Abordaje diagnóstico y tratamiento de meningoencefalomielitis de origen desconocido en perros

Diagnostic approach and treatment of meningoencephalomyelitis of unknown origin in dogs

José Antonio Bautista-Gómez,* Humberto Morales-Castro*

Resumen

Las meningoencefalomielitis abarcan un grupo de enfermedades de origen inmune, que afectan el sistema nervioso central de manera multifocal, la signología es variada desde cambios de comportamiento hasta convulsiones. En ausencia de confirmación histopatológica el diagnostico se basa en imagen avanzada y hallazgos clínicos. El tratamiento es basado en fármacos inmunusupresivos. En el presente trabajo se muestran los resultados basados en resonancia magnética en el curso y evolución de la enfermedad descrita. La combinación de fármacos inmunosupresores parece mejorar la condición de los pacientes, pero no la resolución completa.

Palabras clave. Inflamación, epilepsia, inmune, citarabina, prednisona, resonancia magnética.

Introducci N

Las meningoencefalimielitis abarcan un grupo de enfermedades no infecciosas del sistema nervioso central, llamadas así por sus patrones inflamatorios no supurativos y acompañado de cambios neuropatológicos.1,2 La clasificación de meningoencefalomielitis de origen desconocido (MOD) incluyen varias enfermedades inflamatorias diferenciadas por histopatología, tales como meningoencefalitis necrotizante (MEN), leucoence-

* Instituto de Neurología y Reabilitación Veterinaria. Hospital Veterinario "Peques".

Sobretiros: MVZ José Antonio Bautista-Gómez

Tel.: 55 2894-7405

Correo electrónico: a.bautista.g@gmail.com

Abstract

Meningoencephalomyelitis encompass a group of diseases of immune origin, which affect the central nervous system in a multifocal way; the signology is varied from behavioral changes to seizures. In the absence of histopathological confirmation, the diagnosis is based on advanced imaging and clinical findings. Treatment is based on immunosuppressive drugs. This paper shows the results based on magnetic resonance in the course and evolution of the disease described. The combination of immunosuppressive drugs seems to improve the condition of the patients, but not the complete resolution.

Key words. Inflammation, epilepsy, immune, cytarabine, prednisone, magnetic resonance.

falitis necrotizante (LEN) y meningoencefalomielitis granulomatosa (MEG).3 Los perros afectados pueden manifestar varios signos como letargia, cambios de comportamiento, giros, déficits visuales y conducir al desarrollo de epilepsia.4,5 En la ausencia de la confirmación histopatológica, el diagnóstico se basa en una combinación de hallazgos clínicos e imagen avanzada,1,3 siendo esta última el pilar en el diagnóstico por imágenes para MOD y otros trastornos del SNC.1,6 El uso de algunos fármacos inmunosupresivos son usados en el manejo de MOD, históricamente, cuando la prednisona es la punta de lanza en el tratamiento, pero cuando se ha usado como única terapia, la completa remisión es poco común y el pronóstico es pobre.7 Por esto, otros protocolos terapéuticos han sido implementados para ayudar al pronóstico de

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Bautista-Gómez JA, et al. Meningoencefalomielitis

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MOD, incluyendo el tratamiento con citarabina.

La citarabina (CA) es un análogo de núcleosidosintéticoantimetabolitoquepenetra la barrera hematoencefálica (BHE).8 Se ha reportado que la terapia combinada con prednisona y CA mejora las tasas de remisión temporal y a largo plazo y el pronóstico de los perros diagnosticados conMODencomparaciónconprednisona sola.9,10 El objetivo del siguiente estudio fue observar la respuesta clínica y la evaluaciónporresonanciamagnéticaposttratamiento con citarabina en infusión por 24horasymantenimientoconprednisona.

Materiales Y M Todos

SepresentanalInstitutodeNeurología y Rehabilitación Veterinaria (INREVET) pocos, casos con historia clínica asociada a enfermedad neurológica (Cuadro 1) con signología neurológica multifocal (Cuadro 2), a todos los pacientes se les realizaron estudios de laboratorio (Hemograma, química sanguínea, urinalisis) sinhallazgosrelevantes.Unavezdefinido como lesión intracraneal se sometieron a resonancia magnética para su valoración. Paralosestudiosderesonanciamagnética lospacientesfueroninducidosconPropofol (Moveloc Baxter 200 mg/20mL) con dosis entre 2-4 mg/kg IV, colocados en decúbito esternal y usando un resonador abierto de 0.25 T (ESAOTE VET MR grande 0.25 software EVO 16) con múltiples secuencias (T1W, T2W, FLAIR, T2W*) multiplanar (Sagital, dorsal, transversal)utilizandogadolinio(Dotarem 0.5mmol/mL)comomediodecontrastea dosis de 0.05-0.1 mmol/kg IV.

