22 Atlas de la IASLC de Pruebas de ALK en Cáncer de Pulmón
Patrón aislado 5' (negativo) (Figura 7D). Se considera que una célula tiene un patrón aislado 5' cuando sólo están presentes señales aisladas 5' y no hay señales aisladas 3'. Cuando una célula tiene tanto señales aisladas de 3' como 5', con más señales de 5' que de 3', la clasificación correcta es la de patrón dividido, y no de patrón aislado 5'. El número de señales fusionadas acompañantes no es relevante para la clasificación de patrones. Nota: Los criterios para el patrón dividido se basan principalmente en las pruebas efectuadas de las secciones del tumor FFPE con el Vysis LSI ALK Break Apart FISH Probe Kit, y los criterios deben ser validados cuando se utiliza un reactivo analítico diferente o un espécimen biológico. El tamaño de la sonda puede diferir entre los diseños de sonda, y una sonda más grande da como resultado tanto un tamaño de la señal más grande como una distancia más corta necesaria para la definición de patrón dividido. Célula
Gradación de tumores Se necesita un mínimo de 50 células tumorales cuando hay un marcador y un mínimo de 100 células tumorales cuando hay dos marcadores (ver más información en la sección “Valor de Corte”). Las muestras con menos células evaluables no son adecuadas para el análisis FISH (Camidge 2010). El patrón de señal de cada célula tumoral se debe anotar en una hoja de registro (Figura 8). Es probable que la gradación de tumores sea más exacta cuando se visualiza el tejido bajo un microscopio con filtros de interferencia individuales (rojo y verde) y dual. La gradación de tumores basada en imágenes capturadas tiene limitaciones y la imagen debe representar toda la profundidad de la sección con el fin de evitar una falsa interpretación de las señales aisladas (Figura 9). El aumento de copias del gen ALK nativo es común en CPCNP (Figura 10) y no existe ningún indicio de que esté asociado con la sobreexpresión de la proteína. Hoy por hoy, no se recomienda que el número de copias de ALK se incluya de forma rutinaria como parte de la gradación.
A
Nota: El tamaño de la señal en las imágenes capturadas tiende a ser ligeramente más
señal señal fusionada 5'
señal 3'
Pattern
Célula 1
2
0
0
Fusionada
Célula 2
2
1
1
Dividida
Célula 3
2
0
1
Aislada 3'
Célula 4
1
1
0
Aislada 5'
Célula 5
0
1
2
Dividida
Célula 6
1
0
0
Fusionada
Célula 50
2
0
0
Fusionada
Resumen de gradación de células: Número total de células contadas: 50 Número total de células con patrón fusionado: 19 Número total de células con patrón dividido: 22 Número total de células con patrón aislado 3': 5 Número total de células con patrón aislado 5': 4 Número total de células con patrón de reordenamiento positivo: 22+5=27 Tasa de células de reordenamiento positivo: 27÷50 x100=54%
Figura 8. Un ejemplo de una hoja de registro de gradación de células.
No z-stacking
B
16 planes at 0.4 µm= 6.4 µm z-stacking
Figura 9. El análisis basado en imágenes capturadas es difícil si la sobreposición z (consolidación de múltiples niveles de enfoque en un plano) no representa toda la profundidad de la sección.