2. IDENTIFICACIÓN Las siguientes pruebas se deben realizar con los distintos microorganismos obtenidos en los aislamientos en placa. Se llevarán a cabo 4 pruebas individuales: Prueba de la oxidasa, Test de la Catalasa, Prueba de Kligler y Manita-movilidad. Además se llevará a cabo una prueba compuesta por varias reacciones bioquímicas, el API20E. 2.1. Prueba de la Oxidasa. Se trata de determinar si un microorganismo posee citocromo c-oxidasa. Para ello se utiliza un compuesto orgánico que puede ser reducido por el sistema citocromo-oxidasa/citocromo c en presencia de oxígeno molecular, originando un producto coloreado fácilmente apreciable. oxidasa
1-naftol + dimetilparafenilendiamina
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azul de indofenol
Procedimiento 1.
Tomar con el asa de siembra una colonia de la placa de EMB o TCBS (o bien hacer una suspensión de una colonia en agua) y depositar en un porta. 2. Poner la colonia sobre el porta y añadir una gota de sustrato cromógeno fresco (10 mg/ml). 3. Esperar 20-60 segundos y observar si existe algún cambio en la coloración. Si se pone azul es (+). Resultado: Si la tira se pone de color azul oscuro, el microorganismo es oxidasa positivo. 2.2. Test de la Catalasa. Algunas bacterias poseen catalasa, una enzima capaz de destruir el agua oxigenada generada en algunos procesos metabólicos. Esta enzima está presente en la mayoría de las bacterias que contienen citocromos, bien aerobias o anaerobias facultativas. catalasa
2 H2O2
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2 H2O + O2
Procedimiento 1.
Coger con cuidado una colonia con el asa de siembra (evitar coger agar) de la placa de EMB (Enterobacteriaceae) y TCBS (Vibrionaceae) 2. Poner la colonia directamente sobre un portaobjetos sin añadir agua. 3. Echar sobre la colonia una gota de agua oxigenada pura o al 30 %. 4. Observar si se forman burbujas de oxígeno. Resultado: La aparición de burbujas indica que el microorganismo es catalasa positivo.
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