AADCd Family Workshop 4; Understanding Phenotype Vs Genotype in AADCd HINDI

AADCd फे मिली वर्क शॉप 4 AADCd में फे नोटाइप वि. जीनोटाइप को समझना

प्रोफ़े सर मीता बर्टोल्डी (इटली)

ट्रांसक्रिप्ट ... लिसा सभी लोगों को नमस्कार, मुझे पता है कि मैंने पिछले कु छ दिनों आप में से अधिकांश को देखा है, लेकिन मैं फिर से शुरू करने जा रही हूं और सत्र में प्रोफे सर बर्टोल्डी का स्वागत करती हूं। आज जुड़ने के लिए आप सभी का धन्यवाद और प्रोफे सर बर्टोल्डी हमारे साथ जुड़ने के लिए आप का भी धन्यवाद। मेरा नाम लिसा फ्लिंट, AADC रिसर्च ट्रस्ट की संस्थापक और 23 वर्षीय जेक की मां हूँ जिसे AADC की कमी है। मेरी सहयोगी जुली और आप सभी के साथ हम वैश्विक जागरूकता बढ़ाते हुए, ‘पेशंट एडवोके सी’ के 15 वर्ष मना रहे हैं, तथा गंभीर रोग अनुसंधान के लिए धन मुहैया करा रहे हैं। मुझे खेद है कि समय की कमी के कारण हम एक-एक करके सभी का परिचय नहीं करा सकते हैं।

AADC कमी में फे नोटाइप वि. जीनोटाइप विषय अत्यंत दिलचस्प है और हम आशा करते हैं कि आपको यह वर्क शॉप सहायक होगी। आइए अपने प्रस्तुतकर्ता का स्वागत और परिचय देते हुए शुरुआत करें। मीता बर्टोल्डी बायोकै मिस्ट्री की प्रोफे सर हैं और कार्यरत है यह समझने में कि प्रोटीन कै से कार्य करता है और उनकी संरचना और कार्य के बीच क्या संबंध है। प्रोफे सर बर्टोल्डी दस वर्षों से भी अधिक से ट्रस्ट के साथ मित्र और सहयोगी रहे हैं और यूनिवर्सिटी ऑफ़ वेरोना इटली में प्रोटीन के मिस्ट्री की लेब में काम करती हैं। मैं अब मीता आपको आपकी प्रस्तुति के लिए सौंपने जा रही हूं।

डॉ मीता बर्टोल्डी धन्यवाद लिसा, मुझे आज दोपहर बात करने और आमंत्रित करने के लिए और इस लेक्चर को सुनने के लिए सभी को धन्यवाद जो थोड़ा तकनीकी हो सकता है लेकिन मैंने पिछले कु छ दिनों में लिसा द्वारा उठाए गए कु छ सवालों के जवाब देने की कोशिश की है और जहाँ आपकी रुचि है वहां अपनी प्रस्तुति को ले जाने का प्रयत्न किया है। मैं बोलते समय बहुत धीरे-धीरे जाने का प्रयत्न करुँ गी और कृ पया मुझे बताएं यदि आप कु छ समझ नहीं पाते है तो मैं इसे दोहरा सकती हूं। यह शीर्षक लिसा ने मुझे दिया था; फे नोटाइप वि. जीनोटाइप। मुझे AADC की कमी के बारे में जागरूकता के 15 साल पूरे होने का जश्न मनाने के लिए यहां आकर वास्तव में खुशी हो रही है। स्लाइड

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लिसा ने जो पहला सवाल उठाया वह था "इसका क्या अर्थ है कि AADCd एक एकल जीन दोष है?"। यह विचार हमें जीनोटाइप और जीनोटाइप क्या है की अवधारणा की ओर ले जाएगा। जैसा कि आप जानते हैं कि जीन प्रोटीन के लिए DNA कोडिंग का एक विस्तार है, उदाहरण के लिए आंखों का रंग एक जीन द्वारा नियंत्रित होता है, बालों का रंग एक जीन द्वारा नियंत्रित होता है। और जैसा कि आप शायद जानते हैं कि जीन प्रत्येक कोशिका के न्यूक्लियस के अंदर क्रोमोसोम्स पर व्यवस्थित होते हैं। क्रोमोसोम्स बहुत सघन DNA के क्षेत्र हैं। मानव के पास सभी प्रकार की कोशिकाओं के न्यूक्लियस के अंदर गुणसूत्रों की तेईस प्रतियां होती हैं। ये गुणसूत्र बाईस समजातीय और एक लैंगिक में विभाजित होते है जो स्त्रीलिंग या पुल्लिंग का निर्धारण Page 1

करता है। इसका अर्थ है कि हमारे न्यूक्लियस में हमारे पास प्रत्येक क्रोमोसोम की दो समान प्रतियां होती हैं। तो जीन क्रोमोसोम्स पर नियोजित होते हैं और हमारी कोशिकाओं में हमारे पास प्रत्येक क्रोमोसोम की दो प्रतियां होती हैं। क्रोमोसोम 1 की दो प्रतियां, क्रोमोसोम 2 की दो प्रतियां और इसी तरह आगे भी। ऐसा इसलिए है क्योंकि एक गुणसूत्र पितृ मूल का होता है और एक गुणसूत्र मातृ मूल का होता है। तो प्रत्येक जीन मातृ गुणसूत्र और पितृ गुणसूत्र पर मौजूद होता है। हमारा DNA क्रोमोसोम्स में व्यवस्थित है। DNA कोशिकाओं के लिए सभी सूचनाओं का भंडार है और हमारे पास क्रोमोसोम्स व्यवस्थित करने वाली प्रतियां हैं। तो हमारे पास क्रोमोसोम 1 की दो कॉपी और क्रोमोसोम 2 की दो कॉपी हैं और इसलिए हमारे पास जीन की दोहरी कॉपी है। यही इसका अर्थ है। प्रत्येक क्रोमोसोम, कोशिका चक्र के एक विशेष फे ज में, दो सिस्टर क्रोमोटिड्स का आयोजन करता है, क्योंकि वे विभाजित होती हैं। यह महत्वपूर्ण नहीं है। स्लाइड

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जीनोटाइप एक व्यक्ति में सभी जीन, एक कोशिका में मौजूद सभी जीन होते हैं। AADC के लिए संबंधित जीन, यह क्रोमोसोम 7 के छोटे हाथ वाले हिस्से पर मौजूद है, और यह मानव का एक संपूर्ण जीनोटाइप है। यह एक पुरुष है क्योंकि इसमें XY है, एक महिला में XX क्रोमोसोम्स होंगे।

AADC जीन यहाँ मौजूद है। आप देख सकते हैं कि प्रत्येक क्रोमोसोम में दो क्रोमोटिड्स, दो भुजाएँ होती हैं, क्योंकि यह एक विभाजित होने वाली कोशिका है। स्लाइड

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लेकिन अन्य प्रकार की कोशिकाओं में, जो विभाजित नहीं हो रही हैं, हमारे पास एक भुजा वाले क्रोमोसोम की दो प्रतियां हैं। यह महत्वपूर्ण नहीं है कि आप इसे दोहरी या एकल देखें। तथ्य यह है कि इन दोनों में से प्रत्येक पर, एक मातृ मूल का, एक पितृ मूल का, थोड़ा खिंचाव है। यह इस क्रोमोसोम की एक विस्तृत योजना है, बैंड कलरोमेट्रिक बैंड हैं, जो हमें बताता है कि ठीक कहाँ पर, सेंटीमीटर या मीटर की तरह, जीन स्थित है। AADC का जीन करीब इस क्षेत्र में है। प्रत्येक के पास गुणसूत्र 7 की दो प्रतियां होती हैं, एक माता से, एक पिता से, और हम में से प्रत्येक के पास क्रोमोसोम के इस ऊपरी भाग में स्थित जीन की दो प्रतियां होती हैं। स्लाइड

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जीव विज्ञान में, जीन से, DNA से, ट्रांसमिसन होता है। DNA के संदेश का प्रोटीन में रूपांतरण दो मार्ग से होता है जिसे ट्रांसक्रिप्शन और ट्रांसलेशन कहा जाता है। तो DNA पर मौजूद संदेश प्रोटीन में तब्दील हो जाता है। DNA, जीन, न्यूक्लियोटाइड्स से बना होता है, जो एक एकल भाग बायोमोलेक्यूल होता है, जो एक DNA बनाता है, और यह संदेश एक प्रोटीन में परिवर्तित हो जाता है जो एमीनो एसिड द्वारा बनाया जाता है। तो सामान्य जैविक प्रक्रिया के माध्यम से AADC के लिए बनाई गई जीन कोडिंग, AADC प्रोटीन के गठन को तय करेगी। यह प्रोटीन है जो AADC के मामले में, डोपामाइन और सेरोटोनिन के लिए कार्य करता है। Page 2

फे नोटाइप का अर्थ होता है कि जीन कै से प्रकट होता है। इसे तकनीकी रूप से कहा जाता है, आंख के रंग के लिए जीन में कई एलील्स हो सकते हैं, क्योंकि आंख भूरी, हरी या नीली हो सकती है। प्रभुत्व की समस्या और मैंने इसकी एक स्कीम बनाने का प्रयत्न किया है। हम एलील या चिन्ह, जीन संदेश की अभिव्यक्ति को कहते हैं। यह प्रोटीन ही है जो हमारे बालों या आंखों के रंग को नीला, भूरा या हरा बनाता है। मैं आपको एक उदाहरण दिखाना चाहती हूं। क्रोमोसोम पर जीनोटाइप हमें बताता है कि यह बालों के रंग के लिए जीन की स्थिति है, लेकिन प्रत्येक व्यक्ति में दो क्रोमोसोम्स होते हैं, एक माता से और एक पिता से। इस उदाहरण में इस व्यक्ति के दो क्रोमोसोम्स हैं जो एक ही प्रकार के रंग, फे नोटाइप को साझा करते हैं। जीन बालों का रंग है। फे नोटाइप यहाँ भूरा, यहाँ भूरा और यहाँ भूरा है। इससे इस व्यक्ति के भूरे बाल फे नोटाइप बनते हैं। यह इस व्यक्ति को जिंजर जीनोटाइप बनाता है, क्योंकि दो एलील जो जीन की अभिव्यक्ति हैं, बालों का रंग, बालों का रंग जिंजर होता है। यह एक अधिक तकनीकी दृष्टिकोण है। यदि आप के पिटल अक्षर देखते हैं तो इसका अर्थ प्रभावी चिन्ह है, तो छोटे अक्षर का अर्थ है कमप्रभावी चिन्ह। इस लड़के के माता-पिता हैं जिनके पास एक जैसे ही प्रभावी भूरे बाल जीनोटाइप हैं। प्रत्येक ने पुत्र को माता-पिता के समान बनाते हुए, अपने समान जीन में से एक दिया है। इस दूसरे के लिए भी यही सच है। जिंजर बालों वाले इस फे नोटाइप के दो माता-पिता के बालों का रंग समान है। प्रत्येक एक जैसी ही एलील देते है, क्योंकि कोई अन्य संभावित संयोजन नहीं है, और बेटा इस चिन्ह के लिए होमोज़ायगस है। होमोज़ायगोसिस का अर्थ है कि हमारे पास वैसी ही एलील, वैसी ही जीन है। स्लाइड

