δ- OBSERVATIONS DE CAIRNS Cairns [1962] a été le premier à observer un chromosome entier d'E. coli en cours de réplication. Il a associé des techniques de marquages isotopiques et d'autoradiographie suivis d'observation en microscopie électronique. Après avoir cultivé des bactéries dans un milieu contenant de la thymidine tritiée à faible activité spécifique, pendant un temps dépassant la durée du cycle, il met au point une méthode de lyse de la cellule permettant de libérer le DNA directement sur une grille de microscopie électronique, en minimisant les risques de cassures mécaniques de la molécule. La préparation est recouverte d'une émulsion photographique et après exposition et développement, l'examen révèle des grains d'argent le long de la molécule de DNA. Ces premières observations ont montré la circularité du chromosome d'E.coli, forme qui s'avérera très répandue chez les procaryotes, les virus et le DNA des organites (mitochondries et chloroplastes) des cellules eucaryotes. Dans un second temps, Cairns a effectué des marquages plus courts et a déduit des images obtenues que la réplication commence en un seul point du chromosome bactérien à partir duquel se forme un « œil » qui ne cessera de grandir jusqu’à ce que deux chromosomes bactériens soient obtenus. Fourches de réplication bidirectionnelle Origine de réplication Deux copies du chromosome bactérien original
Fourches de réplication
Point de départ de la réplication
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