AADCd Family Workshop 4; Understanding Phenotype Vs Genotype in AADCd (PORTUGUESE)

AADCd Oficina da Família 4 Entendendo o Fenótipo Vs Genótipo da AADCd

Professora Mita Bertoldi (Itália)

Transcrição...

Lisa Olá a todos, eu sei que vi a maioria de vocês nos últimos dias, mas vou apenas passar pela abertura novamente e dar as boas-vindas a professora Bertoldi a essa sessão. .Obrigada a todos por se juntarem a nós hoje e obrigada ao Professor Bertoldi por se juntar a nós. Meu nome é Lisa Flint, fundadora do The AADC Research Trust e mãe de Jake, de 23 anos, que tem deficiência de AADC. Junto com minha colega Julie e todos vocês, estamos comemorando 15 ANOS este ano de defesa do paciente, aumentando a conscientização global e financiando a pesquisa de doenças críticas. Sinto muito, por causa das limitações de tempo não podemos apresentar cada um de vocês.

O assunto é Fenótipo Vs Genótipo na deficiência de AADC é de extremo interesse e esperamos que você considere este workshop de grande ajuda.

Vamos começar recebendo e apresentando nossa palestrante. Mita Bertoldi é professora de bioquímica e na compreensão de como as proteínas funcionam e a relação entre sua estrutura e função. A professora Bertoldi é amiga e colaboradora da Trust há mais de dez anos e trabalha na Universidade de Verona, Itália, no laboratório de química de proteínas. Vou agora passar para você Mita para sua apresentação.

Professora Mita Bertoldi Obrigada Lisa, por me convidar para falar esta tarde e obrigada a todos por ouvir esta palestra que poderia ser um pouco técnica, mas tentei responder algumas perguntas que Lisa levantou nos últimos dias e tentei apontar minha apresentação para o interesse de vocês. Vou tentar ir bem devagar enquanto falo e, por favor, me digam se vocês perderem algo para que eu possa repetir.

Este foi o título que Lisa me deu; Fenótipo Vs Genótipo. Estou realmente feliz por estar aqui para celebrar os 15 anos de conscientização da deficiência do AADC.

Slide 1 A primeira pergunta que Lisa levantou foi "o que significa que o AADCd é um defeito de um único gene?". Este conceito nos levará ao conceito de genótipo e o que é genótipo. Como você sabe, um gene é um trecho de codificação de Page 1

DNA para uma proteína, por exemplo, a cor dos olhos é controlada por um gene, a cor do cabelo é controlada por um gene. E como você provavelmente sabe, os genes estão organizados em cromossomos dentro do núcleo de cada célula. Os cromossomos são regiões de DNA muito condensadas. Os humanos têm vinte e três cópias de cromossomos dentro dos núcleos de todos os tipos de células.

Estes cromossomos são divididos em vinte e dois homólogos e um sexual que determina o sexo, feminino ou masculino.

Isto significa que em nosso neúcleo temos duas cópias idênticas de cada cromossomo. Assim, os genes são organizados em cromossomos e em nossas células temos duas cópias de cada cromossomo. Duas cópias do cromossomo 1, duas cópias do cromossomo 2 e assim por diante.

Isso ocorre porque um cromossomo é de origem paterna e um cromossomo é de origem materna. Portanto, cada gene está presente no cromossomo materno e no cromossomo paterno. Temos nosso DNA organizado em cromossomos.

O DNA é o depósito de todas as informações para as células e temos cópias de organização dos cromossomos. Portanto, temos duas cópias do cromossomo 1 e duas cópias do cromossomo 2 e, portanto, temos uma cópia dupla do gene. Este é o significado.

Cada cromossomo, em uma fase particular do ciclo celular, está organizando dois cromossomos irmãos, pois eles estão se dividindo. Isto não é importante.

Slide 2 O genótipo são todos os genes de um indivíduo, todos os genes presentes em uma célula. O gene para AADC pertence, está presente na parte de braço curto do cromossomo 7, e este é o genótipo inteiro de um ser humano. Trata-se de um macho porque tem XY, uma fêmea terá XX cromossomos.

O gene AADC está presente aqui. Você pode ver que cada cromossomo tem dois cromossomos, dois braços, porque esta é uma célula divisória.

Slide 3 Mas em outros tipos de células que não estão dividindo, temos duas cópias de um único cromossomo de um braço. Não é importante se você o vê duplicado ou individualizado. O fato é que em cada um destes dois, um de origem materna, um de origem paterna, há um pequeno alongamento. Este é um esquema ampliado deste cromossomo, as bandas são bandas colorométricas, que nos diz exatamente onde, como centímetros ou metros, o gene está posicionado. O Page 2

gene do AADC está nesta região.

Cada um tem duas cópias do cromossomo 7, uma da mãe, uma do pai, e cada um de nós tem duas cópias do gene localizado nesta parte superior do cromossomo.

Slide 4 Na biologia, a partir do gene, do DNA, há a transmissão. A conversão da mensagem do DNA em proteína através de duas passagens que são chamadas de transcrição e tradução. Assim, a mensagem que está presente no DNA é traduzida em proteína. O DNA, o gene, é feito de nucleotídeos que são a parte única, biomolécula, que formam um DNA, e esta mensagem é convertida em uma proteína que é feita por aminoácidos. Portanto, a codificação gênica que é feita para AADC, através do processo biológico normal, determinará a formação da proteína AADC. É a proteína que exerce a função, no caso da AADC, de dopamina e serotonina.

O fenótipo significa como o gene se manifesta. É chamado tecnicamente, o gene para a cor do olho pode possuir múltiplos alelos, porque o olho pode ser marrom, verde ou azul. O problema da dominância e eu tentei fazer um esquema disso.

Nós chamamos alelo, ou caráter, a manifestação da mensagem do gene. É a proteína que faz nosso cabelo ou olho colorir o azul, o marrom ou o verde.

Gostaria de lhes mostrar um exemplo. O genótipo no cromossomo nos diz que esta é a posição do gene para a cor do cabelo, mas cada pessoa tem dois cromossomos, um da mãe e outro do pai. Neste exemplo, este indivíduo tem dois cromossomos que compartilham o mesmo tipo de cor, o fenótipo. O gene é a cor do cabelo. O fenótipo é marrom, marrom aqui e marrom aqui. Isto faz com que este cara tenha o fenótipo do cabelo marrom. Este genótipo de ruivo faz com que este cara, já que os dois alelos que são a manifestação do gene, cor do cabelo, tenham a cor do cabelo ruivo.

Este é um ponto de vista mais técnico. Se você vir a letra maiúscula significa caráter dominante, a letra minúscula significa caráter recessivo. Este tipo tem dois pais que tiveram o mesmo genótipo dominante de cabelo marrom. Cada um deles deu um gene igual, tornando o filho idêntico aos pais.