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प्रभुत्व का अध्ययन क्लासिकल मेंडल नियमों द्वारा होता है। क्या होता है जब कोई व्यक्ति, उदाहरण के लिए, भूरी आँखों वाला व्यक्ति नीली आँखों वाले व्यक्ति के साथ क्रॉस करता है? हम जानते हैं कि भूरी आँखें नीली आँखों पर प्रभावी रहती हैं। हमारे पास यह है, यह मां है, उदाहरण के लिए, के वल बड़ा B दे सकती है, और पिता के वल लोवर के स b दे सकता है। तो बेटा एक हेटेरोज़ायगस होगा क्योंकि दो चिन्ह, दो एलील अलग लेकिन फे नोटाइप हैं, क्योंकि यह इस पर प्रभावी है, भूरा है। इसलिए हम लोगों को भूरी आंखों में देखते हैं लेकिन हम यह नहीं जानते हैं कि ये लोग प्रभावी होमोज़ायगस हैं या हेटेरोज़ायगस। यदि दो हेटेरोज़ायगस एक दूसरे के साथ क्रॉस करते हैं तो उदाहरण स्वरूप, माँ के लिए, इन दो प्रकार के गैमीट की विरासत, या फिर पिता के लिए दो अन्य प्रकार के होने की संभावना है, और इसलिए हमारे पास यह संयोजन होगा; भूरी आँखें होमोज़ायगस, भूरी आँखें हेटेरोज़ायगस, नीली आँखें होमोज़ायगस। जैसा कि आप देख सकते हैं कि जीनोटाइप फे नोटाइप से अलग हो सकता है क्योंकि जीनोटाइप पिता और मां से दो एलील के संयोजन को देखता है। वास्तव में, आपके बच्चों के जीनोटाइप दो भागों में हैं, हम उन्हें पाएंगे, एक पिता से आ रहा है, एक मां से आ रहा है। प्रभुत्व के कारण फे नोटाइप अलग है।

AADC की कमी में, प्रत्येक म्यूटेशन के लिए, हम AADC प्रभुत्व प्रभाव Page 3

को नहीं जानते हैं इसलिए हम फे नोटाइप का सटीक अनुमान नहीं लगा सकते हैं। यह ऐसी चीज है जिसकी हम भविष्यवाणी कर सकते हैं, लेकिन ठीक-ठीक नहीं। यह प्रभुत्व का प्रभाव है। यदि माता की आंखें नीली हों तो वह के वल उसी प्रकार का गैमीट दे सकती है। यदि पिता की आंखें भूरी हैं और वह हेटेरोज़ायगस है, तो वह दो प्रकार के गैमीट दे सकता है। हमारे पास कु छ ऐसे हैं जो 50% हेटेरोज़ायगस भूरे, 50% होमोज़ायगस नीले हैं। यह मैं आपको जीनोटाइप और फे नोटाइप को समझने के लिए बता रही हूं। जीनोटाइप के लिए यह आसान है क्योंकि यह देखने के लिए कि यह कौन सा म्यूटेशन है, जीनोमिक विश्लेषण करना पर्याप्त है। यदि कोई बेटा एक मिश्रित हेटेरोज़ायगस है, तो मैं आपको अपनी बात में बाद में दिखाऊं गी, उसका एक म्यूटेशन है, एक माँ से आ रहा है, एक पिता से आ रहा है। फे नोटाइप है, कै से म्यूटेशन का प्रभाव उसमें प्रकट होता है और यह प्रभुत्व प्रभाव द्वारा नियंत्रित होता है जो कि वर्तमान में AADC की कमी में सरलता से समझ में नहीं आता है। यह आंखों के रंग के लिए अलग है, यह वास्तव में आसान है। लेकिन अगर हमारे पास एक प्रोटीन है, बहुत बड़ा है, जो बहुत सारे म्यूटेशन से गुजर सकता है, तो फे नोटाइप के बारे में जानकारी प्राप्त करना अधिक और अधिक कठिन होता जाता है। स्लाइड

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चलिए DNA भाग को देखें जो AADC प्रोटीन का कारण बनता है। यह वह छोटा सा हिस्सा है, मैं पिछली स्लाइड पर वापस जाना चाहती हूं - यहां मैं AADC के लिए जीन कोडिंग के अंदर देख रही हूं ताकि आपको यह पता चल सके कि यह कै से व्यवस्थित होता है। हम में से प्रत्येक, हमारे पुत्रों, हमारे बच्चों में दो गुणसूत्र 7 होते हैं, एक मातृ मूल से और एक पितृ मूल से। AADC जीन इन वर्गों से बना है जो तथाकथित एक्सॉन कहलाते हैं, इसका अर्थ कोडिंग क्षेत्र है। इसके अंदर DNA सिक्वंस और इन्हें एक साथ रखने पर प्रोटीन बनता है। लिंक क्षेत्रों को क्षेत्र नहीं कहते है, वे तथाकथित इंट्रॉन्स हैं। इन क्षेत्रों में कु छ म्यूटेशन ऐसे भी हो सकते हैं, उदाहरण के लिए, ताइवानीज म्यूटेशन एक ऐसा म्यूटेशन है जिसमें स्प्लाइसिंग क्षेत्र शामिल है, यह एक ऐसा क्षेत्र है जो एक इंट्रॉन और एक एक्सॉन के बीच सीमा रेखा है। मैं बाद में उस पर वापस आऊं गी। तो AADC प्रोटीन के लिए क्रोमोसोम 7 पर DNA का यह भाग कोडिंग क्षेत्रों से बना है जो एक साथ प्रोटीन को ट्रांसलेट होने के बाद पैदा होता हैं। तो

AADC

AADC की कमी में एक ही जीन के दो एलील्स होते हैं, एक मातृ मूल का और दूसरा पितृ मूल का।

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यह AADC के जीन के इन प्रतिनिधित्वों में से एक है। ये ऐसे संदर्भ हैं जो हमें बताते हैं कि शायद प्रभावित लोगों की संख्या हमारे विचार से कहीं अधिक है। AADC शायद इतना दुर्लभ नहीं है जितना हम सोचते हैं। ये म्यूटेशन के प्रकार हैं। ये बॉक्स म्यूटेशन के ग्रुप है। जब आप तारांकन देखते हैं, तो यह एक डिलीशन है। पूरे प्रोटीन में 480 एमीनो एसिड होते हैं। यह जीन है लेकिन यह एक प्रोटीन के लिए कोड करता है जिसमें 480 एमीनो एसिड होते हैं।

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जब ट्रांसलेशन एमीनो एसिड नंबर 7 पर रुक जाता है, तो इसका अर्थ है कि प्रोटीन वास्तव में कम है और सेलुलर सिस्टम द्वारा विकृ त है और यह काम नहीं कर रहा है। यह वह जीनोटाइप है, जो कि आर्जिनिन 7 डिलीशन है, दाईं ओर आप DNA पर म्यूटेशन पा सकते हैं जो प्रोटीन परिवर्तन को जन्म देता है। डिलीशन, यदि यह बहुत शीघ्र होता है, तो एक प्रोटीन को जन्म देता है जो को-फे क्टर, विटामिन B6, या पाइरिडोक्सल फॉस्फे ट को-फे क्टर को बांधने में असमर्थ होता है, और कोशिका द्वारा डिग्रेड हो जाता है। यहां पीले रंग में मैंने दिखाया है कि अवशेष एमीनो एसिड में निहित है, जो PLP को बांधता है। तो हर डिलीशन, इस बिंदु से पहले, एक प्रोटीन को जन्म देता है जो खराब होता है और इसलिए रोगी के पास प्रोटीन नहीं होता है। वह एलील कोई प्रोटीन नहीं बनाता है। इसके स्थान पर आप जो देखते हैं वह एक सब्स्टिटूशन है, लाइसिन के लिए ग्लूटामाइन, ल्यूसीन के लिए वेलिन या हिस्टिडाइन के लिए आर्जिनिन। एमिनो एसिड सब्स्टिटूशन एक ‘मिस-सेन्स’ को जन्म देता है। एक ‘मिस-सेन्स’ का तात्पर्य है कि एमिनो एसिड जो वाइल्ड-टाइप में, एक स्वस्थ प्रोटीन में, एक ख़ास कार्य करता है, दूसरे द्वारा बदल लिया जाता है जो नुकसान पहुंचा सकता है। तो बिंदु म्यूटेशन, जो कि एक एमीनो एसिड का दूसरे में रूपांतरण है, एक ‘मिस-सेन्स’ म्यूटेशन को जन्म देता है क्योंकि प्रोटीन जिसका वह आदान-प्रदान करता है उसका सार है, इस अर्थ में कि यह डोपामाइन और सेरोटोनिन बनाने में सक्षम नहीं हो सकता है। प्रोटीन के कार्य के लिए एक एकल एमीनो एसिड भी महत्वपूर्ण हो सकता है। हमारे पास एक फ्रे म-शिफ्ट है, हमने इन दो अक्षरों 'fs' को जोड़ा है, यह एक म्यूटेशन है जो पैदा हुआ है। टायरोसिन 37 जो थ्रेओनीन में बदल गया है और फिर एक बदलाव है जिसने प्रोटीन का एक अलग अर्थ निर्धारित किया है, इसलिए निम्न एमीनो एसिड का आदान-प्रदान होता है और फिर जब आप तारांकन देखते हैं तो इसका अर्थ है कि प्रोटीन 37वें एमीनो एसिड पर आ गया है और अन्य 5 अमीनो एसिड्स, सामान्य प्रोटीन प्रस्तुत न कर, ‘सेन्स’ के बाहर चले गए है। प्रोटीन का डिलीशन होता है और फिर प्रोटीन रुक जाता है। तो यह प्रोटीन लंबा है, प्रोटीन नहीं है।

37 प्लस 5 अर्थात 42 एमीनो एसिड और यह डिग्रेड हो गया है। रोगी के पास AADC

वह यहां भी सच है। प्रोलाइन 43 से ल्यूसीन हो गया है जो एक फ्रे मशिफ्ट बनाता है। इसे फ्रे म-शिफ्ट कहा जाता है क्योंकि एक एकल DNA बेस का डिलीशन हुआ है जो न्यूक्लियोटाइड की रीडिंग में बदलाव को तय करता है, जो उपयुक्त एमिनो एसिड के लिए कोड नहीं करता है। यह ट्रांसलेशन की प्रक्रिया में है, क्योंकि DNA कोडोन में व्यवस्थित होता है। इसका अर्थ है तीन न्यूक्लियोटाइड, और प्रत्येक तीन न्यूक्लियोटाइड के लिए संबंधित एक विशिष्ट एमीनो एसिड होता है। यह आनुवंशिक कोड कहलाता है। आनुवंशिक कोड का ट्रांसलेशन एक न्यूक्लियोटाइड ट्रिपलेट को अमीनो एसिड में दिखाएगा। यदि न्यूक्लियोटाइड ट्रिपलेट को डिलीशन या सम्मिलन द्वारा बदल दिया जाता है, तो हमारे पास रीडिंग का एक फ्रे म-शिफ्ट तैयार होता है और इसलिए एमीनो एसिड्स सभी मूल काम करने वालों से अलग होते हैं। जब एक एमीनो एसिड का दूसरे के साथ आदान-प्रदान होता है तो हमारे पास मिस-सेन्स म्युटेशंस होते हैं। हमारे पास फ्रे म-शिफ्ट म्युटेशंस होते हैं जब एक मिस-सेन्स होती है और फिर एक फ्रे म-शिफ्ट, कु छ अन्य अलग एमिनो एसिड, उदाहरण के लिए 21, और फिर यह रुक जाता है क्योंकि जब प्रोटीन रूपांतरण का उपकरण एक कोडोन से मिलता है, जिसे स्टॉप कोडन कहते है, यह उपकरण जुदा हो जाता है और प्रोटीन का ट्रांसलेशन आगे नहीं बढ़ता है। हमारे पास अन्य फ्रे म-शिफ्ट हो सकते हैं, उदाहरण के लिए, आइसोल्यूसीन Page 5

