180
GENÉTICA HUMANA el caso del Síndrome de Prader-Willi, en cambio, la búsqueda de un gen candidato no ha dado resultados, aunque el principal gen implicado es SNRPN. En el caso concreto de este gen (SNRPN), se ha visto que existe otra secuencia codificante en dirección 5’ (SNURF por "SNRPN Upstream Reading Frame") de manera que, de hecho, ambos forman un único gen bicistrónico: un solo transcrito del que se traducen dos proteínas. Con los datos actuales, hay que considerar el Síndrome de Prader-Willi como un síndrome de microdeleción causado por la pérdida de varios genes contiguos.
4) Mutaciones o microdeleciones que afectan a los centros de imprinting, de manera que no se podrán re-establecer los patrones durante la gametogénesis en el caso de que haya transmisión de un sexo al opuesto (madre-hijo ó padre-hija). El resultado funcional en el cigoto es idéntico a lo que sucede en la disomía uniparental: ambos alelos llevan el mismo patrón de imprinting. Este tipo de alteraciones son responsables de un 5% de los casos de Síndrome de PraderWilli o de Síndrome de Angelman. El ejemplo típico es el de la abuela paterna portadora de una mutación en el centro de imprinting del cromosoma 15 que lleva marcado como materno. Al transmitir este cromosoma a un hijo varón, el cromosoma mutado pasará a su hijo marcado como materno, por lo que no es necesario reestablecer el imprinting y el hijo será normal (llevará un cromosoma marcado como paterno y otro como materno). En la siguiente generación, en cambio, este individuo varón deberá pasar su cromosoma 15 marcado como paterno, por lo que la marca que lo identificaba como materno deberá ser borrada durante la espermatogénesis y sustituida por la marca que lo identifique como paterno. En este individuo dicho cambio será imposible, debido a la mutación en el centro de imprinting de su cromosoma 15 materno, por lo que su descendencia llevará dos cromosomas con epigenotipo materno y desarrollará Síndrome de Prader-Willi. Lo mismo puede suceder para el Síndrome de Angelman, cuando la mutación del centro de imprinting afecta al cromosoma paterno. El diagnóstico genético en estas dos enfermedades va dirigido a la detección de deleciones, de disomía uniparental o de alteraciones en el centro de imprinting, y se realiza por los siguentes procedimientos:
Cariotipo convencional. Es insuficiente para detectar la microdeleción típica, pero es útil en el probando y en los padres para detectar posibles translocaciones, ya que un pequeño porcentaje de las deleciones son fruto de translocaciones no equilibradas (casi siempre de novo). También detectará translocaciones equilibradas de novo o heredadas, aunque estos casos son excepcionales.
FISH: detecta todas las deleciones, usando sondas frente al gen SNRPN en combinación con una sonda centromérica del cromosoma 15. La mayoría de las deleciones son intersticiales, siendo la más frecuente una pequeña deleción de unas 4 Mb de tamaño.
Detección de Disomía Uniparental: se usan microsatélites del cromosoma 15 para determinar el origen parental de cada cromosoma. Lógicamente, es necesario descartar primero la presencia de deleción, y además este procedimiento viene limitado por la necesidad de obtener muestras del probando y de ambos progenitores, así como por la posible falsa paternidad.
Análisis de metilación: puede hacerse bien por Southern blot tras digestión del ADN genómico con enzimas de restricción sensibles a metilación, o por PCR específica de metilación (MS-PCR). Si el exón 1 de SNRPN y el centro de imprinting adyacente están metilados en los dinucleótidos CpG, esto indica un patrón materno; si no están metilados, podemos excluir el silenciamiento de SNRPN y los demás genes de expresión paterna. Es un análisis que no requiere muestras de los progenitores, y permite confirmar la existencia de Síndrome de Prader-Willi cuando se observa sólo el patrón de metilación materno. Tiene la ventaja de que si el análisis es normal (es decir, si se observan dos patrones distintos de