Infecciones por virus de la inmunodeficiencia humana: tópicos de interés en el 2012

Utilidad de las pruebas rápidas para VIH

Infecciones por virus de la inmunodeficiencia humana: tópicos de interés en el 2012 Octubre 19

Santiago Estrada, M.D. Director General Laboratorio Clínico Congregación Mariana www.labcongregacion.org.co

Clases de pruebas para el diagnóstico de VIH

ELISAs 1° generación: lisados purificados de VIH. Sensiblidad y especificidad disminuidas.

2° generación: proteinas reconvinantes o péptidos sintéticos para VIH 1y2 3° generación: elisa emparedado con Ag como conjugado. Alta sensiblidad y redujeron el periodo de ventana considerablemente.

4°generación: detectan Ag y Ac.

Pruebas rápidas Caracteristicas • Rápida: se obtiene el resultado en menos de 30 minutos.

• Simple: se realiza en 3-4 pasos, requiere mínimo entrenamiento y equipo.

• De fácil interpretación: formato de tarjeta o tirilla con reacción visual.

• Conservación: menos de 30°C, no requieren refrigeración • Bajo costo TDR/SDI/DE/03.1 Laboratory-based evaluation of rapid syphilis diagnostic 2003

Clases de pruebas para el diagnóstico de VIH

Pruebas rápidas • Aglutinación • Inmunofiltración • Inmunocromatografia • Dipstick Lectura por mancha de color, linea o aglutinación de partículas La mayoría se realizan en 20 minutos por lo que se conocen como pruebas simples/rápidas World Health Organization.HIV Assays: Operational Characteristics Report 14 / Simple/Rapid tests. 2004

Terminología 

 



Prueba diagnóstica: se realiza la prueba de VIH en personas teniendo en cuenta sus manifestaciones clinicas (signos y síntomas).

Prueba de tamizaje: se realizan la prueba de VIH en todas las personas de una población definida.

Prueba blanco: se realiza la prueba de VIH en subpoblaciones de personas de alto riesgo, basado este en sus conductas de riesgo o características demográficas.

Opt-out tamizaje: realizar una prueba de VIH previa notificación al paciente que la prueba se hará; el consentimiento se asume a menos que el paciente lo rechace.

Impacto de las pruebas rápidas en la Salud Pública







Alta tasa de personas que no reclaman sus resultados.  En el 2000 en USA, 31% de las personas no reclamaban sus resultados.

Necesidad de un resultado inmediato para definir una conducta.  Salas de parto.  Manejo de la exposición con y sin riesgo biológico.

Realizar tamizajes en poblaciones de alto riesgo.

Conocimiento del estadio serológico de personas con VIH en USA

Número de personas infectadas con VIH

1,039,000 – 1,185,00

Número de personas que desconocen su infección

252,000 - 312,000 (24%-27%)

Estimativo anual de nuevas infecciones

40,000

Glynn M, Rhodes P. 2010 HIV Prevention Conference

Avances en la Prevención del VIH (AHP): nuevas estrategias para cambiar la epidemia

 Cuatro prioridades: 1.

Ofrecer de rutina la prueba de VIH en todos los sitios de atención médica.

2.

Implementar nuevos modelos de diagnóstico de infección de VIH en lugares diferentes a los sitios médicos de atención.

3.

Prevenir nuevas infecciones, trabajando con personas infectadas con VIH y sus compañeros.

4.

Disminuir la transmisión perinatal.

MMWR April 18, 2003

Fuentes de pruebas para VIH y resultados positivos • 38% - 44% de adultos de 18-64 años fueron tamizados • 16-22 millones de personas entre 18-64 años son tamizados anualmente en USA Pruebas de VIH*

Pruebas VIH+**

Consultorios privados

44%

17%

Hospital, ED, consulta externa

22%

27%

Centros públicos

9%

21%

Centros de consejeria para VIH

5%

9%

Cárceles

0.6%

5%

Clínicas de ITS

0.1%

6%

Clinicas de drogadictos

0.7%

2%

*National Health Interview Survey, 2005 **Suppl. to HIV/AIDS surveillance, 2001-2006

Cuatro pruebas rápidas para VIH, aprobadas por la FDA Sensiblidad (95% C.I.)