O mesmo é verdade para este outro. Os dois pais deste fenótipo de cabelo ruivo têm a mesma cor de cabelo. Cada um dá o mesmo alelo, porque não há outra combinação possível, e o filho é homozigoto para este personagem. A homozigose significa que temos o mesmo alelo, o mesmo gene.

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Slide 5 O domínio tem sido estudado pelas Leis clássicas de Mendel.

O que acontece quando uma pessoa, por exemplo, com olhos castanhos cruza com uma pessoa com olhos azuis? Sabemos que os olhos marrons são dominantes sobre os olhos azuis. Temos este aqui, esta é a mãe, por exemplo, pode dar apenas o B maiúsculo, e o pai pode dar apenas o B minúsculo. Assim, vemos pessoas com olhos castanhos, mas não sabemos se estas pessoas são homozigotos dominantes, ou heterozigotos.

Se dois heterozigotos se cruzam, temos a possibilidade de ter, por exemplo, pela mãe, estes dois tipos de herança de gametas, ou pelo pai estes outros dois tipos, e assim temos esta combinação; olhos marrons homozigotos, olhos marrons heterozigotos, olhos azuis homozigotos.

Como você pode ver, o genótipo pode ser diferente do fenótipo porque o genótipo olha para a combinação dos dois alelos do pai e da mãe. Na verdade, seus filhos têm genótipo com duas partes, nós os veremos, um vindo do pai, outro vindo da mãe.

O fenótipo é diferente por causa da dominância. Para a deficiência de AADC, para cada mutação, não conhecemos o efeito de dominância de AADC, portanto não podemos prever exatamente o fenótipo. É algo que podemos prever, mas não exatamente.

Este é o efeito da dominância. Se a mãe tem olhos azuis, ela só pode dar o mesmo tipo de gameta. Se o pai tem olhos castanhos e é heterozigoto, ele pode dar dois tipos de gametas. Temos alguns que são 50% heterozigotos marrons, 50% homozigotos azuis.

Estou lhes dizendo isto para entender o genótipo e o fenótipo. Para o genótipo é fácil porque é suficiente fazer uma análise genômica para ver qual é a mutação. Se um filho é um heterozigoto composto, eu lhe mostrarei mais tarde em minha apresentação, ele tem uma mutação, uma que vem da mãe, uma que vem do pai.

O fenótipo, é como o efeito da mutação aparece e isto é governado pelo efeito de dominância que atualmente não são facilmente compreensíveis na deficiência de AADC. É diferente para a cor dos olhos, isto é realmente fácil.

Mas se temos uma proteína, muito grande, que pode sofrer muitas mutações, a informação sobre o fenótipo é cada vez mais difícil de se obter.

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Slide 6 Vejamos o segmento de DNA que causa a proteína AADC. Esta é aquela pequena peça, eu gostaria de voltar a um slide anterior - aqui estou olhando para dentro, dentro da codificação genética para AADC para que você saiba como ela está organizada.

Cada um de nós, nossos filhos, possuímos dois cromossomos 7, um de origem materna e outro de origem paterna. O gene AADC é feito destes quadrados que são os chamados exônios, isto significa a região codificadora. A sequência de DNA dentro deles e é colocada junto e forma a proteína.

As regiões de ligação não são chamadas de região, elas são os chamados introns. Também podemos ter alguma mutação nestas regiões, por exemplo, a mutação taiwanesa é uma mutação que envolve a região de emenda, ou seja, uma região que é a fronteira entre um intron e um exon. Voltarei a isso mais tarde.

Portanto, este segmento de DNA no cromossomo 7 causa da proteína AADC é feita de regiões codificadoras que, juntas, dão origem após a tradução para a proteína AADC. Logo, na deficiência da AADC existem dois alelos do mesmo gene, um de origem materna e o outro de origem paterna.

Slide 7 Esta é uma dessas representações do gene do AADC. Estas são as referências que nos dizem que talvez o número de pessoas afetadas seja maior do que pensamos. O AADC provavelmente não é tão ultra raro quanto pensamos. Estes são os tipos de mutações. Estas caixas agrupam as mutações. Quando você vê um asterisco, ele é uma deleção. A proteína inteira tem 480 aminoácidos. Este é o gene, mas codifica para uma proteína que tem 480 aminoácidos.

Quando a tradução pára no aminoácido número 7, isso significa que a proteína é realmente curta e degradada pelos sistemas celulares e não está funcionando. É este genótipo, que é a deleção da arginina 7, à direita você pode encontrar a mutação no DNA que dá origem à modificação da proteína. A deleção, se for muito cedo, dá origem a uma proteína que é incapaz de ligar o co-fator, a vitamina B6, ou fator de fosfato piramidoxal, e é degradada pela célula.

Aqui, em amarelo, eu apontei o resíduo no aminoácido, que liga a PLP. Então cada eliminação, antes deste ponto, dá origem a uma proteína que é degradada e, portanto, o paciente não tem proteína. Esse alelo não produz Page 5

nenhuma proteína. O que você vê é uma substituição, glutamina por lisina, valina por leucina ou arginina por histidina. Há uma substituição de aminoácidos. Uma substituição de aminoácidos dá origem a uma mis-sense (mutação de sentido trocado). Uma mis-sense significa que um aminoácido que faz uma determinada função no tipo selvagem, em uma proteína saudável, é substituído por outro que pode causar danos.

Portanto, a mutação pontual, ou seja, a conversão de um aminoácido em outro, dá origem a uma mutação mis-sense porque a proteína troca seu sentido, no sentido de que ela não poderia ser capaz de formar dopamina e serotonina.

Também um único aminoácido poderia ser importante para a função da proteína.

Temos um frame-shift (mutação de alteração do quadro de leitura), adicionamos estas duas letras 'fs', esta é uma mutação que chegou. A tirosina 37 que foi trocada pela tronina e depois há uma alteração que determinou um significado diferente na proteína, de modo que o seguinte aminoácido é trocado e então quando você vê o asterisco isto significa que a proteína chegou ao 37º aminoácido e passa a outros 5 aminoácidos fora do sentido, não apresentando a proteína normal. Há uma deleção da proteína e então a proteína pára.

Portanto, esta proteína é mais longa, 37 mais 5 significa 42 aminoácidos e é degradada. O paciente não tem proteína AADC. O mesmo é verdade aqui. A linha 43 se torna leucina que se torna um "frameshift". É chamada de frame-shift porque há uma inserção de uma única base de DNA que determina uma mudança na leitura do nucleotídeo, que não codifica para o aminoácido apropriado. Isto está sob o processo de tradução, porque o DNA é organizado em códons. Isto significa três nucleotídeos, e para cada três nucleotídeos há um aminoácido específico correspondente. É chamado de código genético.

A tradução do código genético mostrará um triplete de nucleotídeo no aminoácido. Se o triplete de nucleotídeo for alterado por uma eliminação ou por uma inserção, temos uma mudança de quadro da leitura e, portanto, os aminoácidos são todos diferentes dos aminoácidos que funcionam originalmente.

