MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS
Requerimientos Nutritivos
Elemento
%PS (E. coli)
Función
Fuente
Macronutrientes C O N H P
(95%) 50 20 14 8 3
Compuestos orgánicos (COr) COr, aceptor de e- en la CR Proteínas, ácidos nucleicos, coenzimas COr Acidos nucleicos, fosfolípidos, coenzimas, ATP
COr, CO2 O2, H2O, COr COr, NH3, NO3-, N2 H2O, COr, H2 PO4---
Micronutrientes S K Mg Ca Fe
(3.2%) 1 1 0.5 0.5 0.2
Metionina, Cisteína, varias coenzimas Principal catión inorgánico, cofactor Cofactor (ATP), pared celular, membrana, clorofila Cofactor, endosporas de bacterias Cofactor (citocromos)
SO4--, H2S, S°, COr Sales de potasio Sales de magnesio Sales de calcio Sales de hierro
Elementos traza Mn Co Cu Zn Mo Na, Cl
(1.8%) Cofactor (reemplaza al Mg) Vitamina B12 Enzimas especiales (ej. citocromo oxidasa) Enzimas especiales (ej. ADN polimerasa) Reacciones de asimilación de nitrógeno Todos requieren, pero halófilos mucho
Normalmente contenidos en el agua y otros ingredientes
Composición química de la célula microbiana (E. coli) Compuesto
%PS
Función
Macromoléculas totales Proteínas Polisacáridos Lípidos Lipopolisacáridos ADN ARN
96 55 5 9.1 3.4 3.1 20.5
Estructuras, Enzimas Reserva a corto plazo Reserva a largo plazo, membrana (fosfolípidos) Pared celular Información genética Síntesis de proteínas
Monómeros totales Aminoácidos Azúcares Nucleótidos
3 0.5 2 0.5
Proteínas Polisacáridos Acidos nucleicos
Iones Inorgánicos
1
Cofactores
Medio sintético Bacterias quimioautótrofas, que oxidan S
S en polvo (NH4)2SO4 K2HPO4 CaCl2 MgSO4.7H2O FeSO4 Agua destilada
10g 0.4g 4g 0.25g 0.5g 0.01g Hasta 1000 ml
Agar Nutritivo Material
Característica
Valor nutritivo
Cantidad
Extracto de carne
Acuoso de carne de res sin grasa Degradación parcial de material proteico Polisacárido complejo de algas rojas (ficoeritrina) -
Carbohidratos, N, vitaminas y sales N, vitaminas y carbohidratos
3g
Ninguno (solidificante)
15g
Peptona
Agar Agua destilada
Ninguno (solvente)
5g
~1000ml
Esterilización por calor: Autoclave Temperatura Presión Temperatura Presión Tiempo Expulsión de vapor
Expulsión de aire
Programación
Esterilizaci贸n por Filtraci贸n
Esterilizaci贸n por Radiaciones
Equipos y Materiales para el Cultivo de Microorganismos
Cultivo en EstrĂas
Medio de cultivo
Esterilizar asa luego de cada juego de estrĂas
Difusi贸n en Placa
Medio de cultivo
Incubaci贸n
Vertido en Placa Medio de cultivo con agar, estéril y líquido Caja petri estéril Alícuota
Mezclar bien
Suspensión microbiana
Incubación
Almacenamiento de cultivos Corto tiempo
Largo tiempo
Liofilizaci贸n
Velocidad de Crecimiento
Requerimientos de Temperatura
Optima Velocidad de reacciones enzimáticas en constante aumento
Reacciones enzimáticas a máxima velocidad
Máxima
Mínima
Temperatura
Membrana pierde fluidez; transporte muy lento; no hay crecimiento
Desnaturalización proteica; membrana colapsa; lisis térmica
Requerimientos de OxĂgeno
Aerobio
Anaerobio facultativo
Anaerobio obligado
Cultivo de Aerobios
Anaerobio aerotolerante
Microaerobio
Cultivo de Anaerobios obligados