53 Badanie czystości mikrobiologicznej metodą bezpośredniego posiewu można wykonać na dwa sposoby metodą płytek lanych oraz posiewu powierzchniowego. Pierwsza z metod polega na przygotowaniu szeregu rozcieńczeń badanej próby (1:10, 1:100, 1:1000). Z każdego rozcieńczenia odmierza się po 1ml do Płytek Petriego i dodaje około 15-20 ml podłoża agarowego z hydrolizatem kazeiny i soi (TSA) lub agaru Sabouraud z dekstrozą (SDA). Natomiast druga z metod polega na rozprowadzeniu po powierzchni podłoży agarowych TSA oraz SDA odmierzoną objętość próbki przygotowanej jak podano powyżej. Płytki z podłożem agarowym z hydrolizatem kazeiny i soi (TSA) należy inkubować 3-5 dni w temperaturze 30-35oC. Płytki z podłożem agarowym Sabouraud z dekstrozą (SDA) inkubować 5-7 dni w temperaturze 20-25oC. Po okresie inkubacji wybrać płytki odpowiadające danemu rozcieńczeniu, gdzie najwyższa liczba kolonii jest mniejsza niż 250 w przypadku TAMC i 50 w przypadku TYMC. Obliczyć liczbę CFU w 1g lub 1ml produktu [4]. Przyjmuje się, że ogólna liczba drobnoustrojów tlenowych (TAMC) jest równa liczbie CFU znalezionych na podłożu TSA, jeżeli kolonie grzybów są wykrywane na tym podłożu, zaliczane są do TAMC. Odpowiednio, ogólna liczba drożdży i pleśni (TYMC) jest równa liczbie CFU znalezionych na podłożu SDA, jeżeli kolonie bakterii są wykrywane na tym podłożu, zaliczane są do TYMC [4]. Jeżeli określone jest kryterium akceptacji dla jakości mikrobiologicznej produktu, interpretuje się je następująco: 101 CFU:
maksymalna dopuszczalna liczba = 20; 102 CFU: maksymalna dopuszczalna liczba = 200 oraz 103 CFU; maksymalna dopuszczalna liczba = 2000 [4]. Alternatywny sposób obliczania i wyrażania wyników badań zawarty jest także w normie PN-EN ISO 7218: 2008 „Mikrobiologia żywności i pasz. Wymagania ogólne i zasady badań mikrobiologicznych”. • Badanie obecności określonych drobnoustrojów Mikrobiologiczne badanie obecności określonych drobnoustrojów pozwala na stwierdzenie braku lub obecności niewielkiej liczby wybranych mikroorganizmów. W badaniu tym poszukuje się bakterii Gram-ujemnych, tolerujących żółć, Escherichia coli, Salmonella, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Candida albicans oraz w niektórych przypadkach beztlenowców z rodzaju Clostridium. Badanie należy wykonać używając w pierwszej kolejności podłoży namnażających służących do otrzymania biomasy drobnoustrojów badanego szczepu. A następnie podłoży wybiórczych zawierających dodatek związków chemicznych hamujących wzrost konkretnej grupy mikroorganizmów. Podłoża oraz warunki inkubacji potrzebne do określenia obecności wybranych drobnoustrojów przedstawiono w tabeli 1. Wzrost charakterystycznych dla danego drobnoustroju kolonii może świadczyć o jego obecności. Wówczas należy potwierdzić wynik badania dodatkowymi testami identyfikacyjnymi [4].
Drobnoustrój
Podłoże namnażające/ Warunki inkubacji
Podłoże wybiórcze/ Warunki inkubacji
Bakterie Gram-ujemne, tolerujące żółć
Bulion z hydrolizatem kazeiny i soi/ 20-25oC, 2-5 h
Bulion Mossela wzbogacony dla pałeczek jelitowych/ 30-35oC, 24-48 h
Agar z fioletem krystalicznym, czerwienią obojętną, żółcią i glukozą 30-35oC, 18-24 h
Escherichia coli
Bulion z hydrolizatem kazeiny i soi/ 30-35oC, 18-24 h
Bulion MacConkeya/ 42-44 oC, 24-48 h
Agar MacConkeya/ 30-35oC, 18-72 h
Salmonella
Bulion z hydrolizatem kazeiny i soi/ 30-35oC, 18-24 h
Bulion Rappaporta Vassiliadisa wzbogacony dla Salmonella/ 30-35oC, 18-24 h
Agar z ksylozą, lizyną i deoksycholanem/ 30-35oC, 18-48 h
Pseudomonas aeruginosa
Bulion z hydrolizatem kazeiny i soi/ 30-35oC, 18-24 h
Agar z cetrymidem/ 30-35oC, 18-72 h
Staphylococcus aureus
Bulion z hydrolizatem kazeiny i soi/ 30-35oC, 18-24 h
Agar z mannitolem i chlorkiem sodu/ 30-35oC, 18-72 h
Candida albicans
Bulion Sabouraud z dekstrozą/ 30-35oC , 3-5 dni
Agar Sabouraud z dekstrozą/ 30-35oC, 24-48 h
Clostridium
Bulion z hydrolizatem kazeiny i soi
Bulion wzmocniony dla Clostridium/ warunki beztlenowe 30-35oC, 48 h
Tabela 1. Podłoża oraz warunki inkubacji potrzebne do wykrycia obecności określonych drobnoustrojów [4].
e-w ydanie do pobrania na :
w w w.farmacom.com.pl
3/2013
Agar Columbia/ warunki beztlenowe 30-35oC, 48-72 h