Corporación Universitaria Empresarial Alexander Von Humboldt Facultad de ciencias de la salud Programa de medicina 2018-I ________________________________________________________________________________
determinación de la concentración en solución(2,3). Este método es el más rápido, pero propenso a errores. Ventajas: 1. Método rápido y relativamente sensible (varias veces más sensible que el Método de biuret). 2. No existe interferencia del sulfato de amonio y otras sales buffer. 3. Nétodo no destructivo. 4. Utilizado en detección post-columna de las proteínas. Desventajas: 1. Los ácidos nucléicos también absorben en la región de 280nm. 2. El contenido de aminoácidos aromáticos difiere considerablemente en varias proteínas. 3. La solución debe ser clara e incolora. la turbidez puede producir resultados erráticos. 4. Se requiere un sistema relativamente puro para utilizar este método. Ácido bicinconínico (BCA) o ensayo basado en cobre BCA es un reactivo cromogénico específico para Cu1+ y en el segundo paso de la reacción dos moléculas de BCA reaccionan con una de ión Cu1+. La cantidad de Cu2+ reducido es una función de la concentración de proteínas y ser determinada espectrofotométricamente por un cambio en el color de la solución a púrpura, el cual absorbe a 562 nm. La absorbancia es directamente proporcional a la cantidad de proteína presente en la solución y puede ser estimada por comparación con un estándar de proteína conocido, tal como la albúmina sérica bovina (ASB). (4) Ventajas: 1. Sensibilidad comparable a la del método de lowry (0.5mg a 10mg). 2. La mezcla en un paso es más fácil que en el método de lowry. 3. El reactivo es más estable que el reactivo de lowry. 4. Las sales de buffer y detergente no iónico no interfieren con la reacción. 5. Las concentraciones del medio de reactivos desnaturalizantes no interfieren (guanidina 4m-hcl o urea 3m). Desventajas: 1. El color no es estable con el tiempo. se necesita controlar cuidadosamente el tiempo entre el análisis y la lectura en absorbancia. 2 BIOQUIMICA