Nghiên cứu, xác định thành phần Amino acidtrong thực phẩm chức năng bằng phương pháp HPLC - 2018

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI

N

TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN

Khóa luận tốt nghiệp đại học hệ chính quy Ngành Hóa Dược (Chương trình đào tạo chuẩn)

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

A

10 00

B

TR ẦN

H Ư

XÁC ĐỊNH AMINO ACID TRONG THỰC PHẨM BỔ SUNG BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC).

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

G

Đ ẠO

Nguyễn Minh Lân

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

.Q

U

Y

N

H

Ơ

KHOA HÓA HỌC

Hà Nội – 2017

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI

N

TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN

Ý

Báo cáo Khóa luận tốt nghiệp hệ đại học chính quy

(Chương trình đào tạo chuẩn) Cán bộ hướng dẫn: TS. Đỗ Thị Việt Hương.

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ngành Hóa Dược

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

-H

Ó

A

10 00

B

TR ẦN

H Ư

XÁC ĐỊNH AMINO ACID TRONG THỰC PHẨM BỔ SUNG BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC)

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

G

Đ ẠO

Nguyễn Minh Lân

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

.Q

U

Y

N

H

Ơ

KHOA HÓA HỌC

Hà Nội – 2017

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

LỜI CẢM ƠN!

N

H

Ơ

Việt Hương đã giao đề tài và tận tình hướng dẫn em từ những bước đi đầu tiên trong khóa luận này. Đặc biệt trong suốt thời gian qua với sự quan tâm và chỉ bảo sâu sắc của Cô, em đã thực hiện và hoàn thành tốt bản khóa luận này.

N

Với lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc, em xin chân thành cảm ơn TS. Đỗ Thị

Y

Qua đây, em cũng xin gửi lời cảm ơn chân thành đến các cô, các anh, các chị

TR ẦN

H Ư

Trong quá trình làm đề tài, em còn gặp không ít khó khăn trong qua trình tìm kiếm tài liệu, thông tin, thiếu thốn thời gian. Do đó trong đề tài này không tránh khỏi việc thiếu sót. Kính mong thầy cô và các bạn có ý kiến đóng góp để đề tài của em được hoàn thiện hơn.

Hà Nội, ngày tháng 5, năm 2017.

Nguyễn Minh Lân

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

A

10 00

B

Em xin chân thành cảm ơn!

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

G

khoa Hóa học và tất cả người thân đã luôn động viên và giúp đỡ em trong thời gian qua.

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Đ ẠO

Em cũng xin gửi lời cảm ơn tới các thầy, cô giáo trong bộ môn Hóa hữu cơ và trong khoa Hóa học, các anh chị thuộc phòng phân tích hữu cơ, bạn bè khóa K58

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

.Q

U

ở Viện Công nghiệp và Thực phẩm đã luôn hướng dẫn, đặc biệt là ThS. Lê Văn Trọng và Cử nhân Vũ Thị Thu Trang đã tạo điều kiện và giúp đỡ em thực hiện đề tài này.

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Tiếng Anh

Tiếng Việt

ACN

Acetonitrile

Acetonitril

Gas chromatography–

Sắc ký khí ghép khối

mass spectrometry

phổ

High Performance Liquid

Sắc ký lỏng hiệu năng

Chromatography

cao

10 00

H N

Y

Giới hạn phát hiện

Limit of Quantitative

Giới hạn định lượng

High pressure liquid

Sắc ký lỏng

chromatography

hiệu năng cao

Capillary electrophoresis

Điện di mao quản

IS

Internal standard

Chất nội chuẩn

RF

Fluorescence Detector

Đầu dò huỳnh quang

-L

Ý

-H

HPLC

Ó

A

LOQ

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

CE

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Limit of Detection

B

LOD

khối phổ

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

TR ẦN

MassSpectrometer

Sắc ký lỏng ghép hai lần

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

ChromatographTandem

LC/MS/MS

phổ

N

Liquid

Sắc ký lỏng ghép khối

G

mass spectrometry

U

.Q

TP

Liquid chromatography–

LC/MS

http://daykemquynhon.ucoz.com

Đ ẠO

LC

H Ư

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

GC/MS

Ơ

N

Chữ viết tắt

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

D

IỄ N

Đ

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

A

10 00

B

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

G

Đ ẠO

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

.Q

U

Y

N

H

Ơ

MỤC LỤC MỞ ĐẦU .................................................................................................................... 1 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU ................................................................... 2 1.1 Tổng quan về Amino acid ............................................................................ 2 1.1.1 Thành phần và cấu tạo của Amino acid..................................................... 2 1.1.2 Tính chất chung của amino acid ................................................................ 3 1.1.3 Amino acid trong thực phẩm ..................................................................... 4 1.2 Các phương pháp phân tích Amino acid trong thực phẩm ....................... 6 1.2.1 . Phương pháp điện di ................................................................................ 6 1.2.2 . Phương pháp Sắc ký khí (GC) ................................................................. 7 1.2.3 . Sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC). ........................................................ 7 1.3 Phương pháp xác định amino acid bằng HPLC ........................................ 9 1.3.1 Nguyên tắc chung về phương pháp sắc ký lỏng HPLC............................. 9 1.3.2 Pha tĩnh trong HPLC. .............................................................................. 10 1.3.3 Pha động trong HPLC. ............................................................................ 11 1.3.4 Detector trong HPLC............................................................................... 11 1.4 Xác nhận giá trị đặc trưng của phương pháp phân tích. ............................ 12 1.4.1 Giới hạn phát hiện (LOD), giới hạn định lượng (LOQ). ......................... 12 1.4.2 Độ chính xác của phép đo. ...................................................................... 12 CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM .............................................................................. 20 2.1. Đối tượng và mục tiêu nghiên cứu............................................................ 20 2.2. Thiết bị, dụng cụ, hóa chất. ....................................................................... 20 2.2.1. Thiết bị..................................................................................................... 20 2.2.2. Dụng cụ ................................................................................................... 20 2.2.3. Hóa chất ................................................................................................... 20 2.2.4. Chuẩn bị dung dịch chuẩn. ...................................................................... 21 2.3. Đánh giá các thông số phân tích ............................................................... 22 2.3.1. Xây dựng đường chuẩn ........................................................................... 22 2.3.2. Giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng .............................................. 22 2.3.3. Độ chụm .................................................................................................. 23 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN............................................................ 24 3.1. Đánh giá phương pháp phân tích ............................................................. 24 3.1.1 Điều kiện chạy máy ............................................................................... 24 3.1.2 Khảo sát đường chuẩn ............................................................................. 24 3.1.3 Giới hạn phát hiện (LOD), giới hạn định lượng (LOQ) .......................... 36 3.1.4 Độ lặp lại ................................................................................................. 36 3.2. Phân tích mẫu thực tế................................................................................ 42 3.2.1 Quy trình xử lý mẫu ................................................................................ 42 KẾT LUẬN .............................................................................................................. 45 1. Điều kiện tối ưu cho hệ thống HPLC ....................................................... 45 2. Đánh giá phương pháp phân tích: ............................................................ 45 3.

Phân tích hàm lượng amino acid trong mẫu thực phẩm chức năng ...... 45 Phụ Lục.................................................................................................................... 46

N

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

2

Hình 1.2: Đồng phân lập thể của Alanine

6

Hình 1.3: Sơ đồ cấu tạo hệ thống HPLC

10

N

H

Ơ

Hình 1.1: Công thức cấu tạo của Amino acid

Hình 3.4

Đường chuẩn của Glycine

Hình 3.5

Đường chuẩn của Hystidine

Hình 3.6

Đường chuẩn của Arginine

Hình 3.7

Đường chuẩn của Threonine

Hình 3.8

Đường chuẩn của Alanine

30

Hình 3.9

Đường chuẩn của Proline

31

29 29 30

Hình 3.11 Đường chuẩn của Tyrosine

32

A

10 00

31

-H

Ó

32

Ý

33 33

Hình 3.15 Đường chuẩn của Isoleucine

34

Hình 3.16 Đường chuẩn của Leucine

34

Hình 3.17 Đường chuẩn của Aspartate

35

Hình 3.18 Sắc ký đồ chuẩn Amino acid 50µM

35

Hình 3.19 Sắc ký đồ LOQ của Amino Acid

36

Hình 3.20 Sắc ký đồ mẫu amino acid (0317050) test A

43

Hình 3.21 Sắc ký đồ mẫu amino acid (0317050) test B

43

ÀN

TO

ÁN

-L

Hình 3.14 Đường chuẩn của Lysine

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

TP Đ ẠO G N H Ư

TR ẦN

28

Hình 3.10 Đường chuẩn của Cysteine

Hình 3.13 Đường chuẩn của Methionine

Đ

28

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Đường chuẩn của Glutamine

27

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Y U

Hình 3.3

.Q

Đường chuẩn của Serine

Hình 3.12 Đường chuẩn của Valine

IỄ N D

27

Hình 3.2

B

http://daykemquynhon.ucoz.com

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Hình 3.1: Đường chuẩn của Aspartate

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

N

DANH MỤC HÌNH

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Các Amino acid thường gặp

21

Bảng 2.2: Nồng độ chất nội chuẩn

22

H

Ơ

Bảng 2.1: Nồng độ Amino acid chuẩn làm việc

N

2

N

Bảng 3.1: Sự phụ thuộc giữa diện tích pic (chất chuẩn : nội chuẩn) và nồng độ (chất

Bảng 3.5: Độ lặp lại của Methionine Lysine Isoleucine Leucine Phenylalanine

.40

N H Ư

44

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

A

10 00

B

TR ẦN

Bảng 3.7: Nồng độ các amino acid của mẫu 0317005

41

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

39

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Bảng 3.4: Độ lặp lại của Proline Cysteine Tyrosine Valine

G

38 MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

.Q

37

Bảng 3.3: Độ lặp lại của Hystidine , Arginine , Threonine , Alanine

Bảng 3.6: Độ lặp lại của Phenylalanine

http://daykemquynhon.ucoz.com

35

Đ ẠO

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Bảng 3.2: Độ lặp lại của Aspartate ; Serine ; Glutamine ; Glycine

U

Y

chuẩn : nội chuẩn)

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Y

N

H

Ơ

Amino acid là thành phần chính tạo nên giá trị dinh dưỡng riêng biệt của các phân tử protein, rất cần thiết cho sự sống. Giá trị dinh dưỡng của protein được quyết định bởi mối liên quan về số lượng và chất lượng của các amino acid khác nhau trong protein đó. Chúng đóng vai trò quan trọng như là chất trung gian trong quá trình

N

MỞ ĐẦU

TR ẦN

cứu phân tích thành phần amino acid của các sản phẩm TPCN tại Việt Nam.

10 00

B

Do đó, đề tài “Nghiên cứu, xác định thành phần Amino acid trong thực phẩm chức năng bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)” là một đề tài nghiên cứu mới có ý nghĩa thực tiễn và cần thiết nhằm góp phần giúp cơ quan

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

A

chức năng đưa ra những đánh giá quy định nhằm bảo vệ sức khỏe, quyền lợi con người và môi trường sống.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

G

sản phẩm trong quá trình chế biến được bổ sung thêm các chất “chức năng”. Ở Việt Nam TPCN ngày càng trở nên quen thuộc với người dân Việt Nam và được nhiều người tin tưởng sử dụng. Ngày nay, amino acid được bổ sung nhiều vào các sản phẩm TPCN giúp tăng cường hiệu quả của thực phẩm. Tuy nhiên vẫn chưa có nhiều nghiên

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

Thực phẩm chức năng (TPCN) là các sản phẩm có nguồn gốc tự nhiên hoặc là

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

.Q

U

chuyển hóa cũng như tổng hợp protein, cũng là những đơn vị cấu trúc cơ bản của protein. Amino acid không chỉ “xây dựng các tế bào và phục hồi các mô”, mà còn tạo ra kháng thể chống lại virus và vi khuẩn để đảm bảo cho sự sinh tồn của con người.

1

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU Tổng quan về Amino acid

1.1.

