analítico O laboratório prático Pág Test rápido de Ag SARS-CoV-2

1,020) Coeficiente de correlação: 0,998 (Gráfico 2, Tabelas 2 e 3).

Especificidade - Interferências Seguindo protocolos internos estabelecidos, foram avaliados os potenciais interferentes mais frequentemente encontrados em amostras de soro e plasma. Foram utilizadas amostras com certo nível de atividade da lipase (normal e patológica), que foram suplementadas com a substância interferente de forma a obter diferentes níveis da mesma e a atividade da lipase foi determinada em cada nível. O valor médio dos resultados é expresso em porcentagem do resultado da amostra original (sem adição de interferentes). Uma diferença superior a 10% em relação ao valor da amostra nativa é considerada significativa. Nenhuma interferência foi observada pelo menos até 1350 mg/dL de triglicerídeos (Intralipid), 30 mg/dL de bilirrubina e 310 g/L de hemoglobina. Em resumo, o kit Lipase AA líquido apresenta um desempenho analítico que atende aos rigorosos critérios de qualidade exigidos atualmente. Permite medir de forma confiável os valores de atividade da lipase em uma faixa entre 4,4 e 300 U/L. Tem excelente reprodutibilidade em níveis clinicamente relevantes, apresentando coeficientes de variação inferiores a 2% em todos os casos. Os resultados obtidos se correlacionam muito bem com os de outros métodos reconhecidos no mercado, apresentando valores de viés e erro total que atendem aos objetivos de qualidade estabelecidos. A avaliação geral do desempenho permite concluir que okit Wiener lab liquid AA Lipase é uma ferramenta confiável e de grande utilidade no diagnóstico e monitoramento da pancreatite aguda.

O laboratório prático

Teste rápido de Ag SARS-CoV-2

Bioq. Estefanía De Zan estefania.dezan@wiener-lab.com Marketing Corporativo – Wiener Laboratorios SAIC, Rosario – Argentina

Todos nós já sabemos o que é o vírus SARS-CoV-2: um membro da família "Coro-naviridae", subfamília "Coronavirinae", o agente etiológico da doença respiratória aguda COVID-19. Originou-se na cidade de Wuhan, na China, durante os primeiros dias de dezembro de 2019 e em um período de tempo relativamente curto, se espalhou pelo mundo. Como consequência da sua rápida transmissão, o impacto nos sistemas de saúde e onúmero de casos fatais registrados; a Organização Mundial da Saúde (OMS) declarou como uma pandemia em 11 de março de 2020. Se considerarmos o dia zero como o dia em que a infecção ocorre, há um período de incubação de 1 a 14 dias (tipicamente 3 a 7, mas isso vem mudando ligeiramente com o aparecimento de novas cepas) antes do início da doença. Os sintomas são muito diversos, podendo apresentar-se de forma grave ou leve e até nula (pacientes assintomáticos). Desde a implementação das diferentes plataformas vacinais, a gravidade da doença tem vindo a diminuir consideravelmente, registando-se sobretudo casos de curta duração com febre, congestão, tosse, dores no corpo e/ou alterações no paladar e no olfato. Os métodos para sua detecção podem ser classificados em dois grandes grupos: -Testes indiretos: que procuram anticorpos no sangue produzidos pelo contato com o vírus ou parte dele (por ter passado pela doença, ou por receber a vacina). Os ensaios para IgG e/ou IgM anti-nucleocapsídeo, anti-Spike ou agentes neutralizantes estão atualmente disponíveis, em formatos qualitativos ou quantitativos, em diferentes plataformas: ELISA, ECLIA e imunocromatografia. -Testes diretos: Procuram o vírus na saliva ou nas células obtidas através de um swab. Isso pode ser feito por RT-PCR (que detecta material genético, RNA, em laboratórios com certo nível de complexidade) ou por Antigen Test (que detecta proteínas do vírus em poucos minutos, por isso é chamado de "teste rápido"). Estes últimos podem ser realizados em laboratórios sem a necessidade de desenvolver a infraestrutura exigida pelos métodos moleculares, e é sobre tais que iremos nos aprofundar um pouco mais. Se ambos os métodos diretos forem comparados, veremos que eles diferem em termos de sensibilidade: a PCR tem um limite muito menor de detecção, permitindo que o diagnóstico seja feito mesmo quando a carga viral existente não é alta.

LABORATORIO PRÁCTICO

No entanto, para que os resultados de qualquer teste sejam clinicamente úteis, é importante realizá-los não apenas corretamente, mas também no momento certo. E é por isso que os testes rápidos se tornaram tão relevantes: em poucos minutos eles oferecem um resultado que permite a implementação imediata de medidas de isolamento. Mas em que consiste? O teste rápido foi desenvolvido para detectar antígenos virais em amostras do trato respiratório superior coletadas durante a fase aguda da infecção. O WL Check SARS-CoV-2 Ag é um ensaio imunocromatográfico que usa anticorpos monodonais altamente sensíveis para detectar proteínas virais em amostras de swab nasofaríngeo ou nasal anterior ou corneto média. A tira de teste, constituída por uma membrana de nitrocelulose, está imobilizada dentro de um dispositivo plástico (cassete) e é composta pelas seguintes partes: • pad de amostra, onde é depositada uma quantidade fixa da amostra, comumente omaterial biológico obtido no swab, ressuspenso no tampão fornecido com o kit, •pad reagente, contendo micropartículas conjugadas com anticorpos monodonais contra a proteína N do SARS-CoV-2;

