BIOLOGÍA MOLECULAR Y CARACTERIZACIÓN DE LAS POBLACIONES HUMANAS
a)
Denaturación del templado de ADN (que servirá de modelo para su amplificación) a una temperatura de 94 a 96°C.
b)
Anillamiento de los cebadores o cebadores. Los cebadores son oligonucleótidos, formados por moléculas de cadena simple de ADN, que son complementarios a ambos extremos de una secuencia determinada de ADN que actúa como templado o plantilla. Su función es servir al ADN como punto de partida para la polimerización. Este paso requiere una temperatura que varía entre los 42 a 60°C.
c)
Elongación o extensión del primer por la ADN polimerasa. Los cebadores son extendidos de una cadena molde de ADN de cadena simple (previamente desnaturalizado). Gracias a la enzima ADN polimerasa, en presencia de desoxinucleótidos fosfato (dNTPs) y bajo condiciones adecuadas de la reacción, esto da como resultado la síntesis de nuevas cadenas de ADN complementario, a partir de las cadenas templado. Para este paso se requieren temperaturas entre los 60 y 72°C.
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La reacción de amplificación contiene dos cebadores dispuestos de tal manera que puedan hibridizar con las cadenas opuestas de la secuencia "blanco" o secuencia a amplificarse. Debido a que el producto extendido incluye la secuencia complementaria a la del otro primer, el producto de cada reacción sirve como templado en el nuevo ciclo de PCR, verificándose así una reacción bioquímica en cadena. El impacto de la PCR ha sido particularmente importante en algunos campos relacionados al análisis del genoma humano, especialmente en el mapeo genético y físico de los cromosomas y análisis de la expresión génica.
FIGURA VIII.4. REPRESENTACIÓN DE LA AMPLIFICACIÓN DE ADN MEDIANTE PCR. La temperatura de anillamiento va a permitir que los cebadores se complementen efectivamente en las cadenas del ADN para la posterior síntesis de las cadenas hijas (IIB, 2014).