Temos mutações de mis-sense quando um aminoácido é trocado por outro.

Temos mutações frameshift quando há um mis-sense e depois um frameshift, alguns outros aminoácidos diferentes, por exemplo 21, e então ele pára porque quando o aparelho de tradução de proteínas encontra um códon, que é chamado de códon stop, este aparelho é desmontado e a tradução da proteína não prossegue.

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Slide 8 Isto é de uma revisão que mostra o genótipo. A frequência genotípica na literatura se refere à combinação de mutações. Você pode ver que há um duplo.

O genótipo é esta parte, com um ponto e vírgula (;), significa materno; paternal, maternal; paternal. E você vê que esta é a mutação taiwanesa que não dá origem à proteína.

Esta é uma variante normal da proteína zigótica que se deve a mutações idênticas nos dois alelos, os dois genes, um de origem paterna e outro de origem materna. E isto dá a frequência. A taiwanesa é cerca de um quarto de todos os pacientes com deficiência de AADC identificados.

E depois temos o outro fenótipo e genótipo, como relatado por este autor há dois anos. Você pode ver que podemos ter homozigose ou heterozigose compostos. Isto significa que temos uma mutação de um alelo e uma mutação do outro alelo.

Isto não é uma mutação de uma proteína e um ponto. Isto é chamado hemizigose porque temos dois genes diferentes no genótipo, mas um dos dois não produz proteína, portanto a única proteína presente é a outra.

Então, temos homozigose, hemizigose e heterozigose composta. Este é um exemplo, a homozigose e esta é a heterozigose composta.

A frequência dos alelos significa a frequência de um único. Se vemos o genótipo, este é um genótipo, composto pela origem materna e paterna. Se vemos a frequência dos alelos, devemos dobrar. Estes são dois alelos, um da mãe, um do pai.

Gene significa a posição física sobre o cromossomo. Alelo significa o único. Para ver a frequência dos alelos deste eu tenho que contar isto como um, isto como dois e continuar para ver se algum outro tem, isto por exemplo, isto é três e isto é quatro.

Este é um genótipo. A combinação de dois idênticos. Este outro genótipo é a combinação de dois diferentes. Este é outro diferente, a combinação de dois diferentes, mas se eu for e contar o alelo, devo contar um, dois, três, quatro, cinco para que a frequência do alelo da mutação taiwanesa seja cada vez maior. Devemos dobrar no gene único.

Assim, homozigoto é alguém que possui dois alelos idênticos.

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Slide 9 Uma vez que conhecemos a base genética, o genótipo, o genótipo não é suficiente para entender o resultado da doença. Aqui eu peguei duas tabelas que vêm de um trabalho de Tessa Wassenberg, em 2017, que mostram diretrizes para a deficiência de AADC, e alguns dos sintomas. E outra tabela que diz que os sintomas são tabulados como comuns, menos comuns ou não-neurológicos.

Eu gostaria de chamar nossa atenção para as recomendações. O espectro fenotípico do AADCd é amplo. É amplo porque temos muitos sintomas. E, frequentemente, sintomas diferentes. Ele pode variar de muito grave a leve.

Quando temos um paciente com sintomas autonômicos sem distúrbios de movimento, o AADCd deve ser considerado. Não há correlação clara entre genótipo, o fato de possuirmos duas mutações, a correlação bioquímica e a correlação fenotípica clínica, exceto para os taiwaneses, porque isto é fácil.

Eles não produzem nenhuma proteína. Embora, com alguns fenótipos que têm alteração no local de ligação do L-Dopa, e nós temos associado, estes poucos pacientes, com a responsividade do L-Dopa. Temos que ter cuidado agora, pois este tem quatro anos.

Portanto, a mensagem é que a genética é muito importante porque levou à identificação do problema no gene e na proteína, mas não é suficiente porque temos que entender o que aconteceu com a proteína. Qual é o resultado de uma mutação, porque isto poderia nos dizer qual é o problema no nível da proteína e se este problema está ligado a sintomas, e este é o meu trabalho. Eu tento entender como as proteínas funcionam e tento correlacionar este mau funcionamento com a gravidade dos sintomas.

Slide 10 Aqui eu gostaria de lhes mostrar o exemplo clássico da mutação taiwanesa. A mutação taiwanesa, como eu lhes disse, passa por uma única cadeia de 238 aminoácidos ao invés de 480. Eu representei a única proteína monômero, para mostrar que a parte de ligação, a magenta, é cerca da metade da proteína.

Esta proteína verde, é o que é feito por estes pacientes, nunca irá dobrar ou adquirir esta forma porque lhe falta a outra parte que completa a estrutura.

Para esta região, encontramos esta mancha negra, a proteína e esta é a proteína que funciona. Esta é a proteína taiwanesa. É recuperada como insolúvel nas frações celulares, porque provavelmente não apresenta dobra bioquímica, não adquire uma estrutura que seja responsável pela função. É como ter algo que não está estruturado. Você pode ter algo, mas se não estiver Page 8

estruturado, não pode ser funcional.

Slide 11 Portanto, gostaria de esclarecer qual é a situação em indivíduos saudáveis, portadores saudáveis, os pais de nossos filhos e em pacientes afetados.

Os indivíduos saudáveis têm dois cromossomos, um da mãe e outro do pai, e ambos os genes AADC, ou seja, ambos alelos, produzem as cadeias de polipéptidos, a proteína do AADC. Estes genes são chamados nativos, o que significa saudáveis. Eles produzem os polipéptidos do tipo selvagem. Tipo selvagem significa polipéptidos saudáveis e nós temos 100% de proteína saudável.

O AADC para funcionar é um homodímero. Isto significa que uma cadeia de polipeptídeos interage com outra cadeia de polipeptídeos e a interação é aleatória. Isto significa que estes dois podem ser ambos de origem materna, ambos de origem paterna ou podem ser um paterno e um materno, mas é o mesmo porque todos os polipeptídeos são saudáveis. Eles não são modificados por mutações, então a interação dos chamados monômeros, ou seja, a única cadeia de polipeptídeos, é realmente aleatória e quando todas as cadeias de polipeptídeos são saudáveis e idênticas entre si, a associação dá origem aos homodímeros de proteína AADC. Falamos de homodímeros porque a proteína para funcionar precisa ser um homodímero.

Este é um homodímero que funciona plenamente, você pode ver em amarelo a Vitamina B6, a PLP é ligada. Quando a PLP é ligada, a proteína está funcionando. Esta é a situação para indivíduos saudáveis.

Slide 12 Portadores saudáveis, aqui eu tracei a deleção é uma cruz vermelha, uma mutação de um ponto, ou a segunda mutação de ponto. Quando o portador apresenta o cromossomo saudável que faz apenas proteína AADC saudável, na deleção isto não faz proteína, porque a maior parte da deleção ocorre antes do local de ligação da PLP. Portanto, isto não está produzindo proteína.

