sáť&#x2018; chạn intercept

Ä?

Ă&#x20AC;N

TO

Ă N

-L

Háť&#x2021; sáť&#x2018; háť&#x201C;i quy tuyáşżn tĂ­nh: đ?&#x2018;&#x2026;=

â&#x2C6;&#x2018;(đ?&#x2018;Ľ â&#x2C6;&#x2019; đ?&#x2018;ĽĚ&#x2026; ) Ă&#x2014; (đ?&#x2018;Ś â&#x2C6;&#x2019; đ?&#x2018;ŚĚ&#x2026;) â&#x2C6;&#x161;â&#x2C6;&#x2018;(đ?&#x2018;Ľ â&#x2C6;&#x2019; đ?&#x2018;ĽĚ&#x2026; )2 Ă&#x2014; â&#x2C6;&#x2018;(đ?&#x2018;Ś â&#x2C6;&#x2019; đ?&#x2018;ŚĚ&#x2026;)2

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

10 00

B

ChuẊn báť&#x2039; dĂŁy náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; chuẊn (táť&#x2018;i thiáť&#x192;u 6 náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122;). XĂĄc Ä&#x2018;áť&#x2039;nh cĂĄc giĂĄ tráť&#x2039; Ä&#x2018;o Ä&#x2018;ưᝣc đ?&#x2018;Ś theo náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; đ?&#x2018;Ľ (lạp lấi 2 lần, lẼy giĂĄ tráť&#x2039; trung bĂŹnh). Náşżu sáťą ph᝼ thuáť&#x2122;c tuyáşżn tĂ­nh, ta cĂł khoảng khảo sĂĄt Ä&#x2018;Ć°áť?ng biáť&#x192;u diáť&#x2026;n lĂ máť&#x2122;t phĆ°ĆĄng trĂŹnh:

Dáş Y KĂ&#x2C6;M QUY NHĆ N OFFICIAL ST&GT : Ä?/C 1000B TRẌN HĆŻNG Ä?áş O TP.QUY NHĆ N

N

TR ẌN

a) Khảo såt khoảng tuyến tính

H ĆŻ

3.2.2.5 PhĆ°ĆĄng phĂĄp Ä&#x2018;ĂĄnh giĂĄ [18,21]

G

đ?&#x2018;&#x20AC;: Kháť&#x2018;i lưᝣng mẍu ban Ä&#x2018;ầu, g

Máť&#x152;I YĂ&#x160;U CẌU GᝏI Váť&#x20AC; Háť&#x2DC;P MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

TP

Ä? áş O

đ?&#x2018;&#x2030;: Tháť&#x192; tĂ­ch pha loĂŁng, mL

Iáť&#x201E; N D

U .Q

đ?&#x2018;&#x2039;: Náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; tĂ­nh toĂĄn Ä&#x2018;ưᝣc tᝍ diáť&#x2021;n tĂ­ch peak cᝧa mẍu váť&#x203A;i phĆ°ĆĄng trĂŹnh Ä&#x2018;Ć°áť?ng chuẊn, ppb

NĆĄi báť&#x201C;i dưᝥng kiáşżn thᝊc ToĂĄn - LĂ˝ - HĂła cho háť?c sinh cẼp 2+3 / Diáť&#x2026;n Ä?Ă n ToĂĄn - LĂ˝ - HĂła Quy NhĆĄn 1000B Trần HĆ°ng Ä?ấo Tp.Quy NhĆĄn Táť&#x2030;nh BĂŹnh Ä?áť&#x2039;nh

http://daykemquynhon.ucoz.com

đ??ś: HĂ m lưᝣng vitamin D3 cĂł trong mẍu, ppb

Váť&#x203A;i: 0,995 â&#x2030;¤ R â&#x2030;¤ 1 hay 0,99â&#x2030;¤ R2â&#x2030;¤ 1 b) Khảo sĂĄt giáť&#x203A;i hấn phĂĄt hiáť&#x2021;n vĂ giáť&#x203A;i hấn Ä&#x2018;áť&#x2039;nh lưᝣng CĆĄ sáť&#x;: dáťąa trĂŞn tᝡ láť&#x2021; tĂ­n hiáť&#x2021;u trĂŞn nhiáť&#x2026;u (S/N).

Tiáşżn hĂ nh phân tĂ­ch mẍu (mẍu tháť­, mẍu thĂŞm chuẊn hoạc mẍu chuẊn) Ă­t nhẼt 6 lần. XĂĄc Ä&#x2018;áť&#x2039;nh tᝡ láť&#x2021; tĂ­n hiáť&#x2021;u chia cho nhiáť&#x2026;u S/N: LOD chẼp nháş­n tấi náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; (hĂ m lưᝣng) tháť?a mĂŁn yĂŞu cầu 3 â&#x2030;¤ S/N â&#x2030;¤ 10 hoạc chẼp nháş­n tấi náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; mong muáť&#x2018;n váť&#x203A;i S/N > 3 41

Ä?Ăłng gĂłp PDF báť&#x;i GV. Nguyáť&#x2026;n Thanh TĂş

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DấyKèmQuyNhƥn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Nhiáť&#x2026;u Ä&#x2018;Ć°áť?ng náť n Ä&#x2018;ưᝣc tĂ­nh váť hai phĂ­a cᝧa Ä&#x2018;Ć°áť?ng náť n vĂ táť&#x2018;t nhẼt lĂ tĂ­nh nhiáť&#x2026;u lân cáş­n hai bĂŞn cᝧa pĂ­c, báť ráť&#x2122;ng máť&#x2014;i bĂŞn táť&#x2018;i thiáť&#x192;u gẼp 10 lần chiáť u ráť&#x2122;ng cᝧa pĂ­c tấi náť­a chiáť u cao.

Ć

N

LOQ Ä&#x2018;ưᝣc chẼp nháş­n tấi náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; mĂ tấi Ä&#x2018;Ăł tĂ­n hiáť&#x2021;u láť&#x203A;n gẼp 10-20 lần nhiáť&#x2026;u Ä&#x2018;Ć°áť?ng náť n, thĂ´ng thĆ°áť?ng thĆ°áť?ng lẼy S/N = 10.

N

H

LOQ = 3Ă&#x2014;LOD

R%: Ä?áť&#x2122; thu háť&#x201C;i, %

TR ẌN

đ??śđ?&#x2018;&#x161;+đ?&#x2018;? : Náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; chẼt phân tĂ­ch trong mẍu thĂŞm chuẊn đ??śđ?&#x2018;&#x161; : Náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; chẼt phân tĂ­ch trong mẍu tháť­

10 00

B

đ??śđ?&#x2018;? : Náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; chuẊn thĂŞm

Sau Ä&#x2018;Ăł tĂ­nh Ä&#x2018;áť&#x2122; thu háť&#x201C;i chung lĂ trung bĂŹnh cᝧa Ä&#x2018;áť&#x2122; thu háť&#x201C;i cĂĄc lần lĂ m lạp

A

lấi.

D

Iáť&#x201E; N

Ä?

Ă&#x20AC;N

TO

Ă N

-L

Ă?