33 का अस्पैरजीन के साथ, एमिनो

एसिड के लिए तीन अक्षर का कोड, आदान-प्रदान होता है, और फिर हमारे पास 60 एमिनो एसिड की फ्रे म-शिफ्ट होता है, हम मूल प्रोटीन से बड़े 493 तक पहुँचते हैं और फिर यह जम्प मारता है और फिर ट्रांसलेशन का अंत होता है। जब आप फ्रे म-शिफ्ट पाते हैं तो यह रिपीट होता है। एक अन्य प्रकार का म्युटेशन स्प्लाइस-स्थल हैं। स्प्लाइस-स्थल, सबसे अच्छा ताइवानीज है, हमारे पास गैर-कोडिंग क्षेत्र में म्युटेशन है और इस कारण से आपके पास एमिनो एसिड संदर्भ नहीं है। इस म्युटेशन का अर्थ है कि जब हम 571 न्यूक्लियोटाइड पर होते हैं, तो गुआनोसिन द्वारा 3 साइटोसाइंस का आदान-प्रदान होता है और यह न्यूक्लियोटाइड्स की एक भाषा है, हमारे पास एक बदलाव है, DNA का एक म्युटेशन है। लेकिन यह वास्तव में हानिकारक है क्योंकि यह 238 के प्रोटीन को, यहाँ पर, जन्म देता है, एमीनो एसिड जो PLP की बाइंडिंग के साथ नहीं जा पाते है। और इसलिए ताइवानीज जीनोटाइप वास्तव में हानिकारक है। यह वास्तव में गंभीर है क्योंकि इन मरीजों में कोई AADC प्रोटीन कार्य नहीं कर रहा है। ये लगभग 84/85 हैं, और अब नई रिपोर्ट के अनुसार, साहित्य में, मैंने देखा कि यह संख्या संभवतः लगभग 90 म्युटेशन तक बढ़ गई है और यह लगभग 120 तक पहुँच गई है। मुझे लगता है कि मरीज अधिक हो सकते हैं, पिछले कु छ वर्षों में दर्ज किए गए नए वेरिएंट के आधार पर यह 140 तक हो सकते है। हमें लगता है कि यह संख्या अधिक और अधिक हो सकती है।

AADC के जीन में हमें कु छ आकस्मिक और रेंडम म्युटेशन मिल सकते हैं जो ‘मिस-सेन्स’, फ्रे म-शिफ्ट, स्प्लाइसस्थल और ‘नॉन-सेन्स’ को जन्म दे सकते हैं। नॉन-सेन्स डिलीशन है। प्रोटीन बहुत खंडित अवस्था में है। यह आगे बढ़ कर PLP को बांध नहीं सकता है। इसलिए PLP को बांधने से पहले प्रत्येक डिलीशन एक ऐसी प्रजाति को जन्म देता है जो संभवत: डिग्रेड होती है क्योंकि यह PLP को बांधने में असमर्थ है। मरीज होमोज़ायगोसिस या हेटेरोज़ायगोसिस हो सकते हैं, क्योंकि हम कह सकते हैं कि यह जीन की एक प्रति है, उदाहरण के लिए मातृ पक्ष से लेकिन हम में से प्रत्येक के पास जीन की दो प्रतियां हैं। यदि हम समान म्युटेशन करते हैं तो हम होमोज़ायगस हैं, यदि हम भिन्न म्युटेशंस लेते हैं तो हम हेटेरोज़ायगस हैं। AADCd में होमोज़ायगस और हेटेरोज़ायगस जीनोटाइप और फे नोटाइप की इस स्थिति को दिखाने के लिए मैं कु छ स्लाइड्स लेकर वापस आऊं गी। स्लाइड

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यह एक समीक्षा से है जो जीनोटाइप को दर्शाता है। साहित्य में जीनोटाइप आवृत्ति म्यूटेशंस के संयोजन का सन्दर्भ लेती है। आप देख सकते हैं कि एक डबल है। जीनोटाइप यह हिस्सा है, एक सेमी कोलन (;) के साथ, जिसका अर्थ है मातृ; पितृ, मातृ; पितृ। और आप देखते हैं कि यह ताइवानीज म्यूटेशन है जो प्रोटीन को जन्म नहीं देता है। यह एक सामान्य जायगस प्रोटीन प्रकार है जो दो एलील्स, दो जीन, एक पैतृक और एक मातृ मूल पर के समान म्यूटेशंस के कारण होता है। और यह फ़्रीक्वेंसी देता है। AADC की कमी वाले सभी पहचाने गए मरीजों में ताइवानीज लगभग एक-चौथाई है। और फिर हमारे पास दूसरा फे नोटाइप और जीनोटाइप है जैसा कि इस लेखक ने दो साल पहले बताया था। आप देख सकते हैं कि हमारे पास होमोज़ायगोसिस या कं पाउंड हेटेरोज़ायगोसिस हो सकता है। इसका अर्थ है कि हमारे पास एक एलील का एक म्यूटेशन और दूसरे एलील का एक म्यूटेशन है।

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यह कोई प्रोटीन नहीं और एक पॉइंट म्यूटेशन है। इसे हेमीज़ायगोसिस कहा जाता है क्योंकि हमारे जीनोटाइप में दो अलग-अलग जीन हैं लेकिन दोनों में से एक प्रोटीन का उत्पादन नहीं करता है, इसलिए जो प्रोटीन मौजूद है वह दूसरा है। तो हमारे पास होमोज़ायगोसिस, हेमीज़ायगोसिस और कं पाउंड हेटेरोज़ायगोसिस है। यह एक उदाहरण है, होमोज़ायगोसिस और यह कं पाउंड हेटेरोज़ायगोसिस है। एलील फ़्रीक्वेंसी का अर्थ है एकल की फ़्रीक्वेंसी। यदि हम जीनोटाइप देखें, तो यह एक जीनोटाइप है, जो मातृ और पितृ मूल से बना है। यदि हम एलील फ़्रीक्वेंसी देखते हैं तो हमें दोगुना करना चाहिए। ये दो एलील हैं, एक माता का, एक पिता का। जीन का अर्थ है क्रोमोसोम पर उसकी भौतिक स्थिति। एलील का अर्थ है एक मात्र। इसकी एलील फ़्रीक्वेंसी को देखने के लिए मुझे इसे एक के रूप में, इसे दो के रूप में गिनना होगा और यह देखना होगा कि क्या किसी और के पास है, उदाहरण के लिए, यह तीन है और यह चार है। यह एक जीनोटाइप है। दो समान का संयोजन। यह अन्य जीनोटाइप दो अलग-अलग का संयोजन है। यह एक और अलग है, दो अलग-अलग का संयोजन लेकिन अगर मैं एलील गिनने के लिए जाती हूं तो मुझे एक, दो, तीन, चार, पांच की गिनती करनी चाहिए अर्थात ताइवानीज म्यूटेशन की एलील फ़्रीक्वेंसी अधिक से अधिक और अधिक है। हमें सिंगल जीन में डबल करना चाहिए। तो होमोज़ायगस वह है जिसमें दो समान एलील्स होते हैं। स्लाइड

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एक बार जब हम आनुवंशिक आधार, जीनोटाइप, को जान लेते हैं, तो जीनोटाइप रोग के परिणाम को समझने के लिए पर्याप्त नहीं होता है। यहां मैंने दो टेबल लिए हैं जो 2017 में टेसा वासेनबर्ग के एक पेपर से हैं, जो AADC की कमी के लिए दिशानिर्देश और कु छ लक्षण दिखाते हैं। और एक अन्य टेबल है जिसमें कि लक्षण सामान्य, कम सामान्य या गैर-न्यूरोलॉजिक के रूप में सारणीबद्ध हैं। मैं अपना ध्यान सिफारिशों की ओर दिलाना चाहती हूं। AADCd का फे नोटाइप स्पेक्ट्रम व्यापक है। यह व्यापक है क्योंकि हमारे पास बहुत सारे लक्षण हैं। और अक्सर अलग लक्षण। यह बहुत गंभीर से लेकर हल्के तक हो सकते है। जब हमारे पास गतिविधि विकारों के बिना ऑटोनोमिक लक्षणों वाला रोगी होता है तो AADCd पर विचार किया जाना चाहिए। जीनोटाइप के बीच दो म्यूटेशंस, बायोके मिकल और क्लिनिकल फे नोटाइप सहसंबंध रखने के तथ्य, का कोई स्पष्ट संबंध नहीं है सिवाय कि ताइवानीज क्योंकि यह आसान है। वे कोई प्रोटीन नहीं बनाते हैं। हालांकि, कु छ फे नोटाइप्स के साथ जिनमें L-डोपा बाइंडिंग साइट में परिवर्तन होता है, और हमने इन कु छ रोगियों को Lडोपा प्रतिक्रिया के साथ जोड़ा है। हमें अब सावधान रहना होगा, क्योंकि यह चार साल पुराना है। तो संदेश यह है कि जिनेटिक्स बहुत महत्वपूर्ण है क्योंकि इससे जीन और प्रोटीन से जुडी समस्या की पहचान हुई है, लेकिन यह पर्याप्त नहीं है क्योंकि हमें यह समझना होगा कि प्रोटीन के साथ क्या हुआ है। म्यूटेशन का परिणाम क्या होता है, क्योंकि यह हमें बता सकता है कि प्रोटीन स्तर पर क्या समस्या है और क्या यह समस्या लक्षणों से जुड़ी है, और यह मेरा काम है। मैं यह समझने की कोशिश करती हूं कि प्रोटीन कै से काम करता Page 7

है और मैं इस खराबी को लक्षणों की गंभीरता से जोड़ने की कोशिश करती हूं। स्लाइड

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यहां मैं आपको ताइवानीज म्यूटेशन का उत्कृ ष्ट उदाहरण दिखाना चाहती हूं। ताइवानीज म्यूटेशन, जैसा कि मैंने आपको बताया, 480 के बजाय 238 अमीनो एसिड की एकल श्रृंखला से होकर गुजरता है। मैंने आपको यहाँ एकल मोनोमर प्रोटीन प्रस्तुत किया है यह दिखाने के लिए कि कनेक्टिंग भाग, मैजेंटा में, प्रोटीन लगभग आधा है। यह हरा प्रोटीन, जो इन रोगियों में होता है, कभी भी इस रूप को प्राप्त नहीं करेगा क्योंकि इसमें संरचना को पूरा करने वाले दूसरे भाग की कमी है। इस क्षेत्र के लिए, हम पाते हैं कि यह काले धब्बे प्रोटीन है और यह कार्यशील प्रोटीन है। यह ताइवानीज प्रोटीन है। यह कोशिकाओं के अंशों में अघुलनशील रूप में रिकवर किया जाता है, क्योंकि शायद यह बायोके मिकल फोल्ड नहीं बनाता है, यह एक संरचना प्राप्त नहीं करता है जो कार्य के लिए जिम्मेदार होता है। यह कु छ ऐसा है जो संगठित नहीं है। आपके पास कु छ हो सकता है लेकिन अगर वह संगठित नहीं है तो यह कार्यात्मक नहीं हो सकता है। स्लाइड

