Disolver los ingredientes en el medio de base, ajustar el pH a 7,6 y mantener en el autoclave a 121°C durante 15 minutos. Dejar enfriar el medio y añadir: D-cicloserina.............................. 400 mg B-sulfato de polimixina .............. 25 mg ß-D-glucosuro de indoxyl........... 60 mg Deberá disolverse en 8 ml de agua destilada estéril antes de añadirse Solución de difosfato de fenolftaleína al 0,5% esterilizada por filtración ............ 20 ml FeCl3·6H2O al 4,5% esterilizada por filtración ............ 2 ml
Método de Filtración por Membrana Fundamento La metódica propuesta es la de filtración de membrana, se basa en la filtración de volúmenes determinados del agua a analizar por filtros de membrana e incubación sobre medio de cultivo sólido a una temperatura y tiempo adecuado. El filtro de membrana utilizado habitualmente tiene un poro de 0,45 µm, y debe tener una eficacia de recuperación del 80-90% tal y como se describe en la ISO 7704 (1985). En la superficie quedan retenidos los microorganismos contenidos en el agua; el recuento de colonias después de la incubación se hace directamente sobre la superficie de la membrana.
Modo de empleo
La dilución a realizar dependerá de la concentración bacteriana esperada en la muestra. Se debe procurar filtrar de tal manera que el número de colonias crecidas en el filtro permita un recuento de colonias óptimo. Para diluir la muestra se puede utilizar Agua de Peptona Ref.: 413794 de Cultimed que se preparará y esterilizará según se indica en la etiqueta o otros diluyentes similares deshidratados o preparados. Finalizado el proceso de filtración de la muestra, el filtro se lavará con 30 ml de diluyente. Transferir la membrana filtrante mediante pinzas esterilizadas sobre el medio de cultivo contenido en la placa preparada de modo que la superficie de filtración (cuadrícula) quede hacia arriba, cerrar e invertir la placa para su incubación, de acuerdo con el procedimiento establecido.
Los elementos del sistema de filtración que vayan a entrar en contacto con el agua a analizar deben estar estériles. Se filtra el volumen de la muestra o de una dilución de ésta, previamente homogeneizada, efectuando el vacío necesario.
Bibliografía DOCE L330/32 Directiva 98/83/ce del Consejo de 3 de noviembre de 1998 (5-12-98) B.O.E. nº 193 (13-08-1983) B.O.E. nº 226 (20-09-1990) B.O.E. nº 114 (13-05-1987) B.O.E. nº 178 (26-07-1991) ISO 7704 (1988)
Editado / Edited XI - 2002
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