Inhibición de Enzimas • Ha permitido obtener información sobre el mecanismo y las rutas de las catálisis enzimáticas. • Estudio de especificidad del sustrato. • Naturaleza de los grupos funcionales en el centro activo y la participación de grupos funcionales en la catálisis.
Tipos de Inhibici贸n Estas son Reversibles 1:- Inhibici贸n competitiva. 2:- Inhibici贸n acompetitiva. 3:- Inhibici贸n no competitiva (Mixta).
Inhibición Competitiva • El inhibidor se combina con la enzima libre. • Compite con el sustrato normal, para reaccionar con el centro activo. •Formando un complejo enzima - inhibidor (E-I) , análogo al complejo E-S.
Características 1:- La molécula inhibidor no resulta químicamente alterada por la enzima. 2:- Según la teoría de Michaelis - Menten, se define la constante del inhibidor (Ki), como la constante de disociación del complejo E-I. 3:- la inhibición competitiva se reconoce experimentalmente. El porcentaje de inhibición para una concentración de inhibidor constante disminuye al incrementarse la concentración del sustrato.
Características 4:-El análisis cinético, viene determinado para una concentración constante del inhibidor. Como resultado se obtiene una familia de líneas rectas cuyo punto de intersección es común en el eje 1/Ve. 5:- La representación de un I competitivo incrementa la Km aparente de la enzima. Es decir, requiere concentraciones de sustratos mayores para que alcance la Vmax. 6:- El Km aparente del S, será mayor que la verdadera Km.
Caracter铆sticas 7:- El inhibidor competitivo no interfiere con la velocidad de ruptura del complejo E-S. 8:- Ejemplo: Inhibici贸n competitiva de la succinato deshidrogenasa por el malonato.
Inhibición Acompetitiva •El inhibidor no se combina con la enzima libre y no afecta a su reacción con el sustrato. • Se combina con el complejo E-S, para formar un complejo E-S-I, la cual no experimenta su transformación a producto.
Características 1:- Se reconocen con facilidad en las gráficas de doble recíproca. La pendiente de las rectas permanece constante al aumentar la concentración del inhibidor. 2:- La Vmax decrece con aumento del inhibidor. 3:- Es poco frecuente en las reacciones de un solo sustrato.
Inhibición no competitiva (Mixta) • El inhibidor puede combinarse con la enzima libre o con el complejo E-S. • Reconoce un sitio de la enzima diferente al sitio activo. • Generalmente, deforman la enzima y no formarse el complejo E-S a una velocidad normal.
puede
•Sus efectos no se anulan al aumentar la concentración del sustrato.
Características 1:- El inhibidor produce dos formas inactivas E-I y E-S-I. 2:- En las gráficas de doble recíprocas las rectas difieren en pendiente y no comparten un punto común de intersección en el eje de la ordenada (1/Ve). 3:- El valor de la intersección en el eje 1/Ve es mayor para la enzima inhibida v/s condición normal. 4:- Por lo anterior la Vmax. disminuye en presencia del I y no cambia con la concentración del S.
Características 5:- Esta inhibición es producida por los reactivos que pueden combinarse reversiblemente con algún grupo funcional de la enzima e indispensable para mantener la conformación tridimensional catalíticamente activa de ésta. 6:-Las enzimas con grupos SH son inhibidas no competitivamente por iones de metales pesados. 7:- Las enzimas que requieren iones metálicos para su funcionamiento son inhibidas no competitivamente por agentes quelantes como el EDTA.
Inhibición Irreversible • El inhibidor interviene en un equilibrio irreversible, que se establece rápidamente con la enzima o con el complejo E-S. • El agente se une de forma covalente y modifica de modo permanente a un grupo funcional, esencial para la catálisis. •Su estudio es importante porque permite obtener información respecto de los grupos funcionales catalíticos del centro activo.