Signos Pacientes

Estadomentalalterado 1

Tetraparesianoambulatoria 0

Ataxia 2

Déficitspropioceptivos 2

Giros 1

Estrabismoposicionalventral 6

Convulsiones 1

Conbasealosresultadosderesonancia magnética (Figura 1), raza y hallazgos neurológicos los pacientes fueron diagnosticados con enfermedad inflamatoria cerebral (Meningoencefalitis de origen desconocido) e iniciaron con una terapia basadaenStee2020,10 conlacombinación decitarabina(Cytosar-U®Pfizer500mg) a dosis de 100/m2 y prednisona a dosis de 1 mg/kg iniciales por 4 semanas (dosis reducción a 36 semanas), para posteriormente evaluar la evolución clínica del paciente y por imagen con las mismas indicaciones de resonancia previamente descritas.

Resultados

En el presente estudio 5 de 6 pacientes mostraronunamejoracínicasignificativa, enunpaciente(Shih-tzu)elcualingresóen estatus epiléptico no presentó más crisis convulsivas ni se han reportado hasta el momento, el estado mental de los 6 pacientes mejoró de forma significativa, sólounpaciente(Yorkshire)conimágenes por resonancia magnética con herniación subfalcina continuó con giros, los déficits propioceptivos continuaron en 2 de 6 pacientes (Cuadro 3). En las imágenes por resonancia magnética posterior a las 4 semanas iniciado el tratamiento se vio unadisminucióndeledemareportadoque va desde el 85% hasta 50% (Figura 2).

Discusi N

El propósito del presente estudio fue determinar la relación entre la respuesta clínica y la evaluación de las imágenes por resonancia magnética en estudios seriados usando un protocolo de tratamiento basado zen las regiones con hiperintensidad enT2Wfue notoria en la mayoríadeloscasosdescritos.Sepresentó una predilección en hembras (4 de 6) como varios estudios han reportado.1,7,11 Dos casos se presentaron con convulsiones agudas sintomáticas, uno de ellos en estatus epiléptico, Kaczmarska, et al., reportaron una prevalencia del 50% de convulsiones,5 en algunos otros reportes varía del 23% al 37.5%.12,13 Se ha informado que la RM tiene una sensibilidad del 94.4% y una especificidad del 95.5% para detectar una anomalía cerebral, con un rendimiento similarmente alto para clasificar enfermedades neoplásicas e inflamatorias,14 aunque actualmente no hay información disponible sobre el uso deresonanciamagnéticaparadiferenciar entrecasosconfirmadoshistopatológicamente de MEG, MEN, LEN.

Con respecto a los resultados del tratamiento, una revisión sistemática de Granger, et al., plantea varias preguntas, entreellas:¿Cuáleselmediopreferidode tratamientoconcorticosteroides(esdecir, dosis, categoría duración del tratamiento); ¿Otros protocolos de quimioterapia mejoran el resultado?; ¿Sería útil la combinación de tratamientos de radioterapia másinmunosupresión?Ensurevisión,no lograronidentificarunrégimeninmunosupresor“preferido”comoelqueexistepara otras enfermedades veterinarias.11

En el estudio de Stee, et al., identificaron que la mayoría de los perros parecen recaer, y la mayoría de ellos después de suspenderlaprednisolona,loquerequiere la necesidad de reanudar y mantener una pequeña dosis a largo plazo para permanecer en remisión. Este hallazgo plantea la cuestión de si los perros con MUO podrían beneficiarse de recibir una dosis muy pequeña de prednisolona a largo plazo en lugar de suspenderla a las 34 semanas.10 Nuestro estudio tiene limitaciones por la falta de evaluación de LCR y otras variables como peso, sexo, edad que se han relacionado en otros estudios, es necesario tener un grupo más grande y otros estudios para corroborar hipótesis como la de Stee, et al.