Amino acid là đơn vị cấu tạo protein. Amino acid là chất hữu cơ, phân tử có

Ơ

•

N

1.1.1. Thành phần và cấu tạo của Amino acid

U

Dựa vào tính chất của gốc R các amino acid được chia làm 5 nhóm:

10 00

B

- Nhóm 1: gồm 7 amino acid có R không phân cực, kỵ nước: glycine, alanine, proline, valine, leucine, isoleucine và methionine.

-H

Ó

A

- Nhóm 2: gồm 3 amino acid có gốc R chứa nhân thơm: phenylalanine, tyrosinetryptophan.

-L

Ý

- Nhóm 3: gồm 5 amino acid có gốc R phân cực, không tích điện: serine, threonine, cystein, aspargine và glutamine.

•

arginine.

- Nhóm 5: gồm 2 amino acid có gốc R tích điện âm: aspartate và glutamate Các amino acid thường gặp là những amino acid thường có mặt trong thành phần của các loại protein. Chúng có khoảng 20 loại và được thu nhận khi thủy phân protein.

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

- Nhóm 4: gồm 3 amino acid có R tích điện dương: lysine, histidine và

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

•

TR ẦN

Hình 1.1: Công thức cấu tạo của Amino acid

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

G

Đ ẠO

TP

amino acid. Như vậy các protein chỉ khác nhau ở mạch nhánh, hay còn gọi là chuỗi bên (thường được ký hiệu: R).

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Hầu hết amino acid thu nhận được khi thủy phân protein đều ở dạng L-α-

.Q

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

•

Y

N

H

chứa nhóm: carboxyl (-COOH) và nhóm amino (-NH2) gắn với carbon ở vị trí α.

2

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

121 132 146 146 155 174 133 147

H Ư

N

Ó

Các Amino acid thường không màu, nhiều loại có vị ngọt kiểu đường như

Ý

•

-H

1.1.2. Tính chất chung của amino acid

•

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

glyxine, alanine, valine, serine, histidine, triptophan; một số loại có vị đắng như isoleucine, arginine hoặc không có vị như leucine. Bột ngọt hay còn gọi là mì chính là muối của natri với acid glutamic (monosodium glutamate).

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

C B Q K H R D E

A

10 00

B

TR ẦN

Cysteine Aspargine Glutamine Lysine Hystidine Arginine Aspartate Glutamate

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

204 105 119

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

W S T

N

G

Ơ

U

Y

N

H

Ký Khối lượng hiệu mol G 75 A 89 P 115 V 117 L 131 I 131 M 149 F 165 Y 181

.Q

Tên viết tắt Gly Ala Pro Val Leu Ile Met Phe Tyr

α-aminoacetic α -aminopropionic α -pỉolidincarboxylic α -aminoisovaleric α -aminoisocaproic α -amino-β-metylvaleric α -amino-δ-metyltiobutiric α -amino-β-phenylpropionic α -aminoβ-hydrogengenxyphenylpropionic α -amino-β-indolylpropionic Trp α -amino-β-hydroxypropionic Ser α -aminoThr β-hydrogengenxybutiric α -amino-β-tiopropionic Cys Amid của aspartate Asn Amid của glutamate Gln α,ε-diaminocaproic Lys α -amino-β-imidazolpropionic His α -amino-δ-guanidinvaleric Arg α -aminosucinic Asp α -aminoglutarate Glu Bảng 1.1: Các Amino acid thường gặp

Tryptophan Serine Threonine

http://daykemquynhon.ucoz.com

Các amino acid thường dễ tan trong nước và khó tan trong alcohol, ether (trừ proline và hydrogenxyproline), chúng cũng dễ hòa tan trong acid và kiềm loãng (trừ tyrosine).

IỄ N D

Tên amino acid theo danh pháp

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Tên Amino acid Glycine Alanine Proline Valine Leucine Isoleucine Methionine Phenylalani Tyrosine ne

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

TP

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

•

Các amino acid trong phân tử protein đều có ít nhất một carbon bất đối (trừ glycine) vì thế nó đều có biểu hiện hoạt tính quang học, nghĩa là có thể làm quay mặt phẳng của ánh sáng phân cực sang phải hoặc sang trái.

3

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

Trong phân tử amino acid có nhóm carboxyl -COOH nên có khả năng

-L

Ý

-H

Ó

Có 2 loại amino acid khác nhau trong cơ thể: thiếu yếu và không thiếu yếu.

Amino acid không thiếu yếu là những loại amino acid có thể tự sản xuất trong quá trình tổng hợp các chất khác trong cơ thể.

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

Với các amino acid thiếu yếu, cơ thể không tự sản xuất được và do đó cách duy nhất để có được chúng là thông qua các thực phẩm mà cơ thể tiêu thụ. Một số sản phẩm giàu đạm như các các loại hạt, đậu, đậu nành thể cung cấp cho cơ thể đầy đủ tất cả các amino acid thiếu yếu.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

A

1.1.3. Amino acid trong thực phẩm

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

10 00

Hình 1.2: Đồng phân lập thể của alanine

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

B

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

G

Đ ẠO

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

.Q

U

Y

N

H

Ơ

nhường proton (H+) thể hiện tính acid, mặt khác có nhóm amin -NH2 nên có khả năng nhận proton nên thể hiện tính base. Vì vậy amino acid có tính chất lưỡng tính.Trong môi trường acid, amino acid ở dạng cation (tích điện dương), nếu tăng dần pH amino acid lần lượt nhường proton thứ nhất chuyển qua dạng lưỡng cực (trung hoà về điện), và tiếp tục tăng pH Amino acid sẽ nhường proton thứ hai chuyển thành dạng anion (tích điện âm).

N

•

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Amino acid cần thiết cho sự chuyển hoá bình thường của các chất dinh dưỡng khác, đặc biệt là các vitamin và khoáng chất, bởi nó tham gia cấu trúc trong các enzym. Khi thiếu amino acid, nhiều vitamin thì sẽ không phát huy đầy đủ chức năng của chúng. Amino acid kích thích sự thèm ăn vì thế nó giữ vai trò chính tiếp nhận các chế độ ăn khác nhau. Thiếu protein sẽ gây ra các rối loạn như ngừng sinh trưởng hoặc chậm phát triển, mỡ hoá gan, rối loạn hoạt động nhiều tuyến nội tiết (giáp trạng, sinh

4

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

N

H

Ơ

Trong quá trình tiêu hóa, hệ tiêu hóa phá vỡ tất cả các protein thành các amino acid để đưa vào máu, và sau đó các tế bào sử dụng các amino acid như các nguyên liệu xây dựng cơ bản. Mức protein khuyến nghị hằng ngày là 0,8 gram cho mỗi kg trọng lượng cơ thể. Một hộp cá ngừ chứa khoảng 32 gram protein, một ly sữa chứa

N

dục), thay đổi thành phần protein máu, giảm khả năng miễn dịch sinh học của cơ thể và tăng tính cảm thụ của cơ thể với các bệnh nhiễm khuẩn.

Hiện nay, các loại TPCN thường được bổ sung thêm một lượng amino acid

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

A

10 00

B

có chứa các loại amino acid cần thiết để đảm bảo nh cầu của cơ thể cũng như tăng hiệu quả của sản phẩm.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

G

tăng cảm giác ngon miệng, gia tăng chuyển hóa, hấp thu tối đa dinh dưỡng, hiệu quả cho việc tăng cân. Các sản phẩm sữa dành cho người tăng cân, tập thể hình có chứa nhiều Glutamine. Glutamine giúp tăng cường hệ miễn dịch, hỗ trợ các chức năng tiêu hóa và đóng góp một phần ba nhu cầu nitơ cần thiết cho cơ thể. Ngoài ra, các sản phẩm từ thiên nhiên như tảo biển, linh chi, sữa ong chúa,... các hoại cốm vi sinh cũng

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

nhất định. Các sản phẩm dành cho trẻ em thường được bổ sụng Lysine . Lysine làm

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

.Q

U

Y

khoảng 8 gram protein. Nên không phải quá khó khăn để đáp ứng đủ lượng protein hằng ngày.

Hình 1.3: Một số thực phẩm chức năng

Amino acid là thành phần dinh dưỡng quan trọng nhất, chúng có mặt trong thành phần của nhân và chất nguyên sinh của các tế bào. Quá trình sống là quá trình trao đổi chất thường xuyên của protein. Vì vậy, hằng ngày cần ăn vào một lượng đầy đủ Amino acid cho việc duy trì sự sống, sự sinh trưởng, phát triển, sinh sản; cho quá trình lao động và học tập.

5

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

N

H

Ơ

Phương pháp điện di dựa vào tính chất tích điện của các amino acid trong môi trường có pH nhất định. Dưới tác dụng của điện trường các amino acid tích điện dương (+) sẽ chạy về phía cực (-), các amino acid tích điện âm (-) sẽ chạy về cực (+). Do khả năng tích điện không giống nhau trong điện trường giữa các

N

1.2. Các phương pháp phân tích Amino acid trong thực phẩm 1.2.1. . Phương pháp điện di mao quản

TO

ÁN

-L

D

IỄ N

Đ

ÀN

ppm (R2> 0,9981). Giới hạn phát hiện (LOD) trong khoảng 0,32-0,56 ppm. Độ thu hồi từ 85% đến 108%, (n = 3).

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Ý

-H

Ó

A

Mei Musa Ali Omar và cộng sự [15] đã phát triển nghiên cứu phương pháp điện di mao quản kết hợp với detector UV để xác định amino acid: Proline, Valine, Glutamine, Alanine, Asparagine, Serine trong thực phẩm Sudan. Amino acid trong các mẫu được dẫn xuất với 4-chloro-7-nitro-2,1,3-benzoxadiazole (NBD-Cl) trước khi phân tích CE-UV. Điều kiện phản ứng: 100mM đệm borat ở pH 8,5; thời gian 60 phút; nhiệt độ 70oC và NBD-Cl 40mM và phát hiện ở 475 nm. Phương pháp này đã thu được khoảng tuyến tính của tất cả các amino acid trong phạm vi nồng độ 2,5-40

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Hình 3.5: phương pháp điện di

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

10 00

B

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

G

Đ ẠO

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

.Q

U

Y

amino acid vì vậy tốc độ di chuyển của các amino acid không giống nhau trong điện trường. Kết quả các amino acid phân bố trải ra trên giá thể (giấy hoặc polyamide).

Shigeki Akamatsu và cộng sự [17] đã sử dụng phương pháp điện di mao quản để phân tích amino acid trong các sản phẩm sữa ong chúa.Việc tách CE sử dụng dung dịch acid formic 1M (pH 1.8) như điện. Dung môi pha động là etanol 75%. Kết quả thu được là các giới hạn phát hiện (LOD) dao động 0,61-10,5 mg (trọng lượng khô/g cho mỗi amino acid). Độ thu hồi từ 88,3-108,6%, và độ lệch chuẩn tương đối RSD

6

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

<10%. Phương pháp này được cho là hữu ích trong việc phân biệt không chỉ trong những sản phẩm khác nhau mà còn giữa các sản phẩm và mật ong.

Y

N

H

Ơ

Sắc ký khí là một phương pháp chia tách trong đó pha động là một chất khí ( được gọi là khí mang) và pha tĩnh là một vi lớp chất lỏng hoặc polyme được phủ trên một lớp rắn đặt trong một ống thủy tinh hoặc kim loại được gọi là cột (tương tự cột

N

1.2.2. . Phương pháp Sắc ký khí (GC)

-L

Ý

-H

Ó

A

10 00

B

Ayat H. Bani Rashaid và cộng sự [8] đã nghiên cứu Amino acid trong mẫu tóc người. Các bước chuẩn bị mẫu bao gồm thủy phân acid protein bằng acid hydrochloric và trimetylsilyl (TMS). Dẫn suất sử dụng N,O-bis (trimetylsilyl) và trifluoroacetamide (BSTFA). Các điều kiện dẫn suất tối ưu là: Dung môi phản ứng là acetonitrile, nhiệt độ 100 ° C, và thời gian phản ứng là 30 phút. Phương pháp này đã thu được kết quả như sau: Giới hạn phát hiện trong khoảng 0,04-0,1 mmol/L, giới hạn định lượng trong khoảng từ 0,1-0,5 mmol/L, độ phục hồi từ 80% và 110%, và

ÁN

khoảng tuyến tính tốt nhất là 1-300 mmol/L với hệ số tương quan R2> 0,99.

