30 Atlas de la IASLC de Pruebas de ALK en Cáncer de Pulmón
B
A
Figura 2. Un adenocarcinoma que es fuertemente ALK positivo. A: sección teñida con H&E. B: La IHC de ALK con el anticuerpo D5F3 y amplificación de tiramida muestra una intensa tinción citoplasmática del producto del gen ALK (aumento, x40).
para diagnosticar el linfoma anaplásico de célula grande (LACG), ya que la expresión de la proteína es generalmente menor en el CPCNP (Mino-Kenudson 2010). Para superar este problema, se han introducido varios pasos técnicos incluyendo la recuperación de antígeno, el uso de un anticuerpo primario con mayor afinidad y en una concentración suficientemente alta, medidas para amplificar la fuerza de la señal (por ejemplo, con una cascada tiramida y la intercalación de un anticuerpopolímero mejorado), y el desarrollo de nuevos anticuerpos (Tabla 1). Tabla 1. Anticuerpos disponibles en el mercado para la IHC para detectar la expresión de la proteína ALK. Clon
Tipo de Clon
Isotipo
Immunogeno
ALK1
Monoclonal de ratón
IgG3, kappa
Los aminoácidos 1359–1460 de la proteína ALK humana de longitud completa, correspondientes a los aminoácidos 419–520 de la proteína de NPM-ALK quimérica
5A4
Monoclonal de ratón
IgG1
C-terminal del transcrito NPM-ALK (419-520 aminoácidos)
D5F3
Monoclonal de conejo
No disponible
Anti-ALK
Monoclonal de conejo
IgG
Carboxilo terminal (C-terminal) de ALK humano La proteína recombinante que representa los aminoácidos 426 a 528 de ALK humano
Otro aspecto importante de las pruebas IHC de ALK en muestras de cáncer de pulmón es la falta de un control positivo interno para la inmunotinción, lo que hace difícil juzgar si un resultado de IHC negativo es realmente negativo para la expresión de la proteína de fusión de ALK. Sin embargo, debido a que el tejido pulmonar normal no expresa ALK, la expresión difusa de la proteína ALK en células de cáncer de pulmón se asocia siempre con la expresión de la proteína aberrante de fusión ALK (Takamochi 2013, Takeuchi 2013). Los bloques celulares obtenidos a partir de líneas celulares con reordenamientos en ALK (H3122-variante 1 y H2228 de la variante 3) se pueden usar como controles para el estado óptimo de tinción, pero se deben tener en cuenta las diferencias entre las secciones de tejido y los bloques celulares obtenidos de líneas celulares, especialmente con una concentración menor de epítopo de la IHC de ALK (Figura 3).
Fijación y seccionamiento Los pasos preanalíticos para la IHC de ALK son los mismos que los otros procedimientos de la IHC.