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इसलिए मैं स्पष्ट करना चाहूंगी कि स्वस्थ व्यक्तियों, स्वस्थ वाहकों, हमारे बच्चों के माता-पिता और प्रभावित मरीजों में क्या स्थिति है। स्वस्थ व्यक्तियों में दो क्रोमोसोम होते हैं, एक माता से और एक पिता से, और दोनों AADC जीन, यानी दोनों एलील्स, पॉलीपेप्टाइड श्रृंखला, AADC का प्रोटीन उत्पन्न करते हैं। इन जीनों को मूल कहा जाता है, इसका अर्थ है स्वस्थ। वे वाइल्ड-टाइप पॉलीपेप्टाइड्स का उत्पादन करते हैं। वाइल्ड-टाइप का अर्थ स्वस्थ पॉलीपेप्टाइड है और हमारे पास 100% स्वस्थ प्रोटीन है। कार्यकारी AADC के लिए एक होमोडाइमर है। इसका अर्थ है कि एक पॉलीपेप्टाइड श्रृंखला दूसरे पॉलीपेप्टाइड श्रृंखला के साथ इंटरेक्ट करती है और इंटरेक्शन रेंडम होता है। इसका अर्थ यह है कि ये दोनों मातृ मूल की हो सकती हैं, दोनों पितृ मूल की हो सकती हैं या एक पितृ और एक मातृ हो सकती हैं, लेकिन यह समान रहेगी क्योंकि सभी पॉलीपेप्टाइड स्वस्थ हैं। वे म्यूटेशन द्वारा बदले नहीं हैं, इसलिए तथाकथित मोनोमर्स का इंटरेक्शन, जिसका अर्थ है कि एकल पॉलीपेप्टाइड श्रृंखला, वास्तव में रेंडम है और जब सभी पॉलीपेप्टाइड श्रृंखलाएं स्वस्थ होती हैं और एक दूसरे के समान होती हैं तो संसर्ग AADC प्रोटीन होमोडाइमर्स को जन्म देता है। हम होमोडाइमर्स के बारे में बात करते हैं क्योंकि कामकाज के लिए प्रोटीन को होमोडाइमर होना चाहिए। यह पूरी तरह से काम कर रहा है, आप पीले रंग में विटामिन B6 देख सकते हैं, PLP बंधा हुआ है। जब हुआ होता है तो प्रोटीन कार्य कर रहा होता है। स्वस्थ व्यक्तियों के लिए यही स्थिति है। स्लाइड

PLP बंधा

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स्वस्थ वाहक, यहां मैंने एक रेड क्रॉस, एक बिंदु म्यूटेशन, या दूसरा बिंदु म्यूटेशन डिलीशन प्लाट किया है। जब वाहक स्वस्थ क्रोमोसोम प्रस्तुत करता है जो के वल स्वस्थ AADC प्रोटीन बनाता है, तो डिलीशन में यह प्रोटीन नहीं बनाता है, क्योंकि अधिकांश डिलीशन PLP बाइंडिंग स्थल से पहले होता है। तो यह प्रोटीन का उत्पादन नहीं कर रहा है।

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हमारे पास हेमीज़ायगोसिस में एक स्वस्थ वाहक है जिसमें के वल होमोडाइमर कार्यशील प्रोटीन, होमोडाइमेरिक कार्यशील वाइल्ड टाइप प्रोटीन होता है, लेकिन मात्रा में मूल मात्रा का आधा होता है। तो हमारे पास के वल काम कर रही पॉलीपेप्टाइड श्रृंखलाएं हैं जो होमोडाइमर्स बनाती हैं और मात्रा आधी है। यह हेमिज़ायगोसिस में एक स्वस्थ वाहक है, ऐसा इसलिए कहा जाता है क्योंकि के वल एक क्रोमोसोम कार्य कर रहा है। यह वह स्थिति है जो एक स्वस्थ वाहक से भिन्न है जो हेटेरोज़ायगोसिस में होती है क्योंकि एक क्रोमोसोम कार्य कर रहा है, वाइल्ड टाइप के स्वस्थ प्रोटीन का निर्माण कर रहा है, दूसरे में म्यूटेशन है। तो हमारे पास दो प्रकार की पॉलीपेप्टाइड श्रृंखलाएं हैं। मूल, वाइल्ड टाइप, एक स्वस्थ प्रकार का प्रोटीन, और म्यूटेशन को लिए पॉलीपेप्टाइड श्रृंखला। प्रत्येक श्रृंखला डाईमर बनाती हुई बेतरतीब ढंग से एक दूसरे के साथ जुड़ती है इसलिए हमारे पास स्वस्थ वाहक में एक जटिल आबादी है। वाइल्ड टाइप होमोडाइमर्स, प्रोटीन जो सामान्य रूप से कार्य करते हैं, वे होमोडाइमर्स जो दोनों श्रृंखलाओं में के वल एक म्यूटेशन लेकर चलते हैं और वे हेटेरोडाइमर्स जो एक श्रृंखला में एक म्यूटेशन और दूसरी श्रृंखला में कोई म्यूटेशन लेकर नहीं चलते हैं। एक बड़ी समस्या हेटेरोज़ायगोसिस में है। यह हेटेरोज़ायगोसिस की स्थिति है, क्योंकि हमारे पास कोई म्यूटेशन नहीं और एक म्यूटेशन है। यह समस्या नहीं है, क्योंकि यह एक ऐसी स्थिति है जहां एक व्यक्ति इस प्रोटीन को नहीं बनाता है, इसलिए इसे समझना और इलाज करना आसान है। के वल प्रोटीन की कमी होती है, इसलिए माता-पिता के संभावित लक्षण AADC प्रोटीन की कम मात्रा से संबंधित होते हैं जो पूरी तरह से कार्य करते है। यहां इसके बजाय हमारे पास अलग-अलग प्रोटीन आबादी है, क्योंकि यह श्रृंखला स्वस्थ श्रृंखला बनाती है। यह श्रृंखला म्यूटेटेड श्रृंखला बनाती है, और वे इस संयोजन और मात्रा की समस्या को बनाने के लिए बेतरतीब ढंग से जुड़ सकते हैं। क्या मैं मात्रा 20%, 25%, 50% कह सकती हूँ? मैं नहीं कह सकती, क्योंकि समस्या हेटेरोज़ायगोसिस में प्रभुत्व की है। प्रभुत्व में, हम प्रभुत्व के प्रभाव का गहराई से अध्ययन कर रहे हैं लेकिन इस समय हम मात्रा नहीं कह सकते है। हम मानते हैं कि चूंकि स्वस्थ वाहक AADCd विकसित नहीं करते हैं, यह हो सकता है कि वाइल्ड टाइप प्रोटीन होने के कारण, यह म्यूटेशन पर हावी है, लेकिन हमारे पास परिणाम नहीं हैं क्योंकि अब तक हेटेरोज़ायगोसिस में स्वस्थ वाहक पर गहन अध्ययन नहीं किया गया है। स्लाइड

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चलिए मरीजों के पास चलते है। हमारे पास दो स्थितियां हैं। हमारे पास डिलीशन, या फिर स्प्लाइस की स्थिति है, जहां कोई प्रोटीन नहीं होता है, यदि हमारे पास क्रोमोसोम पर डिलीशन है, तो कोई प्रोटीन नहीं बनता है; यदि आपके दोनों क्रोमोसोम पर समान डिलीशन है, तो कोई प्रोटीन नहीं होता है, इसलिए बच्चे में AADC प्रोटीन नहीं होता है। या हमारे पास दोनों क्रोमोसोम पर एक ही म्यूटेशन है और ये तथाकथित होमोज़ायगोसिस रोगी हैं जिनके पास के वल एक पॉलीपेप्टाइड श्रृंखला है जो संपूर्ण AADC आबादी बनाती है। ये होमोडाइमर्स हैं, और होमोडाइमर्स का आसानी से अध्ययन किया जा सकता है क्योंकि यदि हम समझ जाते हैं कि दोष कहाँ है और इसका क्या अर्थ है, तो समाधान खोजने का प्रयास करने के लिए सुझाव देना आसान हो जाता है। हेटेरोज़ायगोसिस में स्थिति अधिक जटिल है क्योंकि हमारे पास हेमीज़ायगोसिस की स्थिति है, जहां एक एलील Page 9

प्रोटीन का उत्पादन नहीं करता है और दूसरा प्रोटीन का उत्पादन करता है लेकिन यह प्रोटीन म्यूटेटेड होता है। हमारे पास के वल एक पॉलीपेप्टाइड श्रृंखला है, जो म्यूटेटेड होती है, और पॉलीपेप्टाइड श्रृंखला की मात्रा कम होती है। या हमारे पास माता और पिता से आने वाले दो अलग-अलग म्यूटेशन हैं और इसलिए हमारे पास एक बहुत अलग संयोजन है जो सैद्धांतिक रूप से 25% होमोडाईमर म्यूटेशन 1 को लेकर और 25% होमोडाईमर म्यूटेशन 2 को लेकर और 50% हेटेरोडाईमर दोनों म्यूटेशन लिए होता है। तो हेटेरोज़ायगोसिस में स्थिति अधिक जटिल है। स्लाइड

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मुझे जवाब देने के लिए कहा गया था, क्या हम बीमारी के परिणाम की भविष्यवाणी कर सकते हैं? मॉडल में एंजाइम फ़ं क्शन के आधार पर रोग की गंभीरता का अनुमान लगाया जा सकता है। मैं इस प्रश्न का उत्तर देने के लिए बायोके मिस्ट्री में जाती हूं। हम एंजाइम के कामकाज की भविष्यवाणी कर सकते हैं। यदि हम भविष्यवाणी करना चाहते हैं कि समस्या क्या है तो हमें प्रोटीन के कार्य को समझना होगा, जो प्रोटीन की संरचना पर निर्भर करता है। प्रोटीन के एक भाग में स्ट्रक्चर परिवर्तन एक सटीक कार्यात्मक प्रभाव निर्धारित कर सकता है। हम सभी इस प्रोटीन को जानते हैं, AADC, L-डोपा और 5-हाइड्रॉक्सीट्राईटोफे न से डोपामाइन और सेरोटोनिन बनता है जो आवश्यक न्यूरोट्रांसमीटर हैं। यह प्रोटीन है। मैंने आपको कु छ म्यूटेशन दिखाए हैं जिनकी पहचान की गई है और हमने उनका अध्ययन किया है। प्रोटीन किस तरह व्यवस्थित होते है, यह समझने के लिए हमें संरचनात्मक डेटा एकत्र करना होगा। ये तकनीकी बायोके मिकल दृष्टिकोण हैं, लेकिन इसका अर्थ यह है कि हमें यह जानना होगा कि संरचना में क्या बदलाव हुआ है। उदाहरण के लिए, हमने पाया है कि यहां इस म्यूटेशन में, यह बहुत प्रारंभिक और सीमावर्ती भाग, वास्तव में सक्रिय साइट पर बड़ी हानि का कारण बनता है। जबकि यहां म्यूटेशन कम हानिकारक हैं। तो हम अनुमान कर सकते हैं, संरचनात्मक डेटा एकत्र करना, और के टालिटिक पैरामीटर डेटा एकत्र करना, अर्थात कार्यकारी डेटा, यह डोपामाइन और सेरोटोनिन की मात्रा है। हम इन दो डेटा को एक साथ रख सकते हैं और समझ सकते हैं कि कै से और कौन से के टालिटिक पैरामीटर बदल गए हैं। क्या यह रासायनिक प्रतिक्रिया की समस्या है क्योंकि L-डोपा से डोपामाइन के रूपांतरण में कु छ कदम बदल गए है या यह बाइंडिंग की समस्या है, क्योंकि यहां L-डोपा और 5-हाइड्रॉक्सीट्रिप्टोफै न बंधे हुए हैं, लेकिन यहां उदाहरण के लिए एक म्यूटेशन डोपा बाइंडिंग को रोकता है या फिर यह डोपा बाइंडिंग को बदलता है। तथ्य यह है कि कम डोपामाइन और सेरोटोनिन बनने के लिए कई कारण हो सकते हैं इसलिए हम संभावित कारणों की तलाश कर रहे हैं। यदि हम प्रतिक्रिया की के मिस्ट्री को समझते हैं तो ठीक है, लेकिन यदि समस्या बाइंडिंग की है तो हम चिकित्सक को डोपा और 5-हाइड्रॉक्सीट्राईटोफे न सहित थेरेपी का प्रयत्न करने का सुझाव दे सकते हैं क्योंकि इससे मरीज को सब्सट्रेट को बाइंड करने में सहायता मिल सकती है। प्रोटीन की समस्या के वल एक बाइंडिंग की समस्या है, न कि कोई फं क्सनिंग समस्या, न ही कोई रासायनिक समस्या। यदि इसके बजाय हमें प्रतिक्रिया में कोई रासायनिक समस्या दिखती है, यदि गतिविधि के लिए महत्वपूर्ण एमीनो एसिड बदल गया है, तो यह एक और बिंदु है क्योंकि हमारे पास एक अक्षम प्रोटीन है। यह अपनी गतिविधि को बचाने में सक्षम नहीं है इसलिए हमें रोगी को स्वस्थ, अच्छी तरह से काम करने वाला अन्य प्रोटीन देना पड़ेगा। Page 10