TO

1.2.3. . Sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC).

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

G

dòng ở mức 1,6 ml / phút (đo ở 50oC). Nitơ (30 ml / phút), hydro (35 ml / phút) và khí tổng hợp (350 ml / phút) được sử dụng như các loại khí phụ trợ. Các chương trình nhiệt độ lò như sau: nhiệt độ ban đầu 110oC, tăng 26oC/phút đến 320oC. Kết quả xác định được giới hạn phát hiện của các amino acid từ 0,112 và 1,795 ppm. Độ thu hồi khoảng 90%, R2> 0,99%. Phương pháp này đã được xác nhận và áp dụng cho một bộ 74 mẫu mật ong thuộc bốn nguồn gốc thực vật khác nhau: Eucaliptus, hương thảo.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Nozal và cộng sự [14] đã nghiên cứu và phát triển khí sắc ký (GC) với ion hóa ngọn lửa (FID) để phân tích Amino acid trong mật ong. Phương pháp này cho phép xác định số 22 amino acid tự do trong mẫu mật ong. Các khí mang (N2) có tốc độ

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q

U

tách phân đoạn được sử dụng trong chưng cất).

D

IỄ N

Đ

ÀN

Trong những năm gần đây, phương pháp HPLC đã đóng vai trò vô cùng quan trọng trong việc phân tích các chất trong mọi lĩnh vực khác nhau, nhất là trong việc tách và phân tích các chất.

Aoyama và cộng sự [9] sử dụng HPLC phân tích amino acid trong mẫu huyết thanh chuột. Phân tích sử dụng NBD-F (4- fluoro-7-nitro-2,1,3-benzoxadiazole) như là một thuốc thử dẫn xuất huỳnh quang. Quá trình phân tích toàn bộ đã được hoàn toàn tự động từ dẫn suất, tiêm để tách HPLC và định lượng. Các điều kiện phản ứng

7

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

N

H

Ơ

trong vòng 100 phút và fluorometrically phát hiện ở 540 nm với sự kích thích ở 470 nm. Giới hạn phát hiện đối với các amino acid là trong khoảng 2,8-20 ppm. Các đường cong hiệu chuẩn là tuyến tính trong khoảng 0,2 pmol đến 20 pmol. Hệ số tương quan là 0,999.

N

dẫn xuất được đánh giá lại và tối ưu hóa. Amino acid được dẫn xuất của NBD-F trong 40 phút ở nhiệt độ phòng, trong đệm borat (pH 9.5). Các dẫn xuất đã được tách ra

97

4.5

95

5

81

19

73

27

20

58

42

25

52

48

32

40

60

35

97

3

H Ư

TR ẦN

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

A

10 00

16

3

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

Kết quả thu được khoảng tuyến tính được xác định trong phạm vi 0,25-10 ppm. Hệ số tương quan là 97-101%, độ lặp lại RSD <3%.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

0

10

%B

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

G

%A

N

Thời gian (phút)

B

http://daykemquynhon.ucoz.com

B: methanol – acetonitrile (70 - 30)

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

.Q

U

Y

Kelly và cộng sự [12] đã xác định 24 amino acid trong rượu vang và rượu nho.

Phương pháp sử dụng với thuốc thử N-acetyl-L-cysteine, trên cột C18 (3mm x 25cm).

Detector được đặt ở bức sóng kích thích 330nm và phát hiện ở 440nm. Dung môi sử dụng: A: đệm acetat 0.05M( pH 6.5) – methanol ( 95-5).

Wang Xing và cộng sự [20] đã xác định thành phần amino trên cây Thiên Nam Tinh bằng phương pháp HPLC ghép 2 lần khối phổ (LC-MS/MS). Phương pháp sử dụng với phenyl isothiocyanate (PITC) là thuốc thử dẫn xuất, các hợp chất được tách ra và xác định trên một cột C18(250 mm × 4,6 mm, 5 µm) nhiệt độ cột là 35 ℃; được phát hiện ở 254 nm. Dung môi sử dụng tách rửa là A: đệm acid acetic 0,05 mol/L(pH

8

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

83~77

17~23

25~35

77~75

23~25

35~45

75~70

25~30

-L

Ý

-H

Ó

A

dưới dạng dung dịch. Khi tiến hành chạy sắc ký, các chất phân tích được phân bố liên tục giữa pha động và pha tĩnh. Trong hỗn hợp các chất phân tích, do cấu trúc phân tử và tính chất lí hoá của các chất khác nhau, nên khả năng tương tác của chúng với pha tĩnh và pha động khác nhau. Do vậy, chúng di chuyển với tốc độ khác nhau và tách ra khỏi nhau. Sơ đồ cấu tạo thiết bị HPLC bao gồm: Bình chứa dung môi pha động Bộ phận khử khí Bơm cao áp Bộ phận tiêm mẫu ( bằng tay hay Autosample)

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

1234-

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

10 00

B

Sắc ký lỏng là quá trình tách xảy ra trên cột tách với pha tĩnh là chất rắn và pha động là chất lỏng (sắc ký lỏng - rắn). Mẫu phân tích được chuyển lên cột tách

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

G

N

H Ư

TR ẦN

1.3. Phương pháp xác định amino acid bằng HPLC 1.3.1. Nguyên tắc chung về phương pháp sắc ký lỏng HPLC.

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

22~25

N

13~17

Ơ

87~83

H

15~22

N

3~13

Y

97~87

U

0~15

.Q

%B

TP

%A

Kết quả nghiên cứu thu được 15 amino acid có trong cây Thiên Nam Tinh.

Khoảng tuyến tính tốt: Glu trong khoảng 2-100 ppm, Arg trong khoảng 6-300 ppm, những amino acid khác trong khoảng 0,8-40 ppm, với hệ số tương quan R2≥ 0,9995. Độ thu hồi là 95% -105% và RSD < 3%.

http://daykemquynhon.ucoz.com

D

Thời gian (phút)

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

6,5); B: acetonitrile 0,05 mol / L. Điều kiện rửa giải gradient được biểu diễn qua bảng sau:

5- Cột sắc ký ( Pha tĩnh ) ( để ngoài môi trường hay trong bộ điều nhiệt ) 6- Detector ( nhận tín hiệu ) 7- Hệ thống máy tính gắn phần mềm nhận, tín hiệu và sử lý dữ liệu và điều khiển hệ thống HPLC. 8- In dữ liệu .

9

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

•

ÁN

-L

Ý

Sắc ký pha thường: pha tĩnh có bề mặt là các chất phân cực (đó là các silica trần hoặc các silica được gắn các nhóm ankyl có ít cacbon mang các nhóm chức phân cực: -NH2, -CN...), pha động là các dung môi hữu cơ không phân cực như: n-hexan, toluene.... Hệ này có thể tách đa dạng các chất không phân

TO ÀN Đ

IỄ N D

-H

Ó

A

10 00

B

Trong HPLC, pha tĩnh chính là chất nhồi cột làm nhiệm vụ tách hỗn hợp chất phân tích. Đó là những chất rắn, xốp và kích thước hạt rất nhỏ, từ 3 – 7mm. Tuỳ theo bản chất của pha tĩnh, trong phương pháp sắc ký lỏng pha liên kết thường chia làm 2 loại: sắc ký pha thường (NP-LC) và sắc ký pha ngược (RP-LC)

•

cực hay ít phân cực.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

1.3.2. Pha tĩnh trong HPLC.

TR ẦN

H Ư

Sắc ký lỏng hiệu năng cao bao gồm nhiều phương pháp có tính đặc thù riêng, đó là sắc ký lỏng pha liên kết, sắc ký phân bố lỏng – lỏng và sắc ký trao đổi lỏng – rắn, sắc ký hấp phụ lỏng – rắn,…

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

G

Hình 1.4: Sơ đồ cấu tạo hệ thống HPLC

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

.Q

U

Y

N

H

Ơ

N

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

Sắc ký pha ngược: pha tĩnh thường là các silica đã được ankyl hoá, không phân cực, loại thông dụng nhất là –C18H37, còn pha động phân cực: nước, methanol, axetonitril....Trong rất nhiều trường hợp thì thành phần chính của pha động lại là nước nên rất kinh tế. Hệ này được sử dụng để tách các chất có độ phân cực rất đa dạng: từ rất phân cực, ít phân cực tới không phân cực .

10

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

1.3.3. Pha động trong HPLC.

N

Pha động phải trơ với pha tĩnh.

•

Pha động phải hòa tan tốt mẫu phân tích, phải bền vững và không bị phân hủy trong quá trình chạy sắc ký.

•

Pha động phải có độ tinh khiết cao.

•

Pha động phải nhanh đạt được các cân bằng trong quá trình sắc ký, như cân bằng hấp phụ, phân bố, trao đổi ion tuỳ theo bản chất của từng loại sắc ký.

•

Phải phù hợp với loại detector dùng để phát hiện các chất phân tích.

•

Pha động phải không quá đắt.

-L

Ý

-H

Ó

A

ngược. ❖ Pha động có độ phân cực thấp: bao gồm các dung môi ít phân cực như xyclopentan, n-pentan, n-heptan, n-hexan, 2-chloropropan, cacbondisulfua (CS2), chlorobutan, CCl4, toluene...

ÁN

Tuy nhiên pha động một thành phần đôi khi không đáp ứng được khả năng rửa

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

giải, người ta thường phối hợp 2 hay 3 dung môi để có được dung môi có độ phân cực từ thấp đến cao phù hợp với phép phân tích. Sự thay đổi thành phần pha động theo thời gian gọi là rửa giải gradient nồng độ.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

10 00

B

❖ Pha động có độ phân cực cao: có thành phần chủ yếu là nước, tuy nhiên để phân tích các chất hữu cơ, cần thêm các dung môi khác để giảm độ phân cực như MeOH, ACN. Pha động loại này được dùng trong sắc ký pha liên kết

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

N

H Ư

TR ẦN

http://daykemquynhon.ucoz.com

Có thể chia pha động làm hai loại:

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

TP

.Q

U

Y

•

G

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

H

Ơ

chất phân tích trong quá trình sắc ký nhất định. Mỗi loại sắc ký đều có pha động rửa giải riêng cho nó để có được hiệu quả tách tốt nhưng nhìn chung phải đáp ứng được các điều kiện sau:

N

Pha động trong HPLC đóng góp một phần rất quan trọng trong việc tách các

1.3.4. Detector trong HPLC.

Detector là bộ phận quan trọng quyết định độ nhạy của phương pháp. Tuỳ thuộc bản chất lí hoá của chất phân tích mà lựa chọn detector cho phù hợp.

-

Detector quang phổ hấp thụ phân tử UV-VIS: áp dụng cho các chất có khả năng hấp thụ ánh sáng trong vùng tử ngoại (UV) hoặc vùng khả kiến (VIS).

11

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DấyKèmQuyNhƥn

dẍn xuẼt hoĂĄ chẼt phân tĂ­ch, gắn nĂł váť&#x203A;i chẼt cĂł khả nÄ&#x192;ng phĂĄt huáťłnh quang hoạc chẼt phân tĂ­ch phản ᝊng váť&#x203A;i thuáť&#x2018;c tháť­ Ä&#x2018;áť&#x192; tấo thĂ nh sản phẊm cĂł khả nÄ&#x192;ng phĂĄt huáťłnh quang.