Temos um portador saudável em hemizigose que tem apenas proteína homodímero que funciona, proteína homodimérica que funciona de tipo selvagem, mas em quantidade que é metade da quantidade original. Portanto, temos apenas cadeias de polipéptidos em funcionamento que formam homodímeros e a quantidade é a metade.

Este é um portador saudável em hemizigose, assim chamado porque apenas um Page 9

cromossomo está funcionando. Esta é a situação diferente de um portador saudável que está em heterozigose, porque um cromossomo está funcionando, formando proteína saudável do tipo selvagem, o outro tem uma mutação.

Portanto, temos dois tipos de cadeias de polipéptidos.

Nativas, do tipo selvagem, um tipo saudável de proteína, e cadeias de polipeptídeos que carregam a mutação. Cada cadeia se associa aleatoriamente umas às outras formando dímeros, de modo que temos uma população complexa no portador saudável.

Homodímeros do tipo selvagem, proteína que funciona normalmente, os homodímeros que carregam apenas uma mutação em ambas as cadeias e os heterodímeros que carregam uma mutação em uma cadeia e nenhuma mutação na outra cadeia.

Um grande problema está na heterozigose. Esta é uma situação de heterozigose, porque não temos nenhuma mutação e uma mutação. Este não é o problema, porque esta é uma situação em que um indivíduo não produz esta proteína, portanto, isto é mais fácil de entender e tratar. Há apenas uma redução da proteína, portanto os possíveis sintomas dos pais estão relacionados com a diminuição da quantidade de proteína AADC que é totalmente funcional.

Aqui, em vez disso, temos uma população proteica diferente, porque esta cadeia faz cadeias saudáveis. Esta cadeia faz cadeias mutantes, e elas podem se associar aleatoriamente para formar esta combinação e o problema da quantidade. Posso dizer a quantidade 20%, 25%, 50%? Não posso dizer, porque o problema é a predominância na heterozigose. Na dominância, estamos estudando profundamente o efeito da dominância, mas neste momento não podemos dizer a quantidade. Presumimos que, como portadores saudáveis não desenvolvem AADCd, pode ser que tendo um tipo selvagem de proteína, isto seja dominante sobre a mutação, mas não temos resultados porque um estudo intensivo sobre portadores saudáveis em heterozigose não foi realizado até agora.

Slide 13 Vamos até os pacientes. Temos duas situações. Temos uma situação de deleção, ou emenda, onde nenhuma proteína é feita, se temos uma deleção em um cromossomo, nenhuma proteína é formada; se você tem a mesma deleção em ambos os cromossomos, nenhuma proteína é feita, então a criança não tem proteína AADC. Ou temos a mesma mutação em ambos os cromossomos e estes são os chamados Page 10

spacientes homozigóticos que têm apenas uma cadeia de polipéptidos que forma toda a população AADC. Estes são os homodímeros, e os homodímeros podem ser facilmente estudados porque se entendermos onde o defeito está e o que significa, é fácil sugerir, tentar encontrar uma solução.

A situação na heterozigose é mais complexa porque temos uma condição de hemizigose, onde um alelo não produz proteína e o outro produz proteína, mas esta proteína é mutante. Temos apenas uma cadeia de polipeptídeos, que é a mutante, e menos quantidade de cadeia de polipeptídeos. Ou temos duas mutações diferentes vindas da mãe e do pai e por isso temos uma combinação muito diferente que teoricamente são 25% de homodímero portador da mutação 1 e 25% de homodímero portador da mutação 2 e 50% de heterodímero portador de ambas as mutações. Portanto, a situação na heterozigose é mais complexa.

Slide 14 Foi-me pedido para responder: podemos prever o prognóstico da doença?

A gravidade da doença pode ser prevista com base na função enzimática em modelos.

Eu vou à bioquímica para responder a esta pergunta. Podemos prever o funcionamento da enzima. Se quisermos prever qual é o problema, temos que entender a função da proteína, que depende da estrutura da proteína.

Uma modificação na estrutura de uma parte da proteína pode determinar um efeito funcional preciso. Todos nós conhecemos esta proteína, AADC, de L-Dopa e 5-hidroxitriptofano, formando dopamina e serotonina, que são neurotransmissores essenciais.

Esta é a proteína. Eu lhes mostrei algumas das mutações que foram identificadas e nós estudamos.

Temos que coletar dados estruturais para entender como a proteína é organizada. Estas são abordagens bioquímicas técnicas, mas o significado é que temos que saber o que na estrutura foi alterado. Por exemplo, descobrimos que nesta mutação aqui, esta parte muito precoce e terminal, realmente causa grandes danos no local ativo. Enquanto as mutações aqui são menos prejudiciais.

Portanto, podemos prever, coletando dados estruturais e coletando dados de parâmetros catalíticos, ou seja, dados de funcionamento, é a quantidade de dopamina e serotonina. Podemos juntar estes dois dados e entender como e quais parâmetros catalíticos são alterados. Isto é um problema da reação Page 11

tquímica porque alguma etapa na conversão de L-Dopa para dopamina foi alterada ou é um problema de ligação, porque aqui o L-Dopa e o 5hidroxitriptofano são ligados, mas por exemplo, uma mutação aqui impede a ligação de dopa ou altera a ligação de dopa.

O fato de se formar menos dopamina e serotonina pode ter múltiplas causas, portanto, estamos procurando as possíveis causas. Se entendermos a química da reação, tudo bem, mas se o problema for a ligação, podemos sugerir ao clínico que tente uma terapia que inclua dopa e 5-hidroxitriptofano, pois isto pode ajudar o paciente a ligar o substrato. O problema da proteína é apenas um problema de ligação, não um problema de funcionamento, não um problema químico.

Se em vez disso temos um problema químico na reação, se o aminoácido que é crucial para a atividade mudou, este é outro ponto porque temos uma proteína incompetente. Ela não é capaz de resgatar sua atividade, então temos que fornecer ao paciente outra proteína AADC saudável e que funcione bem. É importante entender a que nível o dano, a mutação exerceu o seu efeito.

Quero dizer qual aminoácido mudou, o que é a substituição e o que a substituição faz com a estrutura e a função da molécula.

E atribuir cada mutação a uma região específica de proteína. Entendemos que esta região está realmente conectada pelo estudo da patologia, da mutação patogênica, esta região está realmente conectada a esta, numa espécie de efeito dominó ao local ativo. Portanto, se mudamos algo aqui, a proteína não funciona, se mudamos algo aqui, a proteína não funciona. Se mudarmos alguma coisa aqui, não é tão ruim assim. O fato é que não é tão grave assim. Portanto, podemos encontrar um regional para correlacionar a gravidade da mutação na proteína AADC .