AADC

यह समझना महत्वपूर्ण है कि किस स्तर पर क्षति, म्यूटेशन ने अपना प्रभाव डाला है। मेरा अर्थ है कि कौन सा एमीनो एसिड बदल गया है, बदलाव क्या है और बदलाव अणु की संरचना और कार्य के लिए क्या करता है। और प्रत्येक म्यूटेशन को एक विशिष्ट प्रोटीन क्षेत्र के लिए निर्दिष्ट करें। हम समझते हैं कि यह क्षेत्र वास्तव में पैथोलॉजिकल, रोगजनक म्यूटेशन के अध्ययन से जुड़ा हुआ है, यह क्षेत्र वास्तव में सक्रिय साइट से एक प्रकार के डोमिनो प्रभाव से जुड़ा हुआ है। तो अगर हम यहां कु छ बदलते हैं तो प्रोटीन काम नहीं करता है, अगर हम यहां कु छ बदलते हैं तो प्रोटीन काम नहीं करता है। अगर हम यहां कु छ बदलते हैं, तो यह इतना बुरा नहीं है। तथ्य यह है कि यह इतना गंभीर नहीं है। तो हम AADC में प्रोटीन पर म्यूटेशन की गंभीरता को कोरीलेट करने के लिए एक क्षेत्र खोज सकते हैं। इसका अर्थ यह नहीं है कि हम लक्षणों की गंभीरता को कोरीलेट कर सकते हैं, लेकिन हम इसे करने के मार्ग पर हैं, क्योंकि जब आप समझते हैं कि प्रोटीन कै से नियंत्रित होता है तो हम सोच सकते हैं और इस प्रभाव का तोड़ पा सकते हैं। हमारा उद्देश्य, और हम यह कर रहे हैं, हम अंतिम डेटा एकत्र कर रहे हैं जो प्रस्तुत करने के लिए लगभग तैयार है, कि जो प्रोटीन के कार्य को प्रभावित करने वाले संरचनात्मक बदलाव की गंभीरता और सौम्यता को बीमारी की गंभीरता और सौम्यता के साथ कोरीलेट कर सकता है। हम कोरीलेशन, लक्षणों और प्रोटीन संरचना तथा उसके कार्य के बीच लिंक की तलाश कर रहे हैं और यही प्रोटीन पर अध्ययन का उद्देश्य है। स्लाइड

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होमोज़ायगोसिस में, एक ही म्यूटेशन एक ही पॉलीपेप्टाइड श्रृंखला को जन्म देता है, इसलिए हमारे पास के वल एक प्रकार का होमोडाइमर है। होमोडाइमर के लिए, गंभीरता की भविष्यवाणी करना और चिकित्सीय दृष्टिकोण के बारे में सुझाव देना या उसका समर्थन करना सरल है। उदाहरण के लिए, हम होमोडाइमर में देख सकते हैं कि हमें के वल एक प्रोटीन प्रजाति से निपटना है। वे बदलाव जो को-फे क्टर की बाइंडिंग में समस्या पैदा करते हैं, उनकी को-फे क्टर की उच्च आपूर्ति के साथ सहायता की जा सकती है, जिसका मुझे पता है कि यह मरीजों के लिए सप्लाई किए जाते है। अब तक चिकित्सा उपचार लगभग सभी मरीजों के लिए समान हैं, यही कारण है कि विज्ञान और अनुसंधान का लक्ष्य अधिक सटीक चिकित्सा, व्यक्तिगत चिकित्सा की ओर है क्योंकि प्रत्येक रोगी के अपने म्यूटेशन हैं और प्रत्येक म्यूटेशन दूसरे से अलग होता है। मिश्रित हेटेरोज़ायगोसिस में समस्या यह है कि हमारे पास दो पॉलीपेप्टाइड श्रृंखलाएं और AADC डाईमर्स के तीन संभावित संयोजन हैं। दो होमोडाईमर्स, प्रत्येक एक म्यूटेशन और हेटेरोडाईमर लिए हुए होता है। हम दो हेटेरोडाईमेरिक प्रोटीन पर एक पेपर प्रकाशित कर रहे हैं जहां हमें हेटेरोडाईमर की बायोके मिकल विशेषताओं और हेटेरोज़ायगस रोगियों के क्लिनिकल लक्षणों के बीच एक विसंगति मिली। इसका कु छ अर्थ है क्योंकि हेटेरोज़ायगस रोगी में हेटेरोडाईमर होता है, लेकिन दो होमोडाईमर भी होते हैं, इसलिए इस पेपर में, इस जांच में, हमने प्रस्तावित किया है कि म्यूटेशन सकारात्मक या नकारात्मक रूप से पूरक बन सकता है। पूरक होने का क्या अर्थ है? जब हमारे पास दो अलग-अलग म्यूटेशन होते हैं और हम देखते हैं कि हेटेरोडाईमर की गतिविधि दो होमोडाईमर के औसत से अधिक है, तो हम कहते हैं कि पूरकता सकारात्मक है। यदि गतिविधि कम है तो हम कहते हैं कि पूरकता नकारात्मक है।

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tहमने पाया है कि हेटेरोडाईमर्स में पूरकता का एक औचित्य है। हम प्रभुत्व को नियंत्रित करने वाले फे क्टर्स का अध्ययन कर रहे हैं और समझ रहे हैं। उदाहरण के लिए, यदि दो म्यूटेशन में से कोई एक प्रोटीन को जन्म देता है जो अघुलनशील है, तो सतह पर कई म्यूटेशन सकल को जन्म देते हैं, यह घुलनशील प्रोटीन की अभिव्यक्ति की सीमा में हेटेरोडाईमर में भी परिलक्षित होता है। फिर अमीनो एसिड के सब्स्टिटूशन का प्रभाव। चूंकि दो सक्रिय साइट यहां हैं, और यदि एक म्यूटेशन यहां है और दूसरा यहां है, तो इसका सक्रिय साइट पर कोई प्रभाव नहीं पड़ेगा। लेकिन अगर एक म्यूटेशन यहां है, और दूसरा यहां है, तो दो अलग-अलग म्यूटेशंस दोनों सक्रिय साइटों पर प्रभाव डालते हैं, इसलिए सामान्य रूप से पूरकता नकारात्मक होती है। क्यों, यदि वे के वल एक सक्रिय साइट को प्रभावित करते हैं तो पूरकता सकारात्मक है? यदि एक होमोडाईमर अत्यधिक कोम्प्रोमाइज्ड है तो क्लिनिकल फे नोटाइप गंभीर होता है, भले ही हेटेरोडाईमर सकारात्मक पूरकता दिखाता है। मिश्रित हेटेरोज़ायगस रोगी में दो हेटेरोडाईमेरिक की गतिविधि वास्तव में महत्वपूर्ण है। हमें के वल हेटेरोडाईमेरिक प्रोटीन पर ही विचार नहीं करना चाहिए। मैं समझ सकती हूं कि यह काफी जटिल है। समस्या यह है कि जटिलता इस बात से आती है कि मिश्रित हेटेरोज़ायगोसिस में हमारे पास तीन अलग-अलग AADC प्रोटीन आबादी हैं और होमोज़ायगस 1 और 2, और हेटेरोडाईमर 1 और 2 पर म्यूटेशन के प्रकार पर निर्भर हैं, हमारे पास अलग-अलग परिणाम हो सकते हैं। यही कारण है कि एक मिश्रित हेटेरोज़ायगस वास्तव में लक्षणों की एक विस्तृत श्रृंखला दिखाता है। AADC प्रोटीन की आबादी वास्तव में बड़ी है, लेकिन हमने मिश्रित हेटेरोज़ायगस का अध्ययन करने और प्रोटीन आबादी में सभी प्रजातियों के प्रभाव का विश्लेषण करने के लिए एक विधि, एक बायोके मिकल दृष्टिकोण का पता लगाया है। हम यह स्वस्थ वाहकों के साथ भी करना चाहते हैं क्योंकि एलील प्रभुत्व को समझना बहुत महत्वपूर्ण है। स्लाइड

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एक और प्रश्न यह है कि क्या हम म्यूटेशन के प्रकार के आधार पर भविष्यवाणी कर सकते हैं कि क्या एक बच्चा जीन थेरेपी के लिए उपयुक्त होगा या फिर वे दूसरे बच्चे को बेहतर प्रतिक्रिया देंगे। हमने चिकित्सा भविष्यवाणी के कु छ परिणामों की सूचना दी है। मैं आपको वास्तव में एक आशावादी उदाहरण नीचे दिखाऊं गी, जो दवा उपचार को मान्यता या राह दिखा सकता है। लेकिन एक मध्यम फे नोटाइप के लिए जीन थेरेपी के बारे में सवाल, इसका अर्थ है कि फे नोटाइप जो कु छ प्रोटीन पैदा करता है जो सक्रिय है, अब तक जवाब देना मुश्किल रहा है। यदि हम स्वस्थ AADC से भर देते हैं, तो विचार यह है कि हम स्वस्थ वाहक, माता-पिता के समान स्थिति उत्पन्न करते हैं, जिसमें एक स्वस्थ एलील और एक प्रभावित एलील होता है। तो सामान्य दृष्टि यह है कि एक मध्यम फे नोटाइप के लिए, जीन थेरेपी दृष्टिकोण संभवतः बेहतर होगा क्योंकि हम कु छ वाइल्ड टाइप प्रोटीन देते हैं। लेकिन हम प्रभुत्व के बारे में कु छ नहीं जानते हैं। हम नहीं जानते हैं कि यदि हम इन कोशिकाओं में स्वस्थ AADC डालते हैं, तो क्या यह पॉलीपेप्टाइड श्रृंखला, अभी होने वाली श्रृंखलाओं पर, जो रोगियों में मौजूद हैं, हावी रहेगी। गंभीर रूप से पीड़ित रोगियों के लिए जो AADC नहीं बनाते हैं, यह निश्चित रूप से एक लाभकारी परिणाम है। अब तक हमारे पास समझाने के लिए पर्याप्त डेटा नहीं है, हमें एलील प्रभुत्व की असर को बेहतर ढंग से समझना होगा। जीन थेरेपी उपचार में एक बात यह है कि जीनोटाइप, प्रोटीन खासियतों के लिए मरीज समूहबद्ध नहीं है। कु छ रिकोर्ड्स में हमारे पास जीनोटाइप के बारे में कोई जानकारी नहीं है, इसलिए जो परिणाम हम देखते हैं, उनमें Page 12

