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“Calidad, Pertinencia y Calidez”
PRÁCTICA N° BF.5.09- 05 TÍTULO DE LA PRÁCTICA:
INTOXICACIÓN POR CLOROFORMO.
Animal De Experimentación: Rata Wistar Vía De Administración: Via Intraperitoneal Volumen Administrado: 10ml De Cloroformo
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TIEMPOS: Inicio de la práctica:
8:20
Hora de disección:
8:27
Hora Inicio de Destilado: 8:45 Hora de finalización de Destilado: 9:15 Hora finalización de la práctica:
10:15
1. DATOS INFORMATIVOS Docente: BQF. García González Carlos Alberto MSc. Alumna: Jimenez Pulla Lidia del Carmen Carrera: Bioquímica y Farmacia Curso: Quinto Paralelo: “B” Grupo: 6 Fecha de Elaboración de la Práctica: lunes, 11 de Julio del 2016 Fecha de Presentación de la Práctica: lunes, 18 de Julio del 2016 2.- FUNDAMENTO TEÓRICO: El cloroformo es el triclorometano (CHCl3). Inicialmente se empleó como agente anestésico, pero poco después se abandonó este uso por s gran toxicidad hepática y renal.es un líquido incoloro y no inflamable, de olor y sabor dulzón, extremadamente volátil y muy liposoluble. El material de la investigación se somete a destilación con arrastre de vapor en medio acido tartárico, y en el destilado se realiza las reacciones de identificación. En el fondo de un tubo de ensayo se mezclan unas cuantas gotas de cloroformo con otras tantas de alcohol de 95ª que contiene un poco de nitrato de plata, se inflama la mezcla y se observa que esta arde con un llama bordeada de verde y que el ácido clorhídrico formado reacciona con el nitrato de plata disuelto originando un precipitado de cloruro de plata.
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“. PARACELSO
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3.- OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA Observaremos la sintomatología que se presentan en el animal de experimentación (rata Wistar) por medio de los gráficos de prácticas del año pasado para saber el tiempo en que actúa el cloroformo en el organismo del animal Conoceremos las reacciones de identificación para la presencia de cloroformo en el destilado de las vísceras del animal de experimentación (rata Wistar). 4.- MATERIALES, EQUIPOS, REACTIVOS, SUSTANCIAS E INSUMOS:
Materiales de vidrio: Probeta Vasos de precipitación Erlenmeyer Perlas de vidrio Pipetas Tubos de ensayo Agitador Embudo
Otros: Guantes de látex Mascarilla Mandil Gorro Aguja hipodérmica de 10ml Cronometro Estuche de disección Panema Fosforo Pinzas Cocineta Espátula Gradilla
Sustancias: Ácido tartárico Cloroformo Agua destilada Alcohol 950 Nitrato de plata Percloruro de hierro Beta naftol Timol Resorcinol Benedict Clorhidrato de piperazina Equipos: Aparato de destilación Balanza Baño maría Campana Aparato de destilación Muestra: Destilado de vísceras del animal de experimentación
5.- PROCEDIMIENTO: INSTRUCCIONES:
Trabajar con orden, limpieza y sin prisa.
“Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“. PARACELSO
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Mantener las mesas de trabajo limpias y sin productos, libros, cajas o accesorios innecesarios para el trabajo que se esté realizando. Llenar ropa adecuada para la realización de la práctica: bata, guantes, mascarilla, gorro, zapatones. Utilizar la campana extractora de gases siempre que sea necesario. Desinfectamos el área de trabajo y limpiamos los materiales que se emplean en la práctica. Preparar 10mL de Cloroformo. Agarrar al animal de experimentación (rata Wistar) por sus patas y mediante una aguja hipodérmica administrar por vía peritoneal 10 ml de cloroformo Colocar en el panema y observar cómo reacciona rata y cuál es el tiempo de latencia. Una vez muerta la rata Wistar colocarlo en la tabla de disección Rasurarlo en la zona que se le va a realizar la disección con la ayuda de un bisturí Abrir cuidadosamente la piel del animal y absorber la sangre con la ayuda de una jeringa Retirar las vísceras y colocarlo en un vaso de precipitación y procedemos a cortar en pequeños trozos y colocarlo cuidadosamente en un balón aforado. Verter las vísceras en un balón de destilación y agregar 50 mL ácido tartárico al 4% y perlas de vidrio. Destilar, recoger el destilado en NaOH 0.1 N. Con aproximadamente 15 mL del destilado recogido (muestra) realizar las reacciones de reconocimientos en medios biológicos
