Efeito da privação de oxigénio nos parâmetros sanguíneos de corvina

I Congresso Nacional “ A Ponte Entre a Escola e a Ciência Azul” 20 Maio 2014

Efeito da Privação de Oxigénio nos Parâmetros Sanguíneos de Corvina (Argyrosomus regius) Trabalho Realizado por: Artem Sukhenko Tânia Martinho Orientação: Doutora Laura Ribeiro Doutora Florbela Soares Colaboração: Professora Teresa Afonso

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∗A produção piscícola em aquacultura envolve um conjunto de preocupações de forma a garantir o bem estar animal, por forma a garantir boas taxas de crescimento e peixes saudáveis.

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∗ Bem estar animal pode definir-se como o conjunto de condições ambientais, nutricionais e sociais adequadas à espécie que se pretende cultivar.

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∗ Condições ambientais adversas e uma má manipulação, são factores de Stress para o peixe. ∗ Para recuperar o seu equilíbrio, o peixe é obrigado a gastar energia para além das suas funções vitais, o que pode comprometer o seu crescimento.

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∗ Factores de Stress podem ser, por exemplo, manipulação excessiva, aparecimento de doenças, défice de oxigénio, entre outros.

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∗ As respostas fisiológicas ao Stress podem ser:

Primárias [Ex: Produção Cortisol] Secundárias [Ex: Produção Glucose] (Diouf et al. 2000, Barton et al. 2002).

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∗ A falta de oxigénio provoca alta taxa de mortalidade ou morbilidade em aquacultura ∗ Causas frequentes: i. Elevada densidade no tanque de cultivo ii. Aumento da temperatura

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∗ Resposta específica à falta de oxigénio: o Hiperventilação; o Redução da ingestão de alimento; o Aumento da produção de glóbulos vermelhos; o Aumento da área de difusão gasosa.

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∗ A Corvina (Argyrosomus regius) é uma espécie utilizada em aquacultura há relativamente pouco tempo, havendo ainda muito a estudar sobre o modo como reage a condições adversas, tais como o défice de oxigénio.

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∗ O objetivo deste trabalho foi averiguar a forma como a corvina reage quando submetida a uma situação de Stress agudo provocada por défice de oxigénio.

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Hipótese A corvina irá reagir à redução brusca de oxigénio dissolvido na água através de:

Libertação de cortisol Produção de glucose Aumento da produção de hemácias

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Condições iniciais

15 Corvinas [5 exemplares / ponto amostragem]

Peso = 87.3 ± 22.3 g Volume do tanque – 50 L

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Parâmetros analisados ∗ ∗ ∗ ∗ ∗

Observação do comportamento Biometria (peso e comprimento total) Hematócrito Cortisol plasmático Glucose plasmático

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Material Ictiómetro Balança Capilares Seringas Agulhas microtubos

Soluções Fenoxietanol 500 ppm Heparina tanque de hipoxia (10 L)

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Pontos de Amostragem Corvinas colocadas no tanque de hipóxia

Normóxia (15 peixes) Basal/control

5 corvinas

Hipóxia 0

15’

5 corvinas

|Monitorizada a variação de oxigénio

30’

5 corvinas

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Procedimento (Súmula) Em cada ponto de amostragem:

∗ Anestesiámos 5 corvinas em fenoxietanol 500 ppm ∗ Recolhemos sangue, medimos e pesámos ∗ Devolvemos estes peixes ao tanque de recuperação

IC = (peso (g)/comp total³)x100

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Componente analítica A - Hematócrito

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A - Hematócrito

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B - Determinação do Cortisol Foi utilizado o teste VIDAS Cortisol S (Biomérieux), cujo equipamento (Mini-VIDAS) faz a leitura automática da quantidade de cortisol existente no plasma.

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C - Determinação da Glucose 1 – Preparámos as soluções para a curva padrão 2 – Retirámos as amostras de plasma do congelador e deixámo-las descongelar lentamente em gelo 3 - Preparámos a microplaca com o branco, as soluções padrão (triplicado) e as amostras (duplicado).

Volume amostra / padrão: 10 µl Volume reagente: 200 µl

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4 – Incubámos a microplaca a 37ºC durante 10’.

0,70

Curva padrão

0,60 0,50 0,40 0,30

y = 0,005x + 0,065 R² = 0,997

0,20 0,10 0,00 0

50

100

150

Absorvância em função da concentração (mg/dl)

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Resultados I - Variação dos Parâmetros da Água

Normóxia

Hipóxia 15’

Hipóxia 30’

Saturação de oxigénio

70,5%

19%

17%

Temperatura

20,3ºC

25,8ºC

25,2ºC

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II - Biometria biomassa (kg)

0,9

volume tanque (l)

15

densidade (kg.l-1)

0,06

WW (g)

CT (cm)

IC

média

87,3

20,3

1,0

sd

22,3

1,58

0,12

80

IC = (peso (g)/comp total³)x100

70

IC

60 15

50

13 40

oxig %

11

30

temp. ºC

9 7

20

5 3

10

1

0 1

2

3

0,000

0,500

1,000

1,500

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III - Hematócrito % Hct 40,000

Tratamento Cntl

% Hct 26,536 ± 3,3

35,000 30,000 25,000 20,000 15,000

Hx15

26,688 ± 2,8

10,000 5,000

Hx30

33,388 ± 4,3

0,000 Cntl

Hx15

Hct(%) = comp hemácias/comp total de sangue)x100

Hx30

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IV - Cortisol ng/ml 30,000

Tratamento

ng/ml

25,000 20,000

Cntl

6,0 ± 3,37

15,000 10,000

Hx15

3,716 ± 1,23

5,000 0,000

Hx30

28,082 ± 3,7

Cntl

Hx15

Hx30

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V - Glucose Conc (mg/dl ) 70,00 60,00

Tratamento Cntl

Conc (mg/dl) 43,25 ± 9,64

50,00 40,00 30,00

Hx15

66,32 ± 11,92

20,00 10,00

Hx30

54,18 ± 10,65

0,00 Cntl

Hx15

Hx30

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Discussão (Tópicos) ∗ ∗ ∗ ∗ ∗

Aumento do hematócrito ao fim de 30’ (de acordo com o esperado) Aumento significativo do cortisol ao fim de 30’ (de acordo com o esperado) Desvio Padrão elevado condiciona conclusões Variação da temperatura - mecanismos intrínsecos / extrínsecos (?)

Resultados da glucose exigiriam ensaios complementares

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∗ Referências Diouf, Boucar; Rioux, Pierre; Blier, Pierre U; Rajotte, Denis.

Use of Brook Char (Salvelinus fontinalis) Phisiological Responses to Stress as a Teaching Exercise, in Advances Physiology Education, volume 23, nº 1; junho 2000

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∗ Agradecimentos IPMA – Instituto Português do Mar e da Atmosfera Ciência Viva Doutora Laura Ribeiro Doutora Florbela Soares Escola Secundária Dr Jorge Correia - Tavira Professora Teresa Afonso