Preparación y preservación de material científico
También se puede emplear alcohol etílico de la siguiente manera (Simmons 2002): 1. Colocar la muestra en alcohol etílico al 95 % por 1-2 horas, cambiar a un nuevo alcohol etílico de 95%.
2. Trasladar a alcohol etílico al 75 % por 1-2 horas, luego nuevamente cambiar a un nuevo alcohol etílico de 75 %.
3. Use al menos dos veces el volumen de alcohol por volumen del tejido.
4. Cortar la muestras en pedazos de 2-4 mm , puede añadir 100 µmol de EDTA (ácido EtilenDiaminoTetraAcético) por litro de alcohol para estabilizar los tejidos.
Los tejidos en alcohol deberían ser colocados en ampollas de vidrio que cierren bien, o se pueden emplear los envases de plástico usados para centrifugadoras, en este caso el tamaño de la muestra es menor, pero puede ser repartida entre varios envases; es recomendable el uso de viales que puedan ser cerrados herméticamente (los de tapa a presión tienden a desecarse en poco tiempo, si no están manufacturados apropiadamente (com. per. E. La Marca). Envuelva la tapa del envase con cinta adhesiva. Proteja los tejidos de la luz, colóquelos en un ambiente oscuro y fresco tan pronto como sea posible. Para muestras sanguíneas, tejido muscular, piel, etc., lo más recomendable es sumergirlas en etanol al 96% en una proporción 3:1 o 4:1, las muestras deben guardarse en recipientes sellados. Preferentemente, las muestras deben ser refrigeradas a temperaturas entre los 6°C y 4°C, o congeladas, aunque la eficiencia de la extracción de ADN no se ve afectada por mantener las muestras a temperatura ambiente por períodos de semanas. Alternativamente, las muestras de sangre y músculo pueden ser preservadas inmersas en EDTA, pero aquí la refrigeración es imprescindible. El uso de DMSO (dimetil sufoxido) no es recomendable para la colección o almacenamiento de tejidos, dado que no provee estabilidad por periodos largos de tiempo (Simmons 2002). El DMSO es un producto ampliamente usado en veterinaria y medicina; hay controversia en el uso de este, ya que hace más permeables las membranas de
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Preparación y preservación de material científico
las células, permitiendo el ingreso de otros agentes contaminantes por accidente (virus o bacteria). Su uso y efecto también depende de las concentraciones que se están empleando (http://expertos. conabio.gov.mx/_asp/foro4.asp?uid=226). Debe tenerse cuidado con el manejo del DMSO ya que se impregna rápidamente en la piel y puede ser irritante a la piel, ojos, y el sistema respiratorio. La solución salina saturada/DMSO no es inflamable, y puede guardarse indefinidamente a la temperatura del ambiente. Los tejidos como ya se mencionó pueden guardarse en etanol al 70-95%, o en una concentración similar de isopropanol, en lugar del DMSO (Eckert et al. 2000). Si desea trabajar con DMSO recuerde además que este es un crioprotector (Dessauer et al. 1996), lo cual ayuda a preservar las células durante el proceso de congelamiento y descongelamiento, en concentraciones apropiadas. Mantenimiento de la muestra
Como se había mencionado antes cada muestra de tejido debe ser cambiada nuevamente a un envase apropiado, etiquetado. Las muestras de tejido pueden guardarse en ampollas o frasquitos de vidrio o plástico esterilizado, con etanol al 95% o en nitrógeno líquido (Olson et al. 1997). Luego de etiquetar la muestra, estas deben guardarse en una colección pública adecuada (museo o universidad, por ejemplo), de tal manera que estén disponibles para investigaciones. Jacobs & Heyer (1994) indican que los tejidos congelados en hielo normal (agua sólida) no son adecuados para la mayoría de las pruebas bioquímicas estándar de proteínas o ADN. El hielo seco puede guardarse en una bolsa plástica sellada o en una caja, excepto si se evapora rápidamente (cerca de 2-3 kg/día). El tiempo máximo de campo para emplear el hielo seco es cerca de una semana. El hielo seco generalmente está disponible en la industria química para el suministro a firmas o distribuidores de alimentos congelados (como helados). El tanque de nitrógeno líquido o refrigerador es usado en el campo para congelar y almacenar tejidos. El término común entre usuarios para este tipo de envase es tanque o, raramente frasco o termo Dewar; sin embargo, el término comercial es refrigerador. Los tanques vienen en una gran variedad de tamaños con capacidad de 3 a 34 l. El nitrógeno debe estar en cantidad suficiente para mantener
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