336 • Kapittel 10
oftest kuler av gull eller wolfram, blir dekket med DNA og skutt inn i intakt plantevev eller cellekulturer. Partiklene får så høy fart at cellevegg og celle membran punkterer. Partiklene med DNA-et kan dermed trenge inn i cellene. Bruk av genkanon er en direkte genoverføring. Agrobacterium tumefaciens er en bakterie som naturlig infiserer tofrøbladede planter, og den blir derfor brukt til å transformere for eksempel potet, tomat og soya. Nå er det også utviklet bakteriestammer av Agrobacterium, som også kan infisere enfrøbladede planter. Agrobacterium er opprinnelig en jordbakterie som utvikler svulster i planter. Bakterien overfører et eget plasmid (Ti– plasmid) til DNA-et i plantene. Det geniale her er at vi kan designe vårt eget plasmid-DNA med det genet vi har interesse av, sette det inn i bakterien og infisere planteceller med bakteriene. Transformerte skudd kan senere identifiseres ved hjelp av et markørgen, se side 339. a)
b) Agrobacterium-bakterie Bakteriekromosom
Genkanon Planteceller infiseres med Agrobacterium Mikropartikler av gull,dekket med DNA
Planteceller
Bakteriesuspensjon Sted hvor restriksjonsenzym kutter
T DNA
Planteceller
Overføring av DNA til planteceller
Plantecelle DNA integreres i plantecellenes arvestoff
Ti-plasmid
Restriksjonsenzym og DNA-ligase tilsettes
Plantecelle
DNA med gen av interesse
Rekombinant Ti-plasmid
Regenerering av planter fra genmodifiserte planteceller
Transformasjon av planter. a) Genkanon: Mikroprosjektiler blir dekket med DNA og skutt inn i planteceller, enten ved hjelp av komprimert gass, elektrisk utladning eller en sprengladning. b) Agrobacterium: Genet av interesse blir satt inn i isolerte Ti-plasmider, som igjen blir satt inn i bakterien. Den sykdoms framkallende evnen til bakterien fjernes. Deretter blir planteceller infisert med bakteriene. Bakterien blir dyrket sammen med plantevevet i tre–fire dager og deretter tilsatt antibiotika for å drepe bakterien. Når skuddene blir laget, tilsettes noe for å identifisere de transformerte skuddene. Hva som blir tilsatt, avhenger av type markørgen i plasmidet.