¿CÓMO FUNCIONA?
Pirosecuenciación GS-FLX (454)
Reacción de Pirosecuenciación.
Por: Iván Flores Rosales
Sin duda alguna uno de los factores
se logró secuenciar hasta 96
más importantes que desencadenó
muestras de ADN en pocas horas,
la mejora continua de los métodos
procesando entre 500 y 1000
de secuenciación de ADN fue el
bases, pero aun así a un precio
HGP (Proyecto de Secuenciación
muy alto; llegando al límite de
del Genoma Humano por sus
esta generación, publicando en
siglas en inglés). Con una inversión
el año 1995 el primer genoma
de más de 3 mil millones de dólares
secuenciado Haemophilus influenzae
durante un tiempo de investigación
y comenzando entonces con el
de 15 años, se secuenciaron cerca
HGP.
de 3 mil millones de bases, es decir, 1 dólar por base; esto requirió la
La siguiente generación fue la
creación de métodos más rápidos,
primera en lograr la introducción
eficientes y baratos.
comercial mediante el sistema Roche™ GS-FLX (454) en el
Esta tarea hubiese sido demasiada
2004 utilizando una tecnología
complicada hace 35 años, ya
alternativa
que la primera generación de
pirosecuenciación.
secuenciación
desarrollada
conocida
como
de lectura de 80 bases mediante
La Secuenciación 454 involucra 3 pasos principales:
un método manual, tedioso y peligroso debido a la utilización de
Generación de la librería de
componentes radioactivos.
muestras.
En los 90’s con el comienzo de
Nebulización de la muestra y unión
investigaciones
requerían
de adaptadores, posteriormente se
secuenciación se promovió la
realiza una emulsión con perlas,
mejora
las
mediante de
de
que
estos la
métodos,
y
implementación
didesoxinucleótidos
con
fluorescencia y con la mejora
cuales
son
transferidas
a la placa para su posterior secuenciación, en conjunto con ATP Sulfurilasa, Luciferasa y Polimerasa; la adición de cada nucleótido produce una señal de luz, la cual es capturada por una cámara incluida en el equipo. Procesamiento de datos. Los
datos
profundidad
son
analizados
con
a
herramientas
bioinformáticas, para el mapeo de la muestra analizada. Éste es el método con mayor cobertura
dentro
generación,
de
esta
disminuyendo
por base. (Enlace recomendado: http://454.com/products/ technology.asp) Actualmente con el propósito de abaratar los métodos y aumentar
funcionarán
como
microrreactores donde se realizara la amplificación clonal mediante PCR.
la fiabilidad de los mismos se han desarrollado los métodos de tercera generación basados en
la
secuenciación
de
una
sola molécula de ADN (single molecule real time sequencing), esta tecnología desarrollada por Helicos BioSciences™ se basa en
y automatización del proceso Abril 2013 | Doble hélice: 60 años
perlas
entonces el costo a 0.01 dólares
por
Sanger contaba con una capacidad
Las
07
iBIO |SEIBT | Año 1 | Número 2