सुधार करने वाले परिणाम, शुरुआत में जीनोटाइप के साथ मेल नहीं खाते हैं और इसी तरह प्रोटीन फीचर्स। इसलिए मैं इस प्रश्न को गहराई से नहीं समझ सकती हूं क्योंकि हमारे पास नहीं है, और जीन थेरेपी वर्षों पहले शुरू हुई थी, इतनी नहीं, हमारे पास यह स्पष्ट करने वाली रिपोर्ट नहीं है कि क्या एक मध्यम फे नोटाइप के लिए विकास और लक्षणों में कु छ मील के पत्थर अर्जित किए गए हैं। हम ताइवानीज रोगियों, और अन्य रोगियों के लिए, जो जीन थेरेपी से गुजर चुके हैं, जानते हैं कि उनकी स्थितियों में सुधार हुआ है। विचार यह है कि वे माता-पिता के फे नोटाइप से मिलते जुलते हैं, क्योंकि आप उन्हें कु छ स्वस्थ AADC देते हैं। हाल ही में, लिसा के सहयोग से, हमने डोपामाइन और सेरोटोनिन अनुसंधान को जोड़ने का प्रयास किया क्योंकि डोपामाइन का उत्पादन करने वाले एंजाइम का हमेशा अध्ययन किया जाता है, लेकिन सेरोटोनिन के स्तर का इतना अध्ययन नहीं किया गया है। इसका कारण यह है कि हम ख़ास लक्षणों के लिए जीनोटाइप और फे नोटाइप का सटीक मिलान नहीं कर सकते हैं, इसलिए हम पहले से प्रकाशित वेरिएंट में उत्पादित सेरोटोनिन का मूल्यांकन कर रहे हैं, यह तय करने के लिए कि प्रोटीन के दृष्टिकोण से डोपामाइन सेरोटोनिन का अनुपात महत्वपूर्ण है। यदि डोपामाइन कम हो जाता है, लेकिन सेरोटोनिन स्वस्थ प्रोटीन के रूप में बनता रहता है, तो यह हमें रोगियों में मूड नियंत्रण के बारे में कु छ बता सकता है। यह स्पष्ट कर सकता है कि क्यों कु छ रोगियों में दूसरों की तुलना में अधिक मूड भिन्नताएं होती हैं, और क्या है अन्य नॉन-सिस्टेमिक लक्षण जो सेरोटोनिन पैदा कर सकता हैं। हम सभी रोगियों के लिए, रोगियों द्वारा लिए जाने वाले सभी प्रोटीनों के लिए, सेरोटोनिन के स्तर को फिर से निर्धारित कर रहे हैं, ताकि यह पता लगाने के लिए कि क्या कु छ अंतर हैं, उनका डोपामाइन के स्तर से मिलान किया जा सके । इससे रोगियों के इलाज और उनके म्यूटेशन को समझने में दिलचस्प सुझाव मिल सकते हैं। स्लाइड

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एक और कारण कि अभी तक हम जीनोटाइप और फे नोटाइप का विशिष्ट रोग लक्षणों के साथ मिलान नहीं करा सकते हैं, व्यक्तिगत विविधता है। यह AADC है, और यह डोपामाइन के उत्पादन में AADC द्वारा की गई प्रतिक्रिया है। आप देख सकते हैं कि यह प्रतिक्रिया अन्य महत्वपूर्ण अणुओं जैसे कि नॉरअड्रेनेलिन, अड्रेनेलिन और टायरोसिन को शामिल करने वाले मार्ग में है। इन अणुओं में से प्रत्येक के उत्पादन में हम में से प्रत्येक के साथ कु छ अंतर हैं, इसलिए यदि आप रोगियों के लक्षणों में व्यक्तिगत विविधता जोड़ते हैं, तो आप समझ सकते हैं कि मिलान करना इतना आसान क्यों नहीं है। यह एक वैक्सीन प्रतिक्रिया की तरह है, उदाहरण के लिए, हम में से प्रत्येक को उम्मीद है कि एक टीका मिला है, हममें से कु छ को बुखार आता है, कु छ को नहीं, किस आधार पर ऐसा है यह ज्ञात नहीं है। हम आम तौर पर कहते हैं कि इम्यून सिस्टम अच्छी तरह से प्रतिक्रिया कर रही है या नहीं कर रही है, इत्यादि। लेकिन रोग के लक्षण न के वल AADC क्षति से नियंत्रित होते हैं, बल्कि अन्य ढेरों अणुओं के द्वारा भी नियंत्रित होते हैं जो डोपामाइन और सेरोटोनिन के मार्ग में भी बनते हैं। तो संदेश यह है कि हम अधिक से अधिक संभावित लक्षणों को समझने के लिए कार्य कर रहे हैं, लेकिन ऐसा करने के लिए, उदाहरण के लिए, हमने कु छ दिन पहले, टाइरोसिन हाइड्रॉक्सिलेज़ प्राप्त किया है, और हम यह देखना चाहेंगे कि क्या इन दोनों वाइल्ड टाइप और म्यूटेटेड रूपों में भी प्रोटीनों के बीच कु छ संबंध हैं। यह बहुत दिलचस्प होगा क्योंकि इससे हमें यह पता लग सकता है कि कु छ रूपों में समस्या न के वल मालफं क्शन की है, बल्कि पिछले एंजाइम से आगे के एंजाइम की आपूर्ति में भी है। यह वास्तव में जटिल है और हमारे पास एक Page 13

न्यूरोनल सेल मॉडल है जो कु छ दिनों में Crispr हो जाएगा। इन प्रयोगों को न के वल अब हम इन विट्रो, घोल में, बल्कि कोशिकाओं में भी करने का प्रयत्न कर रहे हैं। स्लाइड

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यहां मैं आपको कु छ संभावनाएं और आशाएं बताना चाहती हूं जो खुल रही हैं। मैं पहले से ही अपने सहयोगियों के साथ iPSC स्टेम सेल पर, जो फाइब्रोब्लास्ट रोगियों से लिए गए हैं, बात कर रही हूं। यहां हमारे पास दो मरीजों पर प्रकाशन है, जिनमें से एक में होमोजायगस म्यूटेशन है, जो सक्रिय स्थल पर एक के टालिटिक दोष की ओर ले जाता है। यह सक्रिय स्थल पर एक महत्वपूर्ण अवशेष का रासायनिक बदलाव है। यह एक मिश्रित हेटेरोज़ायगस है जिसमें एमीनो एसिड का डिलीशन होता है, इसलिए कोई प्रोटीन नहीं होता है और के वल यही प्रोटीन बनता है, इसलिए यह हेमीज़ायगस है। खराबी हलकी है और यह सब्सट्रेट साइट के पास स्थित है। हमने पता लगाया है कि इस प्रोटीन में L-डोपा के लिए कम लगाव है और इसलिए, यूके में एक समूह के सहयोग से, प्रोफे सर मंजू कु रियन और प्रोफे सर साइमन हील्स, आप कल से सुनेंगे, ने मरीजों की इन कोशिकाओं पर और म्यूटेशन 2 फं क्शन में L-डोपा थेरेपी का सुझाव दिया, यानी मरीज की ठीक हुई कोशिकाएं L-डोपा के प्रति अनुकू ल हैं। इस म्यूटेशन की समस्या एक के टालिटिक दोष है और हम इस पर अन्य अणुओं, तथाकथित चैपरोन, अणुओं के साथ कार्य कर सकते हैं जो के टालिटिक कदम को बायपास करने में सहायता करते हैं। यह एक उदाहरण है जो मरीजों के लिए चिकित्सा के लिए कु छ सुझाव दे सकता है और मुझे पता है कि कोशिकाओं से लेकर रोगी तक समस्याओं का एक सागर है, लेकिन इस प्रकार के मरीज के लिए चिकित्कीय सुधार के लिए एक संभावित रास्ता हो सकता है। स्लाइड

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यह मेरा समूह है। मैं आपको जियाडा की तस्वीर दिखाना चाहती हूं जो अब लंदन में AADC पर अपना शोध कर रही है। जिओवेनी लक्षणों की गंभीरता को संरचनात्मक और कार्यात्मक सुधार के प्रकार से कोरीलेट करने के लिए प्रोटीन की तुलना करने के लिए वास्तव में कड़ी मेहनत कर रही है। हमारे पास वास्तव में महत्वपूर्ण और आशान्वित करने वाले परिणाम हैं। समर्थन और मित्रता के लिए लिसा और

AADC रिसर्च ट्रस्ट को धन्यवाद।

प्र और उ जुली क्या कु छ दवाएं हैं जो कु छ म्यूटेशन के लिए बेहतर प्रतिक्रिया देती हैं? प्रोफ़े सर मीता बर्टोल्डी अब तक की चिकित्सा तीन प्रकार के उपचारों के ट्राइऐड पर आधारित है। पाइरिडोक्सिन, जो सह-एंजाइम के लिए आपूर्तिकर्ता है, क्योंकि सह-एंजाइम के बिना एंजाइम कार्य नहीं करता है। डोपामाइन एगोनिस्ट क्योंकि एंजाइम पर्याप्त डोपामाइन का उत्पादन नहीं करता है और इसलिए एगोनिस्ट डोपामाइन रिसेप्टर को संदेश प्रसारित करने देता है। और फिर मोनोएमाइन ऑक्सीडेज इन्हिबिटर, क्योंकि आम तौर पर डोपामाइन मोनोएमाइन ऑक्सीडेज Page 14

द्वारा शारीरिक रूप से नष्ट हो जाता है, और यदि हम इन्हिबिटर देते हैं तो हम डोपामाइन की थोड़ी मात्रा को नष्ट होने से रोक पाएंगे। तो चयन किया गया उपचार यह है। इस लिहाज से अन्य के साथ तीनों घटक थेरेपी के लिए आवश्यक हैं। यह सवाल नहीं है कि कौन सा बेहतर कार्य करता है लेकिन डोपामाइन एगोनिस्ट के अंदर, मरीजों ने प्रयोग से पाया है कि एक डोपामाइन एगोनिस्ट के साथ प्रतिक्रिया किसी दूसरे की तुलना में बेहतर है और यह व्यक्तिगत संवेदनशीलता क्षेत्र के आधार पर है। इसका AADC से कोई सम्बन्ध नहीं है, क्योंकि डोपामाइन एगोनिस्ट डोपामाइन रिसेप्टर के साथ इंटरैक्ट करता है, इसलिए समस्या AADC से संबंधित नहीं है। AADC के साथ एक संभावित उपचार L-डोपा है लेकिन के वल तभी जब हमारे बायोके मिकल डेटा से पता चलता है कि डोपा बाइंडिंग में कोई समस्या है अन्यथा यह उपयोगी नहीं है। यदि म्यूटेशन PLP बाइंडिंग साइट में कु छ अवशेषों को छू ता है जिससे PLP अच्छी तरह से बाइंडिंग नहीं करता है तो पाइरिडोक्सिन की एक बड़ी मात्रा जरुरी है। कु छ चैपरोन महत्वपूर्ण हो सकते हैं। अब हम परीक्षणों को शुरू कर रहे हैं क्योंकि हम समझ गए हैं कि दो मोनोमर्स के बीच इंटरफे स रेसीड्यू वास्तव में महत्वपूर्ण हैं और इंटरफे स को और अधिक गुंथे हुए बनाने के लिए कु छ चैपरोन से काम लेना चाहते है ताकि एंजाइम बेहतर ढंग से काम कर सकें । एगोनिस्ट, या उपचार, या दवाओं के एक ही सेट में इलाज की परिवर्तनशीलता व्यक्तिगत है। यह म्यूटेशन से संबंधित नहीं है। जुली क्या आपको लगता है कि जीन थेरेपी मेरे एक साल के बेटे के लिए जो कि मध्यम फे नोटाइप का है सबसे अच्छी रहेगी या उसे सिर्फ दवा पर रहना चाहिए? प्रोफ़े सर मीता बर्टोल्डी मैं एक बायोके मिस्ट हूं और डॉक्टर या चिकित्सक नहीं हूं। मैं के वल वैज्ञानिक परिणामों पर आधारित हूं। मुझे लगता है कि क्रिस जो जीन थेरेपी कर रही है वह वास्तव में मस्तिष्क के एक हिस्से के प्रति है जो अधिक लक्षित तरीके से डोपामाइन का रिसाव करता है। लेकिन मुझे लगता है कि यदि फे नोटाइप तीव्र है तो जीन थेरेपी एक लगभग आवश्यक उपचार है। लेकिन मैं यह नहीं कह सकती कि कोई शोध नहीं हुई है, लेकिन जब मेरे पास जीन थेरेपी से उपचार पाए लोगों के परिणामों पर अधिक डेटा, आउटपुट पर अधिक प्रकाशित डेटा होंगे, और इसका अर्थ कु छ वर्षों के बाद से है क्योंकि हमें न्यूरोट्रांसमीटर की प्रगति को समय के लम्बे पैमाने पर देखना है, इससेहमें अधिक तर्क संगत डेटा प्राप्त होंगे। बहुत व्यक्तिगत आधार पर मुझे लगता है कि जीन थेरेपी बहुत छोटे शिशुओं के लिए सहायक हो सकती है क्योंकि यह बच्चों पर होने वाले प्रयोगों से वर्षो तक डोपामाइन और सेरोटोनिन की कमी से होने वाली मस्तिष्क की उस क्षति को रोकती है। मैं बड़ी उम्र के लोगों के लिए कम्पेसनेट जीन थेरेपी को भी समझती हूं। मैं जीन थेरेपी लेने के लिए अपने सुझाव साझा कर सकती हूं लेकिन मेरे पास अभी तक कोई वैज्ञानिक डेटा नहीं है। हमें उम्मीद है कि ये थोड़े समय में होंगे लेकिन अभी के लिए, मेरी जानकारी के साथ, मैं कु छ नहीं कह सकती। मुझे बहुत खेद है लेकिन मैं कु छ नहीं कह सकती क्योंकि मेरे पास कोई तर्क संगत आधार नहीं है। Page 15

