12 técnicas de recolección de muestras en citopatología

12 TÉCNICAS DE RECOLECCIÓN DE MUESTRAS EN CITOPATOLOGÍA “CELEBRANDRO 12K EN FACEBOOK”

Msc. Dai García Citotecnologo General

INTRODUCCIÓN CONCEPTO DE CITOLOGÍA Rama de la biología que estudia las células vegetales y animales en lo referente a su origen, desarrollo, forma, dimensiones, estructura, constitución física y química, funciones, relaciones entre ellas y su importancia en la complejidad de los seres vivos.

Por otro lado, se trata de una especialidad médica, dentro de la Anatomía Patológica, que se encarga de diagnosticar enfermedades a través de la observación microscópica de células.

Esta última la podemos llamar Citología Clínica o Citopatología.

LABORATORIO DE CITOLOGÍA CLÍNICA Es una estructura médica donde se estudian las células a través del microscopio óptico previamente sometidas a técnicas de tinción de rutina, inmunocitoquímica y/o microscopía electrónica. La enfermedad más importante para la Citología Clínica es el cáncer. El objetivo es diferenciar entre una población celular normal o anormal, y su grado de malignidad.

Existen distintos tipos de muestras citológicas como citología por impronta, citología exfoliativa, citología de líquidos, esputos, por raspado, etc. Un tipo muy especial es la Citología por Punción llamada PAAF, siglas de Punción Aspiración por Aguja Fina.

EN ESTA GUIA VEREMOS LAS DIFERENTES TÉCNICAS DE RECOGIDA DE MUESTRAS EN CITOLOGÍA 1. Impronta 2. Raspado 3. Frotis 4. PAAF 5. Biopsia por aguja gruesa BAG 6. Pistolas de punciones (Cameco) 7. Citología intraoperatoria 8. Licuado 9. Exfoliación 10. Citología Líquida 11. Citología con cinta adhesiva 12. Biopsia punch

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TÉCNICAS DE RECOGIDA DE MUESTRAS

1.- IMPRONTA Esta técnica consiste en apoyar un portaobjetos sobre el tejido lesionado para que las células desprendidas de la lesión se adhieran al porta objeto. Se puede realizar con fragmentos de tejido obtenidos por biopsia o bien en lesiones externas en animales vivos. Cuando utilizamos fragmentos de tejido es conveniente que apoyemos varias veces, sin presionar, la cara de la muestra sobre un papel secante, para eliminar la contaminación de sangre en la muestra. Posteriormente, apoyaremos la muestra varias veces sobre porta-objeto limpio hasta que obtengamos una capa uniforme y plana de células. Si utilizamos esta técnica en lesiones externas, es importante realizar una impronta, apoyando ligeramente el porta-objetos sobre la zona afectada, antes de lavar la lesión. Después, lavaremos la lesión con una gasa y suero Fisiológico, reavivaremos la lesión mediante raspado con una cuchilla de bisturí, secaremos con material absorbente, y volveremos a realizar otra impronta.

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2.- RASPADO Esta técnica consiste en el raspado con una cuchilla de bisturí de la superficie de una lesión. Su mayor utilidad es el estudio de lesiones externas. Primero lavaremos la lesión con suero fisiológico y secaremos la zona con papel absorbente. Echaremos una gota de aceite sobre la zona elegida y sobre la hoja de bisturí para que se adhiera el material que vamos a raspar. Posteriormente apoyaremos el hilo de la cuchilla perpendicular a la superficie de la lesión y la desplazaremos varias veces sobre la misma, sin ejercer excesiva presión.

El material obtenido se transfiere al centro de un portaobjeto limpio y se extiende siguiendo cualquiera de las técnicas que se usan en la preparación de extensiones.

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3.- FROTIS Hisopos Esta técnica consiste en la obtención de células deslizando suavemente un hisopo o bastoncillo de algodón sobre una superficie orgánica. Conviene humedecer el bastoncillo con suero fisiológico para prevenir el daño en las células de la muestra. Se usa, fundamentalmente, cuando no es posible obtener muestras mediante impronta, raspado o aspiración con aguja fina, por ejemplo en citología vaginal, bucal, etc.

