INTRODUÇÃO AO TRABALHO LABORATORIAL EM MICROBIOLOGIA
______________________________________________________________________________________ 1.5.2 Cultura e isolamento de microrganismos A cultura e o isolamento de microrganismos são dois procedimentos essenciais em microbiologia. O crescimento de populações microbianas em meios de cultura no laboratório, permite a obtenção de culturas puras (contêm apenas um tipo de microrganismo) ou de culturas mistas (contêm mais do que um tipo de microrganismo). O isolamento permite a separação de um microrganismo a partir de populações mistas.
PROTOCOLO 2. Cultivo de microrganismos Os microrganismos estão presentes em qualquer local, no ar, na água, nos alimentos e nos objectos que manipulamos diariamente. Para se obter uma suspensão com microrganismos podemos recorrer, por exemplo, às infusões.
1- Preparar uma infusão de batatas ou outro qualquer vegetal com antecedência de 5 dias; 2- Com uma ansa, recolher uma pequena porção da película formada na superfície da infusão; 3- Espalhar a película no meio de cultura escolhido; 4- Colocar parafilme para isolar a caixa de Petri; 5- Incubar, em posição invertida, para evitar a evaporação, numa estufa a 35ºC durante 1 a 2 dias.
O isolamento de um determinado microrganismo em cultura pura a partir de uma população mista envolve o recurso a técnicas de isolamento de colónias. Estas técnicas permitem obter colónias individualizadas e espacialmente separadas que, teoricamente, são originadas a partir de uma única célula, correspondendo, por isso, a uma cultura pura de um determinado microrganismo.
Para obter culturas puras utilizam-se os seguintes métodos: 1. Método das estrias ou de riscado em placa (Figura 17): é um método de isolamento bastante rápido. Consiste na diluição de uma pequena porção de inóculo, colhida com uma ansa, a qual é sucessivamente riscada na superfície de um meio de cultura sólido. A execução do riscado pode ser feita por vários processos.
O objectivo do riscado é a obtenção de uma colónia a partir de uma única célula inicial. Durante o processo de esgotamento do inóculo, deve esterilizar-se a ansa entre os riscados 1, 2, 3 e 4, arrefecendo a ansa antes de iniciar o riscado seguinte.
Figura 17. Riscado em placa
Maria Manuel Azevedo Gomes
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