AVANCE El calibrador es de origen humano. Pese a haber sido ensayado como negativo para HIV, hepatitis B y C y sífilis e inactivado por calor, debe tratarse como potencialmente infectivo, tal como cualquier muestra objeto de análisis. Los reactivos son para uso IN VITRO. La caja y los envases contenidos en este producto no deben ser reusados, debiendo descartarse como residuos peligrosos una vez empleados, de acuerdo a la legislación vigente. El personal que manipula los mismos debe ser debidamente capacitado para su manejo y descarte por la institución o laboratorio que lo emplea.
Es recomendable procesar siempre un punto del calibrador como control del sistema. En tres cubetas de lectura marcadas S (Calibrador), D (desconocido) y C (control) agregue: M
S
C
R1
800 µl
800 µl
800 µl
R2
200 µl
200 µl
200 µl
Multicalibrador
100 µl
----
----
Muestra
----
100 µl
----
Control
----
----
100 µl
Mezcle y lea a 540 nm la absorbancia A1 inmediatamente contra agua destilada y A2 exactamente tras 8 minutos de mezclar.
MATERIALES NECESARIOS PERO NO PROVISTOS 1. Espectrofotómetro o turbidímetro 2. Cubetas de lectura. 3. Pipetas y micropipetas para los volúmenes citados en PROCEDIMIENTO. 4. Cronometro o reloj alarma. 5. Agua destilada o deonizada. 6. Solución fisiológica (cloruro de sodio 8.5 g/l).
CALIBRACION El método debe ser recalibrado con cada lote de reactivos y, al menos, una vez por mes o cuando los controles estén fuera de las especificaciones. CURVA DE CALIBRACIÓN: Prepare las siguientes diluciones del calibrador usando solución fisiológica como diluyente.
MUESTRA Suero fresco. Debe separarse dentro de los 30 minutos de extraída la muestra.
1
2
3
4
5
6
Calibrador (μl)
----
10
25
50
75
100
Solución fisiológica (μl)
100
90
75
50
25
----
0
0.1
0.25
0.5
0.75
1.0
Dilución
ADITIVOS No es necesario el agregado de aditivos.
Factor Concentración resultante (*)
CONDICIONES DE CONSERVACIÓN DE LAS MUESTRAS Refrigerador (2-8ºC): estable 7 días. Congelador (-20ºC): estable 3 meses.
(*) Para calcular las concentraciones de cada dilución, multiplique la concentración del calibrador por el factor indicado en la tabla. Procese las diluciones como indica PROCEDIMIENTO. Calcule la diferencia de lecturas (A2 - A1) obtenidas para los diferentes puntos y construya la curva de calibración con los valores obtenidos y las respectivas concentraciones del calibrador.
SUSTANCIAS INTERFERENTES Las muestras con restos de fibrina deben centrifugarse antes de ensayar. No emplee muestras groseramente hemolisadas o lipémicas. La bilirrubina (20 mg/dl), hemoglobina (10 g/l) y lípidos (10 g/l) no interfieren. MANIPULACIÓN Y DESCARTE Todas las muestras deben considerarse como potencialmente infectivas, así como el material que haya estado en contacto con ellas. El tratamiento y eliminación de las mismas debe efectuarse de acuerdo con las buenas prácticas de laboratorio y las regulaciones locales. Un método sugerido es el autoclavado a 121ºC durante una hora. Los líquidos pueden ser inactivados dejándolos en hipoclorito de sodio 5% durante una hora.
CALIBRACION El método debe ser recalibrado con cada lote de reactivos y, al menos, una vez por mes o cuando los controles estén fuera de las especificaciones. CURVA DE CALIBRACIÓN: Prepare las siguientes diluciones del calibrador usando solución fisiológica como diluyente. CALCULOS La concentración en la muestra se obtiene por interpolación en la curva de calibración del dato de (A2-A1) obtenido con ella.
ENSAYO: Procedimiento: PREVIAMENTE, ATEMPERE EL REACTIVO. En tres tubos marcados B (blanco), E (estándar) y D (desconocido) agregue: Condiciones de reacción: Longitud de onda: 540 nm Temperatura: 37ºC Procedimiento: PREVIAMENTE, ATEMPERE LOS REACTIVOS.
ESTUDIO DE COMPARACIÓN En el desarrollo del producto se efectuaron comparaciones de muestras contra reactivos comerciales de igual fundamento técnico y aprobados por ANMAT, tomados como referencia. 4
FERRITINA Inmunoquant