Isto não significa que podemos correlacionar a gravidade com os sintomas, mas estamos no caminho certo para fazê-lo, porque quando entendemos como a proteína é controlada, podemos pensar e neutralizar este efeito.

Nosso objetivo, e estamos fazendo isso, estamos coletando os dados finais que estão quase prontos para serem apresentados, que podem correlacionar a gravidade e a suavidade da patologia com a gravidade e a suavidade da modificação estrutural que afeta a função da proteína. Estamos procurando encontrar a correlação, a ligação entre sintomas e estrutura e função da proteína e este é o objetivo de um estudo sobre proteínas.

Slide 15 Na homozigose, a mesma mutação dá origem à mesma cadeia de Page 12

polipeptídeos, portanto, temos apenas um tipo de homodímero. Para o homodímero, é mais fácil fazer previsões de severidade e sugerir ou corroborar abordagens terapêuticas.

Por exemplo, podemos ver nos homodímeros que temos que lidar apenas com uma espécie de proteína. As modificações que causam um problema na ligação do co-fator podem ser ajudadas com um alto suprimento de co-fator, que eu sei que é fornecido para os pacientes.

Até agora, os tratamentos médicos são os mesmos para quase todos os pacientes, é por isso que a ciência e a pesquisa estão visando uma terapia mais precisa, personalizada, porque cada paciente tem suas mutações e cada mutação é diferente da outra.

O problema na heterozigose composta é que temos duas cadeias de polipéptidos e três combinações possíveis de dímeros AADC. Dois homodímeros, cada um carregando uma mutação e o heterodímero.

Estamos publicando um artigo sobre duas proteínas heterodiméricas onde encontramos uma discrepância entre as características bioquímicas do heterodímero e os sintomas clínicos dos pacientes heterozigotos. Isto tem algum sentido porque o paciente heterozigoto carrega o heterodímero, mas também os dois homodímeros, por isso, neste artigo, nesta investigação, propusemos que a mutação pode complementar positivamente ou negativamente.

O que significa complementar? Quando temos duas mutações diferentes e vemos que a atividade do heterodímero é maior que a média dos dois homodímeros, dizemos que a complementação é positiva. Se a atividade é menor, dizemos que a complementação é negativa.

Constatamos que a complementação nos heterodímeros tem uma razão de ser.

Estamos estudando e entendendo os fatores que estão controlando a dominância. Por exemplo, se das duas mutações uma dá origem a uma proteína que é insolúvel, muitas mutações na superfície dão origem a agregado, isto se reflete na extensão da expressão de proteínas solúveis também no heterodímero.

Em seguida, o impacto da substituição do aminoácido. Como os dois locais ativos estão aqui, e se uma mutação está aqui e a outra está aqui, isto não terá impacto sobre o local ativo. Mas se uma mutação está aqui, e a outra está aqui, as duas mutações diferentes têm impacto em ambos os locais ativos, então normalmente a complementação é negativa.

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Por que, se elas impactam apenas uma complementação ativa do site é positiva? Se um homodímero é altamente comprometido, o fenótipo clínico é severo, mesmo que o heterodímero possa mostrar uma complementação positiva.

A atividade dos dois heterodímeros no paciente heterozigoto composto é realmente importante. Não devemos considerar apenas a proteína heterodimérica.

Eu posso entender que isto é bastante complexo. O problema é que a complexidade é dada pelo fato de que na heterozigose composta temos três populações diferentes de proteína AADC e dependendo do tipo de mutação nos homozigotos 1 e 2, e no heterodímero 1 e 2, podemos ter resultados diferentes.

Esta é a razão pela qual um heterozigoto composto apresenta uma gama realmente ampla de sintomas. A população de proteína AADC é realmente grande, mas encontramos um método, uma abordagem bioquímica, para estudar os heterozigotos compostos e analisar o efeito de todas as espécies na população de proteína.

Também queremos fazê-lo com os portadores saudáveis porque isto é muito importante para entender o domínio dos alelos.

Slide 16 Outra questão é se podemos prever com base no tipo de mutação se uma criança seria adequada para a terapia genética ou se eles responderão melhor a outra criança.

Temos relatado alguns resultados da previsão da terapia. Mostrarei um exemplo realmente otimista abaixo, que pode validar ou orientar o tratamento medicamentoso. Mas a pergunta sobre terapia genética para um fenótipo moderado, isto significa que o fenótipo que produz alguma proteína que é ativa, é difícil de responder até agora.

Se nos perfumamos com AADC saudável, a idéia é que geramos uma condição semelhante à do portador saudável, os pais, que possuem um alelo saudável e um afetado. Assim, a visão geral é que para um fenótipo moderado, a abordagem da terapia gênica possivelmente melhoraria, porque damos alguma proteína de tipo selvagem. Mas nós não sabemos nada sobre dominância. Não sabemos se colocamos nas células esta AADC saudável, esta cadeia de polipeptídeos seria dominante sobre as cadeias ainda produtoras, ainda formando cadeias, que estão presentes nos pacientes.

Para os pacientes gravemente comprometidos que não fazem AADC, isto é certo de um resultado benéfico. Até agora, não temos dados suficientes para explicar, Page 14

otemos que entender melhor o efeito de dominância do alelo. Uma coisa no tratamento da terapia genética é que os pacientes não estão agrupados por características genotípicas, proteicas. Em alguns registros, não temos informações sobre o genótipo, de modo que os resultados que vemos, os resultados de melhora, não são combinados com o genótipo no início e, portanto, as características protéicas. Portanto, não consigo entender profundamente esta questão porque não temos, e a terapia genética começou anos atrás, nem tanto, não temos os relatórios que explicam se alguns marcos no desenvolvimento e sintomas foram melhorados para um fenótipo moderado.

Sabemos que para os pacientes de Taiwan, e para outros pacientes que foram submetidos à terapia genética, há uma melhora das condições. A idéia é que eles se assemelham ao fenótipo dos pais, porque lhes é dado algum AADC saudável.

Recentemente, em colaboração com Lisa, tentamos combinar a pesquisa de dopamina e serotonina porque a enzima que produz dopamina, é sempre estudada, mas o nível de serotonina não é tão estudado. A razão é que não podemos fazer uma correspondência exata entre genótipo e fenótipo e sintomas únicos, portanto estamos avaliando a serotonina produzida nas variantes já publicadas, para determinar que do ponto de vista proteico a proporção de serotonina dopaminérgica é significativa.

Se a dopamina é diminuída, mas a serotonina é feita como a proteína saudável, isto pode nos dizer algo sobre o controle do humor nos pacientes. Isto poderia explicar porque alguns pacientes têm mais variações de humor do que outros, e outros sintomas não sistêmicos que a serotonina pode exercer.