-H

Ă&#x201C;

Sau khi Ä&#x2018;ĂĄnh giĂĄ Ä&#x2018;áť&#x2122; thu háť&#x201C;i, so sĂĄnh káşżt quả váť&#x203A;i cĂĄc giĂĄ tráť&#x2039; cho trong Bảng 3.2. Ä?áť&#x2122; thu háť&#x201C;i áť&#x; cĂĄc náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; khĂĄc nhau cĂł káťł váť?ng khĂĄc nhau.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

H ĆŻ

N

Trong Ä&#x2018;Ăł:

Máť&#x152;I YĂ&#x160;U CẌU GᝏI Váť&#x20AC; Háť&#x2DC;P MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

TP

Ä? áş O

đ??śđ?&#x2018;&#x161;+đ?&#x2018;? â&#x2C6;&#x2019; đ??śđ?&#x2018;&#x161; Ă&#x2014; 100 đ??śđ?&#x2018;?

G

đ?&#x2018;&#x2026;% =

Dáş Y KĂ&#x2C6;M QUY NHĆ N OFFICIAL ST&GT : Ä?/C 1000B TRẌN HĆŻNG Ä?áş O TP.QUY NHĆ N

.Q

ThĂŞm máť&#x2122;t lưᝣng chẼt chuẊn xĂĄc Ä&#x2018;áť&#x2039;nh vĂ o mẍu tháť­, phân tĂ­ch cĂĄc mẍu thĂŞm chuẊn Ä&#x2018;Ăł, lĂ m lạp lấi táť&#x2018;i thiáť&#x192;u báť&#x2018;n lần báşąng phĆ°ĆĄng phĂĄp khảo sĂĄt, tĂ­nh Ä&#x2018;áť&#x2122; thu háť&#x201C;i theo cĂ´ng thᝊc sau Ä&#x2018;ây:

NĆĄi báť&#x201C;i dưᝥng kiáşżn thᝊc ToĂĄn - LĂ˝ - HĂła cho háť?c sinh cẼp 2+3 / Diáť&#x2026;n Ä?Ă n ToĂĄn - LĂ˝ - HĂła Quy NhĆĄn 1000B Trần HĆ°ng Ä?ấo Tp.Quy NhĆĄn Táť&#x2030;nh BĂŹnh Ä?áť&#x2039;nh

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

c) Ä?ĂĄnh giĂĄ hiáť&#x2021;u suẼt thu háť&#x201C;i (Ä&#x2018;áť&#x2122; Ä&#x2018;Ăşng)

42

Ä?Ăłng gĂłp PDF báť&#x;i GV. Nguyáť&#x2026;n Thanh TĂş

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DấyKèmQuyNhƥn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Bảng 3.2 Ä?áť&#x2122; thu háť&#x201C;i chẼp nháş­n tấi cĂĄc náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; khĂĄc nhau (theo AOAC)

98-102

â&#x2030;Ľ 10

10-1

10%

98-102

â&#x2030;Ľ1

10-2

1%

97-102

â&#x2030;Ľ 0,1

10-3

0,1%

95-105

0,01

10-4

100ppm

90-107

0,001

10-5

10ppm

0,0001

10-6

1ppm

0,00001

10-7

100ppb

80-110

0,000001

10-8

10ppb

60-115

0,0000001

10-9

1ppb

40-120

Ć

100%

H

1

80-110

Hà m lưᝣng chẼt (¾g/kg)

Ä?ĆĄn váť&#x2039;

10 00

STT 1

â&#x2030;¤1

â&#x2030;¤ 1 ppb

50 â&#x20AC;&#x201C; 120

> 1 Ä&#x2018;áşżn < 10

1 â&#x20AC;&#x201C; 10 ppb

70 â&#x20AC;&#x201C; 110

â&#x2030;&#x2026; 10

â&#x2030;&#x2026; 10 ppb

80 â&#x20AC;&#x201C; 110

Ă&#x201C;

A

2

Ă?

-H

3

Ä?áť&#x2122; thu háť&#x201C;i (%)

Ä?

Ă&#x20AC;N

TO

Ă N

-L

d) TĂ­nh Ä&#x2018;áť&#x2122; cháť&#x2021;ch (Bias) â&#x2C6;&#x2020;=

đ?&#x2018;&#x2039;Ě&#x2026; â&#x2C6;&#x2019; đ?&#x153;&#x2021; Ă&#x2014; 100 đ?&#x153;&#x2021;

Trong Ä&#x2018;Ăł: â&#x2C6;&#x2020;: Ä?áť&#x2122; cháť&#x2021;ch (bias), %

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

TR ẌN

B

Bảng 3.3 Quy Ä&#x2018;áť&#x2039;nh váť Ä&#x2018;áť&#x2122; thu háť&#x201C;i cᝧa Háť&#x2122;i Ä&#x2018;áť&#x201C;ng châu Ă&#x201A;u

Máť&#x152;I YĂ&#x160;U CẌU GᝏI Váť&#x20AC; Háť&#x2DC;P MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

N

Ä? áş O

TP

80-110

Dáş Y KĂ&#x2C6;M QUY NHĆ N OFFICIAL ST&GT : Ä?/C 1000B TRẌN HĆŻNG Ä?áş O TP.QUY NHĆ N

.Q

U

Y

N

100

N

Ä?áť&#x2122; thu háť&#x201C;i (%)

G

Ä?ĆĄn váť&#x2039;

Trong trĆ°áť?ng hᝣp phân tĂ­ch cĂĄc chẼt hĂ m lưᝣng váşżt cĂł tháť&#x192; tham khảo tiĂŞu chuẊn cᝧa háť&#x2122;i Ä&#x2018;áť&#x201C;ng châu Ă&#x201A;u.

Iáť&#x201E; N D

Tᝡ láť&#x2021; chẼt

H ĆŻ

NĆĄi báť&#x201C;i dưᝥng kiáşżn thᝊc ToĂĄn - LĂ˝ - HĂła cho háť?c sinh cẼp 2+3 / Diáť&#x2026;n Ä?Ă n ToĂĄn - LĂ˝ - HĂła Quy NhĆĄn 1000B Trần HĆ°ng Ä?ấo Tp.Quy NhĆĄn Táť&#x2030;nh BĂŹnh Ä?áť&#x2039;nh

http://daykemquynhon.ucoz.com

Hà m lưᝣng (%)

đ?&#x2018;&#x2039;Ě&#x2026; : GiĂĄ tráť&#x2039; trung bĂŹnh cᝧa káşżt quả tháť­ nghiáť&#x2021;m đ?&#x153;&#x2021;: GiĂĄ tráť&#x2039; tháťąc hoạc giĂĄ tráť&#x2039; Ä&#x2018;ưᝣc chẼp nháş­n lĂ Ä&#x2018;Ăşng Theo quy Ä&#x2018;áť&#x2039;nh cᝧa nhiáť u táť&#x2022; chᝊc cᝧa Máťš, Canada, châu Ă&#x201A;u, giĂĄ tráť&#x2039; â&#x2C6;&#x2020; khĂ´ng Ä&#x2018;ưᝣc vưᝣt quĂĄ Âą15% cho tẼt cả cĂĄc náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122;, riĂŞng áť&#x; náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; LOQ cĂł tháť&#x192; chẼp nháş­n giáť&#x203A;i hấn Âą20%. e) Ä?áť&#x2122; lạp lấi 43

Ä?Ăłng gĂłp PDF báť&#x;i GV. Nguyáť&#x2026;n Thanh TĂş

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DấyKèmQuyNhƥn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Tiáşżn hĂ nh lĂ m thĂ­ nghiáť&#x2021;m lạp lấi nhiáť u lần (Ă­t nhẼt 6 lần) trĂŞn cĂšng máť&#x2122;t mẍu (mẍu thĂŞm chuẊn), giáť&#x2018;ng nhĆ° hiáť&#x2021;u suẼt thu háť&#x201C;i, tĂ­nh %RSD.