Detector Ä&#x2018;áť&#x2122; dẍn: phĂš hᝣp váť&#x203A;i cĂĄc chẼt cĂł hoất tĂ­nh Ä&#x2018;iáť&#x2021;n hoĂĄ: cĂĄc ion kim

N

Detector huáťłnh quang RF: sáť­ d᝼ng Ä&#x2018;áť&#x192; phĂĄt hiáť&#x2021;n cĂĄc chẼt cĂł khả nÄ&#x192;ng phĂĄt huáťłnh quang. Ä?áť&#x2018;i váť&#x203A;i nhᝯng chẼt khĂ´ng cĂł khả nÄ&#x192;ng nhĆ° váş­y, cần phải

N

Y U

TP

1.4.1. Giáť&#x203A;i hấn phĂĄt hiáť&#x2021;n (LOD), giáť&#x203A;i hấn Ä&#x2018;áť&#x2039;nh lưᝣng (LOQ).

=3

TR ẌN

Trong Ä&#x2018;Ăł: N - Ä?áť&#x2122; nhiáť&#x2026;u trung bĂŹnh Ä&#x2018;Ć°áť?ng náť n.

S - Chiᝠu cao píc cᝧa chẼt cần phân tích.

A

lẼy tᝍ 3 Ä&#x2018;áşżn 5 lần LOD.

10 00

B

Giáť&#x203A;i hấn xĂĄc Ä&#x2018;áť&#x2039;nh lĂ lưᝣng nháť? nhẼt cᝧa chẼt cần phân tĂ­ch cĂł trong mẍu tháť­ cĂł tháť&#x192; Ä&#x2018;áť&#x2039;nh lưᝣng Ä&#x2018;ưᝣc trong Ä&#x2018;iáť u kiáť&#x2021;n tiáşżn hĂ nh phĂŠp tháť­. ThĂ´ng thĆ°áť?ng, LOQ Ä&#x2018;ưᝣc

-L

Ă?

-H

Ă&#x201C;

Tiáşżn hĂ nh xĂĄc Ä&#x2018;áť&#x2039;nh giáť&#x203A;i hấn phĂĄt hiáť&#x2021;n vĂ giáť&#x203A;i hấn Ä&#x2018;áť&#x2039;nh lưᝣng báşąng cĂĄch thĂŞm chuẊn trĂŞn náť n mẍu tháťąc áť&#x; mᝊc náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; giảm dần. áť&#x17E; náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; chẼt phân tĂ­ch cĂł táť&#x2030; sáť&#x2018; tĂ­n hiáť&#x2021;u S/N â&#x2030;&#x2C6; 3 Ä&#x2018;ưᝣc cháť?n lĂ m náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; giáť&#x203A;i hấn phĂĄt hiáť&#x2021;n vĂ S/N â&#x2030;&#x2C6; 10 Ä&#x2018;ưᝣc cháť?n

Ă N

lĂ m giáť&#x203A;i hấn náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; giáť&#x203A;i hấn Ä&#x2018;áť&#x2039;nh lưᝣng [6].

TO

1.4.2. Ä?áť&#x2122; chĂ­nh xĂĄc cᝧa phĂŠp Ä&#x2018;o.

D

Iáť&#x201E; N

Ä?

Ă&#x20AC;N

Ä?áť&#x2122; chĂ­nh xĂĄc cᝧa phĂŠp Ä&#x2018;o Ä&#x2018;ưᝣc Ä&#x2018;ĂĄnh giĂĄ qua Ä&#x2018;áť&#x2122; Ä&#x2018;Ăşng vĂ Ä&#x2018;áť&#x2122; ch᝼m. Ä?áť&#x2122; ch᝼m lĂ mᝊc Ä&#x2018;áť&#x2122; gần nhau cᝧa cĂĄc giĂĄ tráť&#x2039; riĂŞng láşť cᝧa cĂĄc phĂŠp Ä&#x2018;o lạp lấi. Ä?áť&#x2122; Ä&#x2018;Ăşng lĂ mᝊc

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

đ?&#x2018;

N

đ?&#x2018;&#x2020;

H ĆŻ

http://daykemquynhon.ucoz.com

G

Ä&#x2018;ảm bảo sáťą khĂĄc biáť&#x2021;t váť&#x203A;i mẍu trắng táť&#x203A;i 95% ; thĂ´ng thĆ°áť?ng LOD Ä&#x2018;ưᝣc chẼp nháş­n áť&#x; náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; mĂ tấi Ä&#x2018;Ăł tĂ­n hiáť&#x2021;u láť&#x203A;n gẼp 2-3 lần tĂ­n hiáť&#x2021;u nhiáť&#x2026;u Ä&#x2018;Ć°áť?ng náť n, thĆ°áť?ng lẼy

Máť&#x152;I YĂ&#x160;U CẌU GᝏI Váť&#x20AC; Háť&#x2DC;P MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Ä? áş O

Giáť&#x203A;i hấn phĂĄt hiáť&#x2021;n lĂ lưᝣng nháť? nhẼt cᝧa chẼt phân tĂ­ch cĂł tháť&#x192; phĂĄt hiáť&#x2021;n Ä&#x2018;ưᝣc

Dáş Y KĂ&#x2C6;M QUY NHĆ N OFFICIAL ST&GT : Ä?/C 1000B TRẌN HĆŻNG Ä?áş O TP.QUY NHĆ N

NĆĄi báť&#x201C;i dưᝥng kiáşżn thᝊc ToĂĄn - LĂ˝ - HĂła cho háť?c sinh cẼp 2+3 / Diáť&#x2026;n Ä?Ă n ToĂĄn - LĂ˝ - HĂła Quy NhĆĄn 1000B Trần HĆ°ng Ä?ấo Tp.Quy NhĆĄn Táť&#x2030;nh BĂŹnh Ä?áť&#x2039;nh

1.4.

loấi chuyáť&#x192;n tiáşżp....

XĂĄc nháş­n giĂĄ tráť&#x2039; Ä&#x2018;ạc trĆ°ng cᝧa phĆ°ĆĄng phĂĄp phân tĂ­ch.

.Q

-

H

Ć

-

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Ä&#x2018;áť&#x2122; gần nhau cᝧa giĂĄ tráť&#x2039; phân tĂ­ch váť&#x203A;i giĂĄ tráť&#x2039; tháťąc [1]. â&#x20AC;˘ Ä?áť&#x2122; thu háť&#x201C;i (Ä&#x2018;áť&#x2122; Ä&#x2018;Ăşng) CĂ´ng thᝊc tĂ­nh Ä&#x2018;áť&#x2122; thu háť&#x201C;i: đ?&#x2018;&#x2026;% =

đ??śđ?&#x2018;Ąđ?&#x2018;Ą Ă&#x2014; 100 đ??śđ?&#x2018;?

12

Ä?Ăłng gĂłp PDF báť&#x;i GV. Nguyáť&#x2026;n Thanh TĂş

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DấyKèmQuyNhƥn

Trong Ä&#x2018;Ăł:

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

R%: Ä?áť&#x2122; thu háť&#x201C;i (%).

Cc: Náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; chuẊn thĂŞm (lĂ˝ thuyáşżt) (ppb).

Ć

CV: háť&#x2021; sáť&#x2018; biáşżn Ä&#x2018;áť&#x2122;ng cᝧa phĂŠp Ä&#x2018;o.

N

D

Iáť&#x201E; N

Ä?

Ă&#x20AC;N

TO

Ă N

-L

Ă?

-H

Ă&#x201C;

A

10 00

B

TR ẌN

RSD: Ä&#x2018;áť&#x2122; láť&#x2021;ch chuẊn tĆ°ĆĄng Ä&#x2018;áť&#x2018;i

H ĆŻ

http://daykemquynhon.ucoz.com

n: sáť&#x2018; lần Ä&#x2018;o.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

G

đ?&#x2018;&#x2020;đ?&#x2018;Ąđ?&#x2018;? : diáť&#x2021;n tĂ­ch pic trung bĂŹnh.

Máť&#x152;I YĂ&#x160;U CẌU GᝏI Váť&#x20AC; Háť&#x2DC;P MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Ä? áş O

S: Ä?áť&#x2122; láť&#x2021;ch chuẊn.

Dáş Y KĂ&#x2C6;M QUY NHĆ N OFFICIAL ST&GT : Ä?/C 1000B TRẌN HĆŻNG Ä?áş O TP.QUY NHĆ N

.Q

Trong Ä&#x2018;Ăł:

TP

NĆĄi báť&#x201C;i dưᝥng kiáşżn thᝊc ToĂĄn - LĂ˝ - HĂła cho háť?c sinh cẼp 2+3 / Diáť&#x2026;n Ä?Ă n ToĂĄn - LĂ˝ - HĂła Quy NhĆĄn 1000B Trần HĆ°ng Ä?ấo Tp.Quy NhĆĄn Táť&#x2030;nh BĂŹnh Ä?áť&#x2039;nh

U

Y

N

H

â&#x20AC;˘ Ä?áť&#x2122; lạp lấi (Ä&#x2018;áť&#x2122; ch᝼m) cᝧa phĂŠp Ä&#x2018;o Ä&#x2018;ưᝣc xĂĄc Ä&#x2018;áť&#x2039;nh theo cĂĄc Ä&#x2018;ấi lưᝣng S2 vĂ CV. đ?&#x2018;&#x2020;đ??ˇ đ?&#x2018;&#x2026;đ?&#x2018;&#x2020;đ??ˇ% = đ??śđ?&#x2018;&#x2030;% = Ă&#x2014; 100 â&#x2C6;&#x2018;(đ?&#x2018;&#x2020;đ?&#x2018;&#x2013; â&#x2C6;&#x2019; đ?&#x2018;&#x2020;đ?&#x2018;Ąđ?&#x2018;? )2 â&#x2C6;&#x161; đ?&#x2018;&#x2020;đ?&#x2018;Ąđ?&#x2018;? đ?&#x2018;&#x2020;= đ?&#x2018;&#x203A;â&#x2C6;&#x2019;1

N

. Ctt: Náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; chẼt phân tĂ­ch phĂĄt hiáť&#x2021;n Ä&#x2018;ưᝣc (ppb).

13

Ä?Ăłng gĂłp PDF báť&#x;i GV. Nguyáť&#x2026;n Thanh TĂş

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM Đối tượng và mục tiêu nghiên cứu.

Y

N

H

Ơ

Hiện nay, đánh giá về thành phần amino acid là một vấn đề vẫn đang được quan tâm. Như chúng tôi đã đề cập đến trong bản luận văn này, vấn đề thành phần amino acid trong thực phẩm chức năng gây ra nhiều ảnh hưởng đến sức khỏe con

N

2.1.

B

Lò nung Máy điều nhiệt Cân phân tích (độ đọc 0.1mg) Máy xay Philip Simply Silent 600W

10 00

▪ ▪ ▪ ▪

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

G

2.2.1. Thiết bị ▪ Hệ thống sắc ký lỏng HPLC - RF; cột tách: Waters AccQ.Tag 3.9x150mm ▪ Máy lắc vortex (đồng hóa mẫu).

▪ Bể rung siêu âm.

2.2.2. Dụng cụ

Ó

A

• Pipet: 1, 2, 5 ml.

-H

• Vial siêu nhỏ 0,4ml

Ý

• Bình định mức 20ml, 50ml

-L

• Vial loại 1,5ml; 4ml; 6ml

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

• Ống đong, phễu.

• Pipetman và đầu côn Eppendorf.

• Catrige lọc với kích thước 0,2 μm;

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Thiết bị, dụng cụ, hóa chất.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

TP

Đ ẠO

2.2.

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q

Mục tiêu của đề tài là nghiên cứu, xác định thành phần amino acid trong một số loại thực phẩm chức năng bằng phương pháp HPLC ghép detector huỳnh quang.

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

D

U

người.

• Bể siêu âm; tủ lạnh; tủ sấy • Các dụng cụ thí nghiệm thông dụng khác.