Especificidad (95% C.I.)

OraQuick Advance - Sangre total - fluido oral - plasma

99.6 (98.5 - 99.9) 99.3 (98.4 - 99.7) 99.6 (98.5 - 99.9)

100 (99.7-100) 99.8 (99.6 – 99.9) 99.9 (99.6 – 99.9)

Uni-Gold Recombigen - sangre total - suero/plasma

100 (99.5 – 100) 100 (99.5 – 100)

99.7 (99.0 – 100) 99.8 (99.3 – 100)

Cuatro pruebas rápidas para VIH, aprobadas por la FDA Sensibilidad (95% C.I.)

Especificidad (95% C.I.)

Reveal G2 - suero - plasma

99.8 (99.2 – 100) 99.8 (99.0 – 100)

99.1 (98.8 – 99.4) 98.6 (98.4 – 98.8)

Multispot - suero/plasma - HIV-2

100 (99.9 – 100) 100 (99.7 – 100)

99.9 (99.8 – 100)

OraQuick Advance HIV-1/2 

CLIA-aprobada para sangre del dedo, sangre total, fluido oral; moderada complejidad en plasma



Almacenada a temperatura ambiente.



Tamiza para VIH-1 and 2.



Resultados en 20 minutos.

Muestra de sangre por punción de dedo‌

Introducir el asa dentro del vial y sumergir

Recolectar la muestra de fluido oral, pasando el dispositivo entre la encia y el labio.

Guantes opcionales; los desechos no son biopeligrosos

Insertar el dispositivo; esperar resultado en 20 minutos

Control positivo Positivo HIV-1/2

Positive Negative Lectura del resultado en 20 – 40 minutos

Uni-Gold Recombigen



CLIA-Aprobada para sangre por punción del dedo, sangre total; moderada complejidad con suero, plasma



Almacenar a temperatura ambiente.



Tamiza para VIH-1.



Resultados en 10 minutos.

Agregar 1 gota de muestra al pozo

Agregar 4 gotas de soluci贸n de lavado

Positive

Negative

Leer resultados en 10 -12 minutos

Reveal

G2



CLIA moderada complejidad con suero, plasma



Reconstituir y refrigerar los reactivos.



Tamizaje para VIH-1.



Realizar la prueba en 5 minutos.

Centrifugar para obtener suero o plasma

Agregar buffer para reconstituir el conjugado.

(Suficiente para 15 pruebas; refrigerar para almacenar)

Agregar 3 gotas de buffer para humedecer la membrana

Agregar una gota de suero o plasma, seguidos de 3 gotas de buffer.

Agregar 4 gotas del agente revelador

Agregar 3 gotas del buffer de lavado

Reactivo

Negativo

Leer resultados inmediatamente

Multispot HIV-1/HIV-2



CLIA moderada complejidad con suero, plasma



Refrigerar los reactivos.



Diferencia VIH-1 de VIH-2.



Prueba en 15 minutos.

Diluci贸n de plasma o suero

Remover y descartar el tap贸n

Varios tiempos de reactivos & lavados

Control positivo

Recombinante VIH-1

Peptido VIH-2 Peptido VIH-1

Negativo

HIV-1 & HIV-2 Positivo

Ventajas y desventajas de las pruebas rápidas para VIH



Buenas noticias: más personas positivas recibirán su resultado.



Malas noticias: algunas personas recibirán un resultado falso positivo antes de la prueba confirmatoria.