N H

đ?&#x2018;&#x2020;đ??ˇ Ă&#x2014; 100% đ?&#x2018;ĽĚ&#x2026;

N

đ?&#x2018;&#x2026;đ?&#x2018;&#x2020;đ??ˇ =

â&#x2C6;&#x2018;(đ?&#x2018;Ľđ?&#x2018;&#x2013; â&#x2C6;&#x2019; đ?&#x2018;ĽĚ&#x2026; )2 đ?&#x2018;&#x203A;â&#x2C6;&#x2019;1

Ć

đ?&#x2018;&#x2020;đ??ˇ = â&#x2C6;&#x161;

Y

100

100%

1,3

10-1

10%

1,8

10-2

1%

2,7

10-3

0,1%

3,7

10-4

100ppm

5,3

10-5

10ppm

7,3

0,0001

10-6

1ppm

11

0,00001

10-7

100ppb

15

0,000001

10-8

10ppb

21

0,0000001

10-9

1ppb

30

B 10 00

â&#x2030;Ľ1

TO

Ă&#x201C;

Ă N

-L

Ă?

0,001

-H

0,01

A

â&#x2030;Ľ 0,1

Ă&#x20AC;N

RSD %

1

â&#x2030;Ľ 10

Ä?

Ä?ĆĄn váť&#x2039;

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Tᝡ láť&#x2021; chẼt

TR ẌN

Hà m lưᝣng (%)

H ĆŻ

N

Bảng 3.3 Ä?áť&#x2122; lạp lấi táť&#x2018;i Ä&#x2018;a chẼp nháş­n tấi cĂĄc náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; khĂĄc nhau (theo AOAC)

Máť&#x152;I YĂ&#x160;U CẌU GᝏI Váť&#x20AC; Háť&#x2DC;P MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

G

đ?&#x2018;ĽĚ&#x2026; : GiĂĄ tráť&#x2039; trung bĂŹnh cᝧa cĂĄc lần tháť­ nghiáť&#x2021;m

Dáş Y KĂ&#x2C6;M QUY NHĆ N OFFICIAL ST&GT : Ä?/C 1000B TRẌN HĆŻNG Ä?áş O TP.QUY NHĆ N

U TP

Ä? áş O

xi: GiĂĄ tráť&#x2039; tĂ­nh Ä&#x2018;ưᝣc cᝧa lần tháť­ nghiáť&#x2021;m thᝊ i (hiáť&#x2021;u suẼt thu háť&#x201C;i hoạc hĂ m lưᝣng)

Iáť&#x201E; N D

.Q

n: sáť&#x2018; lần thĂ­ nghiáť&#x2021;m

NĆĄi báť&#x201C;i dưᝥng kiáşżn thᝊc ToĂĄn - LĂ˝ - HĂła cho háť?c sinh cẼp 2+3 / Diáť&#x2026;n Ä?Ă n ToĂĄn - LĂ˝ - HĂła Quy NhĆĄn 1000B Trần HĆ°ng Ä?ấo Tp.Quy NhĆĄn Táť&#x2030;nh BĂŹnh Ä?áť&#x2039;nh

http://daykemquynhon.ucoz.com

SD: Ä?áť&#x2122; láť&#x2021;ch chuẊn

RSD% tĂ­nh Ä&#x2018;ưᝣc khĂ´ng Ä&#x2018;ưᝣc láť&#x203A;n hĆĄn giĂĄ tráť&#x2039; trong bảng áť&#x; hĂ m lưᝣng chẼt tĆ°ĆĄng ᝊng.

3.2.2.6 PhĆ°ĆĄng phĂĄp xáť­ lĂ˝ sáť&#x2018; liáť&#x2021;u Sáť&#x2018; liáť&#x2021;u Ä&#x2018;ưᝣc xáť­ lĂ˝, tĂ­nh toĂĄn báşąng phần máť m Microsoft Excel.

44

Ä?Ăłng gĂłp PDF báť&#x;i GV. Nguyáť&#x2026;n Thanh TĂş

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

CHƯƠNG 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

Ơ

H

Pha chuẩn 100 ppb trong methanol từ chuẩn trung gian 1 ppm, tiến hành chạy sắc ký với các điều kiện và chương trình đã cài đặt, ta thu được sắc ký đồ như hình 4.1.

N

4.1 Sắc ký đồ của chuẩn vitamin D3

Peak chuẩn tương đối gọn và đẹp, ít bị chẻ ngọn, dãn rộng hay kéo đuôi.

A

Thời gian lưu ngắn, tiết kiệm thời gian phân tích.

-L

Ý

-H

Ó

Từ đó, ta có thể đánh giá các điều kiện và chương trình chạy sắc ký là phù hợp và cho kết quả khá tốt. Có thể áp dụng chạy trên mẫu để phân tích hàm lượng vitamin D3.

4.2.1 Kết quả đo các điểm chuẩn khảo sát Kết quả phân tích các điểm chuẩn vitamin D3 được tổng kết ở Bảng 4.1.

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

4.2 Khoảng tuyến tính

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

10 00

B

Nhận xét:

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Hình 4.1 Sắc ký đồ của chuẩn vitamin D3 nồng độ 100 ppb trong methanol

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q TR ẦN

H Ư

N

G

Đ ẠO

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

N

Hình 4.1 là sắc ký đồ của chuẩn vitamin D3 ở nồng độ 100 ppb được pha loãng trong methanol.

45

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Bảng 4.1 Tương quan giữa diện tích peak và nồng độ chuẩn của vitamin D3

1,51×105

2,45

2

40

3,57×105

2,47

3

60

5,50×105

2,48

4

80

7,26×105

5

100

9,27×105

6

120

1,08×106

7

140

1,20×106

8

160

1,26×106

9

180

Y 2,42

1,08×106

2,43

H Ư

2,43

10 00

B

Diện tích peak tăng dần khi tăng nồng độ chuẩn, ngoại trừ điểm chuẩn 180 ppb.

Thời gian lưu dao động trong khoảng từ 2,42 phút đến 2,49 phút.