Estamos redeterminando para todos os pacientes, para todas as proteínas transportadas pelos pacientes, os níveis de serotonina, a fim de adequá-los aos níveis de dopamina, para ver se existem algumas diferenças. Isto poderia levar a sugestões interessantes no tratamento dos pacientes e na compreensão de sua mutação.

Slide 17 Uma outra razão pela qual ainda não podemos comparar o genótipo e o fenótipo com os sintomas únicos da doença é a variabilidade individual.

Esta é a AADC, e esta é a reação desempenhada pela AADC ao produzir dopamina. Você pode ver que esta reação está em um caminho que envolve outras moléculas importantes como a noradrenalina, a adrenalina e a tirosina.

Cada um de nós tem algumas diferenças na produção de cada uma destas moléculas, portanto, se você acrescentar aos sintomas dos pacientes a Page 15

variabilidade individual, você pode entender porque não é tão fácil de combinar. É como a resposta a uma vacina, por exemplo, cada um de nós recebeu esperançosamente uma vacina, alguns de nós tiveram febre, outros não, com base na qual ela não é conhecida. Geralmente dizemos que o sistema imunológico está respondendo bem ou não tão bem e assim por diante. Mas os sintomas da doença são governados, não apenas pelos danos da AADC, mas também por uma infinidade de outras moléculas que são feitas no caminho da dopamina e também no caminho da serotonina.

Portanto, a mensagem é que estamos trabalhando para entender o máximo possível dos sintomas, mas para fazer isto, por exemplo, obtivemos há alguns dias a tirosina hidroxilase, e gostaríamos de ver se existem algumas correlações entre estas duas proteínas no tipo selvagem e também nas variantes mutantes.

Isto será muito interessante porque isto pode nos dar a idéia de que em algumas variantes o problema não é apenas o mau funcionamento em si, mas também a entrega da enzima anterior para a enzima dianteira. Isto é realmente complexo e temos um modelo de célula neuronal que será Crispr dentro de poucos dias.

Estamos realizando agora estas experiências para tentar não apenas in vitro, na solução, mas também na célula.

Slide 18 Aqui eu gostaria de lhes mostrar algumas possibilidades e esperanças que estão se abrindo. Já falei com meus colegas sobre a célula tronco do iPSC que são retiradas de pacientes fibroblastados.

Aqui temos uma publicação de dois pacientes, um carrega uma mutação homozigotos, que leva a um defeito catalítico no local ativo.

Esta é uma modificação química de um resíduo importante no local ativo. Tratase de um heterozigoto composto que tem uma deleção do aminoácido, portanto sem proteína e faz apenas esta proteína, portanto é hemizigótico. O defeito é leve e é posicionado próximo ao local do substrato. Determinamos que esta proteína tem uma menor afinidade com o L-Dopa e assim, em colaboração com o grupo no Reino Unido, o professor Manju Kurian e o professor Simon Heales, você vai ouvir de amanhã, sugeriu terapias com L-Dopa a estas células dos pacientes e em mutação 2 função, ou seja, as células tratadas do paciente são responsivas ao L-Dopa. O problema desta mutação é um defeito catalítico e podemos atuar sobre isso com outras moléculas, as chamadas chaperones, moléculas que ajudam a contornar a etapa catalítica. Este é um exemplo que pode dar algumas sugestões de terapia para pacientes e eu sei que de célula para paciente existe um oceano de problemas, mas pode haver um caminho Page 16

possível para melhorar a terapia para tais tipos de pacientes.

Slide 19 Este é o meu grupo. Gostaria de lhes mostrar a foto de Giada, que agora está em Londres realizando sua pesquisa sobre o AADC. Giovanni está fazendo um trabalho muito difícil de comparar a proteína para correlacionar a gravidade dos sintomas com o tipo de modificação estrutural e funcional. Temos resultados realmente importantes e esperançosos.

Obrigada a Lisa pelo apoio e amizade e ao AADC Research Trust.

PERGUNTAS E RESPOSTAS Julie Existem certas drogas que respondem melhor a certas mutações?

Professora Mita Bertoldi O tratamento até o momento é baseado em uma tríade de três tipos de tratamento. Piridoxina, que é o fornecimento da co-enzima, porque sem a coenzima a enzima não funciona. Agente da dopamina porque a enzima não está produzindo dopamina suficiente e por isso o agente deixa o receptor da dopamina transmitir a mensagem. E então inibidores da monoamina oxidase, porque normalmente a dopamina é destruída pela monoamina oxidase fisiologicamente, e se dermos inibidores evitaremos que a pequena quantidade de dopamina seja destruída.

Por isso, o tratamento escolhido é este aqui. Neste sentido, todos os três componentes com outros são essenciais para a terapia. Não é uma questão de qual funciona melhor, mas dentro do agente dopaminérgico, os pacientes experimentaram que com um agente dopaminérgico a resposta é melhor do que com o outro e isto é no campo baseado na sensibilidade individual. Não tem nada a ver com o AADC, porque o agente dopaminérgico interage com o receptor de dopamina, portanto o problema não está relacionado ao AADC. Com o AADC um possível tratamento é o L-Dopa, mas somente se nossos dados bioquímicos mostraram que há um problema na ligação do Dopa, caso contrário não é útil. Uma quantidade maior de piridoxina é importante se a mutação tocar alguns resíduos no local de ligação da PLP, então a PLP não está ligando bem.

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Alguns acompanhantes podem ser importantes. Estamos agora começando um conjunto de experimentos porque entendemos que os resíduos de interface entre os dois monômeros são realmente importantes e quisemos abordar alguns acompanhantes para fazer com que a interface esteja mais entrelaçada, a fim de permitir que a enzima funcione melhor. A variabilidade de tratamento no mesmo conjunto de agentes, ou tratamento, ou drogas, é individual. Não está relacionada a mutações.

Julie Você acredita que a terapia genética seria melhor para meu filho de um ano de idade, que é de fenótipo moderado, ou ele deveria apenas ficar sob medicação?

Professora Mita Bertoldi Sou um bioquímico e não um médico ou clínico. Estou me baseando apenas em resultados científicos. Penso que a terapia genética que Krys está realizando é realmente orientada para uma parte do cérebro que perfila a dopamina de uma maneira mais objetiva.

Mas eu acho que se o fenótipo é grave, então a terapia gênica é um tratamento quase necessário. Mas não posso dizer que não haja pesquisa, mas quando eu tiver mais dados, mais dados publicados sobre a evolução, sobre os resultados das pessoas tratadas com terapia genética, e isto significa que após alguns anos, porque temos que ver a progressão dos neurotransmissores em grande escala de tempo, isto nos dará dados mais racionais.

Em uma base muito pessoal, acho que a terapia genética poderia ser útil para bebês muito jovens, pois evita que o cérebro seja danificado após anos de experiência de crianças, após anos de diminuição de dopamina e serotonina. Eu também entendo a terapia genética compassiva para pessoas mais velhas.

