“INVESTIGACIÓN DE LOS PIGMENTOS CLOROFILICOS”
1. NTRODUCCIÓN Los colores son conferidos a los vegetales por determinados compuestos químicos definidos, llamados pigmentos. El color particular que presenta un determinado órgano vegetal depende generalmente del predominio de uno u otro o la combinación de ellos. Se debe tener claro que cuando un vegetal presenta un color blanco, es debido a la falta de tales pigmentos. La luz solar que incide sobre ellas no es absorbida selectivamente como ocurre en las partes coloreadas, sino que es transmitida o reflejada prácticamente sin sufrir modificación. Las Clorofilas. El color verde tan uniformemente presente en los vegetales es debido a la presencia de dos pigmentos estrechamente emparentados llamados clorofila a y clorofila b . Se encuentran prácticamente en todas las plantas con semilla, helechos, musgos y algas. Pueden formarse en las raíces, tallos, hojas y frutos a condición de que estos órganos estén situados por encima del suelo y queden expuestos a la luz. También aunque aparentemente falten en algunas hojas de color rojo o amarillo, cuando se extraen las otras sustancias colorantes de estas, puede comprobarse incluso allí la presencia de las clorofilas, que estaban enmascaradas por los demás pigmentos. Estos pigmentos se encuentran en el interior de la células vegetales específicamente en una organela llamada cloroplasto . Asociados con las clorofilas, existen también en los cloroplastos dos clases de pigmentos amarillos y amarilloanaranjados que son los xantofilas y carotenide 2.- OBJETIVOS Reconocer las diversas clases de pigmentos y su coloracion determinando su utilidad. Indicar la importancia de las tecnicas de separación de pigmentos. Explique la función que cumple los solventes utilizados.
3. MATERIALES Y EQUIPO -Cámaras de cromatografía -1 Mortero. -Lápiz y regla. -Mondadientes. REACTIVOS -10 ml de alcohol etílico. -20 ml de solvente orgánico (xilol, acetona-alcohol, benceno). -5 g de arena silícea. -2 Tiras de papel filtro. MUESTRAS Hojas frescas de espinaca, nabo, alfalfa, ortiga 4. PROCEDIMIENTO Coloque unas hojas de espinaca en un mortero y agregue alcohol y arena silícea muy fina. Machaque las hojas en el mortero. La arena silícea tiene por objeto el que se disocien las células completamente. Filtre la mezcla para obtener la disolución de clorofila bruta en alcohol. Fije una tira de papel filtro a un gancho de alambre que tiene forma de J y fijado a un corcho. Asegúrese que el papel filtro no tope las paredes del frasco y que no llegue con el extremo al fondo del frasco. Saque el papel filtro del frasco. Vierta en el frasco de vidrio 20 ml de solvente orgánico (1/2 de alcohol y 2 de acetona), de modo que el extremo del papel se sumerja en el solvente. Dibuje una línea horizontal a unos 2 cm del extremo inferior del papel filtro. Use lápiz no tinta. Aplique en la parte media de la línea con un mondadientes o una pipeta de punta muy fina suficiente cantidad de clorofila. La aplicación la debe hacer varias veces con breves segundos de intervalos y observando que se seque en cada aplicación. Cuando observe el punto de aplicación de un verde oscuro deje que se seque completamente. Coloque el papel filtro con la muestra de clorofila en el frasco de vidrio. Asegúrese que el extremo inferior del papel quede sumergido en la mezcla solvente, pero evite que el punto de aplicación de clorofila llegue al solvente. Observe como el solvente asciende a través de los poros del papel filtro y va arrastrando los componentes hasta cierta altura. Retire el papel filtro y deje secar al ambiente. determine los componentes que se han separado a diferente altura y que se diferencian por el color.