6.- REACCIONES DE IDENTIFICACIÓN: a) REACCIÓN DE DUNAS.- al adicionar unas gotas de destilado que contiene cloroformo a unos mililitros de potasa alcohólica (proporción 1:10), se originan formiatos y cloruro de potasio. CHCl3 + 4 KOH ClK + HCO2K + H 2 O Se neutralizan la mezcla, y se separan en dos porciones a una porción se le agrega percloruro de hierro produciendo un color rojo en frio o un precipitado en caliente. A la otra porción se le agrega solución de nitrato de plata produciéndose un precipitado de cloruro de plata que se disuelve en amoniaco diluido. b) REACCIÓN DE LUSTGARTEN.- al calentar la muestra con unos miligramos de beta naftol y una solución alcohólica concentrada de potasa (preferentemente un trozo de potasa y algunas gotas de alcohol), se obtiene un franco color azul. Si se sustituye el B-naftol por timol el color es Amarillo as o menos oscuro; con resorsinol la coloración e roja – violáceo y con la piridina rojo. c) REACCIÓN De FUJIWARA.-En un tubo de ensayo, se vierte 2ml de lejía de sosa 1:2 con una capa de 2mm de piridina y luego la muestra que “Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“. PARACELSO
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contiene el cloroformo; se agitan, podemos por unos instantes en baño de María y se deja en reposo; se convierte en una materia coloreada que varía del rosa al rojo vivo, soluble en piridina .Esta reacción sensible para unos pocos microgramos de cloroformo y es aplicable en la orina de algún sujeto que haya absorbido de 15-20 g de agua clorofórmica. d) REACCIÓN DE ROSEBOOM.- se disuelve un pequeño cristal de yodo en la solución muestra y se agregan unos pocos miligramos de clorhidrato de piperacina ; si el cloroformo está presente en la muestra, la coloración violeta inicial cambia a amarilla rojiza al disolverse el alcaloide. e) REACCIÓN DE BENEDICT.- si la solución muestra contiene cloroformo, reduce el reactivo de Benedict, y de acuerdo a la concentración del toxico puede producirse una gama de colores que van desde el verde, amarillo, naranja o rojo ladrillo. 7.- GRÁFICOS:
1 3 2 Escogemos el animal de experimentación.
Aplicamos 10 cloroformo
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Trituramos ben las vísceras.
ml
de
Ponemos al animal (rata Wistar) en la panema y observamos los síntomas que presenta hasta su muerte.
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Después de diseccionar a la rata se extraen las vísceras
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Atamos al animal en la tabla de disección y con ayuda de un bisturí procedemos a la disección
Colocamos las vísceras trituradas en un balón
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Destilamos por media hora
Extraemos las vísceras y las trituramos completamente
Se adiciona el ácido tartárico
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Al destilado obtenido se le agrega NaOH
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Solución madre en la que se realizara las reacciones de identificación. 8.REACCIONES DE Antes RECONOCIMIENTO
Reacción De Dunas.-:
Después
positivo – característico
Después Antes
Reacción De Lustgarten característico azul intenso
positivo
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Reacción De Fujiwara:
Antes
positivo característico
Después
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Reacción De Roseboom.-
Antes
REACCIÓN DE BENEDICT
Antes
positivo característico
Después
positivo característico
Después
9.- OBSERVACIONES: Debemos observar si el animal de experimentación presento perdida de actividad motora. somnolencia, hinchazón abdominal Si tiene dificultad al respirar. Cabe recalcar que a través de las pruebas en medios biológicos, observaremos la coloración de las reacciones lo cual corroboraremos para determinar la presencia del toxico (cloroformo) en el animal de experimentación. 10.-CONCLUSIONES Se llevó a cabo la Se llevó a cabo la administración de cloroformo a la rata Wistar y se pudo observar la sintomatología que es similar a la presentada en las personas tras una intoxicación por cloroformo, así mismo por medio de reacciones
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cualitativas se identifica el cloroformo proveniente del destilado de las vísceras del animal. 11.- RECOMENDACIONES
Utilizar el equipo de protección adecuado: bata de laboratorio, guantes, especialmente la mascarilla, para evitar intoxicaciones.
Aplicar todas las normas de bioseguridad en el laboratorio.
Para que la muerte del animal sea de forma rápida debemos de asegurarnos de la pureza de la sustancia, cloroformo, evitaremos que la muerta sea lenta y dolorosa para el animal.
CUESTIONARIO 1.- Escriba Los usos más frecuentes del cloroformo. El cloroformo se suele suministrar combinado con un estabilizante como, o, por ejemplo, el etanol. El cloroformo en trazas puede generarse de manera natural y se forma también al clorar el agua potable o las aguas residuales. Se emplea como materia prima en la industria química (fabricación de carburos fluorados que se utilizan como refrigerantes, resinas, plásticos, etc.). También se utiliza como disolvente en procesos industriales y en el laboratorio. En el pasado, el cloroformo se utilizó como sustancia anestésica. 2.- ¿Cuál es la Toxicocinética y mecanismo de acción del cloroformo? El cloroformo es un anestésico potente y origina una profunda depresión del SNC. Entra en el organismo por vía respiratoria, digestiva o dérmica. En humanos puede producir la muerte con la ingestión oral de tan solo 10 ml. Exposiciones prolongadas o repetidas a los vapores pueden producir hepatotoxicidad, severa que se caracteriza por necrosis centrolobular. Asimismo se ha descrito degeneración grasa del hígado, el riñón y el corazón. El mecanismo de lesión parece ser la oxidación a nivel hepático del cloroformo a fosgeno a través del sistema microsomal P450. También se forma fosgeno cuando los vapores de cloroformo se exponen al calor de una llama. El fosgeno inhalado se convierte en ácido hidroclorhídrico y dióxido
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de carbono cuando reacciona con el agua en el alveolo; y el ácido produce edema pulmonar.
3.- Cuales Son Los Peligros Del Cloroformo En contacto con superficies calientes o con llamas, se descompone formando humos tóxicos y corrosivos. Se descompone lentamente bajo la influencia del aire y la luz. Reacciona violentamente con bases fuertes, oxidantes fuertes, originando peligro de incendio y explosión. Ataca algunas formas de plástico, caucho y recubrimientos. Por inhalación causa tos. Al entrar en contacto con la piel se absorbe generando dolor. La ingestión causa dolor y vómitos. Código NFPA: Salud 2, inflamabilidad 1, reactividad 0.
GLOSARIO. HIPOXIA: Es un estado en el cual el cuerpo completo (hipoxia generalizada), o una región del cuerpo (hipoxia de piel loca), se ve privado del suministro adecuado de oxígeno. CIANOGÉNICO: Compuesto capaz de liberar ión cianuro, como por ejemplo, el glucósido amigdalina del hueso del melocotón y el albaricoque. NOCIVO: Riesgo de efectos graves para la salud en caso de exposición prolongada por inhalación e ingestión. BIOACUMULACIÓN: El cloroformo no parece acumularse en gran cantidad en las plantas y en los animales, pero sí podemos encontrar pequeñas cantidades de cloroformo en los alimentos. EXPOSICIÓN: La sustancia se puede absorber por inhalación, a través de la piel y Por ingestión LA HEPATOTOXICIDAD se define por la capacidad de una sustancia para destruir las células del hígado.
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BIBLIOGRAFÍA ECURED (2011).cloroformo. Índice de Guías Seminarios. cloroformo [Citado: 16 de julio del 2016] Disponible en: http://www.ecured.cu/Triclorometano Southern Chemical Corporation. HOJA DE INFORMACIÓN DE SEGURIDAD PARA MATERIALES cloroformo. (En linea) 16—07- 2016. Disponible en: http://www.insht.es/InshtWeb/Contenidos/Documentacion/TextosOnline/Valore s_Limite/Doc_Toxicologica/FicherosSerie2/DLEP%2026.pdf MEDLINEPLUS (1997). Intoxicación con cloroformo. (En linea) 16—07- 2016. Disponible en: http://tratado.uninet.edu/c100803.html WEBGRAFÍA
http://www.clasaanestesia.org/search/apendice/comision_historia/cuba/uso _anestesia_cloroformo.htm https://www.murciasalud.es/recursos/ficheros/137913-CLOROFORMO.pdf
http://salud.ccm.net/faq/23152-hepatotoxicidad-definicion AUTORIA: BQF. GARCIA GONZÁLEZ CARLOS ALBERTO MSc FIRMA DE RESPONSABILIDAD
JIMENEZ PULLA LIDIA DEL CARMEN C.I. 070470220-8
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ANEXOS 1
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MI INVESTIGACION CLOROFORMO ¿Qué es el cloroformo? El cloroformo es un líquido incoloro con un olor agradable no irritante y de sabor ligeramente dulce. Se enciende solamente cuando alcanza temperaturas muy altas. En el pasado, el cloroformo fue usado como un anestésico que se inhalaba durante una cirugía; en la actualidad ya no se utiliza de esta manera. Hoy en día, el cloroformo se usa para hacer otros productos químicos y también se forman pequeñas cantidades de cloroformo cuando se añade cloro al agua. Otros nombres que recibe el cloroformo son triclorometano y tricloruro de metilo. Efectos Potenciales de Salud Inhalación: Actúa como anestésico relativamente potente. Irrita el tracto respiratorio y produce efectos en el sistema nervioso central, incluyendo dolor de cabeza, somnolencia, mareos. La exposición a altas concentraciones puede resultar en inconsciencia e inclusive muerte. Puede causar daño hepático y desórdenes sanguíneos. La exposición prolongada puede llevar a la muerte debido a una frecuencia cardíaca irregular y desórdenes renales y hepáticos. Ingestión: Causa quemaduras severas de boca y garganta, dolor pectoral y vómitos. Grandes cantidades pueden causar síntomas similares a los de la inhalación. Contacto con la Piel: Causa irritación cutánea causando enrojecimiento y dolor. Elimina los aceites naturales. Puede ser absorbido a través de la piel. Contacto con los Ojos: Los vapores causan dolor e irritación ocular. Las salpicaduras pueden causar severa irritación y posible daño ocular. Exposición Crónica: La exposición prolongada o repetida a los vapores puede causar daño al sistema nervioso central, corazón, hígado y riñones. El contacto con el líquido elimina las grasas y puede causar irritación crónica de la piel con grietas y resequedad y la correspondiente dermatitis. Se sospecha que el cloroformo es un carcinógeno en humanos.
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Empeoramiento de las Condiciones Existentes: Las personas con desórdenes cutáneos ya existentes o problemas oculares o función hepática, renal o respiratoria deteriorada, pueden ser más susceptibles a los efectos de esta substancia Contacto con la Piel: Lave la piel inmediatamente con agua abundante por lo menos 15 minutos, mientras se quita la ropa y zapatos contaminados. Busque atención médica inmediatamente. Lave la ropa antes de usarla nuevamente. Limpie los zapatos completamente antes de usarlos de nuevo. Contacto con los Ojos: Lave los ojos inmediatamente con abundante agua, por lo menos 15 minutos, elevando los párpados superior e inferior ocasionalmente. Busque atención médica inmediatamente. Manejo y Almacenamiento Guarde en un envase resistente a la luz, cerrado herméticamente y almacene en un área fresca, seca y bien ventilada. Proteja contra los daños físicos. Aísle de las substancias incompatibles. Use equipo de protección especial (Sección 8) para realizar el mantenimiento o donde las exposiciones puedan exceder los niveles de exposición establecidos. Lávese las manos, la cara, los antebrazos y el cuello al salir de las áreas restringidas. Dese un baño de regadera, deseche la ropa exterior, cámbiese la ropa vistiendo ropa limpia al terminar el día. Evite la contaminación cruzada de las ropas de calle. Lávese las manos antes de comer y no coma, ni beba, ni fume en el trabajo. Los envases de este material pueden ser peligrosos cuando están vacíos ya que retienen residuos del producto (vapores, líquido); observe todas las advertencias y precauciones que se listan para el producto. Umbral de olor del cloroformo: 250 mg/m3. El umbral de olor sólo sirve como advertencia de la exposición; si no siente el olor, no significa que usted no está siendo expuesto. Información Toxicológica Dato Toxicológicos: Chloroform: LD50 oral en ratas: 908 mg/kg; LD50 piel de conejos: > 20 gm/kg; LC50 inhalación en ratas: 47702 mg/m3/4H; irritation data: “Todo es veneno, Nada es veneno, Todo depende de la dosis“. PARACELSO
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piel de conejos 10 mg/24H abierta leve; Ojo de conejos: 20 mg/24H moderada; Ha sido investigado como tumorígeno, mutagénico y causante de efectos reproductivos. Toxicidad Reproductiva: Se han observado defectos al nacimiento en ratas y ratones expuestos a la inhalación de+ cloroformo a concentraciones en el aire mayores de 100 ppm. La ingestión de cloroformo por animales de laboratorio gestantes, ha causado fetotoxicidad pero no defectos al nacimiento y sólo a niveles que causan severos efectos en la madre.
BIBLIOGRAFIA: Agency for Toxic Substances and Disease Registry (ATSDR). 1997. Toxicological Profile for Chloroform. Atlanta, GA: U.S. Department of Health and Human Services, Public Health Service. (En linea) 16—07- 2016. Disponible en: https://www.atsdr.cdc.gov/es/toxfaqs/es_tfacts6.pdf DORWIL S.A.(2008). CLOROFORMO. Buenos aires. (En linea) 16—072016. Disponible en: http://www.dorwil.com.ar/msds/Cloroformo.pdf
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Tema: TRIHALOMETANOS EN AGUAS DE CONSUMO HUMANO
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