Ó

A

4.2.2 Đồ thị các điểm chuẩn

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-H

4.2.2.1 Đồ thị các điểm chuẩn từ 20 ppb đến 120 ppb

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

2,42

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

U

2,45

N

G

Đ ẠO

TP

.Q

2,49

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Nhận xét:

Ơ

20

N

1

N

Thời gian lưu (phút)

H

Diện tích peak (counts)

TR ẦN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

STT Nồng độ chuẩn (ppb)

Hình 4.2 Đường chuẩn 20 ppb – 120 ppb

46

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

N

Nhận xét: đường chuẩn từ 20 ppb – 120 ppb có hệ số hồi quy tuyến tính R = 0,9992 hay R2 =0,998 , có giá trị R2 trong khoảng từ 0,99 – 1 do đó đồ thị rất tuyến tính, khoảng nồng độ đã khảo sát có giá trị diện tích peak phụ thuộc chặt chẽ với nồng độ.

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

4.2.2.3 Đồ thị các điểm chuẩn từ 20 ppb đến 160 ppb

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

A

10 00

B

Nhận xét: đường chuẩn từ 20 ppb – 140 ppb có hệ số hồi quy tuyến tính R = 0,9973 hay R2 = 0,994, có giá trị R2 trong khoảng từ 0,99 – 1 do đó đồ thị khá tuyến tính khoảng nồng độ đã khảo sát có giá trị diện tích peak phụ thuộc khá chặt chẽ với nồng độ.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Hình 4.3 Đường chuẩn 20 ppb – 140 ppb

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q TR ẦN

H Ư

N

G

Đ ẠO

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

N

H

Ơ

4.2.2.2 Đồ thị các điểm chuẩn từ 20 ppb đến 140 ppb

Hình 4.4 Đường chuẩn 20 ppb – 160 ppb Nhận xét: đường chuẩn từ 20 ppb – 160 ppb có hệ số hồi quy tuyến tính R = 0,9907 hay R2 = 0,98 không nằmtrong khoảng từ 0,99 – 1 do đó đồ thị ít 47

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

tuyến tính, khoảng nồng độ đã khảo sát có giá trị diện tích peak ít phụ thuộc chặt chẽ với nồng độ.

4.2.3 Kết luận khoảng tuyến tính

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

A

Vậy khoảng tuyến tính của chuẩn vitamin D3 là từ 20 ppb đến 160 ppb, trong đó đồ thị các điểm chuẩn từ 20 ppb đến 120 ppb đạt độ tuyến tính cao nhất.Theo khảo sát, hàm lượng vitamin D3 trong các loại sữa bột trên thị trường dao động từ 30 đến 200 ppb do đó khoảng tuyến tính này là phù hợp và có thể được áp dụng để phân tích hàm lượng vitamin D3 của các sản phẩm sữa trên thị trường. Riêng đối với các mẫu chứa hàm lượng vitamin D3 vượt ra khỏi khoảng tuyến tính, có thể tính toán hệ số pha loãng để đảm bảo phép phân tích định lượng được chính xác và hiệu quả nhất.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

10 00

B

TR ẦN

Nhận xét: đường chuẩn từ 20 ppb – 180 ppb có hệ số hồi quy tuyến tính R = 0,942 hay R2 = 0,887 không nằmtrong khoảng từ 0,99 – 1 do đó đồ thị không tuyến tính, khoảng nồng độ đã khảo sát có giá trị diện tích peak không phụ thuộc chặt chẽ với nồng độ.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

H Ư

Hình 4.5 Đường chuẩn 20 ppb – 180 ppb

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q N

G

Đ ẠO

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

N

H

Ơ

N

4.2.2.4 Đồ thị các điểm chuẩn từ 20 ppb đến 180 ppb

4.3 LOD và LOQ của phương pháp Giới hạn phát hiện của phương pháp được thực hiện phân tích trên nền mẫu thử, tại điểm nồng độ có tỷ lệ tín hiệu trên nhiễu nền > 3, thu được kết quả: LOD = 10 ppb.

48

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

N

H

Ơ

N

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

Y

2.20×104

0.70×104

6.28

2

4ppb

10 ppb

10.12

3.25×104

1.05×104

6.19

3

4ppb

10 ppb

10.07

2.25×104

0.85×104

5.29

4

4ppb

10 pbb

10.05

2.15×104

0.90×104

4.78

5

4ppb

10 ppb

9.99

2.10×104

0.65×104

6.46

6

4ppb

10 ppb

9.85

2.05×104

0.70×104

5.86

10 00

N

H Ư

A

Ó

-H

Ý

-L

Đ

ÀN

TO

ÁN

Theo Quy chuẩn kỹ thuật quốc gia do Bộ y tế ban hành năm 2011 đối với các các phẩm sữa lỏng, hàm lượng vitamin D3 tối thiểu trong các sản phẩm này là 6 ppb. Mà LOQ của phương pháp được khảo sát là 30 ppb do đó giới hạn định lượng của phương pháp này chỉ phù hợp để phân tích hàm lượng vitamin D3 trong các sản phẩm sữa bột.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

9.98

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

10 ppb

G

4 ppb

B

1

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

U TP

Đ ẠO

Chiều cao S/N nhiễu (h=2N)

Giới hạn định lượng của phương pháp được thực hiện phân tích trên nền mẫu thử, tại điểm nồng độ có tỷ lệ tín hiệu trên nhiễu nền > 10, ta thu được kết quả: LOQ = 30 ppb. Kết quả này phù hợp để phân tích trên nền mẫu sữa bột, theo khảo sát các loại sữa bột trên thị trường có hàm lượng vitamin D3 dao động từ 30 – 200 ppb.

IỄ N D

Hàm lượng Chiều cao tính toán peak được (ppb) (H=S)

TR ẦN

TT Hàm lượng Hàm lượng trong mẫu thêm chuẩn thử

.Q

Bảng 4.2 Thông tin khảo sát LOD của phương pháp

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

Hình 4.6 Sắc ký đồ khảo sát LOD của phương pháp

4.4 Hiệu suất thu hồi Tiến hành thí nghiệm trên 5 mẫu thử và 5 mẫu thêm chuẩn ở nồng độ 30 ppb, tính toán hàm lượng phân tích được từ đó tính toán hiệu suất thu hồi ta thu được các kết quả như ở Bảng 4.3.

49

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DấyKèmQuyNhƥn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Bảng 4.3 Hiáť&#x2021;u suẼt thu háť&#x201C;i cᝧa Vitamin D3

Ć

N

Hiáť&#x2021;u suẼt thu háť&#x201C;i (%)

77,1

107,67

2

49,7

75,7

86,67

46,2

75,1

4

49,4

76,2

89,33

5

44,4

77,7

111

Y

TR ẌN

H ĆŻ

N

Nháş­n xĂŠt:ta thẼy hiáť&#x2021;u suẼt thu háť&#x201C;i trung bĂŹnh qua 5 lần thĂ­ nghiáť&#x2021;m trĂŞn cho káşżt quả lĂ 98,2%, Ä&#x2018;áť&#x2122; thu háť&#x201C;i nĂ y náşąm trong khoảng chẼp nháş­n Ä&#x2018;ưᝣc (80 â&#x20AC;&#x201C; 110% tấi khoảng náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; 100ppb) do AOAC Ä&#x2018;áť ngháť&#x2039;. Do Ä&#x2018;Ăł phĆ°ĆĄng phĂĄp phân tĂ­ch Ä&#x2018;ất Ä&#x2018;ưᝣc hiáť&#x2021;u suẼt thu háť&#x201C;i khĂĄ cao.