5. RESULTADOS 6. 1. Tabla 1: “Pigmentos Clorofílicos”
(Vegetales) Acelga Alfalfa Nabo Ortiga
Caroteno Positivo Positivo Positivo Positivo
Pigmentos Xantófila Positio Positivo Negativo Negativo
Clorofila A Positivo Positivo Positivo Positivo
Clorofila B Positivo Positivo Positivo Positivo
Fuente: LABORATORIO DE BIOLOGÍA GENERAL
Acelga:
Nabo:
Alfalfa:
Ortiga:
6. DISCUSIÓN En practica se observo como en la clorofila fue ascendiendo por el papel filtro. En el caso de la ortiga para obtener el pigmento se procedio a colo arle un poco de alcohol para que se coloreara despues se coloco en un vaso de precipitación y se puso una tira de de papel que se encontraba con un punto de clorofila el cual se sumergió levemete al realizar este proceso el punto de clorofila empezó a ascender hasta llegar a un punto donde ya no subia mas y después se tomo la medida de este rango recorrido obteniendo asi el promedio entee lo que recorrió la acetona y el pigmento . Tambien se extrajro los pigmentos de hojas de espinaca y se lograro identificar por medio de la cromatografía de papel gracias a este metodo se encontró que la migración de los carotenoides fue mayor a la de las clorofilas debido a su mayor afinidad por los disolventes orgánicos Posteriormente se separo los pigmentos en medio líquido, para lo cual se utilizaron disolventes. Aparecieron varias bandas de diferentes colores que estuvieron un poco alejados de del solvente según la mayor o menor solubilidad de los pigmentos en dicha disolución.Estas bandas tenían diferente grosor, dependiendo de la abundancia del pigmentoen la disolución. Las que tenían más afinidad por el disolvente bajaban más rápido que los otros pigmentos. Las primeras clorofilas que se extrajeron fueron la xantofila, la cuál son de color amarillo y olivo.Estas se obtuvieron en pequeña cantidad cada uno de sus coloraciones diferentes. Después se obtuvo la clorofila α la cuál se obtuvo en mayor cantidad ya que esta es la que constituye aproximadamente el 75% de toda la clorofila en las plantas verdes y es de color verde azulado. Seguida por la clorofila beta que fue la que se obtuvo ensegundo lugar en cantidad en color verdeamarillento.
Por ultimo se obtuvieron los carotenos que fueronde color amarillo más intenso que las xantofilas yestos se obtuvieron al final debido a que eranmenos afines al disolvente empleado Finalmente la observación del extracto original diluido de espinaca se reveló una banda con los colores visibles a la luz, sin tomar en cuenta el color violeta y el azul oscuro. También se observo una fluorencencia. 7. CUESTIONARIO 1. ¿Qué función tiene la clorofila dentro del cloroplasto? Es la encargada de absorber la luz necesaria para que la fotosistensis pueda ser llevada a cabo. Las plantas obtienen su energía partiendo de los rayos del sol y de la absorción de Co2 del ambiente para finalmente constituir el oxígeno; en resumen, los cloroplastos son las organelas responsables de la obtención de energía por medio de la fotosíntesis en las plantas verdes. 2. ¿Consulte cuál es la diferencia estructural entre clorofila a y la clorofila b. La clorofila b tiene un grupo formilo (-CHO) en lugar de un grupo metilo de la clorofila en uno de los carbonos del anillo de porfirina. 3. ¿Cuál es la función nutricional de la clorofila? Alimento altamente antioxidante, pose enormes atributos benéficos para la salud humana, al ser una fuente fácil digerible de vitaminas y minerales, que apoya la circulación sanguínea, intestino, riñones e hígado, al ayudar a equilibrar nuestro metabolismo. 4. Indique otros métodos de separación de pigmentos? Métodos de separación de pigmentos: a) Separación de pigmentos vegetales por separación simple. b) Separación de pigmentos vegetales por cromatografía sobre papel 8. CONCLUSIONES Se roconocio las diversas clases de pigmentos como fueron la xantofilia con un color amarillento parduzco ,clorofila α y clorofila fueron de un color verde azul – verde claro su utlidad radica en transformar la energíalumínica en energía quimica. Se indico la importancia de las tecnicas de separación de pigmentos como las técnicas de cromatografía que ha hecho posible la separación rápida de mezclas biológicas complejas. Como en el experimento se observo las partes en el papel. la función que cumple los solventes que presentan afinidad por algunos pigmento se basa en separar en forma diferente los pigmentos clorofilicos como asi tambien sus diferencias fisicas identificando la cantidad de cada uno.
9. BIBLIOGRAFÍA Méndez, R. Ma. E. Biología con enfoque en competencias. Ed. Book Mart. Primera edición. México 2008. 3. Nasón Alvin. Biología. Ed. Limusa. México. 4. Vázquez, C. R. Biología I. Ed. Grupo Patria Cultural. Tercera edición. México 2007.
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