Interpretaci贸n de las pruebas r谩pidas Para pruebas de laboratorio: Sensibilidad: Probabilidad prueba=positiva si paciente=positivo Epecificidad: Probabilidad prueba =negativa si patiente=negativo

Valor predictivo: Probabilidad paciente=positivo si prueba =positiva Probabilidad paciente =negativo si prueba =negativa

Ejemplo:

Prueba 1,000 personas

Especificidad = 99.6%

(4/1000)

VIH prevalencia = 10% Verdaderos positivos:

100

Valor predictivo positivo:

Falsos positivos: 4 100/104 = 96%

Ejemplo: Pruebas 1,000 personas Especificidad = 99.6% (4/1000) VIH prevalencia = 10% Verdaderos positivos: 100 Falsos positivos: 4 Valor predictivo positivo: 100/104 = 96% VIH prevalencia = 0.4% Verdaderos positivos:

4

Falsos positivos: 4

Valor predictivo positivo: 4/8 = 50%

Valor Predictivo de una Ăşnica prueba depende de la especificidad & Varia con la prevalencia Valor predictivo, Prueba positiva Prevalencia de VIH 10% 5% 2% 1% 0.5% 0.3% 0.1% Especificidad

OraQuik 99% 98% 95% 91% 83% 75% 50%

Reveal 92% 85% 69% 53% 36% 25% 10%

Uni-Gold 97% 95% 87% 77% 63% 50% 25%

Ăşnico EIA 98% 96% 91% 83% 71% 60% 33%

99.9%

99.1%

99.7%

99.8%

Pruebas de tamizaje rutinarias para VIH, en paciente de urgencias

Cook County Hospital, Chicago



Pruebas de OraQuick desde octubre de 2002  60% aceptó la prueba de VIH.  98% recibió el resultado.  2.5% nuevos diagnósticos de VIH.  80% ingresó al programa de VIH



4 nuevos proyectos (Wisconsin, Massachusetts, Los Angeles, New York)

Tamizaje para VIH en urgencias

Nuevos VIH+    

Cook County ED, Chicago Grady ED, Atlanta Johns Hopkins ED, Baltimore Massachusetts (4 hospitals)

Porcentaje de sitios de urgencias donde se realizó la prueba de VIH

2.5% 2.7% 3.2% 2.0% : 1.2%

Tamizaje para VIH con OraQuik en MIRAID: Mother Infant Rapid Intervention At Delivery Resultado de la prueba de VIH en mujeres en trabajo de parto: 12 hospitales en 5 ciudades 7.860 mujeres tamizadas  54 (0,7%) nuevas infecciones.  6 falsos positivos, no falsos negativos.  15 falsos positivos por EIAs. Especificidad de OraQuik 99,92%; EIA 99,80% VPP: OraQuik 90%; EIA 76% Bulterys et al, JAMA July 2004

Resultados en los tiempos para pruebas rápidas, Punto de atención (Point-of-Care) vs misma prueba realizada en el laboratorio Prueba en el Punto de atención (Point-of-care): promedio 45 min – (rango 30 min – 2.5 horas) Misma prueba en el laboratorio: promedio 3.5 horas – (rango 94 min – 16 horas)

MMWR 52:36, Sept 16, 2003

Estudio del CDC’s para la prueba de OraQuick

527,775 pruebas compradas en el período 2003 - 2004 –137 dependencias de salud en 36 estados Período: septiembre 2003 – septiembre 2004: – Personas probadas 173,003 – Positivas para VIH 2,741 (1.6%) – Insumos utilizados para el entrenamiento 17,266 – 25,926 reactivos usados para el uso de controles externos.

Changes in HIV Testing at Same Sites After Rapid Testing Introduced 6000

Number of Tests

5000

5222

EIA Rapid Test

3839

4000 3000

1929 1359

2000 1000 0

666 02

932

03

Utah

786

02

1002

03

Maryland

02

03

New York State

02

03

Wisconsin

Changes in Positive Tests at Same Sites After Rapid Testing Introduced

Number of Positive Tests

60 EIA Rapid Test

50 40 30 20 10 0

02

03

Utah

02

03

Maryland

02

03

New York State

02

03

Wisconsin

Fuentes de consulta

General and technical information (updated frequently): CDC: www.cdc.gov/hiv/rapid_testing OMS: operational characteristic of hiv www.who.int/eht/

Proponte desde hoy, no volver a utilizar plรกstico, es uno de los mayores contaminantes.