Posso compartilhar minha sugestão de fazer terapia genética, mas não tenho dados científicos até o momento. Esperamos tê-los em pouco tempo, mas por enquanto, com minha experiência, não posso dizer nada. Lamento, mas não posso afirmar nada, pois não tenho nenhuma base racional.

Julie Após a terapia genética, os resultados bioquímicos mostram um aumento na dopamina e não na serotonina, você acha que as famílias deveriam considerar tratar a deficiência de serotonina com SSRIs? Page 18

Professora Mita Bertoldi Eu diria que, pelo que é publicado na literatura, não se sabe muito sobre o 5hidroxitriptofano e o agente da serotonina. Sei que como a serotonina afeta mais os sintomas psiquiátricos do que os sintomas motores, temos que fazer mais pesquisas sobre o modelo celular para entender que se existe um benefício real.

Se isto é realmente benéfico porque acho que uma sobreposição com o agente da dopamina e o SSRi, poderia ser, não temos dados suficientes para responder, mas sei que algumas pesquisas estão em andamento. O problema é que esta doença tem sido negligenciada por vários anos. A pesquisa começou realmente há apenas 10 anos, uma verdadeira pesquisa básica.

Uma coisa é neutralizar os sintomas como médico, o que você pode fazer com sucesso, mas outra coisa é encontrar a causa molecular do defeito e neutralizar a causa molecular. Isto é realmente novo e, portanto, não temos muitos dados, mas estamos realmente trabalhando nisto para preencher a lacuna.

Julie Como você determina se uma criança com AADC pode ser um candidato e responder melhor ao L-Dopa?

Professora Mita Bertoldi Eu posso medir um parâmetro, que é o nome técnico, e este parâmetro é chamado Km e é uma constante. Medimos com nossa análise cinética, e este parâmetro nos dá informações sobre a afinidade do dopa com a enzima.

Afinidade significa avidez, como o dopa é capaz e se liga à enzima.

Sabemos que na proteína saudável o dopa se liga realmente saudável na faixa nanomolar e em algumas mutações o dopa se liga na faixa milimolar, então não tanto porque precisamos de quantidades milimolares para fazer com que o dopa se ligue à enzima.

Portanto, medimos e encontramos se esta variante, se esta mutação é candidata ao tratamento com dopa. Nós o fizemos e o estamos fazendo.

Lisa Você pode determinar uma possível resposta L-Dopa em heterozigoto, homozigoto e hemizigoto?

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Professora Mita Bertoldi Sim.

Lisa Então você pode fazer isso quando não conhece o domínio também? Para todas as combinações, você pode fazer uma análise L-Dopa?

Professora Mita Bertoldi Enquanto eu tiver a enzima, posso fazer isso. Posso dar a enzima, o L-Dopa, e medir a taxa de produção e coloco estes pontos na tese e, deste ponto de vista matemático, posso extrair o significado de afinidade, a avidez desta enzima, homodímero, heterodímero para o L-Dopa.

Lisa A partir da lista de combinações de mutações que você nos mostrou anteriormente, você pode determinar a partir daqueles que você previria que o L-Dopa funcionaria?

Professora Mita Bertoldi Nós determinamos este parâmetro para muitas destas mutações. Há dados publicados e estamos determinando para muitos deles, acabei de enviar um trabalho para publicação, sobre a heterozigose, sobre duas mutações da heterozigose. Cada uma delas tem três tipos de proteínas e eu dei uma justificativa para afinidade com o substrato e com a atividade química. Somos capazes de nos propor para ver se os efeitos do mau funcionamento da proteína são devidos a uma má ligação de dopa e, portanto, este é um pré-requisito para ser um candidato ao tratamento L-Dopa.

Por exemplo, todas as mutações no local ativo têm um problema com a ligação de dopa. As mutações da interface, algumas delas, têm um problema com a ligação de dopa.

Lisa Por simplicidade, essa lista de mutações combinadas, se soubéssemos quais seriam as que você poderia prever que responderiam ao L-Dopa, apenas em uma simples tabela a maioria de nossas famílias poderá saber quais são suas combinações de mutações para que possam identificar, e então eles poderão Page 20

conversar com seus médicos sobre possíveis tratamentos.

Professora Mita Bertoldi Se você me enviar as combinações de mutações dos pais que estão interessados, posso lhe dizer se já caracterizamos este parâmetro ou se vamos caracterizá-lo.

Lisa E a combinação de L-Dopa e agente dopaminérgico. Você saberia se eles responderiam melhor?

Professora Mita Bertoldi Não sei, do ponto de vista médico, qual é o resultado de combinar L-Dopa com agente dopaminérgico porque é o mesmo. Mas eles funcionam em dois sistemas diferentes. Um aumenta a dopamina. O outro ocupa o receptor, não sei se há algum trabalho cruzado e se é feita alguma competição.

Julie Crispr KAS 9 e Crisp ON, têm aparecido muito nas notícias ultimamente, este tratamento está realmente próximo de ser uma opção e você acha que o AADC pode ser curado por ele no futuro?

Professora Mita Bertoldi Esta questão é realmente importante, mas até agora temos tido sucesso em um único gene Crispr em modelos celulares simples. Eu acho que para o futuro é realmente interessante porque você está silenciando o gene doente, e colocou dentro da célula um gene AADC realmente funcional. Isto é fácil de um ponto de vista teórico. É quase fácil, em alguns modelos celulares simples, como as células neuronais, mas a passagem através de células humanas e depois para os organismos é um pouco mais difícil. Acho que toda estratégia que possa neutralizar este tipo raro de doença deve ser levada em consideração, mas precisamos fazer algumas pesquisas básicas antes.

Acredito que para o futuro pode ser, mas por enquanto devemos ir passo a passo.

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Julie Ouvimos falar de estudos promissores sobre bactérias/probióticos intestinais aumentando a atividade do AADC. Qual é o mecanismo?

Professora Mita Bertoldi As bactérias intestinais têm seu próprio AADC, então o mecanismo é que elas fornecem com o AADC periférico. Isto é muito importante. Estamos pensando em tentar uma terapia de reposição enzimática para atingir o rim, porque atingir o cérebro é realmente difícil, para ultrapassar a barreira do cérebro sanguíneo.

Pensamos que esta poderia ser uma maneira provisória de começar, para ajudar os pacientes. A resposta é importante porque aumenta a dopamina, mas a dopamina periférica, e o problema das crianças é a dopamina cerebral.

Portanto, pode ser útil de alguma forma, como no rim, a maior parte da produção de epinefrina e norepinefrina é periférica, portanto pode ajudar a aumentar esta extensão de neurotransmissores, mas deve ser combinada com outras abordagens. Isto é realmente muito interessante.

Julie Os alimentos protéicos mais elevados em aminoácidos poderiam ser benéficos?