•membrana de reação, que contém anticorpos contra antígenos SARS-CoV-2, e uma região destinada ao controle interno do teste; •pad absorvente. Quando a amostra é adicionada ao poço correspondente, os conjugados imobilizados na almofada de reagente se dissolvem e migram junto com a amostra. Se os antígenos SARS-CoV-2 estiverem presentes, anticorpos monodonais específicos imobilizados na região da linha de teste (T) capturam o complexo formado entre o conjugado anti-SARS-Cov-2 e a proteína viral. Como controle de procedimento, uma linha vermelha sempre aparecerá na região de controle (C) para indicar que um volume adequado de amostra foi adicionado e que ocorreu absorção na membrana. Se a linha C não se desenvolver, o teste é inválido. O procedimento deve ser revisto e oteste repetido com um novo dispositivo. O limite de detecção (LoD) do WL Check SARS-CoV-2 Ag foi determinado testando diluições em série de vírus inativados que foram adicionados a pools de swab nasais de indivíduos negativos confirmados para SARS-CoV-2. A sensibilidade clínica assim estimada é inferior à obtida com PCR. Para avaliar a especificidade analítica e comprovar que não apresenta reação cruzada com outros microrganismos, foram utilizados alguns patógenos relacionados e flora patogênica ou normal de alta prevalência para preparar amostras enriquecidas em uma matriz clínica negativa. Não foi observada reatividade cruzada com nenhum dos microrganismos estudados. Sensibilidade e especificidade são medidas importantes da precisão diagnóstica de um teste, mas não podem ser usadas para estimar a probabilidade de doença em um paciente individual. Para isso, são utilizados os valores preditivos positivos (VPP) e os valores preditivos negativos (VPN), que estimam a probabilidade de oteste entregar o diagnóstico correto, se positivo ou negativo.

VPP=A / (A+B) Corresponde à probabilidade condicional de o paciente ter a doença, dado que o teste foi positivo. Expressa de outra forma, é a proporção de pacientes com teste diagnóstico positivo que realmente têm a condição que foi estudada.

VPN= D / (D+C) Corresponde à probabilidade condicional de o paciente não ter a doença, visto que o teste diagnóstico foi negativo. Ou seja, é a probabilidade de o indivíduo não apresentar a condição em estudo após o teste ser negativo.

Interpretação de resultados Sabemos que um resultado positivo é aquele que, marcando a linha C, marca também a linha T. Se apenas a linha correspondente ao controle estiver colorida, oresultado é negativo; enquanto que, se a linha C não for exibida, o teste é inválido. Mas o que podemos dizer sobre esses resultados? Além da alta especificidade do teste rápido, pode ocorrer a possibilidade de falsos positivos, e dessa última é maior quanto menor a prevalência. Ressalta-se que o VPP e o VPN dependem não apenas do desempenho do teste, mas também da probabilidade pré-teste, que considera tanto a prevalência da doença na população-alvo, quanto o contexto clínico individual. Quando a probabilidade pré-teste é alta (por exemplo, pacientes sintomáticos em áreas onde se sabe que o SARS-CoV-2 circula), os testes de diagnóstico terão um VPP alto. Nessa situação, um resultado de teste rápido de antígeno positivo (mesmo com uma especificidade menor do que nos testes de RT-PCR e, portanto, com maior probabilidade de falso positivo) é confirmatório. Por outro lado, devido à sensibilidade variável do teste de antígeno, um resultado negativo do teste em uma pessoa com sinais e sintomas compatíveis com COVID-19 não necessariamente descarta uma possível infecção, e testes adicionais podem ser solicitados dependendo da persistência. suspeita clínico-epidemiológica para orientar as medidas de saúde pública. Por outro lado, em ambientes com baixa prevalência ou quando há baixa suspeita de infecção por SARS-CoV-2, os testes de antígenos estão associados a um alto valor preditivo negativo, descartando com segurança a infecção.

Conclusão O teste é um elemento crítico na estratégia de prevenção e controle de doenças. Na atual situação de pandemia, tornouse necessária a adoção de métodos analíticos que permitissem classificar os pacientes de forma rápida e eficiente, uma vez que as técnicas convencionais de referência por si só não eram suficientes para oferecer resultados com a rapidez das tomadas de decisões envolvidas. Os testes rápidos de antígenos tornaramse, assim, uma alternativa eficaz, não só pela rapidez de obtenção dos resultados, mas também pelo baixo custo, facilidade de uso e interpretação, e sem requisitos estruturais que limitem seu alcance, permitindo a implementação de medidas oportunas. A OMS recomenda testar todos os indivíduos que preencham os critérios para um caso suspeito de COVID-19, independentemente de terem tido a doença anteriormente ou estarem vacinados.

Teste Positivo Pessoa com a doença Pessoa sem a doença

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