Detección de contaminación cloacal Día 1 Materiales: • Tubos de ensayo grandes con 10ml de caldo Brila Fluorocult 2X y campana de Durham: al menos 3 por muestra (preferentemente más para diluciones y control negativo). • Tubos de ensayo chicos con 5ml de caldo Brila Fluorocult 1X y campana de Durham: al menos 6 por muestra (preferentemente más para diluciones y control negativo). • Pipetas estériles de 10ml • Peritas o propipetas • Micropipetas P1000 y P200 • Tips estériles azules y amarillos • Estufa a 37ºC • Espadol y algodón • Marcador indeleble • Cinta de papel • Guardapolvo • Bolsa roja para descarte de patogénicos • Agua estéril Desarrollo: - Agitar enérgicamente la muestra. - Si la muestra es demasiado turbia, es aconsejable diluirla (por ej. 1:2 y 1:5) y sembrarlas junto a la muestra sin diluir. - Sembrar por cada muestra: o 3 tubos de 10ml de caldo Brila 2X con 10ml de muestra. o 3 tubos de 5ml de caldo Brila 1X con 1ml de muestra. o 3 tubos de 5ml de caldo Brila 1X con 0,1ml de muestra. Agitar la muestra entre siembra y siembra para evitar que se depositen las bacterias. Incluir un juego de tubos sembrados con agua estéril, como control negativo. - Incubar 48hs a 37ºC sin agitación.
Día 2 (48hs después) Materiales: • Tubos de caldo citrato de Koser: 1 por tubo de caldo Brila sembrado (grande o chico) • Reactivo de Kovacs • Lámpara UV • Ansas rectas • Micropipetas P1000 • Tips estériles azules • Estufa a 37ºC • Espadol y algodón • Marcador indeleble • Cinta de papel • Guardapolvo • Guantes • Bolsa roja para descarte de patogénicos Desarrollo: - Observar los tubos y anotar el número de positivos para coliformes por muestra (crecimiento y gas en al menos 1/3 de la campana). Los no coliformes muestran crecimiento pero no gas.
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