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Efecto de la Naloxona en conejos de la raza Nueva Zelanda

AMMVEPE Vol. 34, No. 2 • Mayo-Agosto 2023 pp 56-63

Effect of Naloxone on sexual behavior, testicular diameter, and testicular histology in prepubertal New Zealand rabbits: a preliminary study

Brayam Hernández-Mota,* Abril Contreras-Salazar,* Jesús Alejandro Castillo-Vázquez,* Monserrat Rosas-Mireles,* Luz Elena Alvarado-Alemán,* Alondra De la Torre-Díaz,* Karmina López-Alcántara,* Diana Hernández-Martínez,** Alejandro Casas-Alvarado,*** Agatha Elisa Miranda-Cortés,*** Ismael Hernández-Avalos****

RESUMEN

Los péptidos opioides endógenos (POE) modulan la neurosecreción de gonadotropinas, de forma que un aumento en su concentración a nivel del sistema hipotálamo-hipofisario se relaciona con una disminución de la liberación pulsátil de hormona luteinizante (LH) en la hipófisis anterior. El antagonista opioide Naloxona (Nx) es capaz de inhibir la actividad de los POE, incrementando la neurosecreción de LH y testosterona en los machos, lo que favorece la conducta sexual en diversas especies domésticas, incluido el conejo. El objetivo de este estudio preliminar fue evaluar los efectos de Nx sobre el comportamiento sexual, el diámetro testicular y las características histológicas de los testículos de conejos prepúberes. Se utilizaron seis conejos machos raza Nueva Zelanda con una edad promedio de 3.5 ± 0.1 meses y un peso promedio de 2.89 ± 0.13 Kg, distribuidos aleatoriamente en 2 grupos de tres individuos cada uno. El grupo control (G1; n = 3) fue tratado con 1 mL de SSF (0,9% NaCl) por vía intramuscular (IM) cada 24 h durante 15 días. El grupo experimental (G2; n = 3) fue medicado con Nx a la dosis de 0.04 mg/Kg IM cada 24 h por el mismo tiempo. Los resultados revelaron que ninguno de los animales tanto en G1 como en G2 logró el descenso testicular, por lo que no hubo conejos que intentaran montar o que pudieran haber eyaculado durante la evaluación (P > 0.05). Sin embargo, los conejos del G2 mostraron un mayor interés y un comportamiento de olfación mas

Abstract

Endogenous opioid peptides (POE) modulate the neurosecretion of gonadotropins, such that an increase in their concentration at the level of the hypothalamic-pituitary system is related to a decrease in the pulsatile release of luteinizing hormone (LH) in the anterior pituitary gland. The opioid antagonist Naloxone (Nx) is capable of inhibiting the activity of POEs, favoring the neurosecretion of LH and testosterone in males, which promotes sexual behavior in various domestic species, including rabbits. The objective of this preliminary study was to evaluate the effects of Nx on sexual behavior, testicular diameter, and histological characteristics of the testis of prepubertal rabbits. Six New Zealand male rabbits with an average age of 3.5 ± 0.1 months and an average weight of 2.89 ± 0.13 Kg were used, randomly distributed in 2 groups of three individuals each. The control group (G1; n = 3) was treated with 1 mL of SSF (0.9% NaCl) intramuscularly (IM) every 24 h for 15 days. The experimental group (G2; n = 3) was medicated with Nx at a dose of 0.04 mg/Kg IM every 24 h for the same time. The results revealed that none of the animals in both G1 and G2 achieved testicular descent, so there were no rabbits that attempted to mount or that could have ejaculated during the evaluation (P > 0.05). However, G2 rabbits showed sustained interest and olfaction behavior from 6 days after Nx administration (P < 0.05) unlike G1; behavior that was maintained

* Alumnos de la asignatura Farmacología, Toxicología y Terapéutica Médico Veterinaria. UNAM. Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán.

** M en MVZ. Diplomado en Patología Clínica. Clínica privada.

*** Profesor de asignatura A interino. Departamento de Ciencias Biológicas. Farmacología, Toxicología y Terapéutica Médico Veterinaria. UNAM. Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán.

**** Profesor de Carrera Asociado B, tiempo completo. Departamento de Ciencias Biológicas. Farmacología Clínica y Anestesia Veterinaria. UNAM. Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán.

