Aula 9 MICROSCOPIA

Prof. Esp. Pedro H. Veloso Biomédico CRBM/DF 6831

MICROSCÓPIO • A invenção: holandês Zacharias Jansen, fabricante de óculos, por volta do ano 1595.

• Feito com duas lentes simples convergentes chamadas de "objetiva" e "ocular”.

MICROSCÓPIO • Por volta de 1650, Robert Hooke, fabricou um microscópio óptico que lhe permitiu observar um pedaço de cortiça.

• Observou pequenas cavidades, às quais chamou "poros" ou "células".

• Foi Hooke que utilizou, pela primeira vez, o termo célula.

MICROSCÓPIO •Aparelho com lentes ópticas que maximiza um ser ou estruturas minúsculas a um tamanho de boa observação.

CÉLULA LEUCÓCITOS

BACTÉRIAS

CÉLULAS SANGUÍNEAS

COMPONENTES DO MICROSCÓPIO O MICROSCÓPIO ÓPTICO, É TAMBÉM CONHECIDO COMO MICROSCÓPIO DE LUZ

COMPÕE-SE DE UMA PARTE MECÂNICA QUE SERVE DE SUPORTE PARA A PARTE ÓPTICA

PARTE ÓPTICA É CONSTITUÍDA POR TRÊS SISTEMAS DE LENTES: O CONDENSADOR, AS OBJETIVAS E AS OCULARES.

COMPONENTES DO MICROSCÓPIO • CONDENSADOR: – Sua finalidade é projetar um cone de luz sobre as células que estão sendo examinadas ao microscópio; – Após atravessar as células, esse feixe luminoso, em forma de cone, penetra nas objetivas;

• OBJETIVAS: – Projetam uma imagem aumentada , no plano focal das oculares, que novamente a amplia;

• OCULARES: – As imagens fornecidas pela oculares podem ser percebidas pela retina.

OCULARES

TUBO ÓPTICO

BRAÇO OBJETIVAS

REVÓLVER

PINÇA PARAFUSO MACROMÉTRICO

PLATINA PARAFUSO MICROMÉTRICO

CONDENSADOR

CHARRIOT LÂMPADA

BASE

OCULARES

BRAÇO OU SUPORTE OBJETIVAS

REVÓLVER

PLATINA

CONDENSADOR

LÂMPADA

BASE

PARAFUSO MACROMÉTRICO PARAFUSO MICROMÉTRICO

FORMAÇÃO DA IMAGEM • PODER DE RESOLUÇÃO: – O poder de resolução de um sistema óptico é a sua capacidade de separar detalhes; – É expresso pelo limite de resolução.

• LIMITE DE RESOLUÇÃO: – É a menor distância que deve existir entre dois pontos para que eles apareçam individualizados.

FORMAÇÃO DA IMAGEM

LIMITE DE RESOLUÇÃO ESPOROS DE LEVEDURAS HEMÁCIAS

CÉLULAS TUBULARES DO EPITÉLIO RENAL

•O que determina, a riqueza de detalhes da imagem é o seu limite de resolução, e não o seu poder de aumentar o tamanho do objeto.

MO Vs. ME HEMÁCIAS

LEUCÓCITO

PLAQUETAS

EOSINÓFILOS

LINFÓCITO

QUAL TIPO DE MICROSCÓPIO USADO 1

3

4

2

5

PRINCIPAIS CORANTES TÉCNICAS

CONSTITUINTES

HEMALÚMEN (Hematoxilina),

HE TRICRÔMICO DE MASSON

IMPREGNAÇÃO ARGÊNTICA PARA FIBRAS RETICULARES

NÚCLEOS

FUCCINA ÁCIDA E PONCEAU DE XILIDINA,

VERDE-LUZ

SOLUÇÕES DE SAIS DE PRATA

FIBRAS COLÁGENAS

ROSA

ROSA

FIBRAS RETICULARES

AZUL

EOSINA HEMATOXILINA FÉRRICA

CITOPLASMA

PRETO

VERMELHO

VERDE

PRETO

UNIDADES DE MEDIDA MICRÔMETRO (µm)

1mm = 1.000 μm

NANÔMERO (nm)

1μm = 1.000 nm

ÂNGSTROM (Å) ESTA UNIDADE DE MEDIDA TEM SUBSTITUIDO O nm

1nm = 10 Å

AMPLIAÇÕES OBJETIVAS (COM OCULAR DE 10X)

AMPLIAÇÃO TOTAL (VER SEMPRE AS OCULARES)

04 x

40 X

10 x

100 X

40 x

400 X

100 x (Sempre usar com óleo de Imersão)

1000 X

PRÁTICA LABORATORIAL 1. Obedecer todas as normas de biosegurança (EPI/EPC); 2. Lavar as mãos na entrada e na saída após a pratica; 3. É obrigatório que você conheça as partes ópticas e mecânicas dos microscópicos antes de usá-lo; 4. Não manusear o aparelho com as mãos sujas ou molhadas; 5. Nunca desloque o aparelho com a lâmpada acesa; 6. Na remoção do equipamento, segure-o firmemente com uma das mãos no braço e a outra na base; 7. É proibido o uso de câmaras fotográficas durante a exposição da aula prática; 8. Limpar o microscópio após o uso.

PRÁTICA LABORATORIAL 1. Inicie sempre pela objetiva de menor aumento; 2. Na observação de uma preparação, olhe pela ocular e mova o macrométrico muito lentamente, assim que a imagem aparecer, mesmo confusa, pare e complete a focalização com o micrométrico; 3. OBJETIVA DE 100x: O uso da objetiva de imersão é mais delicada pois, a distância focal entre a face da objetiva e a parte superior da lamínula, diminui quando a ampliação é aumentada.

PRÁTICA LABORATORIAL 1. Ligar.

2. Descer a mesa ao máximo.

3. Colocar na objetiva de menor número (vrm).

4. Aumentar a intensidade se luz.

5. Colocar a lâmina para a análise.

6. Alcançar o foco entanto observa a lâmina pelas oculares ao mesmo tempo em que, vagarosamente subindo a mesa movimentando o macrômetro.

7. Movimentar o micrométrico para alcançar o foco.* 8. Após mudar de objetiva, SOMENTE achar o foco pelo micrométrico. *perigo de quebrar a lamina. **após o uso do microscópio para a análise, devemos voltar a objetiva ao menor aumento (vmr), abaixar a mesa ao máximo, tirar a lâmina e não se esquecer de desligar o microscópio.

EXERCÍCO DE FIXAÇÃO 1. Defina microscópio, suas principais estruturas ópticas e mecânicas, observando os cuidados a serem utilizados no manuseio deste aparelho.

2. Diferencie Poder de Resolução de Limite de Resolução.

3. Quais as características de cada parte do Microscópio óptica ?

4. Quais os cuidados a serem observados antes de manusear o aparelho?

5. De acordo com as oculares de 22x, calcule a ampliação total de uma imagem observada por objetivas de : 05x, 10x, 20x, 40x e 100x. (Jamais esqueçam de acrescentar os cálculos destas respostas na prova) 6. Defina Ampliação Total.

EXERCÍCO DE FIXAÇÃO 7. Cite 6 elementos estruturais de um Microscópio Óptico.

8. Quais os dois principais corantes da Técnica de coloração por HE? 9. Quais os cuidados individuais que se deve ter ao uso dos laboratórios?

10. Quais os EPI’s utilizados para prática de microscopia?

11. Qual a importância dos Equipamento de Proteção Coletiva (EPC)?

12. Cite 5 condutas inapropriadas dentro de um laboratório.

13. Quais as vacinas que devem ser tomadas antes de se adentrar dentro de um laboratório com riscos biológicos?

EXERCÍCO DE FIXAÇÃO 14. O que são riscos e quais os principais relacionados com a área da saúde?

15. Qual e porque a única objetiva que só deve ser usada com óleo de imersão?

“Melhor que a foto do rosto e do corpo, é o raio-x de sua cabeça”. (Diego Biggy Monthy)

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