26 Atlas de la IASLC de Pruebas de ALK en Cáncer de Pulmón
Otra señal de FISH atípica es el denominado patrón de doble señal roja, en el que un par de señales de 3' se fusiona con una señal 5' (Figura 13A) (Peled 2012). El CPCNP ALK-positivo con un patrón de doble señal roja puede ser mal interpretado como negativo para el reordenamiento de ALK porque dicho grupo de señales puede simular una señal fusionada convencional. A veces, tres o más copias de señales 3' pueden agruparse y fusionarse con una señal 5' (que se refiere como un patrón de triple señal roja) y así sucesivamente, según el número de copias (Figura 13B, 13C). En otros casos más raros, la mayoría de las células tumorales en CPCNP de ALK positivo pueden mostrar sólo señales 3' aisladas sin copias normales de ALK (Figura 13D). Las células con dicho patrón son consideradas como no evaluables por las reglas de gradación convencionales debido a la posibilidad de un fallo de la hibridación de la sonda 5', y el cáncer ALKpositivo con un patrón de este tipo puede ser pasado por alto. B Aunque todavía no está completamente claro cómo tales patrones de señales anormales predicen el estado de fusión sistemáticaA C D mente, estos patrones Figura 13. Patrones atípicos observados en los tumores de pulmón con la sonda FISH deberían al menos break-apart. 13 A: 3'-5-3' (patrón de doble señal roja) 13B y 13C: 3'-3'-5'-3' (patrón de triple plantear un alto índice señal roja); 13D: Señales 3’ aisladas, en su mayoría sin señales normales ALK. Las flechas de sospecha e incitar a indican un reordenamiento en ALK. la realización de pruebas con otras modalidades de diagnóstico (por ejemplo, la RT-PCR o la IHC). Serán necesarios futuros estudios para identificar otros perfiles de señal atípicos que están asociados con resultados falsos negativos de la prueba FISH. Tasas borderline de células con reordenamiento positivas En aproximadamente el 8% de los casos de CPCNP, la tasa de células con reordenamiento positivo está en un rango del 10 % al 20 % (Camidge 2013). Aunque el punto de corte aceptado actualmente del 15% clasifica técnicamente tales casos, ya sea como positivo o negativo para el reordenamiento de ALK, nuestra experiencia es limitada en cuanto a si dicha prevalencia borderline de señales de reordenamiento por la prueba FISH representa con precisión la presencia del gen de fusión. Recomendamos que las células sean cuidadosamente contadas otra vez en este tipo de muestras prestando especial atención a la diferenciación morfológica entre células tumorales y no tumorales. El hecho de incluir las células no tumorales en el recuento diluye la tasa de células con reordenamiento positivo. Estos errores técnicos se deberían minimizar mediante el algoritmo de clasificación de dos pasos recomendado. Se debe prestar atención también a las señales divididas verticalmente a lo largo del eje z del plano de tejido, el cual podría ser confundido con una señal fusionada. Este último inconveniente es particularmente relevante en laboratorios en los que la evaluación se realiza en imágenes digitales capturadas que consolidan múltiples niveles de enfoque para producir una imagen (sobreposición z). Estos casos borderline también pueden albergar perfiles de señal atípicos, como se ha descrito anteriormente. En concreto, un patrón de doble señal roja puede destacar inicialmente como una tasa borderline de células con reordenamiento positivo. Usar un filtro de un solo color en el análisis