Una vez obtenida la muestra, deberemos apoyar y hacer rotar el hisopo sobre el portaobjeto, sin ejercer mucha presión y sin pasar dos veces por el mismo sitio. También podemos hacer

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4.- PUNCIÓN-ASPIRACIÓN CON AGUJA FINA (PAAF) Técnica diagnóstica y en ocasiones terapéutica que consiste en la punción y posterior aspiración de un determinado tejido mediante el uso de una aguja larga y fina para su análisis posterior.

La PAAF es un procedimiento que se realiza con agujas de pequeño calibre montadas en una jeringa. La presión negativa ejercida por la aspiración obtiene un líquido que contiene células. Esta técnica está especialmente indicada para la obtención de muestras citológicas de órganos o lesiones sólidas, mediante la punción y/o aspiración de lesiones con una aguja y una jeringa.

Es importante preparar la zona donde se va a realizar la punción.

Para muestras subcutáneas, bastará con limpiar la zona de piel con alcohol. Si la muestra se va a recoger por punción de la cavidad abdominal, torácica o articulaciones, la zona de piel deberá prepararse como un campo quirúrgico. Para realizar la punción aspiración, se debe sujetar firmemente la masa con los dedos, siempre que sea posible, con el fin de favorecer la penetración de la aguja en la piel y en el tejido, y el control de la dirección. La aguja unida a la jeringa, se dirige hacia el centro de la masa y se ejerce una presión negativa haciendo retroceder el émbolo de la jeringa hasta aproximadamente partes del volumen de la jeringa. Se puede realizar aspiraciones de varias zonas de la masa, evitando en todo momento salirnos de la masa y que el material aspirado Msc. Dai García Citotecnologo General

se contamine con sangre. Si la masa es grande, podemos mantener la presión negativa mientras redirigimos la aguja a otra zona. En masas pequeñas es más conveniente suspender la presión negativa mientras movemos la aguja. Una vez obtenido el material, se deja de ejercer la presión negativa y se extrae la aguja y la jeringa de la masa y de la piel.

Posteriormente, separamos la aguja de la jeringa y llenamos de aire esta última, mediante una aspiración. Entonces, se vuelve a colocar la aguja en el cono de la jeringa y se expele el contenido en la parte central de un portaobjeto, intentando que quede en forma de gota. Existe una variante de esta técnica que es la punción con aguja fina sin aspiración. Se realiza de forma similar, pero sin ejercer presión negativa, con lo que está especialmente indicada en lesiones muy vascularizadas con mucho sangre y en los ganglios linfáticos. Realizaremos la punción de la lesión, moviendo varias veces la aguja dentro de la masa hacia adelante y atrás, e intentando permanecer en el mismo trayecto. La recogida de células se realiza mediante el corte de la propia aguja, que se irá llenando con las células desprendidas. Luego acoplamos una jeringa de unos 10 cc que previamente habremos llenado de aire y expeleremos el material en un porta limpio.

Debemos hacer esto lo antes posible para evitar que se seque la muestra. La punción se puede repetir varias veces en una misma masa siempre que no aparezca contaminación sanguínea. Finalmente, se realizará la extensión. Las lesiones en las que se utiliza esta técnica se dividen en dos grandes grupos, masas palpables, como nódulos de la glándula mamaria o de la glándula tiroides y masas no palpables, como

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del hígado, pulmones, mediastino, páncreas y retroperitoneo. Unas y otras pueden ser a su vez sólidas o quísticas.

En el laboratorio de Citología es muy importante el papel de Técnico que actúa tanto en la recepción y preparación de las muestras como en la primera observación o barrido de la Citologías en colaboración muy estrecha con el Patólogo o Citólogo -médico. El estudio se realiza en diferentes unidades del centro de salud u hospital por personal cualificado generalmente de forma ambulatoria. El paciente se debe desnudar la zona a estudio y permanecer tumbado sobre una camilla durante el procedimiento. El médico procede a la desinfección de la zona sobre la cual se realizará la punción. Se administrará un sedante en algunos casos y un anestésico local.