B

4.5 Ä?áť&#x2122; lạp lấi

Ă&#x201C;

A

10 00

Dáťąa vĂ o káşżt quả hiáť&#x2021;u suẼt thu háť&#x201C;i cᝧa 5 mẍu tháť­ vĂ 5 mẍu Ä&#x2018;ưᝣc thĂŞm chuẊn 30 ppb, ta tĂ­nh toĂĄn giĂĄ tráť&#x2039; Ä&#x2018;áť&#x2122; láť&#x2021;ch chuẊn tĆ°ĆĄng Ä&#x2018;áť&#x2018;i %RSD, thu Ä&#x2018;ưᝣc káşżt quả Ä&#x2018;ưᝣc tĂłm tắt áť&#x; bảng 4.4.

-H

Bảng 4.4 Ä?áť&#x2122; lạp lấi cᝧa phĆ°ĆĄng phĂĄp

-L

Ă?

Náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; spike chuẊn

Hiáť&#x2021;u suẼt thu háť&#x201C;i (%)

Ä?áť&#x2122; láť&#x2021;ch chuẊn SD

TO

Ă N

Mẍu

107,67

Ă&#x20AC;N Ä?

11,01

86,67 PM03

30 ppb

D

Iáť&#x201E; N

10,82

Ä?áť&#x2122; láť&#x2021;ch chuẊn tĆ°ĆĄng Ä&#x2018;áť&#x2018;i RSD% hay háť&#x2021; sáť&#x2018; biáşżn thiĂŞn CV%

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

G

Hiáť&#x2021;u suẼt thu háť&#x201C;i trung bĂŹnh: 98,2%

Dáş Y KĂ&#x2C6;M QUY NHĆ N OFFICIAL ST&GT : Ä?/C 1000B TRẌN HĆŻNG Ä?áş O TP.QUY NHĆ N

U

96,33

.Q

TP

30

Ä? áş O

PM03

N

44,8

Máť&#x152;I YĂ&#x160;U CẌU GᝏI Váť&#x20AC; Háť&#x2DC;P MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; Náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; trong trong mẍu tháť­ mẍu thĂŞm chuẊn (ppb) (ppb)

H

Náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; thĂŞm chuẊn (ppb)

1

3

NĆĄi báť&#x201C;i dưᝥng kiáşżn thᝊc ToĂĄn - LĂ˝ - HĂła cho háť?c sinh cẼp 2+3 / Diáť&#x2026;n Ä?Ă n ToĂĄn - LĂ˝ - HĂła Quy NhĆĄn 1000B Trần HĆ°ng Ä?ấo Tp.Quy NhĆĄn Táť&#x2030;nh BĂŹnh Ä?áť&#x2039;nh

http://daykemquynhon.ucoz.com

STT Mẍu

96,33 89,33 111 đ?&#x2018;ĽĚ&#x2026; = 98,2

50

Ä?Ăłng gĂłp PDF báť&#x;i GV. Nguyáť&#x2026;n Thanh TĂş

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DấyKèmQuyNhƥn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Ć

N

Nháş­n xĂŠt: áť&#x17E; khoảng náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; nĂ y, theo AOAC RSD% táť&#x2018;i Ä&#x2018;a chẼp nháş­n Ä&#x2018;ưᝣc lĂ 15%. Qua cĂĄc thĂ­ nghiáť&#x2021;m trĂŞn 5 mẍu tháť­ vĂ 5 mẍu thĂŞm chuẊn, ta tĂ­nh Ä&#x2018;ưᝣc Ä&#x2018;áť&#x2122; láť&#x2021;ch chuẊn tĆ°ĆĄng Ä&#x2018;áť&#x2018;i (%RSD) hay háť&#x2021; sáť&#x2018; biáşżn thiĂŞn (%CV) cĂł giĂĄ tráť&#x2039; lĂ 11,01% nháť? hĆĄn 15%, ta cĂł tháť&#x192; thẼy phĆ°ĆĄng phĂĄp phân tĂ­ch cĂł Ä&#x2018;áť&#x2122; lạp lấi khĂĄ táť&#x2018;t hay cĂł Ä&#x2018;áť&#x2122; ch᝼m Ä&#x2018;ất yĂŞu cầu.

N

H

4.6 Ä?Ć°áť?ng chuẊn

Ă?

-H

Tᝍ Ä&#x2018;áť&#x201C; tháť&#x2039; trĂŞn ta thiáşżt láş­p Ä&#x2018;ưᝣc phĆ°ĆĄng trĂŹnh háť&#x201C;i quy tuyáşżn tĂ­nh nhĆ° sau:

-L

Nháş­n xĂŠt:

Ă N

Cháť&#x2030; tiĂŞu Ä&#x2018;ầu tiĂŞn cᝧa máť&#x2122;t Ä&#x2018;Ć°áť?ng chuẊn Ä&#x2018;ất yĂŞu cầu lĂ háť&#x2021; sáť&#x2018; tĆ°ĆĄng quan háť&#x201C;i quy hay háť&#x2021; sáť&#x2018; háť&#x201C;i quy tuyáşżn tĂ­nh (R). R phải Ä&#x2018;ất theo yĂŞu cầu sau: 0,995 â&#x2030;¤ R â&#x2030;¤ 1 hay 0,99 â&#x2030;¤ R2 â&#x2030;¤ 1 .Qua khảo sĂĄt khoảng tuyáşżn tĂ­nh cᝧa vitamin D3 cho ta phĆ°ĆĄng trĂŹnh háť&#x201C;i quy tuyáşżn tĂ­nh mĂ háť&#x2021; sáť&#x2018; tĆ°ĆĄng quan R = 0,9992 > 0,995, Ä&#x2018;iáť u nĂ y chᝊng táť?, khoảng náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; Ä&#x2018;ĂŁ khảo sĂĄt cĂł giĂĄ tráť&#x2039; diáť&#x2021;n tĂ­ch peak ph᝼ thuáť&#x2122;c chạt cháş˝ váť&#x203A;i náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122;.

TO Ă&#x20AC;N Ä?