जुली जीन थेरेपी के बाद बायोके मिकल परिणाम सेरोटोनिन में नहीं बल्कि डोपामाइन में वृद्धि दिखाते हैं, क्या आपको लगता है कि परिवारों को SSRIs के साथ सेरोटोनिन की कमी का उपचार करने पर विचार करना चाहिए? प्रोफ़े सर मीता बर्टोल्डी साहित्य में जो कु छ प्रकाशित हो चुका है उससे मैं कहूंगी, 5-हाइड्रॉक्सिट्राईटोफै न और सेरोटोनिन के एगोनिस्ट के बारे में इतना कु छ नहीं पता है। मुझे पता है कि चूंकि सेरोटोनिन मोटर लक्षणों की तुलना में अधिक मानसिक लक्षणों पर प्रभाव डालता है, इसलिए हमें यह समझने के लिए सेल मॉडल पर अधिक शोध करना होगा कि क्या कोई वास्तविक लाभ है। यदि यह वास्तव में लाभकारी है, क्योंकि मुझे लगता है कि डोपामाइन एगोनिस्ट और SSRi के साथ ओवरलैपिंग हो सकती है, हमारे पास जवाब देने के लिए पर्याप्त डेटा नहीं है, लेकिन मुझे पता है कि कु छ शोध जारी है। समस्या यह है कि यह रोग कई वर्षों से उपेक्षित है। अनुसंधान, वास्तविक बुनियादी रिसर्च, वास्तव में के वल 10 साल पहले शुरू हुई है। एक मेडिकल डॉक्टर के रूप में लक्षणों का प्रतिकार करना एक बात है, जिसे आप सफलता के साथ कर सकते हैं, लेकिन दोष के आणविक कारण का पता लगाना और आणविक कारण का प्रतिकार करना दूसरी बात है। यह वास्तव में नया है और इसलिए हमारे पास ज्यादा डेटा नहीं है लेकिन हम वास्तव में इस अंतर को पाटने के लिए काम कर रहे हैं। जुली आप कै से तय करते हैं कि सकता है?

AADC वाला बच्चा L-डोपा के लिए उम्मीदवार हो सकता है और बेहतर प्रतिक्रिया दे

प्रोफ़े सर मीता बर्टोल्डी मैं एक पैरामीटर को माप सकती हूं, जो कि तकनीकी नाम है, और इस पैरामीटर को Km कहा जाता है और यह स्थिर है। हम अपने गतिज विश्लेषण से मापते हैं, और यह पैरामीटर हमें एंजाइम के लिए डोपा के लगाव की जानकारी देता है। लगाव का अर्थ है उत्सुकता, डोपा कै से एंजाइम को बांधने में सक्षम होता है। हम जानते हैं कि स्वस्थ प्रोटीन में डोपा नैनोमोलर रेंज में वास्तव में सबल रूप से बांधता है और कु छ म्यूटेशन में डोपा मिलिमोलर रेंज में बांधता है, इसलिए इतना नहीं क्योंकि हमें एंजाइम से डोपा को बांधने के लिए मिलीमोलर मात्रा की आवश्यकता होती है। तो हम मापते हैं और हम पाते हैं यदि यह प्रकार, यदि यह म्यूटेशन डोपा उपचार के लिए एक प्रत्याशी है। हमने किया था और हम कर रहे हैं। लिसा क्या आप

L-डोपा की संभावित प्रतिक्रया को हेटेरोज़ायगो, होमोज़ायगो और हेमीज़ायगो में निर्धारित कर सकते हैं?

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प्रोफ़े सर मीता बर्टोल्डी हाँ। लिसा जब आप प्रभुत्व को भी अच्छे से नहीं जानते हैं तो क्या आप ऐसा कर सकते हैं? सभी संयोजनों के लिए आप डोपा विश्लेषण कर सकते हैं?

L-

प्रोफ़े सर मीता बर्टोल्डी जब तक मेरे पास एंजाइम है मैं इसे कर सकती हूं। मैं एंजाइम, L-डोपा दे सकती हूं, और उत्पादन की दर को माप सकती हूं और इन बिंदुओं को प्लॉट पर रखती हूं और इससे, गणितीय दृष्टिकोण से, मैं लगाव, एंजाइम की चाह Lडोपा के लिए होमोडाईमर, हेटेरोडाईमर का अर्थ निकाल सकती हूं। लिसा म्यूटेशन के संयोजनों की सूची से जो आपने हमें पहले दिखाई थी, क्या आप उन लोगों से तय कर सकते हैं किन लोगों में आपके अनुमान के अनुसार L-डोपा काम करेगा? प्रोफ़े सर मीता बर्टोल्डी हमने इनमें से कई म्यूटेशन के लिए यह पैरामीटर निर्धारित किया है। प्रकाशित डेटा प्राप्त हैं और हम इनमें से कई के लिए पता लगा रहे हैं, मैंने अभी प्रकाशन के लिए, हेटेरोज़ायगोसिस पर, दो हेटेरोज़ायगोसिस म्यूटेशन पर एक पेपर प्रस्तुत किया है। प्रत्येक में तीन प्रकार के प्रोटीन हैं और मैंने सब्सट्रेट और रासायनिक गतिविधि के लिए लगाव पर एक तर्क दिया। हम यह देखने का प्रस्ताव करने में सक्षम हैं कि प्रोटीन की खराबी के प्रभाव खराब डोपा बाइंडिंग के कारण हैं और इसलिए L-डोपा उपचार के लिए एक उम्मीदवार होने की यह एक शर्त है। उदाहरण के लिए, सक्रिय साइट पर सभी म्यूटेशनों में डोपा बाइंडिंग की समस्या है। इंटरफ़े स म्यूटेशन, उनमें से कु छ, में डोपा बाइंडिंग की समस्या है। लिसा सरलता के लिए, संयुक्त म्यूटेशन की वह सूची, यदि हमें जानना हो कि क्या आप अनुमान कर सकते हैं कि कौन से लोगों में L-डोपा अनुकू ल रहेगा, बस एक साधारण तालिका में हमारे अधिकांश परिवारों को पता चल जाएगा कि उनके म्यूटेशन संयोजन क्या हैं, ताकि वे पहचान सकें , और फिर वे संभावित उपचार के बारे में अपने डॉक्टरों से बात कर सकते हैं। प्रोफ़े सर मीता बर्टोल्डी यदि आप मुझे रुचि रखने वाले माता-पिता के म्यूटेशन के संयोजन भेजते हैं तो मैं आपको बता सकती हूं कि क्या हमने पहले से ही इस पैरामीटर की विशेषता बता दी है या फिर हम इसकी विशेषता बताएंगे।

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लिसा और

L-डोपा और डोपामाइन एगोनिस्ट का संयोजन। क्या आप जान पाएंगे कि क्या वे बेहतर प्रतिक्रिया देंगे?

प्रोफ़े सर मीता बर्टोल्डी मैं मेडिकल दृष्टिकोण से नहीं जानती हूं कि L-डोपा को डोपामाईन एगोनिस्ट के साथ मिलाने से क्या परिणाम निकलता है क्योंकि यह वही है। लेकिन वे दो अलग-अलग प्रणालियों पर कार्य करते हैं। एक डोपामाइन बढ़ाता है। दूसरा रिसेप्टर पर कब्जा कर लेता है, मुझे नहीं पता है कि क्या कोई क्रॉस वर्क है और कोई प्रतिस्पर्धा है। जुली

Crispr KAS 9 और Crisp ON, हाल ही में काफी चर्चा में रहे हैं, क्या यह इलाज वास्तव में एक विकल्प होने के करीब है और क्या आपको लगता है कि भविष्य में AADC इससे ठीक हो सकता है? प्रोफ़े सर मीता बर्टोल्डी यह प्रश्न वास्तव में महत्वपूर्ण है लेकिन अब तक हम सरल सेल मॉडल में Crispr सिंगल जीन में सफल रहे हैं। मुझे लगता है कि भविष्य के लिए यह वास्तव में दिलचस्प है क्योंकि आप रोगग्रस्त जीन को शांत कर रहे हैं, और सेल के अंदर वास्तव में काम कर रहे AADC जीन डाल रहे हैं। सैद्धांतिक दृष्टि से यह सरल है। यह लगभग सरल है, कु छ सरल सेल मॉडल में, जैसे कि न्यूरोनल सेल में, लेकिन मानव कोशिकाओं और फिर जीव से गुजरना थोड़ा अधिक कठिन है। मुझे लगता है कि इस दुर्लभ प्रकार की बीमारी का मुकाबला करने वाली हर रणनीति को ध्यान में रखा जाना चाहिए, लेकिन हमें पहले कु छ बुनियादी रिसर्च करने की जरूरत है। मुझे लगता है कि भविष्य के लिए यह हो सकता है, लेकिन अभी के लिए हमें कदम दर कदम आगे बढ़ना चाहिए। जुली हमने AADC गतिविधि को बढ़ाने वाले आंतों के बैक्टीरिया/प्रोबायोटिक्स पर आशाजनक अध्ययन के बारे में सुना है। प्रक्रिया क्या है? प्रोफ़े सर मीता बर्टोल्डी आंतों के बैक्टीरिया का अपना AADC होता है, इसलिए प्रणाली यह है कि वे परिधीय AADC के साथ आपूर्ति करते हैं। यह बहुत महत्वपूर्ण है। हम किडनी को टार्गेट करने के लिए एंजाइम रिप्लेसमेंट थेरेपी आजमाने के बारे में सोच रहे हैं, क्योंकि मस्तिष्क को टार्गेट करना, ब्लड ब्रेन की बाधा को पार करना वास्तव में कठिन है। हमें लगता है कि यह मरीजों की सहायता करने के लिए शुरू करने का एक अस्थायी तरीका हो सकता है। इसका उत्तर यह है कि यह महत्वपूर्ण है क्योंकि यह डोपामाइन, परिधीय डोपामाइन को बढ़ाता है, और बच्चों की समस्या ब्रेन डोपामाइन है। तो यह कु छ मायनों में उपयोगी हो सकता है जैसे कि किडनी में, एपिनेफ्रीन और नॉरएपिनेफ्रीन का अधिकांश उत्पादन परिधीय होता है, इसलिए यह इस न्यूरोट्रांसमीटर की सीमा को बढ़ाने में सहायता कर सकता है, लेकिन इसे अन्य तरीकों के साथ जोड़ा जाना चाहिए। ये वास्तव में, वास्तव में मजेदार है।

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जुली क्या अमीनो एसिड से भरे प्रोटीन खाद्य पदार्थ फायदेमंद हो सकते हैं? प्रोफ़े सर मीता बर्टोल्डी प्रोटीन खाद्य पदार्थ जिनमें डोपामाइन और सेरोटोनिन के पूर्ववर्ती होते हैं और इसका अर्थ है पशु प्रोटीन। पशु मूल का प्रोटीन। शाकाहारियों के लिए क्षमा करें, उन्हें इसे प्राप्त करने के लिए गोलियों से आपूर्ति लेनी होगी। पशु प्रोटीन में बहुत अधिक, उदाहरण के लिए, बड़ी मात्रा में ट्रिप्टोफै न होता है जो वनस्पति प्रोटीन में निहित नहीं है, इतना नहीं। आपको बहुत से बीन्स खाने चाहिए, अंग्रेज लोगों की तरह जो मेरी तरह सुबह बीन्स खाते हैं। मैंने इसे यूके में खोजा, लेकिन मुझे यह बहुत पसंद है। पशु प्रोटीन एक स्रोत है। साथ ही विशेष रूप से दूध ट्रिप्टोफै न से भरपूर होता है। शाम को एक गिलास दूध पीने से जो ट्रिप्टोफै न से भरा होता है, जो हमारे एंजाइम 5-हाइड्रॉक्सिट्रिप्टोफै न द्वारा परिवर्तित होता है, सेरोटोनिन में परिवर्तित हो जाता है जो स्थिरता, शांति, आनंद और नींद का न्यूरोट्रांसमीटर है। तो पशु प्रोटीन, दूध, हमें मांस से या इसी तरह ट्रिप्टोफै न और फे निलएनेनाइन या टायरोसिन की आपूर्ति करनी होगी। सब्जियों में ये आवश्यक एमीनो एसिड होते हैं, क्योंकि फे निलएनेनाइन और ट्रिप्टोफै न आवश्यक हैं। हम इन एमीनो एसिड का उत्पादन करते हैं लेकिन पर्याप्त मात्रा में नहीं। इसलिए यदि कोई शाकाहारी है तो उसे आवश्यक अमीनो एसिड की आपूर्ति फार्मेसी वगैरह से लेनी होगी। जुली हम पाते हैं कि Forskolin सायक्लिक AMP देने से हमारे बेटे के लक्षणों में सुधार होता है। वह मिश्रित हेटेरोज़ायगस है। क्या आप एसिड एंजाइम गतिविधि में सायक्लिक AMP की भागीदारी पर अपने विचार साझा करने के लिए कृ पा करेंगे? प्रोफ़े सर मीता बर्टोल्डी सायक्लिक AMP एक नियमन करने वाला अणु है। हम सायक्लिक AMP और AADC के बीच सटीक संबंध नहीं जानते हैं, लेकिन सायक्लिक AMP, इसका एक कार्य एंजाइमों को सक्रिय करना है जो फॉस्फोरीलेशन की मध्यस्थता कर रहे हैं। फॉस्फोरीलेशन कई एंजाइमों की गतिविधि के नियमन की एक प्रक्रिया है। हम AADC के फॉस्फोरीलेशन के बारे में कु छ नहीं जानते हैं लेकिन घोल में AADC के हमारे प्रारंभिक आंकड़ों से पता चलता है कि, मेरे PhD छात्रों में से एक संयुक्त राज्य अमेरिका गया था, और AADC के फॉस्फोरीलेशन का अध्ययन किया था और सक्रिय साइट पर कु छ सेरीन अवशेष पाए जो कि फॉस्फोरीलेटेड थे। तो यह एक संभावित प्रभाव फॉस्फोरीलेशन स्तर को बढ़ाना है, लेकिन मेरे पास सायक्लिक AMP के लाभकारी प्रभाव का कोई वैज्ञानिक आधार नहीं है, और AADC के फॉस्फोरीलेशन का रासायनिक प्रतिक्रिया, डोपामाइन और सेरोटोनिन उत्पादन के वेग पर कोई प्रभाव नहीं पड़ता है, लेकिन ऐसा लगता है कि यह डोपा और ट्रिप्टोफै न को अधिक सक्षम बनाता है, यह AADC से बंधने के लिए डोपा और ट्रिप्टोफै न के लगाव को बढ़ाता है। वह पैरामीटर जिस पर लिसा ने पहले मुझसे पूछा था। सक्रिय स्थल के कु छ अवशेषों में AADC का फॉस्फोरीलेशन, डोपा और ट्रिप्टोफै न बाइंडिंग, इस प्रकार डोपामाइन और सेरोटोनिन में सुधार लाता है। मैं सोच सकती हूं कि कु छ रूपों में, जो डोपा और डोपामाइन को बांधने में इतने कु शल नहीं हैं, यह महत्वपूर्ण हो सकता है। इसका कु छ असर हो सकता है लेकिन अभी तक के मेरे परिणाम इन Page 19

विट्रो हैं। मुझे नहीं पता यदि यह कोशिकाओं में होता है या नहीं। इन विट्रो, फॉस्फोरीलेशन सब्सट्रेट के लिए लगाव बढ़ाता है, इसलिए यह हो सकता है कि बच्चे पर प्रभाव फॉस्फोरीलेशन के नियमन में सुधार के कारण हो। यह हमारे शोध का एक और विषय है। हम जानना चाहेंगे कि क्या यह फॉस्फोरीलेशन जो हमने वाइल्ड टाइप प्रोटीन में देखा था, रोगजनक रूपों में अन्य पर समान प्रभाव डालता है। लिसा क्या पाउडर के रूप में बोवाइन एड्रेनल ग्लेंड कोर्टेक्स का अर्क AADC बच्चों में पेरिफे रल नॉरएपिनेफ्रीन और एपिनेफ्रीन भी बढ़ाएगा ताकि वे दैनिक तनाव के स्तर को बेहतर ढंग से मेनेज कर सकें ? प्रोफ़े सर मीता बर्टोल्डी मैं वास्तव में नहीं जानती हूं क्योंकि अधिक यह एक चिकित्सा का प्रश्न है। मुझे लगता है कि एड्रेनल ग्लेंड कोर्टेक्स का अर्क एपिनेफ्रीन या नॉरएपिनेफ्रीन के स्तर को बढ़ाने में फायदेमंद हो सकता है लेकिन यह वास्तव में मेरी विशेषज्ञता से बाहर है। तर्क संगत दृष्टिकोण से, मैं काउंटर इफे क्ट या क्रॉस इफे क्ट नहीं जानती हूं। हो सकता है कि कोई औचित्य हो। लिसा क्रोहन के (Crohn's) रोग में, जो आंतो को बहुत प्रभावित करता है, लक्षणों में सुधार के लिए कभी-कभी एक फिकल माइक्रोबायोटा ट्रांसप्लांट (FMT) की सुविधा उपलब्ध की जाती है। क्या आपको लगता है कि AADC रोगियों में आंतो के कार्य में सुधार के लिए और AADC उत्पादन बढ़ाने के लिए ऐसा कु छ विकल्प बन सकता है? प्रोफ़े सर मीता बर्टोल्डी यह एक और सवाल है जो मुझे नहीं पता क्योंकि मैं AADC के साथ सीधे संबंध का अध्ययन कर रही हूं। मैं साहित्य में नज़र डाल सकती हूं और देख सकती हूं कि क्या इसके और डोपामाइन और सेरोटोनिन संश्लेषण के मार्ग के बीच कोई इन्टरैक्शन है। अगर मैं देखती हूं कि मार्ग में कु छ अणु शामिल हैं, तो यह हो सकता है लेकिन मुझे पता नहीं है। लिसा मुझे लगता है कि जिस PS128 के बारे में डॉ ली बात कर रहे थे, वह सहायता कर सकता है, इसलिए हम उस प्रश्न को हम डॉ ली के सम्मुख वापस रख सकते हैं। प्रोफ़े सर मीता बर्टोल्डी मुझे आशा है कि मैं स्पष्ट हूं और बहुत तेजी से नहीं बोली हूं। यह अधिक तकनीकी है। यदि आपके पास और प्रश्न हैं जो अगले कु छ दिनों में आपके पास आते हैं तो आप उन्हें मुझे भेज सकते हैं। AADC की कमी के खिलाफ इस संघर्ष में मेरे दृष्टिकोण से जवाब देना और योगदान देना खुशी की बात होगी। लिसा मेरे पास एक और प्रश्न है। वाहकों में, विशेष रूप से हेमीज़ायगस और होमोज़ायगस, क्या आप अनुमान कर सकते Page 20

हैं कि क्या ये रोगसूचक के रियर्स होंगे और आप किसी उपचार की सिफारिश करेंगे? प्रभुत्व के कारण हेटेरोज़ायगस अधिक जटिल है, लेकिन हेमीज़ायगस और होमोज़ायगस में क्या आप उनसे लक्षण उभरने की उम्मीद करेंगे और क्या उनके इलाज की संभावना है? प्रोफ़े सर मीता बर्टोल्डी मुझे लगता है कि शोध की दृष्टि से इस प्रकार के लोग वास्तव में दिलचस्प होते हैं। हम वास्तव में नहीं जानते हैं, हमारे पास इन हेमीज़ायगस, वाहकों पर बहुत अच्छी खबर नहीं है। अब हम जो कर रहे हैं, हमारे पास सिस्टम फ़ं क्शन है, यह समझने के लिए वाहक जीनोटाइप की नकल करने का प्रयास करना है कि क्या संभावित लक्षण जो इतने गंभीर नहीं हैं, अन्य म्यूटेटेड एलील के कारण हो सकते हैं। और कु छ सुझाव देना है। सुझाव देने के लिए मोलेक्युलर आधार चाहिए, लेकिन अभी हमारे पास नहीं है। लिसा यह एक खुशी की बात है मीता धन्यवाद। शानदार प्रस्तुति। मुझे पता है कि हर कोई इसे फिर से देखेगा और आपने जो कहा है उसका अध्ययन करेगा, और प्रश्न भी होंगे इसका मुझे यकीन है। कृ पया बेहतरीन कार्य जारी रखें। इन बच्चों में से प्रत्येक के लिए जो अलग तरह से पेश आ रहे हैं दवा को व्यक्तिगत करने के लिए जेनेटिक समझ बहुत महत्वपूर्ण है। इसके बारे में और जानना अच्छा है। तो आज के लिए और आपके द्वारा दिए गए अतिरिक्त समय के लिए बहुत-बहुत धन्यवाद। प्रोफ़े सर मीता बर्टोल्डी यह मेरे लिए और आप सभी माता-पिता के लिए हमेशा खुशी की बात है। मैं लंदन की मीटिंग्स को याद करती हूं। परिवारों और बच्चों से मिलकर बहुत अच्छा लगा। और एक दुसरे से बात करना और समझना कि स्थिति क्या है। मैंने पाया कि माता-पिता वैज्ञानिक मामलों के बारे में बहुत जानकार हैं इसलिए यह वास्तव में मेरे लिए भी महत्वपूर्ण और जानकारीपूर्ण था। लिसा धन्यवाद। और आज शामिल होने के लिए सभी को धन्यवाद और आशा है कि कल हम अपने अंतिम के लिए आपसे फिर मिलेंगे। आप जहां कहीं भी हों, आपके लिए अच्छी सुबह, दोपहर या शाम।

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AADCd Family Workshop 4 : Transcript

Produced by Julie Ramsay

Verified by Lisa Flint & Professor Mita Bertoldi

Translated by teamextended.com

The AADC Research Trust would like to thank all involved.

#CureAADC #CureAADCd Page 26