Professora Mita Bertoldi Alimentos proteicos que contêm precursores de dopamina e serotonina, o que significa proteína animal. Proteína de origem animal. Desculpe pelos vegetarianos, eles têm que fornecer por pílulas para obter o mesmo. As proteínas animais contêm muita, por exemplo, uma grande quantidade de triptofano que não está contida nas proteínas vegetais, não tanto. Deve-se comer muito feijão, como os ingleses, que comem feijão pela manhã, como eu. Descobri isso no Reino Unido, e eu gosto muito. A proteína animal é uma fonte. Também o leite é particularmente rico em triptofano. Beber um copo de leite à noite cheio de triptofano, que é convertido pela nossa enzima, 5-hidroxitriptofano, é convertido em serotonina que é o neurotransmissor da serenidade, da calma, da alegria e da facilidade de dormir. Portanto, proteínas animais, leite, temos que fornecer triptofano e fenilananina ou tirosina a partir da carne e assim por diante. Os vegetais contêm estes aminoácidos essenciais, porque a fenilananina e o triptofano são essenciais. Produzimos estes aminoácidos, mas não em quantidades suficientes. Portanto, se alguém é vegetariano, tem que adquirir em farmácia este suplemento de aminoácidos essenciais.

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Julie Descobrimos que o suplemento Forskolin Cyclic AMP melhora os sintomas de nossos filhos. Ele é heterozigótico composto. Você poderia compartilhar suas idéias sobre o envolvimento do AMP cíclico na atividade enzimática ácida?

Professora Mita Bertoldi O AMP cíclico é uma molécula reguladora. Não conhecemos a ligação exata entre o AMP cíclico e o AADC, mas o AMP cíclico, uma de suas funções é ativar as enzimas que estão mediando a fosforilação.

A fosforilação é um mecanismo de regulação da atividade de muitas enzimas.

Não sabemos nada sobre a fosforilação do AADC, mas nossos dados preliminares do AADC em solução mostraram que, um de meus alunos de doutorado foi aos Estados Unidos e estudou a fosforilação do AADC e encontrou no local ativo alguns resíduos serinosos fosforilados.

Portanto, é um efeito possível, mas não tenho nenhuma base científica de que o efeito benéfico do AMP cíclico é aumentar os níveis de fosforilação, e a fosforilação do AADC não tem efeito sobre a reação química, na velocidade de produção de dopamina e serotonina, mas parece que torna o dopa e o triptofano mais capazes, aumenta a afinidade do dopa e do triptofano para se ligar ao AADC. O parâmetro que Lisa me perguntou antes.

A fosforilação do AADC em alguns resíduos do local ativo, parece melhorar a ligação do dopa e do triptofano, portanto a dopamina e a serotonina. Posso pensar que em algumas variantes, que não são tão eficientes na ligação de dopa e dopamina, isso poderia ser importante. Poderia ter algum efeito, mas até o momento meus únicos resultados são in vitro. Não sei se isso acontece em células. In vitro, a fosforilação aumenta a afinidade com os substratos, de modo que pode ser o efeito sobre a criança é devido a esta melhoria na regulação da fosforilação. Este é outro tópico de nossa pesquisa. Gostaríamos de saber se esta fosforilação que observamos na proteína do tipo selvagem, exerce o mesmo efeito sobre outras nas variantes patogênicas.

Lisa O extrato da glândula supra-renal bovina em pó também aumentaria a norepinefrina periférica e a epinefrina nas crianças AADC, para que elas possam administrar melhor os níveis de estresse diários?

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Professora Mita Bertoldi Eu realmente não sei porque é uma questão mais médica. Penso que o extrato de córtex supra-renal pode ser benéfico para elevar os níveis de epinefrina ou norepinefrina, mas está realmente fora do meu conhecimento. De um ponto de vista racional, eu não conheço o efeito contrário ou o efeito cruzado. Pode haver uma razão.

Lisa Na doença de Crohn, que afeta muito o intestino, um Transplante de Microbiota Faecal (FMT) às vezes é facilitado para melhorar os sintomas. Você acha que algo assim pode ser uma opção para os pacientes com AADC para melhorar a função intestinal e aumentar a produção de AADC?

Professora Mita Bertoldi Esta é outra questão que eu não sei, pois estou estudando a correlação direta com AADC. Posso olhar a literatura e ver se existe alguma interação entre isso e o caminho da síntese de dopamina e serotonina. Se eu vejo que há algumas moléculas envolvidas no caminho, isto pode ser, mas não sei.

Lisa Acho que o PS128 de que Dr. Lee estava falando poderia ajudar, então talvez possamos colocar essa questão de volta ao Dr. Lee.

Professora Mita Bertoldi Espero ter sido claro e não ter falado muito rápido. Isto é mais técnico. Se você tiver mais perguntas nos próximos dias, você pode encaminhá-las para mim. É um prazer responder e contribuir, do meu ponto de vista, nesta luta contra a deficiência de AADC.

Lisa Tenho mais uma pergunta. Em portadores, particularmente os hemizigotos e homozigotos, você poderia prever se eles seriam portadores sintomáticos e recomendar algum tratamento? Heterozigotos é mais complicado por causa da dominância, mas nos hemizigotos e homozigotos, você esperaria que eles tivessem sintomas e poderiam ser potencialmente tratados?

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Professora Mita Bertoldi Acho que estes tipos de pessoas são realmente interessantes do ponto de vista da pesquisa. Não sabemos realmente, não temos grandes notícias sobre eles, os hemizigotos, os portadores. O que estamos fazendo agora, temos a função do sistema, é tentar imitar o genótipo do portador a fim de entender se possíveis sintomas que não são tão graves podem ser devidos ao outro alelo, o mutante. E para dar algumas sugestões. Ter uma base molecular para dar uma sugestão, mas neste momento não a temos.

Lisa Foi um prazer Mita, obrigada. Brilhante apresentação. Eu sei que todos vão observar e estudar o que você disse e haverá perguntas, tenho certeza. Por favor, continue o ótimo trabalho. A compreensão genética é tão importante para personalizar a medicina para cada uma dessas crianças que estão se apresentando de forma diferente. É bom saber mais sobre isso. Por isso, muito obrigada por hoje e pelo tempo extra que você dedicou.

Professora Mita Bertoldi É sempre um prazer para mim e para todos vocês, pais. Eu realmente sinto falta das reuniões em Londres. Foi muito bom conhecer as famílias e as crianças. E falar com os outros e entender qual é o objetivo. Descobri que os pais estão muito informados sobre assuntos científicos, por isso foi muito importante e informativo para mim também.

Lisa Obrigada. E obrigada a todos por participarem hoje e esperamos vê-los amanhã para o nosso último workshop. Tenham um bom dia, tarde ou noite, onde quer que estejam.

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AADCd Family Workshop 4 : Transcript Produced by Julie Ramsay Verified by Lisa Flint & Professor Mita Bertoldi Translated by

teamextended.com

The AADC Research Trust would like to thank all involved.

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