Iáť&#x201E; N D

đ?&#x2018;Ś = 5716,9 Ă&#x2014; đ?&#x2018;Ľ â&#x2C6;&#x2019; 166645

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Ă&#x201C;

A

4.6.2 PhĆ°ĆĄng trĂŹnh háť&#x201C;i quy tuyáşżn tĂ­nh

Máť&#x152;I YĂ&#x160;U CẌU GᝏI Váť&#x20AC; Háť&#x2DC;P MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

10 00

HĂŹnh 4.7 Ä?áť&#x201C; tháť&#x2039; cĂĄc Ä&#x2018;iáť&#x192;m chuẊn Vitamin D3 tᝍ 20 ppb Ä&#x2018;áşżn 120 ppb trong methanol

Dáş Y KĂ&#x2C6;M QUY NHĆ N OFFICIAL ST&GT : Ä?/C 1000B TRẌN HĆŻNG Ä?áş O TP.QUY NHĆ N

.Q B

TR ẌN

H ĆŻ

N

G

Ä? áş O

TP

NĆĄi báť&#x201C;i dưᝥng kiáşżn thᝊc ToĂĄn - LĂ˝ - HĂła cho háť?c sinh cẼp 2+3 / Diáť&#x2026;n Ä?Ă n ToĂĄn - LĂ˝ - HĂła Quy NhĆĄn 1000B Trần HĆ°ng Ä?ấo Tp.Quy NhĆĄn Táť&#x2030;nh BĂŹnh Ä?áť&#x2039;nh

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

4.6.1 Ä?Ć°áť?ng chuẊn

4.7 Káşżt quả phân tĂ­ch hĂ m lưᝣng vitamin D3 trĂŞn cĂĄc mẍu sᝯa Tiáşżn hĂ nh phân tĂ­ch hĂ m lưᝣng vitamin D3 cᝧa 20 mẍu tháş­t, dáťąa vĂ o Ä&#x2018;Ć°áť?ng chuẊn Ä&#x2018;ĂŁ xây dáťąng, tĂ­nh toĂĄn hĂ m lưᝣng phân tĂ­ch thĂ´ng qua phần máť m microsoft excel, ta thu Ä&#x2018;ưᝣc cĂĄc káşżt quả Ä&#x2018;ưᝣc tĂłm tắt áť&#x; Bảng 4.5.

51

Ä?Ăłng gĂłp PDF báť&#x;i GV. Nguyáť&#x2026;n Thanh TĂş

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Bảng 4.5 Kết quả phân tích hàm lượng vitamin D3 trên các mẫu sữa

74,9

PM02

2,26

5,71×105

129

PM03

2,22

1,91×105

47

PM04

2,22

2,46×105

PM05

2,25

4,74×105

PM06

2,22

2,34×105

PM07

2,25

1,97×104

PM08

2,19

4,58×104

PM09

2,26

1,72×105

PM10

2,19

2,00×105

PM11

2,26

2,19×105

50,6

PM12

2,25

1,66×105

58,2

PM13

2,24

2,66×105

75,6

PM14

2,26

4,91×105

115

2,18

2,31×105

69,6

2,27

1,83×105

61,1

2,19

6,1×105

136

PM18

2,28

2,04×105

64,9

PM19

2,16

2,92×105

80,1

PM20

2,26

3,16×105

84,4

Ó -H

N

Y U

173

35,1 32,7 37,2 59,2

D

IỄ N

Đ

64,1

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

A

10 00

B

TR ẦN

H Ư

N

G

Đ ẠO

TP

.Q

90,1

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

TO

-L

PM17

Ý

PM16

Ơ

1,76×105

H

2,16

N

Hàm lượng tính được (ppb)

PM01

PM15

ÀN

Diện tích peak

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Thời gian lưu (phút)

ÁN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

Mẫu

52

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Nhận xét: 100% các loại sữa phân tích đều chứa một hàm lượng vitamin D3 xác định, hàm lượng trung bình của 20 mẫu phân tích là 76,89 ppb.

Ơ

N

H

Lấy giá trị hàm lượng vitamin D3 trên bao bì là giá trị gần đúng, tiến hành tính toán độ chệch để đánh giá độ chính xác của phương pháp phân tích, tathu được kết quả như sau:

N

4.8 Độ chệch

Y 47

-9,62

Đạt

PM04

103

90,1

-12,52

Đạt

PM05

200

173

-13,50

Đạt

PM06

45,25

35,1

-22,43

Không đạt

PM07

37,5

32,7

-12,8

Đạt

PM08

50

37,2

-25,6

Không đạt

PM09

75

59,2

-21,07

Không đạt

75

64,1

-14,53

Đạt

60

50,6

-15,67

Đạt

PM12

65

58,2

-10,46

Đạt

85

75,6

-11,06

Đạt

PM14

130

115

-11,54

Đạt

PM15

75

69,6

-7,20

Đạt

PM16

75

61,1

-18,53

Đạt

PM17

150

136

-9,33

Đạt

PM18

80

64,9

-18,88

Không đạt

PM19

95

80,1

-15,68

Không đạt

PM20

90

84,4

-6,22

Đạt

H Ư TR ẦN B

Ó -H

-L

TO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

52

.Q

Không đạt

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

PM03

TP

-22,75

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

129

PM13

ÀN

U

167

Đ ẠO

Đạt

G

-9,76

N

PM02

Đánh giá

10 00

74,9

Độ chệch (%)

A

83

PM11

Đ

Giá trị thực phân tích (ppb)

PM01

PM10

IỄ N D

Giá trị đúng (ppb)

ÁN

Mẫu

Ý

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

Bảng 4.6 Độ chệch của phương pháp

53

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Nhận xét:

Ơ https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

A

10 00

B

TR ẦN

H Ư

N

G

Đ ẠO

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

N

H

Nguyên nhân có sự chênh lệch giữa hàm lượng phân tích được và hàm lượng ghi trên bao bì là do lượng vitamin D được bổ sung vào các loại sữa thường bao gồm cả 2 dạng vitamin D2 và vitamin D3 trong khi phương pháp chỉ phân tích hàm lượng vitamin D3, hơn nữa không thể đảm bảo độ đồng nhất của vitamin D3 trong sữa là 100% và các thao tác xử lý mẫu, định mức… cũng có thể làm thất thoát lượng chất phân tích.

N

Độ chệch của hàm lượng phân tích được so với hàm lượng ghi trên bao bì của 20 mẫu thực có kết quả 14 trên 20 mẫu phù hợp với tiêu chuẩn do USFDA quy định là độ chệch của các phương pháp phải không được lớn hơn ±15%, giá trị này là chấp nhận được cho phương pháp phân tích vi lượng.

54

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

CHƯƠNG 5 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận

Ơ

-

Quy trình xử lý mẫu khá đơn giản, ít tốn kém hóa chất, tiết kiệm được thời gian và chi phí.

G

N

H Ư

TR ẦN

Khoảng tuyến tính khảo sát được là từ 20 ppb đến 160 ppb, kết quả này khá phù hợp để áp dụng vào phân tích thực tiễn vì các loại sữa bột có trên thị trường có hàm lượng vitamin D3 dao động từ 30 ppb đến 200 ppb.

-

Đường chuẩn sử dụng tính toán được xây dựng ở các điểm nồng độ 20 ppb, 40 ppb, 60 ppb, 80 ppb, 100 ppb, 120 ppb, có hệ số tuyến tính R = 0,9992, giá trị này là đạt chuẩn do AOAC quy định (R > 0,995). Chứng tỏ trong khoảng đường chuẩn đã khảo sát, chất phân tích có giá trị diện tích peak phụ thuộc chặt chẽ với nồng độ.