2.2.3. Hóa chất Các loại hóa chất sử dụng đều thuộc loại tinh khiết phân tích •

Chất chuẩn Amino acid được cung cấp bởi Waters ( USA)

•

Chất phản ứng (2A) được cung cấp bởi Waters

20 Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Chất pha loãng (2B) được cung cấp bởi Waters

•

Đệm Borate được cung cấp bởi Waters

•

Na2B4O7 được cung cấp bởi KANTO chemical ( Nhật Bản)

•

HCl 37% được cung cấp bởi Merck

•

Phenol 99% được cung cấp bởi Glentham Life Sciences ( Anh Quốc)

•

Acetonitrile loại tinh khiết được cung cấp bởi Merck

•

Đệm Eluent loại tinh khiết được cung cấp bởi Waters

•

Nước siêu sạch dùng cho máy HPLC

400 µl (500 µM)

600

200 µl (500 µM)

800

500 µl (100 µM)

500

20

200 µl (100 µM)

800

10

100 µl (100 µM)

900

5

100 µl (50 µM)

900

200

3

100

4

50

A

10 00

2

Ó -H

Ý -L

7

ÁN

800

500

6

TO

200 µl (2500 µM)

1

5

Thể tích H2O deion (µl)

Bảng 2.1 Nồng độ Amino acid chuẩn làm việc

Chuẩn làm việc được bảo quản ở -20oC, sử dụng trong 1 tháng.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

H Ư

N

Nồng độ chuẩn Thể tích Aminoacid (µM) (µl)

TR ẦN

STT

B

http://daykemquynhon.ucoz.com

G

Đ ẠO

❖ Pha dung dịch chuẩn ➢ Chuẩn gốc 2500µM, bảo quản ở -20oC, sử dụng trong 12 tháng ➢ Chuẩn làm việc được pha theo bảng sau trong vial 1ml

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

2.2.4. Chuẩn bị dung dịch chuẩn.

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q

U

Y

N

H

Ơ

N

•

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

Chất nội chuẩn: (trong một số trường hợp còn được gọi là chất đồng hành) là chất được thêm vào mẫu ở thời điểm sớm nhất có thể trong quy trình phân tích để kiểm soát lượng mẫu mất đi trong quá trình chiết làm sạch và phân tích sắc ký.

D

IỄ N

Đ

ÀN

❖ Pha nội chuẩn

21 Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

V–H2O

Nồng độ (µM)

V – IS (ml)

1

500

0,2ml (IS-Amino acid 2500 µM)

0,8

2

100

0,2 ml (IS-Amino acid 500 µM)

0,8

3

20

0,2 ml (IS-Amino acid 100 µM)

0,8

(ml)

Y

Thêm 10µl chất nội chuẩn (IS- 20 µM) vào ống nghiệm.

•

Thêm 60µl Reagent 1( đệm borate) vào ống nghiệm, lắc đều.

•

Dùng pipet hút 20µl dịch phản ứng vào ống đựng mẫu.

•

Lắc vortex vài giây. Để yên về nhiệt độ phòng.

•

Điều nhiệt ở 55oC trong 10 phút.

H Ư

N

G

•

TR ẦN

http://daykemquynhon.ucoz.com

• Hút 10µl chuẩn làm việc vào Vial siêu nhỏ 0,4ml

B

Dung dịch sử dụng trong 1 tuần, bảo quản ở nhiệt độ phòng. Đánh giá các thông số phân tích

10 00

2.3.

-L

Ý

-H

Ó

A

2.3.1. Xây dựng đường chuẩn Để phù hợp với thiết bị sắc ký lỏng HPLC với detector RF chúng tôi đã xây dựng đường chuẩn với amino acid từ 5 µM đến 100 µM. Thông tin về đường đường chuẩn sẽ được trình bày ở phần kết quả.

2.3.2. Giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng

TO

ÁN

Giới hạn phát hiện (LOD) Là nồng độ thấp nhất của chất phân tích mà hệ thống phân tích còn cho tín

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Đ ẠO

Chỉnh máy điều nhiệt về 55oC

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

TP

2.2.5. Dẫn xuất hóa dung dịch chuẩn

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

U .Q

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Bảng 2.2 Nồng độ chất nội chuẩn •

N

H

Ơ

N

STT

D

IỄ N

Đ

ÀN

hiệu phân tích khác có nghĩa so với tín hiệu màu trắng hay tín hiệu nền. Đối với các quá trình sắc ký, LOD là nồng độ nhỏ nhất mà cho tín hiệu/nhiễu (S/N).

Giới hạn định lượng (LOQ) Là nồng độ thấp nhất của chất phân tích mà hệ thống phân tích định lượng được với tín hiệu phân tích khác có ý nghĩa định lượng với tín hiệu màu trắng hay tín hiệu của nền.Thông thường, với các quá trình sắc ký giá trị LOQ bằng 3.33 lần LOD

22 Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

A

10 00

B

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

G

Đ ẠO

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

.Q

U

Y

N

H

Ơ

Độ chụm là một khái niệm định tính và được định lượng bởi độ lệch chuẩn tương đối RSD% hay hệ số biến thiên CV%.

Công thức tính độ chụm đã được nêu ở phần 1.

N

2.3.3. Độ chụm Độ chụm là mức độ gần nhau của các giá trị riêng lẻ của các phép đo lặp lại.

23 Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Đánh giá phương pháp phân tích

3.1.

N

H

Ơ

Sau khi tham khảo các tài liệu đã công bố và qua quá trình khảo sát tại phòng thí nghiệm, chúng tôi đã lựa chọn được điều kiện phù hợp để phân tích amino acid

N

Điều kiện chạy máy

3.1.1.

Thể tích bơm: 10 µl Nhiệt độ cột: 40 ºC Dung môi: Acetonitrile : H2O = 95 : 5 (A), Đệm Eluent A : H2O = 10 : 90 (B) Chương trình Gradient:

Y %B

1

99

2

98

7

93

19

10

90

32 - 33

33

67

34 - 37

100

0

38 - 50

0

100

51 - 55

1

99

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-H

A

15

10 00

0,5

B

0

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

%A

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

G

N

H Ư

TR ẦN

Thời gian

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

-

U .Q

Cột tách: Waters AccQ.Tag 3.9x150mm Thời gian chạy: 55 phút Tốc độ dòng: 1 ml/phút

TP

-

Ó

http://daykemquynhon.ucoz.com

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Điều kiện hệ thống sắc ký lỏng HPLC - FLD (Shimadzu)

3.1.2. Khảo sát đường chuẩn Dung dịch dùng để dựng đường chuẩn được pha loãng từ dung dịch gốc và dẫn xuất hóa như mục 2.2.4. Đường chuẩn được xây dựng từ nồng độ 5µM đến 100µM. Các điều kiện đo như ở mục 3.1.1 và kết quả thu được trình bày ở bảng 3.1.

24 Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Tên chất CSTD/IS (µM)

SSTD/IS (µM) Tên chất CSTD/IS (µM)

SSTD/IS (µM)

0,0951

0,25

0,0452

0,5

0,2070

0,5

0,1609

1

0,3459

2,5

0,8099

2,5

0,8873

5

1,6460

0,25

0,1039

0,5

0,5

0,2323

1

1

0,3593

2,5

0,9099

5

1,6772

0,25

H N Y

0,1131

0,25

0,3219

0,5

0,1150

0,5

0,7469

1

0,2404

1

1,2985

2,5

3,3629

5

6,2070

TR ẦN

H Ư

N

3,7105

VAL

1,1018

-H

0,2359

0,25

0,2684

0,5

0,5743

0,5

0,6006

GLY

1

1,0073

1

1,0311

2,5

2,6527

2,5

2,7227

5

4,9613

5

4,9882

0,25

1,9207

0,5

0,3542

1

2,4068

1

0,7913

2,5

2,2253

5

4,1249

Đ

ÀN

TO

-L

Ý

0,25

ÁN

Ó

A

5

MET

HIS

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

1,9965

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

0,7675

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

U .Q TP

Đ ẠO G

2,5

0,4618

5,0

GLU

IỄ N D

TYR

B

http://daykemquynhon.ucoz.com

SER

CYS

10 00

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

ASP

Ơ

N

0,25

LYS 5

5,0991

25 Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

0,25

0,0708

0,25

0,4663

0,5

0,2361

0,5

1,0201

1

0,5170

1

1,7791

2,5

1,3995

2,5

4,6398

5

2,6546

5

8,5391

0,25

0,1442

0,5

1,0014

0,5

0,3447

1

1

0,5799

2,5

1,5693

5

2,9505

0,25

0,1564

0,5

0,3447

1

0,5799

2,5

1,5627

ILE

Ơ H

N

Y

U .Q TP

1

3,4945

2,5

7,3676

5

12,3983

N PHE

0,3375

2,5

0,8001

5

1,5067

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

Đ ẠO

2,7168

G 0,5

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

1

-L ÁN TO ÀN

8,5391

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Ó

-H

0,1815

Bảng 3.1 Sự phụ thuộc giữa diện tích pic (chất chuẩn : nội chuẩn) và nồng độ (chất chuẩn : nội chuẩn)

D

IỄ N

Đ

5

0,0743

0,5

Ý

PRO

4,4772

2,8442

A

5 0,25

2,5

H Ư

TR ẦN

ALA

LEU

B

http://daykemquynhon.ucoz.com

THR

1,7106

10 00

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

N

ARG

26 Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Từ kết quả trên, ta xây dựng được đường chuẩn của 17 amino acid. ➢

Aspartate Area Ratio

N

5

H

Ơ

1.50

N

1.25

Y

1.00

.Q TP Đ ẠO

2 1

0.00 0.0

0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0

3.5

4.0

4.5 Conc. Ratio

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

G

Hình 3.1 Đường chuẩn của Aspartate

H Ư

→ phương trình hồi quy của đường chuẩn có dạng:

TR ẦN

y = 0,03024352 + 0,5437032x

B

Trong khoảng nồng độ khảo sát từ 5µM đến 100µM , các điểm nồng độ của Aspartate phụ thuộc tuyến tính chặt chẽ, với hệ số tương quan R2>0,9992777.

10 00

➢ Serine

Area Ratio 1.75

A

-H

Ó

1.50

5

Ý

1.25

4

0.75

0.50 3 2

0.25 1 0.00 0.0

0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0

3.5

4.0

4.5 Conc. Ratio

Hình 3.2 Đường chuẩn của Serine → phương trình hồi quy của đường chuẩn có dạng:

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

1.00

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

3 0.25

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

0.50

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

U

4 0.75

y = 0,0471286+ 0,3293996x Trong khoảng nồng độ khảo sát từ 5µM đến 100µM , các điểm nồng độ của Serine phụ thuộc tuyến tính chặt chẽ, với hệ số tương quan R2> 0,9980937.

27 Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

➢

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Glutamine Area Ratio 5

Ơ

N

1.00

N

H

0.75

1.5

2.0

2.5

3.0

3.5

4.0

4.5 Conc. Ratio

G

Hình 3.3 Đường chuẩn của Glutamine

N

→ phương trình hồi quy của đường chuẩn có dạng:

H Ư

y = 0,03235095+ 0,2134659x

B

Glycine

10 00

➢

TR ẦN

Trong khoảng nồng độ khảo sát từ 5µM đến 100µM , các điểm nồng độ của Glutamine phụ thuộc tuyến tính chặt chẽ, với hệ số tương quan R2> 0,9979994.

Area Ratio

-H

Ó

4

5

A

5

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

3

4

2

3

1 2 1 0 0.0

0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0

3.5

4.0

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

1.0

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

0.5

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

TP

0.00 0.0

2

Đ ẠO

1

http://daykemquynhon.ucoz.com

D

3

0.25

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

.Q

U

Y

0.50

4.5 Conc. Ratio

Hình 3.4 Đường chuẩn của Glycine → phương trình hồi quy của đường chuẩn có dạng: y = 0,04907518+ 0,9930881x

Trong khoảng nồng độ khảo sát từ 5µM đến 100µM , các điểm nồng độ của Glycine phụ thuộc tuyến tính chặt chẽ, với hệ số tương quan R2> 0,9984756.

28 Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

➢

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Hystidine Area Ratio 5

Ơ

N

5

N

H

4

Y

3

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0

3.5

4.0

4.5 Conc. Ratio

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

G

Hình 3.5 Đường chuẩn của Hystidine

H Ư

→ phương trình hồi quy của đường chuẩn có dạng:

TR ẦN

y = 1,74546+ 0,6704363x

Arginine

10 00

➢

B

Trong khoảng nồng độ khảo sát từ 5µM đến 100µM , các điểm nồng độ của Hystidine phụ thuộc tuyến tính chặt chẽ, với hệ số tương quan R2> 0,9999755.

Area Ratio

A

5

Ó

2.5

-H

2.0

4

1.0

3

0.5 2 1 0.0 0.0

0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0

3.5

4.0

4.5 Conc. Ratio

Hình 3.6 Đường chuẩn của Arginine → phương trình hồi quy của đường chuẩn có dạng:

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

1.5

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

0.5

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

0 0.0

Đ ẠO

1

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q

1

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

2

U

3

y = 1,74546+ 0,6704363x Trong khoảng nồng độ khảo sát từ 5µM đến 100µM , các điểm nồng độ của Arginine phụ thuộc tuyến tính chặt chẽ, với hệ số tương quan R2> 0,9983890.

29 Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

➢

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Threonine Area Ratio 5

Ơ

N

3.0

N

H

2.5

Y

2.0

4

Đ ẠO

2 1 0.0 0.0

0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0

3.5

4.0

4.5 Conc. Ratio

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

G

Hình 3.7 Đường chuẩn của Threonine

H Ư

→ phương trình hồi quy của đường chuẩn có dạng:

TR ẦN

y = 0,02505941+ 0,5906359x

10 00

➢

B

Trong khoảng nồng độ khảo sát từ 5µM đến 100µM , các điểm nồng độ của Threonine phụ thuộc tuyến tính chặt chẽ, với hệ số tương quan R2> 0,9985107.

Alanine

Area Ratio

Ó

A

5

-H

2.5

4

1.5

1.0

3 0.5 2 1 0.0 0.0

0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0

3.5

4.0

4.5 Conc. Ratio

Hình 3.8 Đường chuẩn của Alanine → phương trình hồi quy của đường chuẩn có dạng:

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

2.0

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

3 0.5

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

TP

1.0

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

U .Q

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

1.5

y = 0,03432729 + 0,5706511x Trong khoảng nồng độ khảo sát từ 5µM đến 100µM , các điểm nồng độ của Alanine phụ thuộc tuyến tính chặt chẽ, với hệ số tương quan R2> 0,9973220.

30 Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

➢

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Proline Area Ratio 5

Ơ

N

1.50

H

1.25

N

1.00

Y

4

2

0.00 0.0

0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

Đ ẠO

1 3.0

3.5

4.0

4.5 Conc. Ratio

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

G

Hình 3.9 Đường chuẩn của Proline

H Ư

→ phương trình hồi quy của đường chuẩn có dạng:

TR ẦN

y = 0,02740099 + 0,2987303x

Cysteine

10 00

➢

B

Trong khoảng nồng độ khảo sát từ 5µM đến 100µM , các điểm nồng độ của Proline phụ thuộc tuyến tính chặt chẽ, với hệ số tương quan R2> 0,9987004.

Area Ratio

-H

Ó

0.7

5

A

0.8

0.6

0.4

0.3

0.2

3

0.1 2 0.0 0.00

0.25

0.50

0.75

1.00

1.25

1.50

1.75

2.00

2.25 Conc. Ratio

Hình 3.10 Đường chuẩn của Cysteine → phương trình hồi quy của đường chuẩn có dạng:

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

0.5

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

3 0.25

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

0.50

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q

U

0.75

y = -0,02312135+ 0,3340067x Trong khoảng nồng độ khảo sát từ 5µM đến 100µM , các điểm nồng độ của Cystein phụ thuộc tuyến tính chặt chẽ, với hệ số tương quan R2> 0,9984475.

31 Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

➢

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Tyrosine Area Ratio

N

5

Ơ

3.5

N

H

3.0

Y

2.5 4

0.5

0.0 0.0

0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0

3.5

Đ ẠO

3 2

4.0

4.5 Conc. Ratio

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

G

Hình 3.11 Đường chuẩn của Tyrosine

H Ư

→ phương trình hồi quy của đường chuẩn có dạng:

TR ẦN

y = 0,0928286+ 0,7294305x

10 00

➢

B

Trong khoảng nồng độ khảo sát từ 5µM đến 100µM , các điểm nồng độ của ASP phụ thuộc tuyến tính chặt chẽ, với hệ số tương quan R2> 0,9984210.

Valine

Area Ratio

A

5

Ó

6

-H

5

4 3

2 3 1

2 1

0 0.0

0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0

3.5

4.0

4.5 Conc. Ratio

Hình 3.12 Đường chuẩn của Valine → phương trình hồi quy của đường chuẩn có dạng:

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

4

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

1.0

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

1.5

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q

U

2.0

y = 0,09913257+ 1,236954x Trong khoảng nồng độ khảo sát từ 5µM đến 100µM , các điểm nồng độ của Valine phụ thuộc tuyến tính chặt chẽ, với hệ số tương quan R2> 0,9980992.

32 Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

➢

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Methionine Area Ratio 5

Ơ

N

5

N

H

4

3

.Q 2

0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

Đ ẠO

1 0 0.0

3.0

3.5

4.0

4.5 Conc. Ratio

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

G

Hình 3.13 Đường chuẩn của Methionine

H Ư

→ phương trình hồi quy của đường chuẩn có dạng:

TR ẦN

y = 0,08234936 + 0,9945326x

Lysine

10 00

➢

B

Trong khoảng nồng độ khảo sát từ 5µM đến 100µM , các điểm nồng độ của Methionine phụ thuộc tuyến tính chặt chẽ, với hệ số tương quan R2> 0,9977379.

Area Ratio

-H

Ó

3.5

5

A

4.0

3.0

4

2.0

1.5 1.0 3 0.5

2

0.0 0.0

0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0

3.5

4.0

4.5 Conc. Ratio

Hình 3.14 Đường chuẩn của Lysine → phương trình hồi quy của đường chuẩn có dạng:

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

2.5

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

3

1

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

2

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

U

Y

4

y = -0,01627268 + 0,8400862x Trong khoảng nồng độ khảo sát từ 5µM đến 100µM , các điểm nồng độ của Lysine phụ thuộc tuyến tính chặt chẽ, với hệ số tương quan R2> 0,9968873.

33 Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

➢

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Isoleucine Area Ratio

N

5

N

H

Ơ

7.5

5.0

0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

Đ ẠO

1 0.0 0.0

3.0

3.5

4.0

4.5 Conc. Ratio

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

G

Hình 3.15 Đường chuẩn của Isoleucine

H Ư

→ phương trình hồi quy của đường chuẩn có dạng:

TR ẦN

y = 0,142289 + 1,700888x

Leucine

10 00

➢

B

Trong khoảng nồng độ khảo sát từ 5µM đến 100µM , các điểm nồng độ của Isoleucine phụ thuộc tuyến tính chặt chẽ, với hệ số tương quan R2> 0,9980607.

Area Ratio

-H

Ó

7

5

A

8

6

4 4 3

2

3

1

2

0 0.0

0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0

3.5

4.0

4.5 Conc. Ratio

Hình 3.16 Đường chuẩn của Leucine → phương trình hồi quy của đường chuẩn có dạng:

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

5

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

3 2

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

TP

2.5

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

U

Y

4

y = 0,2113376 + 1,617361x Trong khoảng nồng độ khảo sát từ 5µM đến 100µM , các điểm nồng độ của Leucine phụ thuộc tuyến tính chặt chẽ, với hệ số tương quan R2> 0,9977844.

34 Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

➢

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Phenylalanine Area Ratio 5

Ơ

N

12.5

N

H

10.0

TP

3

0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

Đ ẠO

0.0 0.0

3.0

3.5

4.0

4.5 Conc. Ratio

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

G

Hình 3.17 Đường chuẩn của phenylalanine

H Ư

→ phương trình hồi quy của đường chuẩn có dạng:

TR ẦN

y = 1,569144 + 2,188964x

10 00

B

Trong khoảng nồng độ khảo sát từ 5µM đến 100µM , các điểm nồng độ của phenylalanine phụ thuộc tuyến tính chặt chẽ, với hệ số tương quan R2> 0,9967399.

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

A

Pic chuẩn

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

2 2.5

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

5.0

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q

U

Y

4

7.5

Hình 3.18 Sắc ký đồ chuẩn Amino acid 50µM Từ các kết quả trên với khoảng tuyến tính này (từ 5µM đến 100µM ), phương pháp hoàn toàn có thể xác định hàm lượng amino acid trong các mẫu bụi cần nghiên cứu.

35 Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

N

H

Ơ

Giới hạn xác định là lượng nhỏ nhất của chất cần phân tích có trong mẫu thử có thể định lượng được trong điều kiện tiến hành phép thử. Thông thường, LOQ được

N

3.1.3. Giới hạn phát hiện (LOD), giới hạn định lượng (LOQ)

Hình 3.19 Sắc ký đồ LOQ của Amino Acid

ÁN

µM).

-L

Ý

Ta có S/N >10 nên các amino acid sẽ có LOQ = 5µM ( riêng Cysteine là 2,5

TO

Suy ra LOD là 1,5 µM ( riêng Cysteine là 0,75 µM)

Để đánh giá độ lặp lại của thiết bị, chúng tôi tiến hành khảo sát độ lặp lại của các amino acid ở 200 µM ( riêng cys là 100 µM) được tiến hành với 6 lần bơm mẫu độc lập. Kết quả được trình bày ở các bảng 3.1 – 3.5 :

D

IỄ N

Đ

ÀN

3.1.4. Độ lặp lại

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

-H

Ó

A

10 00

B

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

G

Đ ẠO

vào cách tính ở mục 2.3.2, chúng tôi tiến hành khảo sát giới hạn phát hiện ở nồng độ 5µM được lặp lại 3 lần. Kết quả thu được như sau :

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

.Q

Tiến hành xác định giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng bằng cách thêm chuẩn trên nền mẫu trắng ở mức nồng độ giảm dần cho đến khi đạt S/N≥ 10. Dựa

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

U

Y

lấy từ 3 đến 5 lần LOD.

36 Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

98,20

GLU

96,35

200

85,50 108,77

181,231

90,62

175,690

87,85

ÁN

-L

Ý

-H

A

217,547

175,777 221,581 214,299

98,07

10,76

87,89 110,79

200

107,15

209,157

104,58

180,355

90,18

Bảng 3.2 Độ lặp lại của Aspartate ; Serine ; Glutamine ; Glycine

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

GLY

10,43

83,95

Ó

170,997

91,70

85,01

10 00

192,699

103,59

TR ẦN

167,901

5,54

94,97

B

170,016

100,29

N

109,56

189,940 207,170

N

95,31

200

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

196,406

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

100,13

Y

200,259

U

97,93

.Q

195,852

10,83

TP

93,62

219,118

96,37

104,95

187,232

190,620

Ơ

110,36

200

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

81,36

N

162,723

RSD%

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

90,02

209,901

SER

trung bình

180,049 220,730

ASP

R%

R%

Đ ẠO

(uM)

C thêm chuẩn ( µM)

G

C thu hồi

Tên chất

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

H

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

37 Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

90,81

173,951

86,98

A

Ó

N

6,69

95,09 200

186,567

93,28

186,55

93,28

194,974

97,49

168,158

84,08

167,937

83,97

-H Ý -L ÁN TO ÀN Đ

89,90

88,01

190,179

186,624 ALA

3,37

92,51

176,025 THR

93,28

92,73

10 00

185,012

9,28

105,55

B

185,451

98,09

103,06

TR ẦN

206,119 211,102

G

N

H Ư

109,44 200

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

181,616

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

103,48

Y

206,964

.Q

109,58

TP

219,161

10,65

Đ ẠO

114,90

U

102,33

229,802

ARG

IỄ N D

107,51 200

218,87

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

86,60

Ơ

173,203

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

91,93

215,027

RSD% trung bình

183,864

HIS Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

R% R%

H

C thu hồi C thêm chuẩn ( µM) (uM)

Tên chất

93,31 200

196,522

98,26

187,572

93,79

172,014

86,01

Bảng 3.3: Độ lặp lại của Hystidine , Arginine , Threonine , Alanine

38 Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

81,17

H Ư

96,10 200

A

Ó

10,12

100,14 200

184,813

92,41

195,677

97,84

189,599

94,80

165,618

82,81

183,872

91,94

-H Ý -L ÁN TO ÀN

99,17

80,84

200,278

217,919 VAL

7,75

87,27

161,67 TYR

92,21

84,34

10 00

174,539

TR ẦN

84,342

7,58

95,46

B

95,456

83,85

81,67

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

81,174

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

87,50

U

87,504

.Q

93,90

TP

187,808

Đ ẠO

92,82

G

185,632

7,63

N

98,02

81,674

Đ

N 91,19

196,048

CYS

IỄ N D

95,65 200

96,101

http://daykemquynhon.ucoz.com

Ơ

78,74

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

157,471

H

88,00

191,303

RSD% trung bình

176,001

PRO Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

R% R%

N

C thu hồi C thêm chuẩn ( µM) (uM)

Y

Tên chất

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

108,96 200

210,614

105,31

212,378

106,19

199,639

99,82

Bảng 3.4 Độ lặp lại của Proline Cysteine Tyrosine Valine

39 Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

95,15

250,146

125,07

N

H Ư

110,17 200

187,953

A

Ó

113,11 200 110,92

224,722

112,36

195,639

97,82

164,848

82,42

154,885

77,44

-H

221,846

Ý -L ÁN TO ÀN

92,49

10,79

97,97

226,218

200,939 LEU

7,84

96,15

195,943 ILE

104,72

93,98

10 00

192,296

11,34

110,48

B

220,967

106,77

108,49

TR ẦN

216,974

100,47 200

196,961

98,48

200,135

100,07

192,166

96,08

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

92,42

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

184,838

Y

104,72

U

209,431

.Q

95,87

TP

191,742

4,11

Đ ẠO

96,07

G

192,137

220,34

Đ

96,78

200

LYS

IỄ N D

N

95,11

Ơ

190,21

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

93,75

190,29

http://daykemquynhon.ucoz.com

RSD% trung bình

187,492

MET Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

R%

H

(uM)

R%

C thêm chuẩn ( µM)

N

C thu hồi Tên chất

Bảng 3.5 Độ lặp lại của Methionine Lysine Isoleucine Leucine Phenylalanine

40 Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

C thu hồi Tên chất (uM)

C thêm chuẩn (µM)

R% R%

RSD% trung bình

87,73

176,67

88,34

203,308

101,65

G

Bảng 3.1 Độ lặp lại của Phenylalanine

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

Ngoài độ lặp lại thì đánh giá hiệu suất thu hồi là một yếu tố để đánh giá phương pháp phân tích. Đánh giá độ thu hồi là đánh giá độ tin cậy của phương pháp xử lý mẫu. Công thức tính độ thu hồi được nêu ở mục 1.4.2. Kết quả thu được ở bảng 3.1 – 3.5 với độ thu hồi (R%) của các amino acid khá cao đạt khoảng 85% đến 115 %.

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

A

10 00

B

Từ các bảng cho ta thấy khi đo lặp lại 6 lần ở nồng độ 200 µM thì RSD% < 12%, độ thu hồi đạt khoảng 80% đến 110%. Theo quy định AOAC, quy trình phân tích amino acid bằng HPLC là đáng tin cậy, hoàn toàn có thể áp dụng trên các mẫu thực tế.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

92,32

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

184,647

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

92,33

TP

184,663

5,39

.Q

92,46

Đ ẠO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

200

Y

92,36

PHE

U

184,719

N

H

Ơ

N

175,457

41 Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

3.2.

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Phân tích mẫu thực tế

N

3.2.1. Quy trình xử lý mẫu

Ơ

Cân W(g) mẫu

Y

N

H

+ 2ml HCl đặc 37%

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

Định mức 20, 50 ml bằng nước

TR ẦN

Lọc qua màng 0,2 µm Dẫn xuất hóa: điều nhiệt ở 55oC, lấy 10 µl dịch trên

10 00

B

+ 10 µl nội chuẩn (20 µM) + 60 µl đệm borate

Lắc Vortex trong vài giây Để yên 1 phút Chuyển sang vial 1,5 ml Điều nhiệt 55oC trong 10 phút Chạy HPLC-FD

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

A

+ 20 µl chất phản ứng

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

G

Chỉnh pH=7 bằng NaB4O7 0,25M

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

Làm lạnh, mở vial

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

.Q

Đậy nắp, thủy phân ở 112-116oC trong 20-24 giờ

U

+ 1 tinh thể phenol với acid

42 Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DấyKèmQuyNhƥn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

3.2.2. Ä?áť&#x2122; chĂ­nh xĂĄc cᝧa phĂŠp Ä&#x2018;o

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

D

Iáť&#x201E; N

Ä?

Ă&#x20AC;N

TO

Ă N

-L

Ă?

-H

Ă&#x201C;

HĂŹnh 3.20 Sắc kĂ˝ Ä&#x2018;áť&#x201C; mẍu amino acid (0317050) test A

Máť&#x152;I YĂ&#x160;U CẌU GᝏI Váť&#x20AC; Háť&#x2DC;P MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

A

10 00

B

TR ẌN

H ĆŻ

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

G

Ä? áş O

TP

NĆĄi báť&#x201C;i dưᝥng kiáşżn thᝊc ToĂĄn - LĂ˝ - HĂła cho háť?c sinh cẼp 2+3 / Diáť&#x2026;n Ä?Ă n ToĂĄn - LĂ˝ - HĂła Quy NhĆĄn 1000B Trần HĆ°ng Ä?ấo Tp.Quy NhĆĄn Táť&#x2030;nh BĂŹnh Ä?áť&#x2039;nh

Náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; cĂĄc chẼt amino acid cᝧa mẍu 0317050 Ä&#x2018;ưᝣc xáť­ lĂ˝ vĂ biáť&#x192;u diáť&#x2026;n áť&#x; bảng 3.6. CĂĄc cháť&#x2030; tiĂŞu amino acid cᝧa mẍu dao Ä&#x2018;áť&#x2122;ng trong khoảng 1-5% Ä&#x2018;ưᝣc cho lĂ phĂš hᝣp vĂ cĂł tĂĄc d᝼ng báť&#x2022; sung táť&#x2018;t cho cĆĄ tháť&#x192;.

Dáş Y KĂ&#x2C6;M QUY NHĆ N OFFICIAL ST&GT : Ä?/C 1000B TRẌN HĆŻNG Ä?áş O TP.QUY NHĆ N

U

Y

N

đ??śđ?&#x2018;&#x153; Ă&#x2014; đ?&#x2018;&#x2030; Ă&#x2014; đ??š (Âľđ?&#x2018;&#x20AC;) đ?&#x2018;&#x160;

.Q

đ??ś(Âľđ?&#x2018;&#x20AC;) =

H

Ć

thĂŞm ngoĂ i tháť&#x2039; trĆ°áť?ng (bao gáť&#x201C;m 5 mẍu). 5 mẍu sản phẊm Ä&#x2018;ưᝣc xáť­ lĂ˝, phân tĂ­ch nhĆ° phần 3.2.1. Káşżt quả thu Ä&#x2018;ưᝣc sắc kĂ˝ Ä&#x2018;áť&#x201C; cᝧa cĂĄc mẍu biáť&#x192;u diáť&#x2026;n áť&#x; hĂŹnh 3.19, 3.20 vĂ phần ph᝼ l᝼c 1-8. Náť&#x201C;ng Ä&#x2018;áť&#x2122; cĂĄc chẼt thu Ä&#x2018;ưᝣc quy Ä&#x2018;áť&#x2022;i theo cĂ´ng thᝊc:

N

CĂĄc mẍu Ä&#x2018;ưᝣc cháť?n Ä&#x2018;ưᝣc Viáť&#x2021;n cĂ´ng nghiáť&#x2021;p tháťąc phẊm cung cẼp vĂ Ä&#x2018;ưᝣc mua

HĂŹnh 3.21 Sắc kĂ˝ Ä&#x2018;áť&#x201C; mẍu amino acid (0317050) test B

43 Ä?Ăłng gĂłp PDF báť&#x;i GV. Nguyáť&#x2026;n Thanh TĂş

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

Ctb (%)

Test

N

5,39

N

H

1,49

0,12

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

A

10 00

B

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

0,95 1,08 1,89 1,48 0,22 1,08 0,46 0,86

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

1,18

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

1,39

N

G

Đ ẠO

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

.Q

U

Y

1,98

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

W V Co C Ctb F (ml/g) (ml) (M) (mg/100g) (mg/100g) A 0,1016 50 12,5 59,504 5358,60 Acid 5393,03 Glutamine B 0,1013 50 10 74,365 5400,46 A 0,1016 50 12,5 13,315 1484,10 Tyrosine 1485,59 B 0,1013 50 10 16,628 1487,08 A 0,1016 50 12,5 24,521 1978,60 Leucine 1982,53 B 0,1013 50 10 30,682 1986,46 A 0,1016 50 12,5 17,452 130,06 Cysteine 118,21 B 0,1013 50 10 17,786 106,36 A 0,1016 50 12,5 15,678 1409,92 Lysine 1390,13 B 0,1013 50 10 18,991 1370,33 A 0,1016 50 12,5 24,850 1147,57 Glycine 1178,49 B 0,1013 50 10 32,640 1209,42 A 0,1016 50 12,5 17,170 940,99 Alanine 953,02 B 0,1013 50 10 21,946 965,04 A 0,1016 50 12,5 15,175 1074,74 Proline 1081,42 B 0,1013 50 10 19,148 1088,81 A 0,1016 50 12,5 26,124 1882,66 Valine 1887,85 B 0,1013 50 10 32,738 1893,04 A 0,1016 50 12,5 18,123 1462,38 Isoleucine 1479,93 B 0,1013 50 10 23,129 1497,48 A 0,1016 50 12,5 23,036 211,44 Methionine 217,29 B 0,1013 50 10 30,298 223,14 A 0,1016 50 12,5 11,078 1125,72 Phenylalanin 1076,37 B 0,1013 50 10 12,596 1027,02 A 0,1016 50 12,5 65,858 425,75 Serine 458,98 B 0,1013 50 10 94,893 492,22 A 0,1016 50 12,5 12,176 892,17 Threonine 863,24 B 0,1013 50 10 14,191 834,31 A 0,1016 50 12,5 38,311 3137,04 Acid 3161,54 Aspartic B 0,1013 50 10 48,493 3186,03 A 0,1016 50 12,5 15,960 1523,29 Hystidine 1658,27 B 0,1013 50 10 23,416 1793,24 A 0,1016 50 12,5 32,102 3440,06 Arginine 3375,02 B 0,1013 50 10 38,496 3309,97 Bảng 3.6 Nồng độ các amino acid của mẫu 0317050 Chỉ tiêu

D

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Ơ

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

3,16 1,66 3,38

44 Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

KẾT LUẬN

Ơ

pháp sắc ký lỏng HPLC - RF xác định hàm lượng amino acid trong thực phẩm chức năng chúng tôi thu được kết quả bao gồm:

N

Qua cơ sở nghiên cứu các điều kiện thực nghiệm, với mục đích ứng dụng phương

N

H

1. Điều kiện tối ưu cho hệ thống HPLC

1 -2

15 -19

7 - 10

93 - 90

33

67

100

0

38 - 50

0

100

51 - 55

1

99

N

H Ư

TR ẦN

Ó

A

10 00

34 - 37

99 -98

-H

2. Đánh giá phương pháp phân tích:

-L

Ý

Xác định giới hạn phát hiện LOD là 1,5 µM ( riêng Cysteine là 0,75 µM). Xây dựng đường chuẩn, phương trình hồi quy tuyến tính của các amino acid trong khoảng

ÁN

tuyến tính 5–100 µM; hệ số tương quan tuyến tính R2≥ 0,996; hiệu suất thu hồi R%

TO

trung bình là 80% đến 110%; độ lệch chuẩn tương đối RSD% có giá trị nhỏ hơn 12%.