Sobretiros: Dr en C. Ismael Hernández-Avalos. Correo electrónico: ismael.hernandez@cuautitlan.unam.mx

Hernández-Mota B, et al. Efecto de la Naloxona en conejos de la raza Nueva Zelanda

AMMVEPE 2023; 34 (2): 56-63 sostenido desde los 6 días después de la administración de Nx (P < 0,05) a diferencia de G1; comportamiento que se mantuvo hasta el final del experimento. El diámetro y longitud testicular evaluados después del sacrificio fue mayor en G2, siendo 1.5 ± 0.1 cm y 3.1 ± 0.1 cm, en comparación con G1 donde se registró 1.0 ± 0.1 cm y 2.5 ± 0.1 cm, respectivamente. Las características histológicas de los testículos se evaluaron mediante tinción con H&E y PAS. En los túbulos seminíferos de G2 se observó una moderada pérdida de estratificación celular con una ligera reducción del número de estratos que componen el epitelio germinal. En los mismos conejos también se observaron espermátidas gigantes multinucleadas localizadas hacia la luz de los túbulos seminíferos y un menor número de espermatozoides maduros. De igual forma, en G2, a nivel de la luz de los túbulos seminíferos, se pudo observar un mayor número de espermatocitos y restos celulares, así como un menor número de espermatozoides maduros. Se concluye que Nx mejoró el comportamiento sexual de los conejos tratados, además de aumentar el diámetro y la longitud testicular, modificando así las características histológicas del testículo en los conejos prepúberes estudiados, aunque no se logró el descenso testicular y la eyaculación.

Palabras clave. Naloxona, conejos, pubertad, función testicular.

Introducci N

El aparato reproductor del conejo tiene dos funciones primordiales: la producción de espermatozoides (función citógena) y la síntesis de hormonas sexuales (función endocrina).1 La función de las gónadas es regulada por la hipófisis anterior mediante la secreción degonadotropinastantoenmachoscomo en hembras, siendo las más importantes la FSH (hormona folículo estimulante) y LH (hormonaluteinizante).1,2Asu vez, la hipófisis está regulada por el hipotálamo mediante la neurosecreción pulsátil de GnRH.3 De esta manera, el control endocrino del funcionamiento testicular está dado por el eje hipotálamo hipófisisgonadal (HHG), donde el órgano blanco deestashormonaseseltejidotesticular,el cualproducehormonasesteroidescomola testosterona y una hormona glicoproteica llamada inhibina, quienes participan en el mecanismo de realimentación negativa hacia el mismo eje.1,4

Otros neurotransmisores que pueden afectar la regulación del eje HHG son los péptidos opioides endógenos (POE), quienes incluso han mostrado su participación en la expresión de la conducta reproductivaalinhibirlasecrecióndeLH y GnRH.3,5,6 La fisiología de los POE se ha relacionado también con su secreción a nivel hipofisario e hipotalámico en los sistemas neurales involucrados con el dolor,enlaproliferacióncelular,enelcontrol until the end of the experiment. The testicular diameter and length evaluated after the sacrifice was greater in G2, being 1.5 ± 0.1 cm and 3.1 ± 0.1 cm, compared to G1 where there was a record of 1.0 ± 0.1 cm and 2.5 ± 0.1 cm, respectively. The histological characteristics of the testis were evaluated by H&E and PAS staining. In the seminiferous tubules of G2, a moderate loss of cell stratification was observed with a slight reduction in the number of strata that make up the germinal epithelium. In the same rabbits, multinucleated giant spermatids located towards the lumen of the seminiferous tubules and a lower number of mature spermatozoa were also observed. Similarly, in G2, at the level of the lumen of the seminiferous tubules, it was possible to observe a greater number of spermatocytes and cell debris, as well as a lower number of mature spermatozoa. It is concluded that Nx improved the sexual behavior of the treated rabbits, in addition to increasing testicular diameter and length, thus modifying the histological characteristics of the testis in prepubertal rabbits, although testicular descent and ejaculation were not achieved. cardiovascular, el estrés y en la respuesta inmune.7

Key words. Naloxone, rabbits, puberty, testicular function.

Estos POE son clasificados en tres grupos:encefalinas,dinorfinasyendorfinas,quienesejercensuactividadsegúnsu afinidad por los receptores opiáceos que son: alfa (α), beta (β), delta (δ), epsilon (ε), kappa (κ), lambda (λ), mu (µ) y sigma(σ).8 Losreceptoresopioidespertenecen a la gran superfamilia de receptores acoplados a la proteína G. Ellos actúan a través de esta proteína para inhibir la adenil-ciclasa,aumentandolascorrientes de potasio, inhibiendo la actividad de los canales de calcio, modulando la rotación de inositol trifosfato y finalmente, activando la proteína quinasa mitógenoactivada. Estas acciones culminan en la atenuación de la actividad neuronal mediante la inhibición de la liberación de neurotransmisores y el cambio de la excitabilidad neuronal. La mayoría de los genes están compuestos por múltiples exones que deben ser empalmados conjuntamente para generar el mRNA que, a su vez, produce la respuesta en el receptor µ.8,9

Enlamodulacióndelaconductasexual sehanutilizadoantagonistasdeopioides, particularmente la naloxona (Nx).10,11 Estefármacoesunderivadodelatabaína que a dosis bajas tiene una alta afinidad por los receptores opioides µ1 y µ2, en comparaciónconelreceptoropioide δ,en el que se requieren altas dosis de Nx para ejercer el bloqueo de dicho receptor.9,12

Estefármacosehautilizadoentrabajos experimentalesenhembrasparalainducciónysincronizacióndecelosenhembras, neurosecretor de LH, estimulante de la receptividad sexual, fertilidad y prolificidad,uniformadordecuerposlúteosparala transferencia de embriones y tratamiento dequistesfoliculares,8,11,13 mientrasqueen machossehautilizadoparaincrementarla libido, el diámetro testicular y los niveles séricos de testosterona.10,14-18 Por tanto, el objetivo del presente estudio preliminar fue evaluar los efectos de la Nx sobre la conducta sexual, diámetro testicular y características histológicas del testículo en conejos prepúberes de la raza Nueva Zelanda.

Material Y M Todos

El presente estudio preliminar fue un estudioprospectivo,aleatorioyciegoque se realizó durante noviembre de 2022 en el módulo de conejos del Centro de Enseñanza Agropecuaria de la Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán de la Universidad Nacional Autónoma de México (UNAM). Esta zona se orienta geográficamente a 19º43’ latitud norte y 19º10’longitud oeste, a 2,252 metros sobre el nivel del mar. En esta zona el clima se encuentra tipificado como templado subhúmedo con lluvias en verano de humedadmediaC(w1)dondelatemperatura promedio anual es de 15.7 ºC, siendo la máxima de 27.8 ºC.

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Los conejos que integraron el estudio fueron 6 machos prepúberes de la raza Nueva Zelanda con una edad promedio de3.5±0.1mesesyunpesopromediode 2.89 ± 0.13 Kg al inicio del experimento. Durante el desarrollo de la investigación, los conejos fueron colocados en jaulas tipo flackdeck individuales de 60 cm de ancho, 90 cm de largo y 40 cm de altura, con una alimentación a base de concentradocomercial(91%MS,proteína cruda 14.5%; EM 2400 Kcal), agua ad libitum ybajocondicionesdeiluminación de12hluz/12hoscuridad.Losanimales se agruparon de forma aleatoria en 2 grupos de tres individuos cada uno. El grupo control (G1; n = 3) fue tratado con 1 mL deSSF(NaCl0.9%)porvíaintramuscular (IM) cada 24 h durante 15 días. El grupo experimental(G2;n=3)fuemedicadocon Nx a una dosis de 0.04 mg/Kg por vía IM cada 24 h durante el mismo tiempo. La dosis calculada fue aforada a 1 mL con SSF para que tuviera el mismo volumen a administrar que el G1.

El presente estudio se realizó bajo las directrices establecidas en la Norma Oficial Mexicana NOM-062-ZOO-1999 intitulada, Especificaciones técnicas para la producción, cuidado y uso de los animales de laboratorio.

Conducta sexual

Este parámetro en los conejos prepúberes fue evaluado a través de una escala simple con los siguientes indicadores y puntuaciones: agresividad = 0, desinterés = 1, interés y olfación sostenida = 2, intento de monta = 3 y eyaculado = 4. Para lograr la estimulación de la conducta se utilizó a una hembra en celo y una vagina artificial a temperatura de 42-43 ºC.

La evaluación de la conducta se hizo losdías0,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12, 13,14y15delexperimento,considerando solo un estímulo por día.

Diámetro testicular

Ningunodelosconejosprepúberesque integraron el estudio tenían descendidos los testículos al momento de iniciar el experimento, por lo que esta variable fue medidaposterioralsacrificiohumanitario delosconejos,utilizadouncalibradorvernier. Se obtuvieron medidas de diámetro y largo de los testículos, reportando las mediciones en cm.

Características histológicas

Una vez transcurridos los 15 días de la administracióndeNxydelplaceboenlos grupos de estudio, se procedió a realizar el sacrificio humanitario de los conejos conforme al método descrito en la Norma Oficial Mexicana NOM-033-SAG/ZOO2014intituladaMétodosparadarmuertea losanimalesdomésticosysilvestres.Esto conlafinalidaddeenviarallaboratoriolos testículosparasuanálisishistológico.Las muestrasfueronenviadasenrefrigeración a una temperatura de 4-5 ºC debidamente identificadas y procesadas bajo la tinción de hematoxilina-eosina (H&E).

Analísis estadístico

Los datos obtenidos se analizaron utilizando el software estadístico GraphPad Prism versión 9.5.1 (GraphPAd Software Inc., CA, USA). Los resultados de la variable conducta sexual fueron expresados como mediana ± error estándar de la media(EEM)yanalizadosatravésdeuna pruebanoparámetricadeKruskal-Wallis, utilizando una prueba post-hoc de Dunn. Los valores de P < 0.05 fueron consideradosestadísticamentesignificativos.Por otra parte, los resultados de las variables diámetro testicular evaluados posterior al sacrificioylascaracterísticashistológicas fueron presentados primariamente en un

Cuadro 1. Registrodelapuntuaciónobservadadurantelaevaluacióndelaconductasexual.Los resultadosseexpresancomoMediana±EEM.

*Indicadiferenciaestadísticamentesignificativaentregruposdeestudio(P<0.05).Losindicadores medidosfueronagresividad=0,desinterés=1,interésyolfaciónsostenida=2,intentodemonta =3yeyaculado=4.

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AMMVEPE 2023; 34 (2): 56-63 cuadro y en descripción en fotografías comparativas, respectivamente.

Resultados

En el cuadro 1 se muestran los resultados referentes a la evaluación de la conductasexualdelosconejosprepúberes de raza Nueva Zelanda. Cabe destacar que en ninguno de los animales de ambos gruposdeestudioselogróundescensode los testículos, por lo que no hubo conejos que hicieran un intento de monta o que pudieran haber eyaculado. Sin embargo, los animales del G2 mostraron mayoritariamente un comportamiento de interés y olfación sostenida apartir de los 6 días de la administración de Nx, a diferencia de los animales del G1 quienes se mostraron en una conducta de desinterés e incluso agresivos durante el periodo de investigación. Cabe destacar que este comportamiento se mantuvo hasta el final del experimento, por lo que se puede inferir que la administración de Nx pudo inducir uncambiopaulatinoenlaconductasexual del G2.

En el cuadro 2 se presentan las mediciones de diámetro y largo testicular de ambos grupos de estudio, donde se puede observar que los animales tratados con Nx (G2) tuvieron un mayor registro en las variables medidas, a pesar de que ninguno de los conejos que se utilizaron enelpresenteexperimento(n=6)mostró un descenso testicular.

La comparativa de resultados a nivel histológico se presenta en las figuras 1-5, por lo que en cada una de ellas se describen los cambios observados en los cortes preparados.

Discusi N

La investigación como un proceso sistemático, organizado y objetivo, está destinado a responder una pregunta de investigación. Por ello, en ciencias biomédicas con la finalidad de reducir los errores en la investigación, se acepta el diseñodeestudiospreliminarescomoloes elpresenteestudio.Estossonimportantes porque permiten recabar información, datos y antecedentes necesarios para poder definir los diseños experimentales o estadísticos, e incluso mejorar los procedimientos de los futuros proyectos de investigación,obteniendoasídiseñosmás completos,demejoralcanceeconómicoy quesepuedanrealizarenmenorestiempos deejecución.19 Enelpresenteestudiopreliminar fue posible evaluar los efectos de la Nx sobre la conducta sexual, diámetro testicular y características histológicas del testículo en conejos prepúberes de la raza Nueva Zelanda, bajo la hipótesis de que los antagonistas opioides permiten la activación del eje HHG.

En este sentido, los antagonistas opiáceos como la Nx tienden a aumentar en losmachoselvolumendeeyaculado,evidenciaquesugierequeestarespuestaesta mediada por estimulación de receptores opiáceos m.11,20,21 Los POE participan en la regulación de la secreción hipofisaria a travésdeefectosinhibidorestónicossobre la descarga de hormonas hipotalámicas comolaGnRHyCRH.Porlotanto,laadministracióndeNxpodríaincrementarlas concentraciones plasmáticas de LH, FSH y ACTH,3,9 lo mismo que las hormonas

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AMMVEPE 2023; 34 (2): 56-63 espermáticas (muestras teñidas con H&E, observadas con un aumento de 400x). Se observa un menor número de espermatozoides maduros (3A) en comparación a lo observado en el grupo control (3B).

Características celulares a nivel de túbulos seminíferos (muestras teñidas con H&E, observadas con un aumento de 400x). Se encuentran constantes espermátidas gigantes multinucleadas ubicadas hacia la luz de los túbulos seminíferos en los animales tratados con Nx.

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A B

4. Características del epidídimo de los conejos tratados con Nx (muestras teñidas con H&E, observadas con un aumento de 100x y 400x). En aquellos animales que recibieron Nx no se observaron cambios significativos en la estructura histológica de los túbulos eferentes, sin embargo, a nivel de la luz del túbulo se logra observar una mayor cantidad de espermatocitos y restos celulares, así como menor cantidad de espermatozoides maduros.

A B

5. Características del epidídimo de los conejos del G1 o control (muestras teñidas con H&E, observadas con un aumento de 400x y 100x). En comparación a los cortes de pacientes del G2, en estas imágenes se aprecian ocasionales espermatocitos y una mayor cantidad de espermatozoides maduros.

Hernández-Mota B, et al. Efecto de la Naloxona en conejos de la raza Nueva Zelanda

AMMVEPE 2023; 34 (2): 56-63 producidas por sus órganos blancos, tal es el caso de la testosterona.22 En el presente estudio se encontró que losconejosquerecibieronNx(G2)durante15días,mostraronunmayorinteréspor las hembras en celo, conducta sexual que fue aumentando con el paso de los días sin llegar a un intento de monta y eyaculación, en comparación con el G1 que se mostró más desinteresado e incluso en algunosmomentosdelaevaluaciónhasta agresivos o indiferentes del medio, por lo quesepuedeinferirquelaadministración de Nx pudo inducir un cambio paulatino en la conducta sexual del G2. De esta manera,segúnHernández,11 algunasmanifestacionesdelcomportamientosexualde los conejos incluyen el olfateo constante; conducta realizada para intercambiar información entre los dos individuos. No obstante, también se ha descrito que los conejos machos tienden a frotarse sobre una serie de objetos inanimados o sobre la misma hembra para marcar los objetos con las secreciones olorosas personales producidas por las glándulas inframandibulares.16 Esta descripción conductual da pie a interpretar que, si bien, los conejos delpresenteestudionoestabanlistospara copularpuestoquefueronanimalesprepúberes, sí fueron preparándose y teniendo comportamientosreproductivosqueconel paso de los días se fueron intensificando con la administración de Nx.

Villagrán,20 empleó Nx para caracterizarlaspautasnormalesdelcomportamiento sexual del macho Nueva Zelanda antes y/o durante el apareamiento, tomando en consideraciónestimadoresdeagresividad sexual (eneuresis, grasping y pateo de piso) y estimadores del desarrollo sexual (número de montas, tiempo de latencia entremontas,tiempoentremontayeyaculación, número de eyaculaciones, tiempo de latencia entre eyaculación y monta), concluyendo que el comportamiento sexual se encuentra mediado por POE, siendo así posible manipular la conducta sexual del conejo.

Asimismo, Fuentes,14 Villagrán,21 así como Branson y Majorie,4 opinan que es posible manipular la conducta sexual de machos y hembras de varias especies domésticas,entreellas,elconejo.Loanterior coincide con los resultados obtenidos en el presente estudio, ya que al existir un mayor nivel en la testosterona sérica y/o plasmática,laconductasexualyeldiámetro testicular tienden a incrementarse. De acuerdoconHafezyHafez,1 esteaumento de andrógenos permite el incremento del tamaño testicular, el mejoramiento de la calidad seminal y la líbido, donde al igual quelosinvestigadorescitados,Hernández et al., 23 sugieren que esta respuesta es mediada por estimulación de receptores opioides.

A este respecto de la modulación de la conducta sexual, Fuentes, et al., 17 realizaron un estudio en 12 conejos machos adultosdediferentesedadesentrelos14y 20mesesconunfotoperíodonaturalde12 horasluzy12oscuridad,endondeambos gruposrecibieronunimplantesubcutáneo deNxcon8mg,elcualfuediseñadopara absorberse en 15 días, mismo periodo de administración que el planteado por el presente estudio. Estos autores concluyeron, que tanto los machos jóvenes como los adultos, incrementaron su número de montas después de la administración del opioide, sugiriendo que la Nx es capaz de mejorar la libido de los animales.

En cuanto al tamaño de los testículos, Alcázar,10 menciona que en los conejos adultos estas estructuras miden aproximadamente de 2 a 4 cm dependiendo de su edad. Sin embargo, en el presente estudio preliminar una limitante fue que los animales prepúberes utilizados en el experimento no mostraron un descenso testicular, por lo que no pudieron ser evaluados en cuanto a diámetro y largo al momento de iniciar el estudio. Una vez realizadas las eutanasias y necropsias de los semovientes de ambos grupos, se encontró que los testículos de los conejos a los que se les administró Nx tenían una diferencia de tamaño a su favor.

Pineda, et al.,24 enunestudiorealizado en el altiplano mexicano reportan que conejosmachosprepúberesdelarazaNueva Zelandablancodeseissemanasdeedady quefuerontratadosconNxadosisde0.04 mg/Kgpordía,manifestaronundescenso total de los testículos a partir de las dos semanas de haber iniciado el tratamiento. Así mismo, estos autores reportan que en el grupo experimental, el promedio del ancho testicular fue de 1.300 ± 0.0145 cm y el largo testicular de 4.300 ± 0.058 cm, valores que presentaron diferencia estadística (P< 0.05) en relación al grupo testigo. Estos mismos autores concluyen que la administración de Nx produce un descenso precoz de los testículos, así como un aumento en el tamaño testicular y que por lo tanto se alcanza en menor tiempo la pubertad, lo que es congruente con nuestros resultados a excepción del descenso testicular. Es importante tomar en cuenta que en el estudio de Pineda y Ramírez,24 los conejos fueron tratados durante 3 semanas y con dosis de 0.004 mgdeNxadiferenciadelopropuestopor nuestro diseño experimental.

Otrasevidenciasacercadelasventajas delusodeNxenconejoshansidopublicadasporFuentes, et al.,15 yFuentes, et al., 17 quienesensusrespectivasinvestigaciones observaron un incremento significativo en el número de montas continuas, concluyendo con base en sus hallazgos que el comportamiento sexual del conejo está mediado por receptores opiáceos.

Así también, Hernández,25 al realizar un trabajo con conejos de la raza California en el altiplano mexicano, reporta que la Nx no influye en el tiempo de reacción a la monta, sin embargo a pesar de no haber obtenido en sus resultados diferencia significativa (P > 0.05), concluye que el antagonista opioide muestra la tendencia de disminuir el tiempo de reacción entre los grupos tratados, por lo que este autor considera que este fármaco puede ser una alternativa terapéutica no hormonal para mejorar el comportamiento reproductivo de esta especie, además de optimizar el uso de los machos y de reducir el tiempo que destina el productor para manejarlos.

Con la evaluación y análisis de estos trabajos, se puede inferir que el antagonista opioide puede influir en el comportamiento reproductivo de los machos de esta especie. Por tanto, los resultados de nuestrainvestigaciónpreliminarimpactan directamentesobrelareproduccióndeesta especie,yaquesiselograobtenermachos sexualmente activos a temprana edad, se mejoraría la actividad reproductiva en

Hernández-Mota B, et al. Efecto de la Naloxona en conejos de la raza las unidades de producción pecuaria y se tendrían mejores ganancias para los cunicultores y productores.

Sin embargo, el presente estudio preliminar tuvo algunas limitantes que requieren discusión. Por ejemplo, la falta de medición de los niveles séricos de testosterona para correlacionar los hallazgos observados con los niveles hormonales séricos o plasmáticos, donde investigadores como Pedrón, et al., 22 y Hernández-Avalos,11 observaron que la Nxinfluyepositivamentesobrelosniveles plasmáticos de la testosterona, al estudiar conejos machos adultos de la raza Nueva Zelanda y California, respectivamente. Otralimitantefuelaedaddelossemovientes, ya que si estos hubiesen sido de una edadmásavanzada,loscambioshistológicos pudieron haber sido más congruentes y concluyentes en favor de la utilización de la Nx, ya que la pubertad y conducta sexualdelosconejossedesarrollaapartir delos5meses.Duranteestainvestigación, otrofactorqueinfluyódirectamenteenlos resultados fue el tamaño de muestra, no obstante, al ser un estudio preliminar se pudocontribuiracontinuarconeldesarrollodeáreasdeinvestigaciónrelacionadas. Finalmente, otro elemento de discusión es la falta de experiencia sexual de cada conejo prepúber.

Enconclusión,laNxmejorólaconducta sexual de los conejos tratados, además de que incrementó el diámetro y largo testicular, modificando así las características histológicas del testículo en conejos prepúberes.

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