-

Giới hạn phát hiện LOD và giới hạn định lượng LOQ của phương pháp được xác định dựa vào tỷ lệ tín hiệu trên nhiễu (S/N), cho kết quả LOD = 10ppb và LOQ = 30 ppb. Phương pháp phân tích này chỉ phù hợp để phân tích hàm lượng vitamin D3 trong sữa bột do hàm

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-

-H

Ó

A

10 00

B

Tiến hành đánh giá quy trình phân tích thông qua một số chỉ tiêu thẩm định cơ bản như độ tuyến tính, độ đúng, độ chụm, giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng của phương pháp, ta thu được kết quả đa số các chỉ tiêu đều đạt chuẩn AOAC, thích hợp cho phân tích hàm lượng vitamin D3 trong sữa bột.

Kết quả cụ thể như sau:

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Peak sắc ký của chuẩn cũng như mẫu phân tích khá gọn và đẹp, ít bị chẻ ngọn, dãn rộng hay kéo đuôi, nhiễu nền tương đối ít, tuy nhiên vẫn còn tạp chất.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

-

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q

Thời gian lưu của mẫu là 2,16 – 2,18 phút, sớm hơn thời gian lưu của chuẩn là 2,42 – 2,49 phút, tuy nhiên thời gian lưu chênh lệch không nhiều, có thể chấp nhận được.

IỄ N D

TP

-

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

N

H

Khảo sát sơ bộ một số quy trình xác định hàm lượng vitamin D 3 trong sữa bằng phương pháp sắc ký lỏng ghép hai lần khối phổ LC/MS/MS. Chọn lựa quy trình ly trích mẫu là xà phòng hóa ở nhiệt độ phòng - chiết với hexane, điều kiện chạy sắc ký phù hợp với điều kiện phòng thí nghiệm và cho kết quả khá tốt:

N

Đề tài đã đạt được một số kết quả sau:

55

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

-

Đánh giá độ chụm của phương pháp bằng độ lặp lại dựa trên thông số độ lệch chuẩn tương đối %RSD ta thu được giá trị %RSD = 11,01%. Điều này cho thấy kết quả dao động khá nhiều, tuy nhiên vẫn nằm trong khoảng cho phép của AOAC là không lớn hơn 15% tại khoảng nồng độ khảo sát. Như vậy phương pháp áp dụng có độ chụm đạt yêu cầu.

Ơ

Việc xác định độ đúng được thực hiện bằng cách xác định độ thu hồi (còn gọi là độ tìm lại) của phương pháp. Hiệu suất thu hồi trung bình qua 5 lần thí nghiệm có giá trị là 98,2%, độ thu hồi này nằm trong khoảng chấp nhận được (80 – 110% tại khoảng nồng độ 100ppb) do AOAC đề nghị. Do đó phương pháp phân tích đạt được hiệu suất thu hồi khá cao.

-L

5.2 Kiến nghị

Đ

ÀN

TO

ÁN

Do còn hạn chế về thời gian nên đề tài chỉ nghiên cứu trên một loại nền mẫu, khảo sát cụ thể bằng một quy trình xử lý mẫu và đánh giá quy trình ở một vài thông số thẩm định cơ bản. Nếu có thêm thời gian và kinh phí, đề tài nên được mở rộng nghiên cứu thêm: -

Tối ưu hóa các điều kiện xử lý mẫu, điều kiện sắc ký.

-

Đánh giá quy trình toàn diện hơn, bổ sung các chỉ tiêu như độ chọn lọc, độ không đảm bảo đo và độ tái lặp của phương pháp.

-

Mở rộng phân tích trên cả nền mẫu sữa lỏng.

-

Mở rộng đề tài, tìm hiểu các quy trình phân tích đồng thời vitamin D2 và D3 để phân tích chính xác hơn hàm lượng vitamin D trong sữa.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Ý

-H

Ó

Với các kết quả như trên, quy trình hoàn toàn có thể được đưa vào thực tiễn sử dụng phân tích hàm lượng vitamin D3 trên nền mẫu sữa bột.

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q

A

10 00

B

TR ẦN

Tiến hành phân tích trên 20 mẫu thật, kết quả 100% các mẫu đều có chứa vitamin D3, hàm lượng trung bình của 20 mẫu phân tích là 76,89 ppb, hàm lượng phân tích được có chênh lệch so với hàm lượng ghi trên bao bì, chênh lệch này được thể hiện qua độ chệch (bias) của phương pháp. Kết quả 14 trên 20 mẫu có giá trị độ chệch không vượt mức tối đa cho phép là ±15% do USFDA quy định do đó sự chênh lệch này là chấp nhận được. Điều này chứng tỏ quy trình phân tích có độ chính xác khá cao.

IỄ N D

TP

H Ư

N

G

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

N

H

-

N

lượng khảo sát được trên các sản phẩm trên thị trường là 30 – 200 ppb trong khi hàm lượng tối thiểu trong sữa lỏng do Bộ Y Tế quy định là 6 ppb.

56

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

[2]

Vu TT, Nguyên CK, Nguyen TL, Le BM, Nguyen Trung Le D, Bui TN, Nakamori M, Kunii D,Sakai T and Yamamoto S, 2005.

Determining the prevalence of osteoporosis and related factors using quantitative ultrasound in Vietnamese adult Women.,Pubmed – Indexed for Medline, 161(9) : 824 – 30.

[3]

Nguyễn Đình Nguyên và Nguyễn Văn Tuấn, 2007. Loãng xương.

Nguyên nhân chẩn đoán điều trị phòng ngừa. Nhà xuất bản Y học.

[4]

Nguyễn Thị Ngọc Lan, 2009. Bệnh Học Cơ Xương Khớp Nội Khoa.

Nhà Xuất Bản Giáo Dục Việt Nam. Hà Nội. Trang 274-285.

[5]

Giáo trình bộ môn Nhi. ĐHYD Huế. Trang 76-80

[6]

Đào Văn Phan, 2009. Dược Lý Học, tập 2. Nhà Xuất Bản Giáo Dục Việt Nam. Hà Nội. Trang 203-209.

[7]

Phan Đình Châu, 2011. Hóa Dược Và Kỹ Thuật Tổng Hợp, tập 3. Nhà Xuất Bản Bách Khoa Hà Nội. Trang 5-82.

[8]

Trần Đức Hậu, 2007. Hóa Dược, tập 2. Nhà Xuất Bản Y Học. Hà Nội.

Trang 32-80.

[9]

Đái Thị Xuân Trang và Phan Lê Công Huyền Bảo Trân, 2015. Giáo trình Hóa Sinh Học. Trang 235-237.

[10]

Yang Liu, 2013. Investigation Of Vitamin D3 Content In Fortified Fluid Milk And The Stability Of Vitamin D3 In Milk To Light Exposure. Master of science. The university of British Culumbia.

Canada.

[11]

Alex J.Brown, Adriana Dusso, Eduardo Slatopolsky, 1999. Vitamin D. American Journal of Physiology – Renal Physiology, No. 2, Vol. 277.