En lesiones muy superficiales no requieren del uso de anestesia y posteriormente insertará una aguja larga y una en el interior del tejido que desee estudiar o tratar. La aguja permanecerá conectada a una jeringuilla o a un sistema de aspirado mientras se realiza la aspiración de una pequeña cantidad de tejido para su análisis posterior.

En ocasiones puede ser necesario el uso de técnicas de imagen como radiografía, ecografía, tomografía o resonancia entre otras para guiar a la aguja hacia el punto exacto que el médico desea analizar. El estudio suele durar 20-30 minutos.

Preparación para el estudio La PAAF no requiere de preparación previa por parte del paciente salvo evitar la ingesta de líquidos y sólidos entre 6-8 horas previas a la realización del estudio. Algunos fármacos deberán ser retirados antes del estudio. La PAAF es una prueba molesta pero generalmente tolerable gracias al uso de anestésicos locales. El paciente puede sentir un dolor en forma de pinchazo y quemazón al inyectar el anestésico. Puede sentir un dolor sordo, agudo y pasajero en el momento de la aspiración del tejido. Tras el estudio puede presentar molestia o dolor en la zona de la punción que cede generalmente con analgésicos habituales. Debe guardar reposo en las horas o días siguientes al procedimiento.

Complicaciones del PAAF Hematoma en la zona de la punción, sangrado del tejido donde se ha realizado la punción, infección superficial de la zona de la punción, infección del tejido donde se ha realizado la punción no deseada de un tejido u órgano Contraindicaciones del estudio El paciente debe consultar con su médico antes de realizar el estudio en caso de: alergia a los fármacos Msc. Dai García Citotecnologo General

utilizados durante el estudio tales como sedantes, anestésicos.

Alteraciones de la coagulación. Toma de algún tipo de medicación, especialmente anticoagulantes o ácido acetil salicílico.

Razones por las que se realiza el estudio La PAAF es una técnica diagnóstica y terapéutica ampliamente conocida y utilizada en el campo de la Medicina. Al ser un procedimiento invasivo, se realiza únicamente en pacientes seleccionados en los que es necesario analizar en un laboratorio o bajo el microscopio una pequeña muestra de tejido para llegar al diagnóstico de la enfermedad o alteración que presenta el paciente. Permite conocer si una determinada alteración de un tejido es de tipo inflamatorio, infeccioso, tumoral o canceroso, entre otras.

Pasos de la técnica: Preparación de la zona con antiséptico, anestesia local opcional en la mayoría de las punciones no se utiliza, pues el dolor de la punción es mínimo. Localización de la zona de lesión con el dedo índice y medio. Realización de la punción y aspiración de la zona en distintos planos, sin llegar a sacar la aguja de la zona, con movimientos de vaivén, y sin soltar la aspiración. Se suelta el vacío. Se retira la jeringa.

Se retira la aguja. Se cubre la zona de la punción, previo aplicación de antiséptico en la misma.

Se extiende la muestra sobre los cristales de las láminas preparados previamente con la identificación del paciente. Para ello, llenaremos la jeringa de aire, la conectamos a la aguja y proyectamos el material sobre los cristales. Se repite esta operación, hasta haber conseguido todo el material que se encuentra en el émbolo de la aguja, sin olvidar desconectar la aguja para volver a llenar de aire la jeringa y así evitar la pérdida del material en la jeringa. Se fijan las muestras con aerosol o fijador celular, esperamos a que se sequen y se colocan en una cajita junto con la petición o boleta debidamente completada, para su posterior tinción y estudio microscópico.

Antes de iniciar el procedimiento hay que identificar los cristales, especificando el tipo de toma: EJ: toma de mama: derecha o izquierda: MD, MI Preservar la intimidad de la paciente en todo momento: indicarle de forma clara dónde puede desvestirse, qué ropa debe quitarse y dónde puede dejarla.

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5.- BIOPSIA CON AGUJA GRUESA (BAG) La Biopsia con Aguja Gruesa, o microbiopsia consiste en obtener una muestra para análisis histológico, mediante el uso de una aguja de un calibre variable, mayor que el de las agujas utilizadas en la P AAF. Habitualmente realizada con agujas de calibre 18 o 16, esta técnica ha supuesto un auténtico cambio en el diagnóstico de las lesiones mamarias. Puede realizarse sobre lesiones palpables y no palpables. En las lesiones no palpables, se necesita el uso de un sistema radiológico de guía, que permita alcanzar la lesión con precisión. Y aunque la lesión resulte palpable, es conveniente utilizar un sistema de guía por ejemplo ecográfico, para garantizar una toma de muestra viable y válida. En las lesiones no palpables, el sistema radiológico de guía depende del grado de visualización de la lesión con dicho método radiológico.

Por ejemplo, una lesión sólo visible en Mamografía, requerirá la guía mamográfica, y una lesión sólo visible en Ecografía, requerirá la guía ecográfica. Se pretende obtener una muestra representativa de toda la lesión, no extraer toda la lesión. Técnica consiste en la acción de introducir la aguja, se administra anestesia local. Cuando ésta ha hecho efecto, se realiza un minúsculo corte en la piel para permitir la introducción de la aguja de biopsia. Cuando ésta alcanza la posición deseada con respecto a la lesión, el médico radiólogo activa el mecanismo de corte. El paciente Msc. Dai García Citotecnologo General

escuchará, entonces, un ruido similar al del disparo de una pistola existen diversos dispositivos, un mecanismo de pistola permite cortar un número variable de fragmentos muestras de la lesión.

Según el caso, el radiólogo efectúa uno o varios pases de aguja, deposita la muestra en un recipiente apropiado y, posteriormente, la remite al laboratorio de Anatomía Patológica, en donde es estudiada por los facultativos especialistas. La duración del procedimiento es variable, según el número de lesiones a puncionar, el método guía utilizado y la dificultad técnica. En la situación más común guiada por ecografía, el procedimiento no suele superar los 20 minutos.

Lo más habitual es que surja un hematoma en la zona, a veces muy importante, que no suele requerir tratamiento. Normalmente, el paciente prosigue con su actividad cotidiana, siempre que ésta no suponga actividad física importante, tras abandonar la consulta.

Preparación: No es necesario guardar ayuno. Cuando se utilice la guía mamográfica, deben emplearse radiaciones ionizantes. Por ello, hay que comunicar al personal la posibilidad de embarazo, con objeto de poner en marcha las medidas oportunas de radioprotección fetal.

Complicaciones y contraindicaciones se consideran las mismas que con la PAAF. Aunque, como ya se ha comentado, es poco traumática, debe comunicarse al personal la posible existencia de trastornos de la Msc. Dai García Citotecnologo General

coagulación de la sangre algunas enfermedades, pacientes en tratamiento con anticoagulantes diversos, etc.

6.- PISTOLAS DE PUNCIONES (CAMECO) Utilizadas en punciones para obtener muestras con el fin de realizar pruebas citológicas en hematología, cirugía, oncología, ginecología, urología y radiología. Facilita el aspirado permitiendo al médico disponer de una mano libre el cambio de jeringa se realiza fácil y rápidamente.

Puede utilizarse en lavado de corpusculos de sangre, también en diagnósticos de infecciones de las vías urinarias por punción suprapúbica de vejiga. Tamaños: 10 cm., 20 cm. Universal para 10 y 20 cm.

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7.- CITOLOGÍA EXTEMPORÁNEA)

INTRAOPERATORIA

(BIOPSIA

INTRAOPERATORIA

Es la que se obtiene durante una laparotomía exploradora. La muestra se obtiene en el mismo instante de la operación y es enviado inmediatamente al laboratorio de Anatomía Patológica para ser

analizado en -10 minutos y emitir un diagnóstico de positividad o negatividad de células malignas.

Ventajas Detalle citológico Similar a la PAAF- Rapidez Estudios complementarios.

Indicaciones Muestras pequeñas en ganglio centinela, diagnóstico de infecciones Métodos de tinción Romanowsky Papanicolaou Hematoxilina & eosina, azul de metileno (entre otras)

8.- LICUADO Se denomina licuefacción o condensación al cambio de fase de la materia que se encuentra en forma gaseosa y pasa a forma líquida. Es el proceso inverso a la vaporización. Se produce un paso de estado gaseoso a estado sólido de manera directa, el proceso es llamado sublimación inversa o deposición. Sistemas de toma de muestra de “emisión cero” para industria química, farmacéutica, petroquímica y de refino.

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Aunque el paso de gas a líquido depende, entre otros factores, de la presión y de la temperatura, generalmente se llama condensación al tránsito que se produce a presiones cercanas a la ambiental. Cuando se usa una sobrepresión elevada para forzar esta transición, el proceso se denomina licuefacción. El proceso de condensación suele tener lugar

cuando un gas es enfriado hasta su punto de rocío, sin embargo este punto también puede ser alcanzado variando la presión. El equipo industrial o de laboratorio necesario para realizar este proceso de manera artificial se llama condensador.

Aplicaciones: la condensación es esencial para el proceso de destilación, un proceso muy importante tanto para el trabajo en el laboratorio como para aplicaciones industriales.

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9.- EXFOLIACIÓN Estudio de las células obtenidas por un ligero raspado de los órganos comunicados con el exterior, como los del tracto digestivo, la vagina, los bronquios, etc.

10.- CITOLOGÍA LÍQUIDA Como su nombre lo dice, este método se utiliza para muestras de lesiones supurativas o húmedas. El instrumento por excelencia para esta técnica es el hisopo o aplicador de algodón.

Existen en el mercado KITS especiales que traen consigo un medio de cultivo donde se introduce la muestra inmediatamente después de ser tomada.

Otro uso frecuente de esta técnica es la toma de muestras de mucosas varias, como la oral, faríngea, nasal, anorectal o uretral, sin necesidad de que existan lesiones evidentes.

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Muchas enfermedades oncológicas o infecciosas pueden ser detectadas antes de ser sintomáticas o en etapas precoces gracias a este tipo de estudios.

11.-CITOLOGÍA CON CINTA ADHESIVA (DERMATOLOGIA VETERINARIA) Este tipo de citología exfoliativa se realiza usualmente sobre lesiones regulares y secas de la piel, con mucha descamación pero a la vez muy friables.

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Cuando la exfoliación por raspado pueda generar sangrado o úlceras, se prefiere este método, el cual no produce lesiones agregadas y disminuye el riesgo de infecciones.

Se utiliza cinta adhesiva transparente común. Si bien algunos autores recomiendan una marca específica por su origen comprobado, otras han sido utilizadas con una tasa de éxito equiparable.

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La técnica es muy sencilla, solo se toma un trozo de cinta y se aplica directamente sobre la lesión durante unos segundos y luego se pega a un portaobjeto.

Una particularidad de la citología con cinta adhesiva es que se usa mucho en la dermatología veterinaria. Su utilidad para diagnosticar enfermedades cutáneas en perros, gatos, caballos y ganado la ha convertido en una práctica diaria en las consultas de animales.

12.- BIOPSIA PUNCH La biopsia punch es una herramienta diagnóstica útil en el estudio de las enfermedades cutáneas, particularmente en dermatología. En los últimos años se han desarrollado nuevas técnicas con usos que van más allá del diagnóstico y se incluyen en el campo de la terapéutica médica, dermatológica y cirugía general. El objetivo de la presente revisión es servir de actualización en biopsia punch, también llamada en sacabocados, tanto para médicos especialistas como no especialistas.

La biopsia punch (o en sacabocados) es una técnica diagnóstica y, en algunos casos, terapéutica. Se realiza utilizando un bisturí de forma circular unido a un mango plástico. El instrumento se rota sobre la piel, penetrando todas las capas (epidermis, dermis y parte de la hipodermis), Msc. Dai García Citotecnologo General

y se obtiene una muestra tisular cilíndrica. Si bien es un procedimiento relativamente simple, es importante planificar, entre otros, el momento de la toma de la biopsia, el sitio donde será realizada y el número de muestras a tomar.

Dado que es una técnica ampliamente usada por dermatólogos, cirujanos, y en algunos casos por médicos familiares y generales, es necesario conocer sus indicaciones, técnica y, finalmente, sus nuevas aplicaciones.

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ME ATREVÍ A HACER LO QUE ME GUSTA Y AHORA NO PUEDO PARAR

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