PROTOCOLO 7
Coloração de Gram
INTRODUÇÃO Na coloração diferencial aplica-se mais de que um corante e reagente. Uma das técnicas de coloração diferencial muito utilizada em bacteriologia é o método de Gram, este método permitem diferenciar organismos que reagem de modo diferente ao mesmo corante. As bactérias Gram-positivas, que retêm o corante violeta cristal e apresentam coloração violeta enquanto que as bactérias Gram-negativas, que não retêm o corante violeta cristal e são coradas pela safranina apresentando coloração vermelha. Ambas as células bacterianas são coradas com
Figura 15. Escherichia coli; bacilos, Gram– (http://pt.wikibooks.org/wiki/Biologia celular/Bact%C3%A9rias)
violeta cristal (cor azul-violeta) seguido pelo mordente (lugol) que forma com o corante violeta cristal um complexo intracelular. Este complexo é removido pelo etanol nas bactérias Gram-negativas mas permanece nas bactérias Gram-positivas. Nas bactérias Gram-negativas o peptidoglicano (constituinte de todas as paredes celulares bacterianas) é menos espesso do que nas bactérias Gram-positivas, permitindo a passagem desse complexo e a sua posterior coloração vermelha quando utilizado o corante safranina.
OBJECTIVOS • Realizar o método de coloração de Gram.
Figura 16. Staphylococcus aureus, cocos, Gram +. (http://www.infoescola.com/microbiol ogia/bacterias-gram-positivas-e-gramnegativas)
• Distinguir bactérias pelo método de Gram.
• Interpretar resultados de uma actividade experimental.
Fotografa as diferentes etapas da coloração de Gram.
PROCEDIMENTO 1- Colocar uma gota de água destilada esterilizada na lâmina; 2- Esterilizar uma ansa à chama e deixar arrefecer; 3- Tocar na colónia (protocolo anterior) com a ansa e suspender o material na gota de água; 4- Espalhar o líquido numa pequena área, esfregando bem de forma a separar a massa de células; 5- Segurar a lâmina com uma pinça e passar rapidamente sobre a chama até toda a água evaporar para fixar o material; 6- Numa tina (Figura 17), inundar o esfregaço fixado com violeta de cristal (corante primário) agitando suavemente durante cerca de 1 minuto;
Maria Manuel Azevedo Gomes
Figura 17. Tina de coloração para executar a técnica de Gram.
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