Ơ

Report of a joint FAO/WHO expert consultation, 2001. Human Vitamin and Mineral Requirements. Chapter 8. Page 109-120.

Y

TO

Nguyễn Kim Phi Phụng, 2007. Phương Pháp Cô Lập Hợp Chất Hữu Cơ. Nhà Xuất Bản Đại Học Quốc Gia TP Hồ Chí Minh. TP Hồ Chí Minh. Trang 31-34.

[14]

Bùi Long Biên, 2002. Hóa Học Phân Tích Định Lượng. Nhà Xuất Bản Khoa Học Và Kỹ Thuật. Hà Nội. Trang 109-127.

[15]

Nguyễn Thị Diệp Chi, 2008. Bài Giảng Các Phương Pháp Phân Tích Hiện Đại.

[16]

Nguyễn Phi Kim Phụng, 2004. Khối Phổ. Nhà Xuất Bản Đại Học Quốc Gia Thành Phố Hồ Chí Minh. TP Hồ Chí Minh. Trang 32-58.

Đ

ÀN

[13]

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

U

.Q

TP

Đ ẠO

G

N

H Ư

TR ẦN

B

10 00

Ý

-L

TCVN 6123-2:1996 (ISO 3596-2:1998). Dầu mỡ động vật và thực vật – Xác định chất không xà phòng hóa. Phần 2. Phương pháp nhanh dùng chất chiết Hexan.

ÁN

[12]

IỄ N D

-H

Ó

A

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

H

[1]

N

TÀI LIỆU THAM KHẢO

57

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

Technical Brief, 2009. Mass Spectrometry in Bioanalysis. Particle Sciences. Vol. 4.

[18]

Trần Cao Sơn, 2010. Thẩm Định Phương Pháp Trong Phân Tích Hóa Học và Vi Sinh Vật. Nhà xuất bản Khoa Học và Kỹ Thuật. Hà Nội.

Trang 10-59.

[19]

TCVN 6400:1998 (ISO 707:1997) Sữa và các sản phẩm sữa – Hướng dẫn lấy mẫu. Hà Nội. 1998.

[20]

D. Blanco, M. P. Fernandez and M. D. Gutierrez, 2000. Simultaneous determination of fat-soluble vitamins andprovitamins in dairy products by liquid chromatography witha narrow-bore column. The Analyst, 125: 427-431.

[21]

La Văn Thái, 2015. Hướng Dẫn Xác Nhận Giá Trị Sử Dụng Của Phương Pháp. Vinacert Control.

[22]

Gilliland & dowell, 2012.AOAC Official Method 2011.13 Vitamins D2 and D3 in Infant Formula and Adult Nutritionals LC-MS/MS First Action 2011.Journal of AOAC international.Vol 95, No.3:287-290.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q

TP

Đ ẠO

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

A

10 00

B

TR ẦN

H Ư

N

G

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

U

Y

N

H

[17]

N

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Ơ

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

58

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

D

ÀN

Đ

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

A

Ó

-H B

10 00 TR ẦN G

N

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Ý

-L

TP

Y

U

.Q

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

TO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

Ơ

H

N

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

PHỤ LỤC

Phụ lục 1. Kết quả phân tích sắc ký của các chuẩn vitamin D3 ở các nồng độ.

59

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

D

ÀN

Đ

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

A

Ó

-H B

10 00 TR ẦN G

N

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Ý

-L

TP

Y

U

.Q

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

TO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

Ơ

H

N

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

60

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

D

ÀN

Đ

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

A

Ó

-H B

10 00 TR ẦN G

N

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Ý

-L

TP

Y

U

.Q

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

TO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

Ơ

H

N

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

61

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

D

ÀN

Đ

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

A

Ó

-H B

10 00 TR ẦN G

N

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Ý

-L

TP

Y

U

.Q

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

TO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

Ơ

H

N

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

62

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

D

ÀN

Đ

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

A

Ó

-H B

10 00 TR ẦN G

N

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Ý

-L

Phụ lục 2. Kết quả phân tích sắc ký của 20 mẫu thực.

TP

Y

U

.Q

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

TO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

Ơ

H

N

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

63

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

D

ÀN

Đ

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

A

Ó

-H B

10 00 TR ẦN G

N

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Ý

-L

TP

Y

U

.Q

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

TO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

Ơ

H

N

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

64

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

D

ÀN

Đ

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

A

Ó

-H B

10 00 TR ẦN G

N

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Ý

-L

TP

Y

U

.Q

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

TO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

Ơ

H

N

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

65

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

D

ÀN

Đ

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

A

Ó

-H B

10 00 TR ẦN G

N

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Ý

-L

TP

Y

U

.Q

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

TO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

Ơ

H

N

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

66

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

D

ÀN

Đ

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

A

Ó

-H B

10 00 TR ẦN G

N

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Ý

-L

TP

Y

U

.Q

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

TO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

Ơ

H

N

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

67

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

D

ÀN

Đ

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

A

Ó

-H B

10 00 TR ẦN G

N

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Ý

-L

TP

Y

U

.Q

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

TO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

Ơ

H

N

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

68

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

D

ÀN

Đ

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

A

Ó

-H B

10 00 TR ẦN G

N

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Ý

-L

TP

Y

U

.Q

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

TO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

Ơ

H

N

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

69

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

D

ÀN

Đ

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

A

Ó

-H B

10 00 TR ẦN G

N

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Ý

-L

TP

Y

U

.Q

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

TO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

Ơ

H

N

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

70

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

D

ÀN

Đ

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

A

Ó

-H B

10 00 TR ẦN G

N

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Ý

-L

TP

Y

U

.Q

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

TO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

Ơ

H

N

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

71

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

D

ÀN

Đ

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

A

Ó

-H B

10 00 TR ẦN G

N

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Ý

-L

TP

Y

U

.Q

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

TO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

Ơ

H

N

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

72

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

D

ÀN

Đ

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

A

Ó

-H B

10 00 TR ẦN G

N

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Ý

-L

Phụ lục 3. Kết quả phân tích sắc ký của 5 mẫu thử và 5 mẫu thêm chuẩn.

TP

Y

U

.Q

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

TO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

Ơ

H

N

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

73

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

D

ÀN

Đ

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

A

Ó

-H B

10 00 TR ẦN G

N

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Ý

-L

TP

Y

U

.Q

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

TO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

Ơ

H

N

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

74

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

D

ÀN

Đ

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

A

Ó

-H B

10 00 TR ẦN G

N

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Ý

-L

TP

Y

U

.Q

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

TO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

Ơ

H

N

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

75

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

D

ÀN

Đ

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

A

Ó

-H B

10 00 TR ẦN G

N

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Ý

-L

TP

Y

U

.Q

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

TO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

Ơ

H

N

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

76

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

D

ÀN

Đ

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

A

Ó

-H B

10 00 TR ẦN G

N

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Ý

-L

TP

Y

U

.Q

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

TO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

Ơ

H

N

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

77

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

D

ÀN

Đ

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

A

Ó

-H B

10 00 TR ẦN G

N

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Ý

-L

TP

Y

U

.Q

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

TO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

Ơ

H

N

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

78

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial