Appendix #2 SpanishREV
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Agar Chocolate GC (medio agar base gonococos [GC] más hemoglobina y 1% de suplemento de crecimiento definido) El agar chocolate GC es un medio no selectivo utilizado para el crecimiento de cultivos puros de Neisseria gonorrhoeae. Aunque el agar chocolate se hace frecuentemente con sangre fresca de carnero, no se recomienda que se utilicen productos frescos de la sangre en el medio de gonococo, porque ellos varían en su habilidad para soportar el crecimiento de N. gonorrhoeae. La hemoglobina en polvo debe, por ello, ser utilizada para preparar el medio estándar de agar chocolate GC. Los siguientes métodos permiten la producción de 100 ml de medio (cinco placas de 15x100 mm de diámetro); ajuste proporcionalmente las cantidades para la producción de volúmenes mayores de medios. Se sugiere que los laboratoristas deben preparar no más de 500 ml de medio por contenedor individual, porque es difícil de mezclar apropiadamente grandes cantidades de medios. a) Suspenda 7,2 g de agar base de GC en 100 ml de agua destilada. Mezcle completamente, caliente con agitación frecuente, lleve a hervir y suavemente revuelva para suspender completamente el polvo (aproximadamente 1 minuto). Lleve al autoclave el medio a 121˚C por 15 minutos. Enfríe en un baño de agua hasta 50˚C. b) Añada 2 g de polvo de hemoglobina soluble a 5–10 ml de agua destilada caliente en un frasco con tapa de rosca. Gradualmente añada agua destilada caliente (hasta un volumen total de 100 ml) y agite el frasco poco a poco hasta que se alcance una suspensión uniforme. (Este proceso se hace más fácil si la solución se pudiera agitar con un agitador magnético.) Lleve al autoclave la solución de hemoglobina a 121˚C durante 15 minutos. Enfríe en un baño de agua hasta 50˚C. • Si estuviera lista para utilizar la solución de hemoglobina, en vez de seguir los métodos descritos aquí en el paso b, use 100 ml de la solución lista para utilizar de hemoglobina estéril al 2% calentada en un baño de agua a 50˚C. c) Reconstituya el suplemento de crecimiento (IsoVitaleX). d) Abra asépticamente el vial que contiene el suplemento de crecimiento liofilizado. e) Use una aguja y una jeringuilla estériles para transferir asépticamente 10 ml del diluente acompañante al vial. f) Agite para asegurar una completa solución. Después de reconstituido, use inmediatamente el suplemento para el crecimiento, o guárdelo a 4˚C y úselo en dos semanas. g) Añada asépticamente 100 ml de solución de hemoglobina estéril y 2 ml del suplemento de crecimiento reconstruido a 100 ml de medio agar base de GC.
196 | Manual de Laboratorio para la Identificación y Prueba de Susceptibilidad a los Antimicrobianos