D

IỄ N

Đ

ÀN

3. Phân tích hàm lượng amino acid trong mẫu thực phẩm chức năng

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

0 – 0,5

32 - 33

%B

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

%A

G

Thời gian

B

http://daykemquynhon.ucoz.com

Chương trình Gradient:

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

.Q

U

Y

Điều kiện hệ thống sắc ký lỏng HPLC - FLD (Agilent); Cột tách: Waters AccQ.Tag 3.9x150mm; Thời gian chạy: 55 phút; Tốc độ dòng: 1 ml/phút; Thể tích bơm: 10 µl; Nhiệt độ cột: 40 ºC ; Dung môi: Acetonitrile : H2O = 95 : 5 (A), Đệm Eluent A : H2O = 10 : 90 (B)

Tiến hành áp dụng phương pháp phân tích trên 5 đối tượng mẫu trên địa bàn Hà Nội. Các mẫu đều có hàm lượng các amino acid dao động khoảng 1-5% .

Nhận xét: Từ các kết quả thu được chúng tôi nhận thấy có thể áp dụng phương pháp sắc ký lỏng HPLC –RF để phân tích hàm lượng Amino acid với độ tin cậy cao, phù hợp cho việc phân tích trong các mẫu thực phẩm chức năng.

45 Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

N

Phụ Luc

H

Ơ

Danh sách Phụ Lục

Y https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

U .Q TP Đ ẠO

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

A

10 00

B

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

G

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

Phụ lục2 . Sắc ký đồ mẫu amino acid (0317011) test B Phụ lục 3. Sắc ký đồ mẫu amino acid (0317015) test A Phụ lục 4. Sắc ký đồ mẫu amino acid (0317015) test B Phụ lục 5. Sắc ký đồ mẫu amino acid (1216020) test A Phụ lục 6. Sắc ký đồ mẫu amino acid (1216020) test B Phụ lục 7. Sắc ký đồ mẫu amino acid (0317052) test A Phụ lục 8. Sắc ký đồ mẫu amino acid (0317052) test B Phụ lục 9. Sắc ký đồ độ lặp lại mẫu amino acid lần 1 Phụ lục 10. Sắc ký đồ độ lặp lại mẫu amino acid lần 2 Phụ lục 11. Sắc ký đồ độ lặp lại mẫu amino acid lần 3 Phụ lục 12. Sắc ký đồ độ lặp lại mẫu amino acid lần 4 Phụ lục 13. Sắc ký đồ độ lặp lại mẫu amino acid lần 5 Phụ lục 14. Sắc ký đồ độ lặp lại mẫu amino acid lần 6

N

Phụ lục 1. Sắc ký đồ mẫu amino acid (0317011) test A

46 Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

D

ÀN

Đ

http://daykemquynhon.ucoz.com

A

Ó

-H B

10 00

Phụ lục 2 . Sắc ký đồ mẫu amino acid (0317011) test B

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

TR ẦN G

N

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Ý

-L

TP

Y

U

.Q

Phụ lục 1. Sắc ký đồ mẫu amino acid (0317011) test A

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

TO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

N

Ơ

H

N

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Phụ lục 3. Sắc ký đồ mẫu amino acid (0317015) test A

47

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

D

ÀN

Đ

http://daykemquynhon.ucoz.com

A

Ó

-H B

10 00

Phụ lục 5. Sắc ký đồ mẫu amino acid (1216020) test A

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

TR ẦN G

N

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Ý

-L

TP

Y

U

.Q

Phụ lục 4. Sắc ký đồ mẫu amino acid (0317015) test B

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

TO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

N

Ơ

H

N

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Phụ lục 6. Sắc ký đồ mẫu amino acid (1216020) test B

48

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

D

ÀN

Đ

http://daykemquynhon.ucoz.com

A

Ó

-H Phụ lục 8. Sắc ký đồ mẫu amino acid (0317052) test B

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

B

10 00 TR ẦN G

N

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Ý

-L

TP

Phụ lục 7. Sắc ký đồ mẫu amino acid (0317052) test A

Y

U

.Q

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

TO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

N

Ơ

H

N

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Phụ lục 9. Sắc ký đồ độ lặp lại mẫu amino acid lần 1

49

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

D

ÀN

Đ

http://daykemquynhon.ucoz.com

A

Ó

-H B

10 00

Phụ lục 11. Sắc ký đồ độ lặp lại mẫu amino acid lần 3

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

TR ẦN G

N

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Ý

-L

TP

Phụ lục 10. Sắc ký đồ độ lặp lại mẫu amino acid lần 2

Y

U

.Q

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

TO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

N

Ơ

H

N

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Phụ lục 12. Sắc ký đồ độ lặp lại mẫu amino acid lần 4

50

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

IỄ N

D

ÀN

Đ

http://daykemquynhon.ucoz.com

A

Ó

-H B

10 00

Phụ lục 14. Sắc ký đồ độ lặp lại mẫu amino acid lần 6

Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

TR ẦN G

N

H Ư

Đ ẠO

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Ý

-L

TP

Phụ lục 13. Sắc ký đồ độ lặp lại mẫu amino acid lần 5

Y

U

.Q

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

ÁN

TO

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

N

Ơ

H

N

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

51

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

TÀI LIỆU THAM KHẢO

N

H

Ơ

[1] Trần Tứ Hiếu, Từ Vọng Nghi, Nguyễn Văn Ri, Nguyễn Xuân Trung (2007), Hóa học phân tích, phần 2: Các phương pháp phân tích công cụ, Nhà xuất bản Khoa học và Kỹ thuật Hà Nội.

N

• Tài liệu tiếng Việt

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

G

[5] Phạm Hùng Việt (2005) Sắc ký khí Cơ sở lí thuyết và khả năng ứng dụng Bộ Y Tế, Nhà xuất bản y học.

TR ẦN

[6] Viện kiểm nghiệm An toàn Vệ sinh thực phẩm Quốc gia, Thẩm định phương pháp trong phân tích hóa học & vi sinh vật, NXB Khoa học và Kĩ thuật.

10 00

• Tài liệu tiếng Anh

B

[7] Thực phẩm chức năng – Sức Khỏe Bền Vững, NXB Khoa Học và Kỹ Thuật.

-H

Ó

A

[7] Abdel-Aal, E.-S. M., & Hucl, P. (2002). Amino acid composition and in vitro protein digestibility of selected ancient wheats and their end products. Journal of Food Composition and Analysis, 15, 737–747.

TO

ÁN

-L

Ý

[8] Bani Rashaid, A., Jackson, G., & Harrington, (2014). Quantitation of amino acids in human hair by trimethylsilyl derivatization gas chromatography. Mass Spectrometry. Enliven: Bio Anal Techniques.

D

IỄ N

Đ

ÀN

[9] C. Aoyama, T. Santa, M. Tsunoda, T. Fukushima, C. Kitada, K. Imai, Biomed.

(2004), A fully automated Amino acidanalyzer using NBD-F as a fluorescent derivatization reagent. Chromatogr. 18, 630

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

[4] Hóa sinh công nghiệp, Lê Ngọc Tú, NXB KHKT HN, 2002.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

TP

[3] Tạ Thị Thảo (2005), Bài giảng chuyên đề thống kê trong hóa phân tích, ĐH Quốc gia Hà Nội.

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

.Q

U

Y

[2] Nguyễn Văn Ri (2007), Các phương pháp tách sắc ký, chuyên đề cao học trường ĐH KHTN - ĐHQG Hà Nội.

[10] Catherine Cooper, Nicolle Packer, Kate Williams,Humana Press, Amino acid protocol, 253 pages.

[11] E. Takach, T. O’Shea, H. Liu, (2014), High-throughput quantitation of amino acids in ratnd mouse biological matrices using stable isotope labeling and UPLCMS/MS analysis, J. Chromatogr. B.

52 Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

Ơ

amino acids and biogenic amines in wine, fruit and honey. Journal of Chromatography A 1217.

N

[12] Kelly, M.T., Blaise, A., Larroque, M., (2010). Rapid automated high performance liquid chromatography method for simultaneous determination of

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

[14] Nozal, M.J., Bernal, J.L., Toribio, M.L., Diego, J.C., Ruiz, A, (2004), Rapid and sensitive method for determining free amino acids in honey by gas chromatography

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

[15] Mei Musa Ali Omar, Abdalla Ahmed Elbashir, Oliver J. Schmitz, (2016).

Capillary electrophoresis method with UV-detection for analysis of freeamino acids concentrations in food.

B

[16] R. Y. Yada, (2004), Protein in Food processing, Woodhead Publishing Limited and CRC Press LLC.

-H

Ó

A

10 00

[17] Shigeki Akamatsu, Takao Mitsuhashi,(2013), Development of a simple analytical method using capillary electrophoresistandem mass spectrometry for product identification and simultaneous determination of free amino acids in dietary supplements containing royal jelly. Journal of Food Composition and Analysis 30, 47-51.

ÁN

-L

Ý

[18] Takano, Y., Kashiyama, Y., Ogawa, N.O., Chikaraishi, Y., Ohkouchi, N, (2010), Isolation and desalting with cation-exchange chromatography for compound-specific

TO

nitrogen isotope analysis of amino acids: application to biogeochemical samples.

Rapid Commun Mass Spectrom. 24, 2317–2323.

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

G

A.

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

Đ ẠO

with flame ionization or mass spectrometric detection. Journal of Chromatography

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

.Q

U

fluid by gas chromatography–mass spectrometry, J. Chromatogr. B 931.

Y

N

H

[13] M.J. de Paiva, H.C. Menezes, P.P. Christo, R.R. Resende, Z.L. Cardeal, (2013).

An alternative derivatization method for the analysis of amino acids in cerebrospinal

D

IỄ N

Đ

ÀN

[19] U. Harder, B. Koletzko, W. Peissner, (2011), Quantification of 22 plasma amino acids combining derivatization and ion-pair LC–MS/MS, J. Chromatogr. B 879, 495-504.

[20] Wang Xing, Chi Yumei, Kang An, (2014), Qualitative and quantitative analysis of the amino acids in Rhizoma Arisaematis by ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry and high performance liquid chromatography, Nanjing University of Traditional Chinese Medicine.

53 Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial

https://twitter.com/daykemquynhon plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn

www.facebook.com/daykem.quynhon https://daykemquynhon.blogspot.com

[21] Webb, E.C., Honch, N.V., Dunn, P.J.H., Eriksson, G., Lidén, K., Evershed, R.P, (2015), Compound-specific amino acid isotopic proxies for detecting freshwater

https://daykemquynhonofficial.wordpress.com/blog/

DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST&GT : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN

MỌI YÊU CẦU GỬI VỀ HỘP MAIL DAYKEMQUYNHONBUSINESS@GMAIL.COM HOTLINE : +84905779594 (MOBILE/ZALO)

D

IỄ N

Đ

ÀN

TO

ÁN

-L

Ý

-H

Ó

A

10 00

B

TR ẦN

H Ư

http://daykemquynhon.ucoz.com

N

G

Đ ẠO

TP

Nơi bồi dưỡng kiến thức Toán - Lý - Hóa cho học sinh cấp 2+3 / Diễn Đàn Toán - Lý - Hóa Quy Nhơn 1000B Trần Hưng Đạo Tp.Quy Nhơn Tỉnh Bình Định

.Q

U

Y

N

H

Ơ

[22] Z.T. How, F. Busetti, K.L. Linge, I. Kristiana,C.A. Joll, J.W.A. Charroi, (2014), Analysis of free amino acids in natural waters by liquid chromatography–tandem mass spectrometry, J. Chromatogr. A 1370, 135–146.

N

resource consumption. J. Archaeol. Sci. 63, 104–114.

54 Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú

www.facebook.com/daykemquynhonofficial www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial